CN104031048B - 一种β-氯乙基亚硝基脲类化合物及其合成方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新型的β-氯乙基亚硝基脲类化合物及其合成方法和用途，所述β-氯乙基亚硝基脲类化合物的结构如通式(Ⅱ)所示。本发明对通式Ⅱ中的化合物进行了体外抗肿瘤筛选试验。结果表明，通式Ι中的化合物对人脑神经胶质瘤细胞SF763、SF767、SF126、SF188，人结肠癌细胞HT29和小鼠白血病细胞L1210等多种肿瘤细胞系均有明显的抑制作用，且比现有的CENU及其与O6-苄基鸟嘌呤的联合用药具有更高的肿瘤抑制活性。

Description

一种β-氯乙基亚硝基脲类化合物及其合成方法和用途
技术领域
本发明涉及一种亚硝基脲类化合物及其合成方法和用途，特别是涉及一种新型β-氯乙基亚硝基脲类化合物及其合成方法和在制备抗肿瘤药物中的用途。
背景技术
亚硝基脲类化合物是临床上广泛应用的抗肿瘤药物。美国癌症研究中心于20世纪60年代发现N-甲基-N-亚硝基脲对移植L1210白血病有效(Schepartz,S.A.CancerTreat.Rep.1976,60,647-649.)，此后在对该类药物结构进行改造的过程中发现当β位甲基被氯乙基取代后，药物的抗癌活性明显增加，继而陆续合成了一系列的β-氯乙基亚硝基脲(CENU)类化合物(如式Ⅰ所示)(Gnewuch,C.T.；Sosnovsky,G.Chem.Rev.1997,97,829-1013.)。
由于CENU具有较强的脂溶性，能穿越血脑屏障，因此在脑瘤的治疗中尤为重要。目前临床上常用的CENU包括卡莫司汀(BCNU)、洛莫司汀(CCNU)、司莫司汀(Me-CCNU)和尼莫司汀(ACNU)(如化合物Ⅰ结构所示)。CENU的作用机制主要是通过诱导DNA双链上鸟嘌呤N1位与胞嘧啶N3位发生股间横向交联，形成dG-dC交联，抑制DNA双链打开，从而阻碍DNA的复制与转录，最终诱发癌细胞凋亡。
然而，癌细胞中的O6-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶(AGT)能修复dG-dC交联的前体化合物O6-氯乙基鸟嘌呤和N1，O6-桥亚乙基鸟嘌呤(N1，O6-桥亚乙基鸟嘌呤的由来，CENU先导致DNA生成O6-氯乙基鸟嘌呤，O6-氯乙基鸟嘌呤进一步再生成N1，O6-桥亚乙基鸟嘌呤)，从而抑制dG-dC交联物的形成，阻断CENU的抗癌活性，导致肿瘤细胞对药物产生耐药性。
研究表明O6-苄基鸟嘌呤为一种有效的AGT抑制剂，它能将自身的苄基转移到AGT活性中心的145位半胱氨酸残基上，从而抑制AGT活性，提高肿瘤细胞对CENU的敏感性(Pegg,A.E.Chem.Res.Toxicol.2011,24,618-639.)。研究表明，2.5μM的O6-BG作用10分钟即可使AGT活性下降90％以上。万永玲等人(O6-苄基鸟嘌呤增强BCNU体外和体内抗肿瘤作用的研究，中国临床药理学杂志,1999,15:52-57)的研究结果表明，荷瘤无胸腺小鼠经O6-苄基鸟嘌呤实验治疗，发现预先给予O6-苄基鸟嘌呤处理2小时后再给予CENU治疗，可明显抑制肿瘤的生长，显著增强了CENU的化疗效果。
目前，O6-苄基鸟嘌呤和氯乙基亚硝基脲的联合用药已成为药物化疗的研究热点。通过O6-苄基鸟嘌呤抑制肿瘤细胞的AGT活性以阻断癌细胞中AGT对DNA损伤的修复作用，以达到提高氯乙基亚硝基脲化疗效果的目的。然而研究发现，由于O6-苄基鸟嘌呤对AGT的抑制作用不具有靶向性。在与CENU联合用药中，O6-苄基鸟嘌呤不能选择性的针对肿瘤细胞发挥其抑制AGT的作用，而是同时非靶向性的作用于正常细胞，导致正常细胞中的AGT被抑制，从而破坏了正常细胞对DNA损伤的修复机制，增加了正常细胞DNA损伤的风险，最终导致化疗药物毒副作用的提高。
经过检索，尚未发现本发明提供的化合物的相关报道。
发明内容
本发明的目的是是提供一种新型β-氯乙基亚硝基脲类化合物，以及合成该类化合物的方法和在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供的新型β-氯乙基亚硝基脲类化合物结构如通式(Ⅱ)所示：
其中，X为(CH2)n，n为1-6的整数。
优选地，所述β-氯乙基亚硝基脲类化合物为：
本发明还提供了一种制备新型β-氯乙基亚硝基脲类化合物的方法，该方法包括以下步骤：
式中X为(CH2)n，n为1-6的整数。
具体的，所述方法包括以下步骤：
1)1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)的合成
将2-氨基-6-氯-嘌呤(a)溶于有机溶剂，加入1-甲基吡咯烷，搅拌反应，反应结束后，加入丙酮使(b)完全沉淀，过滤，将收集到的固体用***洗涤2次，真空干燥，得到1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)；
2)脂肪族三氟乙酰胺苄醇(c)的合成
将脂肪族氨基苄醇和三乙胺按照1:1的摩尔比溶于有机溶剂，在惰性气体保护下逐滴加入三氟乙酸乙酯，搅拌反应，反应结束后，加入乙酸乙酯和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，真空除去溶剂，得到化合物(c)粗产物，粗产物经硅胶柱层析纯化，得到化合物(c)；
3)O6-[(脂肪族三氟乙酰胺基)苄基]鸟嘌呤(d)的合成
将步骤2)得到的脂肪族三氟乙酰胺苄醇(c)溶于有机溶剂，加入步骤1)得到的1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)与叔丁醇钾，在惰性气体保护下搅拌反应，反应结束后加入冰乙酸水溶液以中和过量的叔丁醇钾至溶液pH＝7，然后加入二氯甲烷和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，二氯甲烷层用水洗2遍，真空干燥，得到化合物(d)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(d)；
4)O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤(e)的合成
将步骤3)中制备的O6-[(脂肪族三氟乙酰胺基)苄基]鸟嘌呤(d)溶于甲醇/水溶液，加入无水碳酸钾，加热回流，反应结束后，冷却至室温，真空干燥，得到化合物(e)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(e)；
5)1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(f)的合成
将步骤4)中制备的O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤(e)溶于有机溶剂，在冰浴条件下，逐滴加入氯乙基异氰酸酯，搅拌反应，反应结束后，加入乙酸乙酯和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，乙酸乙酯层水洗2遍，真空干燥，得到化合物(f)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(f)；
6)1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(g)的合成
将步骤5)中制备的1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(f)溶于有机溶剂，在冰浴条件下，逐滴加入含有亚硝酸钠的盐酸/水溶液，避光搅拌反应，反应结束后，将反应液冷冻干燥，得到化合物(g)粗产物，将粗产物溶于甲醇，过滤除去杂质沉淀，重结晶后得到终产物1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(g)。
上述方法中：
步骤1)中，
所述2-氨基-6-氯-嘌呤(a)与1-甲基吡咯烷的摩尔比为1:1-1:5，优选1:2-1:3；
所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，优选N,N-二甲基甲酰胺，其主要用于溶解反应物(a)，使得(a)处于溶液中，易与其他物质发生反应，其用量为反应物(a)摩尔量(mmol)的0.5-3倍量体积(mL)；
搅拌反应时温度控制在15-40℃，优选20-30℃；
反应时间为12-24小时，优选16-20小时。
步骤2)中：
所选有机溶剂为甲醇、乙醇或N,N-二甲基甲酰胺，优选甲醇；其主要作用是溶解脂肪族氨基苄醇，使得脂肪族氨基苄醇处于溶液中，易与其他物质发生反应，其用量为脂肪族氨基苄醇摩尔量(mmol)的1.2-2.2倍量体积(mL)；
所述脂肪族氨基苄醇和三氟乙酸乙酯的用料比(摩尔比)为1:1-1:2；
所述脂肪族氨基苄醇为2-(氨烷基)-苄醇、3-(氨烷基)-苄或4-(氨烷基)-苄醇，其中的烷基优选为甲基、乙基或丙基；
所选惰性保护气体为氮气或氩气，优选氩气；
反应温度可控制在15-40℃，优选20-30℃；
反应时间可控制在1-3小时，优选2小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为乙酸乙酯和环己烷，采用等度洗脱，乙酸乙酯/环己烷体积比为1:1-1:2。
步骤3)中：
化合物(b)、化合物(c)与叔丁醇钾的摩尔比为1:1-5:3-6，优选1:2-3:4-5；
所选有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，优选N,N-二甲基甲酰胺；其主要用于溶解反应物(b)，使得(b)处于溶液中，易与其他物质发生反应，其用量为反应物(b)摩尔量(mmol)的2-3倍量体积(mL)；
所选惰性保护气体为氮气或氩气，优选氩气；
在惰性气体保护下搅拌反应时，反应温度控制在15-40℃，优选20-30℃；反应时间为2-4小时，优选3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷(v/v)1:50逐渐变为1:10。
步骤4)中：
所选溶剂甲醇/水溶液是甲醇与水按照体积比为10:1-30:1混合，优选为15:1-20:1；
化合物(d)与无水碳酸钾的摩尔比为1:3-1:8，优选1:4-1:6；
加热回流时的反应时间控制在1-4小时，优选2-3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇/三乙胺/二氯甲烷，采用等度洗脱方法，甲醇/三乙胺/二氯甲烷的体积比为20:1:100。
步骤5)中：
所选有机溶剂为甲醇、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，优选N,N-二甲基甲酰胺；其主要用于溶解反应物(e)，使得(e)处于溶液中，易与其他物质发生反应，其用量为反应物(e)摩尔量(mmol)的10-30倍量体积(mL)；
化合物(e)和氯乙基异氰酸酯的摩尔比为1:1-1:2；
搅拌反应时，反应温度控制在15-40℃，优选20-30℃；
反应时间为2-4小时，优选3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷(v/v)1:50逐渐变为1:10。
步骤6)中：
所选有机溶剂为甲醇、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜，优选甲醇；其主要用于溶解反应物(e)，使得(e)处于溶液中，易与其他物质发生反应，其用量为反应物(e)摩尔量(mmol)的25-50倍量体积(mL)；
化合物(f)和亚硝酸钠的摩尔比为1:1-1:3，优选1:2；
所用盐酸/水溶液中盐酸浓度为5-15％(v/v)，优选5％；
避光搅拌反应时，反应温度控制在0-5℃；
反应时间为2-12小时，优选5-8小时。
本发明还提供了含上述化合物的制剂，由化合物单独制成或由化合物和药学上可接受的载体组成。
所述制剂为片剂、口服液、胶囊、丸剂、散剂或注射剂，所述注射剂为注射液或注射用冻干粉针。
所述药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，选自填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增溶剂、助悬剂、润湿剂、色素、香精、溶剂、表面活性剂或矫味剂中的一种或几种。
所述填充剂选自淀粉、预胶化淀粉、糊精、葡萄糖、蔗糖、乳糖、乳糖醇、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇或木糖醇，优选山梨醇、微晶纤维素、乳糖或预胶化淀粉；
所述崩解剂选自交联羧甲基纤维素钠，交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠或淀粉，优选交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素或羧甲基淀粉钠；
所述润滑剂选自硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、PEG4000、PEG6000、月桂醇硫酸钠，优选硬脂酸镁、滑石粉；
所述粘合剂选自羧甲基纤维素钠、羟丙甲基纤维素、乙基纤维素、聚维酮、淀粉浆、蔗糖、糖粉、胶浆、明胶、聚乙二醇，优选羟丙甲基纤维素、聚维酮；
所述增溶剂选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、甲葡胺、L-赖氨酸、L-精氨酸，优选氢氧化钠、葡甲胺；
所述助悬剂选自微粉硅胶、蜂蜡、纤维素、固态聚乙二醇；
所述润湿剂选自甘油、吐温-80、乙氧基氢化蓖麻油或卵磷脂；
所述溶剂选自乙醇、液态聚乙二醇、异丙醇、吐温-80、甘油、丙二醇或植物油，所述植物油选自大豆油、蓖麻油、花生油、调和油等；
所述表面活性剂选自十二烷基苯磺酸钠、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐温)等；
所述矫味剂选自阿斯巴甜、蔗糖素、香精、甜菊素、安赛蜜、柠檬酸或糖精钠。
本发明还提供了上述化合物或其制剂在制备抗肿瘤的药物中的应用，所述肿瘤为神经胶质瘤、结肠癌或白血病。
本发明提供的化合物具有以下优点：
1、本发明通式Ⅱ中的化合物由于含有能够抑制AGT活性的O6-苄基鸟嘌呤药效团，比现有亚硝基脲类抗癌药物具有耐药性更低、抗癌活性更高的优点；该化合物能选择性的作用于癌细胞，降低了联合用药的毒副作用，提高了药物的靶向性。
2、本发明对通式Ⅱ中的化合物进行了体外抗肿瘤筛选试验。结果表明，通式Ι中的化合物对人脑神经胶质瘤细胞SF763、SF767、SF126、SF188，人结肠癌细胞HT29和小鼠白血病细胞L1210多种肿瘤细胞系均有明显的抑制作用，且比现有的CENU及其与O6-苄基鸟嘌呤的联合用药具有更高的肿瘤抑制活性。因此，通式Ⅱ中的化合物可用于抗肿瘤。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1:1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物1)的合成。
(1)1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物的合成
将2g2-氨基-6-氯嘌呤(11.8mmol)溶于40mLN,N-二甲基甲酰胺，加入2.8mL1-甲基吡咯烷(26.4mmol)，25℃混合搅拌反应18小时，反应结束，后加入4mL丙酮，出现沉淀，过滤，将收集到的固体用***洗涤2次，真空干燥，得到1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(2.6g，8.2mmol)，产率66％。
UVλ：289nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3445.4(NH),3274.9(NH2),2974.9(C-H),1719.3(C＝N),1552.7(C＝C)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：2.04(m,2H,CH2),2.23(m,2H,CH2),3.64(s,3H,CH3),3.94(m,2H,CH2N+),4.58(m,2H,CH2N+),7.13(s,2H,NH2),8.31(s,1H,H8),12.99(s,1H,H9)；
ESI-MS：255[M+H]+。
(2)2-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇
将1.7g2-(氨甲基)-苄醇(12.4mmol)和1.76mL三乙胺(12.4mmol)溶于20mL无水甲醇，在氩气保护下逐滴加入1.96mL三氟乙酸乙酯(16.4mmol)，25℃搅拌反应2小时。反应结束后，加入30mL乙酸乙酯和30mL水进行萃取，收集的乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，真空除去溶剂，得到2-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇粗产物，粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯/环己烷(体积比1:2)，等度洗脱，得到2-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(2.0g，8.6mmol)，产率69％。
熔点：75-76℃；
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3425.1(NH),2956.7(CH2),1711.6(C＝O),1590.8(C＝C),1151.2(C-N),1196.5(CF3)；
1H-NMR(CDCl3)δ：2.20(s,1H,OH),4.61(d,2H,CH 2NH),4.75(s,2H,CH 2OH),7.76(s,1H,NH),7.30-7.44(m,4H,Ar)；
ESI-MS：234[M+H]+。
(3)O6-[2-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤
将1.18g步骤(2)中制得的2-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(5.1mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺，加入600mg步骤(1)中制得的1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(2.36mmol)和1.2g叔丁醇钾(10.7mmol)，在氩气保护下，25℃搅拌反应3小时。反应结束后加入冰乙酸水溶液中和过量的叔丁醇钾至溶液pH＝7，然后加入二氯甲烷和水(二氯甲烷和水的体积比为1:1)进行萃取，二氯甲烷层用水洗2遍，真空干燥，得到O6-[2-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，洗脱液为甲醇/二氯甲烷，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10。得到O6-[2-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(608mg，1.66mmol)，产率70％。
熔点：179-180℃；
UVλ：245nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3421.2(NH),3389.6(NH2),3109.6(＝CH),2998.3(CH2),1725.9(C＝O),1617.4(C＝C),1371.2(C＝N),1190.3(CF3)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.58(d,2H,CH 2NH),5.57(s,2H,CH 2OH),6.29(s,2H,NH2),7.26-7.60(m,4H,Ar),7.81(s,1H,H8),10.01(s,1H,NHCO),12.33(s,1H,H9)；
ESI-MS：367[M+H]+。
(4)O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤
将335mg步骤(3)中制备的O6-[2-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(0.91mmol)溶于36mL甲醇/水(甲醇与水的体积比为17:1)溶液，加入656mg无水碳酸钾(4.75mmol)，加热回流2小时，冷却至室温，真空干燥，得到O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，等度洗脱，洗脱液为甲醇/三乙胺/二氯甲烷(体积比为20:1:100)。得到O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(165mg，0.61mmol)，产率67％。
熔点：169-171℃；
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3475.3(NH),3407.6(NH2),3075.2(＝CH),2995.6(CH2),1643.4(C＝C),1323.8(C＝N)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.82(s,2H,CH 2NH2),9.02(m,2H,CH2NH 2),6.27(s,2H,NH2),7.22-7.55(m,4H,Ar),5.55(s,2H,CH2O),7.83(s,1H,H8),12.03(s,1H,H9)；
ESI-MS：271[M+H]+。
(5)1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲
将100mg步骤(4)中制备的O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(0.37mmol)溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺，在冰浴条件下，逐滴加入含0.032mL氯乙基异氰酸酯(0.37mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液5mL。滴毕后，25℃搅拌反应3小时。反应结束后，加入20mL乙酸乙酯和20mL水进行萃取，乙酸乙酯层水洗2遍，真空干燥，得到1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10。得到1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(112mg，0.30mmol)，产率81％。
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3453.1(NH),3495.6(NH2),3087.5(＝CH),2936.4(CH2),1726.7(C＝O),1670.1(C＝C),1456.8(C＝N),1113.7(C-O),758.3(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.58(m,2H,CH2Cl),3.46(m,2H,CH 2CH2Cl),6.25(m,1H,NHCO),6.31(m,1H,NHCO),4.30(s,2H,NHCH 2),6.98(s,2H,NH2),7.17-7.36(m,4H,Ar),5.35(s,2H,CH2O),8.47(s,1H,H8),11.80(s,1H,H9)；
ESI-MS：376[M+H]+。
(6)1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲
将50mg步骤(5)中制备的1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(0.13mmol)溶于5mL无水甲醇，在冰浴条件下，逐滴加入含18mg亚硝酸钠(0.26mmol)的5％盐酸水溶液，避光搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液冷冻干燥，得到1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲粗产物。将粗产物溶于无水甲醇，过滤除去杂质沉淀，重结晶后得到终产物1-(O6-[2-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(25mg，0.062mmol)，产率48％。
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3425.3(-NH-),3390.4(-NH2),3073.3(＝CH),2981.2(CH2),1720.9(C＝O),1432.3(N＝O),1620.6(C＝C),1439.4(C＝N),1161.5(C-O),763.7(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.70(m,2H,CH2Cl),3.58(m,2H,CH 2CH2Cl),6.21(m,1H,NHCO),4.30(s,2H,NHCH 2),7.08(s,2H,NH2),7.19-7.42(m,4H,Ar),5.31(s,2H,CH2O),8.98(s,1H,H8),10.9(s,1H,H9)；
ESI-MS：405[M+H]+。
实施例2:1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物2)的合成。
(1)1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物的合成：方法与实施例1中的步骤(1)相同。
(2)3-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇
取3.4g3-(氨甲基)-苄醇(24.8mmol)和3.52mL三乙胺(24.8mmol)溶于50mL无水甲醇，在氩气保护下逐滴加入3.92mL三氟乙酸乙酯(32.8mmol)，25℃搅拌反应2小时，反应结束后，加入50mL乙酸乙酯和50mL水进行萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，真空除去溶剂，得到3-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇粗产物，粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯/环己烷(体积比1:2)，等度洗脱。得到3-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(4.8g，20.6mmol)，产率83％。
熔点：73-74℃；
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3413.5(NH),2983.1(CH2),1720.6(C＝O),1670.9(C＝C),1132.8(C-N),1180.4(CF3)；
1H-NMR(CDCl3)(CDCl3)δ：1.84(s,1H,OH),4.52(d,2H,CH 2NH),4.70(s,2H,CH 2O),6.65(s,1H,NHCO),7.21-7.39(m,4H,Ar)；
ESI-MS：234[M+H]+。
(3)O6-[3-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤
将2.37g步骤(2)中制备的3-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(10.2mmol)溶于40mLN,N-二甲基甲酰胺，加入1.2g步骤(1)中制备的1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(4.72mmol)和2.4g叔丁醇钾(21.4mmol)，在氩气保护下，25℃搅拌反应3小时。反应结束后加入冰乙酸水溶液中和过量的叔丁醇钾至溶液pH＝7，然后加入二氯甲烷和水(二氯甲烷和水的体积比为1:1)进行萃取，二氯甲烷层用水洗2遍，真空干燥，得到O6-[3-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，洗脱液为甲醇/二氯甲烷，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10。得到O6-[3-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(1.24g，3.38mmol)，产率72％。
熔点：210-211℃；
UVλ：245nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3454.2(NH),3313.2(NH2),3024.5(＝CH),2990.1(CH2),1720.2(C＝O),1665.8(C＝C),1421.6(C＝N),1213.5(CF3)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.42(d,2H,CH 2NH),5.47(s,2H,CH2),6.27(s,2H,NH2),7.18-7.41(m,4H,Ar),7.83(s,1H,H8),10.1(s,1H,NHCO),12.44(s,1H,H9)；
ESI-MS：367[M+H]+。
(4)O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤
将670mg步骤(3)中制备的O6-[3-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(1.82mmol)溶于72mL甲醇/水(甲醇与水的体积比17:1)溶液，加入1.31g无水碳酸钾(9.5mmol)，加热回流2小时，冷却至室温，真空干燥，得到O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，等度洗脱，洗脱液为甲醇/三乙胺/二氯甲烷(体积比为20:1:100)。得到O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(360mg，1.32mmol)，产率73％。
熔点：158-160℃；
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3471.6(-NH-),3413.5(-NH2),3060.9(＝CH),2949.6(CH2),1676.9(C＝C),1421.5(C＝N)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.02(s,2H,CH 2NH2),8.58(m,2H,CH2NH 2),6.30(s,2H,NH2),7.16-7.45(m,4H,Ar),5.48(s,2H,CH2O),7.83(s,1H,H8),11.2(s,1H,H9)；
ESI-MS：271[M+H]+。
(5)1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲
将200mg步骤(4)中制备的O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(0.74mmol)溶于8mLN,N-二甲基甲酰胺，在冰浴条件下，逐滴加入含0.064mL氯乙基异氰酸酯(0.74mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液5mL。滴毕后，25℃搅拌反应3小时。反应结束后，加入30mL乙酸乙酯和30mL水进行萃取，乙酸乙酯层水洗2遍，真空干燥，得到1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10。得到1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(230mg，0.62mmol)，产率83％。
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3421.3(NH),3383.1(NH2),3012.4(＝CH),2899.5(CH2),1762.8(C＝O),1653.4(C＝C),1445.2(C＝N),1102.2(C-O),775.4(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.64(m,2H,CH2Cl),3.42(m,2H,CH 2CH2Cl),6.34(m,1H,NHCO),6.36(m,1H,NHCO),4.25(s,2H,NHCH 2),7.03(s,2H,NH2),7.14-7.37(m,4H,Ar),5.13(s,2H,CH2O),8.57(s,1H,H8),12.1(s,1H,H9)；
ESI-MS：376[M+H]+。
(6)1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲
将100mg步骤(5)中制备的1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(0.26mmol)溶于12mL无水甲醇，在冰浴条件下，逐滴加入含36mg亚硝酸钠(0.52mmol)的5％盐酸水溶液，避光搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液冷冻干燥，得到1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲粗产物。将粗产物溶于无水甲醇，过滤除去杂质沉淀，重结晶后得到终产物1-(O6-[3-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(66mg，0.164mmol)，产率63％。
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3470.4(-NH-),3415.6(-NH2),3096.5(＝CH),2940.6(CH2),1712.4(C＝O),1512.9(N＝O),1606.9(C＝C),1555.4(C＝N),1159.4(C-O),760.9(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.61(m,2H,CH2Cl),3.40(m,2H,CH2CH2Cl),6.33(m,1H,NHCO),4.32(s,2H,NHCH 2),6.89(s,2H,NH2),7.11-7.42(m,4H,Ar),5.20(s,2H,CH2O),9.03(s,1H,H8),11.9(s,1H,H9)；
ESI-MS：405[M+H]+。
实施例3：1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(化合物3)的合成
(1)1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物的合成：方法与实施例1中的步骤(1)相同。
(2)4-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇
取2.55g4-(氨甲基)-苄醇(18.6mmol)和2.64mL三乙胺(18.6mmol)溶于25mL无水甲醇，在氩气保护下逐滴加入2.94mL三氟乙酸乙酯(24.6mmol)，25℃搅拌反应2小时。反应结束后，加入35mL乙酸乙酯和35mL水进行萃取，乙酸乙酯层用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，真空除去溶剂，得到4-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇粗产物。粗产物经硅胶柱层析纯化，洗脱剂为乙酸乙酯/环己烷(体积比1:2)，等度洗脱。得到4-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(3.9g，17.1mmol)，产率90％。
熔点：91-92℃；
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3434.2(NH),2990.2(CH2),1721.8(C＝O),1664.9(C＝C),1010.3(C-N),1176.5(CF3)；
1H-NMR(CDCl3)(CDCl3)δ：1.75(s,1H,OH),4.50(d,2H,CH 2NH),4.67(s,2H,CH 2O),6.90(s,1H,NHCO),7.27-7.40(m,4H,Ar)；
ESI-MS：234[M+H]+。
(3)O6-[4-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤
将1.77g步骤(2)中制备的4-[(三氟乙酰胺基)甲基]-苄醇(7.65mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺，加入900mg步骤(1)中制备的1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(3.54mmol)和1.8g叔丁醇钾(16.1mmol)，在氩气保护下，25℃搅拌反应3小时，反应结束后加入冰乙酸水溶液中和过量的叔丁醇钾至溶液pH＝7，然后加入二氯甲烷和水(二氯甲烷和水的体积比为1:1)进行萃取，二氯甲烷层用水洗2遍，真空干燥，得到O6-[4-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，洗脱液为甲醇/二氯甲烷，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10，得到O6-[4-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(900mg，2.46mmol)，产率69％。
熔点：213-215℃；
UVλ：245nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3451.9(NH),3489.8(NH2),3099.3(＝CH),2960.2(CH2),1716.2(C＝O),1632.4(C＝C),1412.5(C＝N),1228.4(CF3)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.40(d,2H,CH 2NH),5.49(s,2H,CH2),6.34(s,2H,NH2),7.20-7.35(m,4H,Ar),7.90(s,1H,H8),10.30(s,1H,NHCO),12.64(s,1H,H9)；
ESI-MS：367[M+H]+。
(4)O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤
将503mg步骤(3)中制得的O6-[4-(三氟乙酰胺基)甲基-苄基]鸟嘌呤(1.37mmol)溶于54mL甲醇/水(甲醇和水的体积比为17:1)溶液，加入984mg无水碳酸钾(7.13mmol)，加热回流2小时，冷却至室温，真空干燥，得到O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，等度洗脱，洗脱液为甲醇/三乙胺/二氯甲烷(体积比为20:1:100)。得到O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(300mg，1.11mmol)，产率81％。
熔点：158-160℃；
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3459.1(NH),3383.4(NH2),3055.9(＝CH),2994.7(CH2),1675.4(C＝C),1415.3(C＝N)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：4.02(s,2H,CH 2NH2),8.58(m,2H,CH2NH 2),6.30(s,2H,NH2),7.16-7.45(m,4H,Ar),5.48(s,2H,CH2O),7.83(s,1H,H8),11.2(s,1H,H9)；
ESI-MS：271[M+H]+。
(5)1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲
将100mg步骤(4)中制备的O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤(0.37mmol)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺，在冰浴条件下，逐滴加入含0.032mL氯乙基异氰酸酯(0.37mmol)的N,N-二甲基甲酰胺溶液5mL。滴毕后，25℃搅拌反应3小时。反应结束后，加入20mL乙酸乙酯和20mL水进行萃取，乙酸乙酯层水洗2遍，真空干燥，得到1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲粗产物。将粗产物用硅胶柱层析纯化，梯度洗脱，甲醇/二氯甲烷体积比从1:50逐渐变为1:10。得到1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(110mg，0.29mmol)，产率78％。
UVλ：241nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3458.1(NH),3397.3(NH2),3059.5(＝CH),2987.3(CH2),1720.6(C＝O),1610.2(C＝C),1378.5(C＝N),1190.3(C-O),765.1(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.68(m,2H,CH2Cl),3.54(m,2H,CH 2CH2Cl),6.31(m,1H,NHCO),6.30(m,1H,NHCO),4.32(s,2H,NHCH 2),6.87(s,2H,NH2),7.20-7.25(m,4H,Ar),5.18(s,2H,CH2O),9.04(s,1H,H8),11.8(s,1H,H9)；
ESI-MS：376[M+H]+。
(6)1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲
将65mg步骤(5)中制备的1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(0.17mmol)溶于5mL无水甲醇，在冰浴条件下，逐滴加入含23.4mg亚硝酸钠(0.34mmol)的5％盐酸水溶液，避光搅拌反应3小时。反应结束后，将反应液冷冻干燥，得到1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲粗产物。将粗产物溶于无水甲醇，过滤除去杂质沉淀，重结晶后得到终产物1-(O6-[4-(氨甲基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(39mg，0.096mmol)，产率56％。
UVλ：234nm；
IR(KBr压片)v/cm-1：3456.1(NH),3404.8(-NH2),3020.3(＝CH),2980.6(CH2),1717.1(C＝O),1525.8(N＝O),1623.8(C＝C),1480.4(C＝N),1165.2(C-O),756.3(C-Cl)；
1H-NMR(DMSO-d6)δ：3.68(m,2H,CH2Cl),3.40(m,2H,CH 2CH2Cl),6.33(m,1H,NHCO),4.32(s,2H,NHCH 2),6.89(s,2H,NH2),7.11-7.42(m,4H,Ar),5.20(s,2H,CH2O),9.03(s,1H,H8),11.9(s,1H,H9)；
ESI-MS：405[M+H]+。
实验例1：抗癌效果实验
1、实验材料与仪器
供试化合物：上述制备实施例中制得的化合物1、2、3；
细胞系：人脑神经胶质瘤细胞SF763、SF767、SF126、SF188，人结肠癌细胞HT29和小鼠白血病细胞L1210；
2、实验方法
六种肿瘤细胞分别以1000/孔接种96孔板，在37℃，5％CO2培养24小时后，换以系列浓度(1μM、5μM、10μM、50μM、100μM、200μM、400μM和1000μM)的BCNU(阳性对照组)、BCNU+20μMO6-苄基鸟嘌呤(联合用药组)、化合物1、化合物2和化合物3，并设置阴性对照组(20μMO6-苄基鸟嘌呤)，每组5个复孔，作用48小时。然后，向每孔中加10μLCCK-8溶液，作用4小时。最后，测定在450nm处的吸光度值，按以下公式计算细胞活性，并通过回归分析计算得到半数抑制率IC50。
细胞死亡率(％)＝(对照组OD450–药物处理组OD450)/对照组OD450×100
3、实验结果：见表1
表1：肿瘤细胞的半数抑制率(IC50,μM)
化合物 SF763 SF767 SF126 SF188 HT29 L1210
阳性对照组 196±5 60±3 50±2 180±4 256±4 32±3
联合用药组 101±10 39±5 30±4 112±8 157±11 26±2
1 73±3 31±2 19±4 73±7 85±9 21±4
2 53±2 25±2 22±5 50±3 72±7 18±2
3 59±5 30±3 21±6 58±3 75±2 19±3
表1结果显示：
与阳性对照组(BCNU组)相比，化合物1、2和3对6种肿瘤细胞的IC50值更低，表明化合物1、2和3对6种肿瘤细胞的抑制作用比BCNU均有明显的提高。
与联合用药组(BCNU+20μMO6-苄基鸟嘌呤)相比，化合物1、2和3对肿瘤抑制效果也较高。
阴性对照组(O6-苄基鸟嘌呤组)对6种肿瘤细胞均无明显抑制作用。
实验结果表明，本发明提供的化合物比现有的CENU及其与O6-苄基鸟嘌呤的联合用药具有更高的肿瘤抑制活性，可用于抗肿瘤。
虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (18)

1.一种β-氯乙基亚硝基脲类化合物，其结构如通式(Ⅱ)所示：
X为(CH2)n，n为1-6的整数。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为：
3.一种制备权利要求1或2所述的化合物的方法，其特征在于，该方法的反应式如下：
式中X为(CH2)n，n为1-6的整数。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1)1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)的合成
将2-氨基-6-氯-嘌呤(a)溶于有机溶剂，加入1-甲基吡咯烷，搅拌反应，反应结束后，加入丙酮使(b)完全沉淀，过滤，将收集到的固体用***洗涤2次，真空干燥，得到1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)；
2)脂肪族三氟乙酰胺苄醇(c)的合成
将脂肪族氨基苄醇和三乙胺按照1:1的摩尔比溶于有机溶剂，在惰性气体保护下逐滴加入三氟乙酸乙酯，搅拌反应，反应结束后，加入乙酸乙酯和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥过夜，真空除去溶剂，得到化合物(c)粗产物，粗产物经硅胶柱层析纯化，得到化合物(c)；
3)O6-[(脂肪族三氟乙酰胺基)苄基]鸟嘌呤(d)的合成
将步骤2)得到的脂肪族三氟乙酰胺苄醇(c)溶于有机溶剂，加入步骤1)得到的1-(2-氨基-9-氢-嘌呤-6-)-1-甲基吡咯烷氯化物(b)与叔丁醇钾，在惰性气体保护下搅拌反应，反应结束后加入冰乙酸水溶液以中和过量的叔丁醇钾至溶液pH＝7，然后加入二氯甲烷和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，二氯甲烷层用水洗2遍，真空干燥，得到化合物(d)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(d)；
4)O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤(e)的合成
将步骤3)中制备的O6-[(脂肪族三氟乙酰胺基)苄基]鸟嘌呤(d)溶于甲醇/水溶液，加入无水碳酸钾，加热回流，反应结束后，冷却至室温，真空干燥，得到化合物(e)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(e)；
5)1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(f)的合成
将步骤4)中制备的O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤(e)溶于有机溶剂，在冰浴条件下，逐滴加入氯乙基异氰酸酯，搅拌反应，反应结束后，加入乙酸乙酯和水按照体积比为1：1组成的混合液进行萃取，乙酸乙酯层水洗2遍，真空干燥，得到化合物(f)粗产物，将粗产物用硅胶柱层析法纯化，得到化合物(f)；
6)1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(g)的合成
将步骤5)中制备的1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)脲(f)溶于有机溶剂，在冰浴条件下，逐滴加入含有亚硝酸钠的盐酸/水溶液，避光搅拌反应，反应结束后，将反应液冷冻干燥，得到化合物(g)粗产物，将粗产物溶于甲醇，过滤除去杂质沉淀，重结晶后得到终产物1-(O6-[(脂肪族氨基)苄基]鸟嘌呤)-3-(2-氯乙基)-1-亚硝基脲(g)，即式Ⅱ化合物。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中：
所述2-氨基-6-氯-嘌呤(a)与1-甲基吡咯烷的摩尔比为1:1-1:5；
所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
搅拌反应时温度控制在15-40℃；
反应时间为12-24小时。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中：
所述2-氨基-6-氯-嘌呤(a)与1-甲基吡咯烷的摩尔比1:2-1:3；
所述有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
搅拌反应时温度控制在20-30℃；
反应时间为16-20小时。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中：
所选有机溶剂为甲醇、乙醇或N,N-二甲基甲酰胺；
所述脂肪族氨基苄醇和三氟乙酸乙酯的用料摩尔比为1:1-1:2；
所述脂肪族氨基苄醇为2-(氨烷基)-苄醇、3-(氨烷基)-苄醇或4-(氨烷基)-苄醇，其中的烷基为甲基、乙基或丙基；
所选惰性保护气体为氮气或氩气；
反应温度控制在15-40℃；
反应时间控制在1-3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为乙酸乙酯和环己烷，采用等度洗脱，乙酸乙酯/环己烷体积比为1:1-1:2。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤2)中：
所选有机溶剂为甲醇；
所述脂肪族氨基苄醇和三氟乙酸乙酯的摩尔比为1:1-1:2；
所述脂肪族氨基苄醇为2-(氨烷基)-苄醇、3-(氨烷基)-苄醇或4-(氨烷基)-苄醇，其中的烷基为甲基、乙基或丙基；
所选惰性保护气体为氩气；
反应温度控制在20-30℃；
反应时间控制在2小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为乙酸乙酯和环己烷，采用等度洗脱，乙酸乙酯/环己烷体积比为1:1-1:2。
9.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中：
化合物(b)、化合物(c)与叔丁醇钾的摩尔比为1:1-5:3-6；所选有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
所选惰性保护气体为氮气或氩气；
在惰性气体保护下搅拌反应时，反应温度控制在15-40℃；
反应时间为2-4小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷体积比1:50逐渐变为1:10。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中：
化合物(b)、化合物(c)与叔丁醇钾的摩尔比为1:2-3:4-5；所选有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
所选惰性保护气体为氩气；
在惰性气体保护下搅拌反应时，反应温度控制在20-30℃；
反应时间为3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷体积比1:50逐渐变为1:10。
11.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中：
所选溶剂甲醇/水溶液是甲醇与水按照体积比为10:1-30:1混合；
化合物(d)与无水碳酸钾的摩尔比为1:3-1:8；
加热回流时的反应时间控制在1-4小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇/三乙胺/二氯甲烷，采用等度洗脱方法，甲醇/三乙胺/二氯甲烷的体积比为20:1:100。
12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述步骤4)中：
所选溶剂甲醇/水溶液是甲醇与水按照体积比为15:1-20:1；
化合物(d)与无水碳酸钾的摩尔比为1:4-1:6；
加热回流时的反应时间控制在2-3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇/三乙胺/二氯甲烷，采用等度洗脱方法，甲醇/三乙胺/二氯甲烷的体积比为20:1:100。
13.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中：
所选有机溶剂为甲醇、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
化合物(e)和氯乙基异氰酸酯的摩尔比为1:1-1:2；
搅拌反应时，反应温度控制在15-40℃；
反应时间为2-4小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷体积比1:50逐渐变为1:10。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中：
所选有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺；
化合物(e)和氯乙基异氰酸酯的摩尔比为1:1-1:2；
搅拌反应时，反应温度控制在20-30℃；
反应时间为3小时；
硅胶柱层析所用的洗脱剂为甲醇和二氯甲烷，采用梯度洗脱方法，其梯度变化规律是从甲醇/二氯甲烷体积比1:50逐渐变为1:10。
15.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤6)中：
所选有机溶剂为甲醇、乙醇、N,N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜；
化合物(f)和亚硝酸钠的摩尔比为1:1-1:3；
所用盐酸/水溶液中盐酸体积浓度为5-15％；
避光搅拌反应时，反应温度控制在0-5℃；
反应时间为2-12小时。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述步骤6)中：
所选有机溶剂为甲醇；
化合物(f)和亚硝酸钠的摩尔比为1:2；
所用盐酸/水溶液中盐酸体积浓度为5％；
避光搅拌反应时，反应温度控制在0-5℃；
反应时间为5-8小时。
17.含权利要求1或2所述的化合物的制剂，其特征在于，由化合物单独制成或由化合物和药学上可接受的载体组成。
18.权利要求1或2所述的化合物或权利要求17所述的制剂在制备抗肿瘤药物中的应用，所述肿瘤为神经胶质瘤、结肠癌或白血病。
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