CN103945855A - 含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物。更具体地说，涉及一种含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物，其具有优异的皮肤抗氧化、抗老化、美白以及保湿效果，且对皮肤无刺激性。

Description

含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物
技术领域
本发明涉及一种含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物。更具体地说，涉及一种含有白甘菊提取物的皮肤外用剂组合物，其具有优异的皮肤抗氧化、抗老化、美白以及保湿效果，且对皮肤无刺激性。
背景技术
随着年龄的增加，人的皮肤会由于多种内部、外部因素而发生变化。内部因素包括多种调节新陈代谢的激素分泌减少，免疫细胞功能和细胞的活性降低，从而导致生物体所必须的免疫蛋白质以及生物体结构蛋白质的生物合成减少；而外部因素包括由臭氧层的破坏，太阳光线中到达地表的紫外线的含量增加，并且随着环境污染更加严重，自由基以及氧自由基等的增加。这些不仅导致皮肤厚度变小、皱纹增加、弹性降低，还可使皮肤肤色灰暗，常发生皮肤问题，以及黑斑、雀斑、老年斑增加等多种变化。
随着不断的老化，会出现构成皮肤的物质(胶原、弹性蛋白、透明质酸以及糖蛋白)的含量以及排列发生变化或者减少的症状，并可受到自由基以及氧自由基的氧化胁迫。并且，由于不断的老化以及紫外线的影响导致环氧酶-2(cyclooxygenase，Cox-2)的生物合成增加，其被认为在构成皮肤的大部分细胞中引起炎症的促炎症细胞因子(proinflammatory cytokine)。并且，由于上述炎性因子的作用可增加作为分解皮肤组织的基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMP)的生物合成，还已知诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase)会导致NO(nitric oxide)的生成增加。即根据自然发生的内因性老化引起的细胞活性的降低以及微炎症导致的基质物质的生物合成减少，以及根据多种有害环境的胁迫的增加及太阳光线引起的活性氧的增加等外部因素而加速分解以及变性，导致皮肤基质被破坏、变薄，从而显示出诸多皮肤老化的症状。因此，正在进行着多种关于能防止和改善上述老化现象的活性成分的研究。
并且，由于体内酶类、还原代谢、化学药品、污染物以及光化学反应等多种物理、化学以及环境因素等原因产生的活性氧，对于脂质、蛋白质、糖以及DNA等构成细胞的成分可非选择性地、非可逆性地进行破坏，从而引起包括细胞老化或者癌症的多种疾病。并且，由上述活性氧引起的作为脂质过氧化的产物而产生的脂质过氧化物等多种体内过氧化物也对细胞引起氧化损伤，并进一步导致各种功能障碍，从而成为多种疾病的病因。因此，可消除自由基的化合物(free radical scavengers)或者过氧化物生成抑制物质等抗氧化剂，有望成为由上述氧化物引起的老化以及各种疾病的抑制剂或者治疗剂。
本发明中白甘菊(Chrysanthemumindicumvar.albescens或者Chrysanthemumindicumvar.Albescens Makino)为甘菊的变种，也被称为Dendranthemaindicum f.albescens，Dendranthema indicum f.albescens(Makino)T.B.Lee等学名。通常对于甘菊的研究仅是对黄甘菊(Chrysanthemumindicum)进行的，而国内外对于上述白甘菊的研究则几乎没有，也没有白甘菊对于皮肤效果的相关研究。
发明内容
本发明要解决的技术问题
本发明发明人发现与使用现有的黄甘菊提取物时相比，将白甘菊提取物作为皮肤外用剂组合物使用时，对皮肤没有刺激性，且具有优异的抗氧化、抗老化、美白以及保湿效果，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的在于，提供一种皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物，从而具有优异的皮肤抗氧化、抗老化、美白以及保湿效果。
技术方案
为解决上述技术问题，本发明提供一种用于抗氧化的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于抗老化的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于增加皮肤弹性的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于改善皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于美白的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于保湿的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
有益效果
为解决上述技术问题，本发明提供一种用于抗氧化的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于抗老化的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于增加皮肤弹性的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于改善皮肤皱纹的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于美白的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
并且，本发明提供一种用于保湿的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
附图说明
图1是表示通过高效液相色谱(HPLC)对白甘菊提取物进行成分分析结果的曲线图
图2是表示通过高效液相色谱(HPLC)对黄甘菊提取物进行成分分析结果的曲线图。
最佳实施方式
根据本发明的皮肤外用剂组合物，其含有白甘菊(Chrysanthemumindicumvar.albescens或者Chrysanthemumindicumvar.Albescens Makino)提取物作为有效成分。
本发明的白甘菊提取物可通过本领域公知的方法获得。具体例如，将白甘菊用纯净水清洗，通过日光干燥或者热风干燥进行干燥，并在细末化的粉末中加入提取溶剂，可选择有机溶剂乙醇、甲醇、丁醇、***、乙酸乙酯、氯仿或这些有机溶剂和水的混合溶剂作为提取溶剂。考虑到原料的稳定性，优选使用水或者30-70％的乙醇。将利用上述溶剂获得的提取物回流提取后进行过滤，在40-45℃条件下进行减压浓缩，从而可获得白甘菊干燥提取物。
本发明的组合物中相比于组合物总重量，上述白甘菊提取物的含量优选为0.001-10重量％。其中，当上述白甘菊提取物的含量不足0.001重量％时，通过上述成分得到的功效以及效果甚微；而当超过10重量％时，存在皮肤稳定性或者剂型上的问题。
本发明的组合物可用作抗氧化的皮肤外用剂组合物，其通过消除或者抑制自由基，具有优异的抗氧化效果。
本发明的组合物用作抗老化的皮肤外用剂组合物，其具有优异的增加皮肤弹性，改善皱纹的效果。
本发明的组合物可用作保湿的皮肤外用剂组合物，其可强化皮肤屏障功能，还可诱导皮肤角质形成细胞的分化。
本发明的组合物可用作美白的皮肤外用剂组合物，其可抑制酪氨酸酶的活性，抑制黑色素的生成，从而具有优异的美白效果。
根据本发明的组合物可包含化妆品领域或者皮肤科学领域允许使用的载体或者基质，从而被剂型化。其可以是适合局部应用的所有剂型，例如可以以溶液、凝胶、固体、浆糊无水生成物、在水相中分散油相而获得的乳液、混悬液、微乳液、微胶囊、微颗粒球或者离子型(脂质体)以及非离子型的小囊分散剂形态，或者乳霜、化妆水、乳液、粉末、软膏、喷雾剂或者遮瑕棒的形态提供。并且还可以以泡沫(foam)的形态或者进一步含有压缩推进剂的气雾剂组合物的形态使用。上述组合物可根据本领域通常的方法而制备。
并且，根据本发明的组合物还可含有在化妆品或者皮肤科学领域中通常使用的辅助剂，例如脂肪物质、有机溶剂、增溶剂(solubilizers)、浓缩剂、胶凝剂、软化剂、抗氧化剂、悬浮剂、稳定剂、发泡剂(foaming agent)、芳香剂、表面活性剂、水、离子型或非离子型乳化剂、填充剂、金属离子封闭剂、螯合剂、防腐剂、维生素、阻隔剂、润湿剂、必需的油、染料、颜料、亲水性或者亲油性活性剂、脂质小囊，或者含有通常在化妆品中使用的任意的其它成分等。上述辅助剂可以以化妆品或者皮肤科学领域中通常使用的量添加。
并且，为了增加改善皮肤的效果，本发明的组合物可含有促进皮肤吸收的物质。
并且，本发明的组合物在不破坏作为本发明发明目的的抗氧化、抗老化、保湿以及美白效果的范围内，除了上述白甘菊提取物，优选进一步含有可提升上述皮肤保护效果的其它成分。
具体实施方式
以下，将通过试验例以及剂型例更加详细地说明本发明的构成以及效果。然而，上述试验例以及剂型例仅以例示为目的，其是为了帮助理解本发明而提供的。因此，本发明的范畴及范围不被下述例子所限定。
[制备例1]白甘菊提取物的制备
将获得的新鲜白甘菊用纯净水清洗，通过日光干燥的方式进行干燥，然后在100g的细末化的粉末中加入1000ml的70％乙醇，进行回流提取，然后进行过滤，在40-45℃条件下减压浓缩，从而最终获得17.1g白甘菊干燥提取物。
[比较制备例1]黄甘菊提取物的制备
在上述制备例1中，除了使用黄甘菊代替白甘菊，其余均使用与制备例1相同的方法进行制备。
[试验例1]白甘菊和黄甘菊提取物的成分分析
通过HPLC分别对10mg/ml浓度的，由上述制备例1以及比较制备例1制备的白甘菊提取物以及黄甘菊提取物进行成分分析，其结果如表1和图1以及图2所示。
表1
如上述表1所示，黄甘菊提取物中不含有已知的抗氧化活性物质，即蒙花苷(linarin)，而白甘菊提取物中则含有大量的蒙花苷。
[试验例2]抗氧化效果试验(DPPH测试)
为了确定通过上述制备例1以及比较制备例1制备的白甘菊以及黄甘菊提取物的抗氧化效果，通过下述方法实施了抗氧化能力评价实验。通过由1,1-二苯基-2-苦基苯肼(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl，DPPH)的还原(抗氧化剂会发生氧化)引起的吸光度的变化，比较测定DPPH氧化抑制功能。即对于通过制备例1以及比较制备例1获得的白甘菊以及黄甘菊提取物，测定由于它们对DPPH的氧化抑制，而引起的吸光度与对照组相比减少的程度来进行评价。相对于对照组的吸光度，显示出50％以下吸光度的浓度被评价为有效抗氧化浓度。
在190μL的100μM(溶于乙醇)DPPH溶液中分别添加10μL以上述方法获得的制备例1以及比较制备例1的白甘菊和黄甘菊提取物，以及阳性对照组，制备反应液，在37℃条件下反应30分钟后，在540nm波长下测定吸光度。上述阳性对照组为被广泛使用的合成抗氧化剂生育酚(Trolox)。各个物质的DPPH分析结果如下述表2所示。IC50是指由添加的样品引起吸光度减小50％时的样品浓度。
表2
试验物质 IC50(ppm)
生育酚(Trolox) 43
白甘菊提取物(制备例1) 48
黄甘菊提取物(比较制备例1) 107
从上述表2可确定，制备例1的白甘菊提取物相比于作为阳性对照组而使用的合成抗氧化剂生育酚，具有类似的功能效果。与比较制备例1的黄甘菊提取物相比较时，显示出2倍以上的抗氧化功效。因此，可以知道本发明的白甘菊提取物具有优异的抗氧化效果。
[试验例3]抗老化效果-胶原酶表达抑制功能
与生育酚以及表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)相比较，测定了制备例1及比较制备例1中获得的白甘菊以及黄甘菊提取物的胶原酶生成抑制功能。已知生育酚以及EGCG作为抗氧化物质，具有可使皮肤表皮细胞再生，防止皮肤老化的功能。
在装有含2.5％胎牛血清的DMEM(Dulbecco’s Modified Eagles’sMedia)培养基的96孔平板培养器(96-well microtiter plate)中添加人成纤维细胞，以5000细胞/孔(well)的方式添加，经培养使其长满至90％程度。之后在无血清DMEM培养基中培养24小时后，分别利用50ppm浓度的溶解于无血清培养基的上述制备例1以及比较制备例1的白甘菊以及黄甘菊提取物、10-4摩尔浓度的生育酚以及EGCG处理24小时，之后获得细胞培养液。
对于获得的细胞培养液，利用商业上可使用的胶原酶测定仪(美国法玛西亚试剂盒公司(Amersham Pharmacia))测定了胶原酶的生成程度。首先，将均匀涂覆有胶原酶抗体的96孔平板(96-well plate)中，加入获得的细胞培养液，在恒温槽中进行3小时的抗原-抗体反应。
3小时后将结合有发色基团的胶原酶二抗加入至96孔平板中，再反应15分钟。15分钟后加入显色诱发物质在室温诱导显色，时间为15分钟。之后加入1M的硫酸终止反应(显色)，反应液的颜色呈黄色，根据反应进行的程度其黄色的深浅程度不同。
利用光度计测定405nm波长下的呈黄色的96孔平板的吸光度，并根据下述数学式1计算出胶原酶合成程度。其中，将从未用组合物进行处理的组中获得的细胞培养液的反应吸光度作为对照组。即将非处理组中的胶原酶表达程度视为100，与此对比，求出用试验物质处理的组的胶原酶的表达程度，其结果如下述表3所示。
数学式1
胶原酶表达程度(％)＝物质处理细胞组的吸光度/对照组的吸光度×100
表3
试验物质 胶原酶表达程度(％)
非处理组 100
生育酚 76
EGCG 69
白甘菊提取物(制备例1) 64
黄甘菊提取物(比较制备例1) 81
胶原酶的表达程度越低，说明胶原酶表达抑制能力越强，皮肤内发生的胶原分解更少，从而阻碍皮肤弹性的降低，并且产生的皱纹的量也将减少。如上述表3所示，可确认本发明的白甘菊提取物在体外(invitro)，有效抑制了胶原酶的表达，其抑制胶原酶表达的能力比生育酚以及EGCG还优异。尤其是，白甘菊提取物相比于黄甘菊提取物，更有效地抑制了胶原酶的表达，减少了皮肤内胶原的分解，从而可以知道其具有优异的增强皮肤弹性以及减少皱纹等抗老化效果。
[试验例4]美白效果-利用小鼠色素细胞的黑色素生成抑制效果
对于上述制备例1以及比较制备例1获得的白甘菊以及黄甘菊提取物的黑色素生成抑制功能与公知的美白物质氢醌进行了比较测定。
将C57BL/6小鼠来源的小鼠的色素细胞(Mel-Ab细胞)(DooleyT.P.et al，Skin Pharmacol，7，pp188-200)，在37℃、5％的CO2条件下，在含有10％的胎牛血清、100nM的豆蔻酰佛波醇乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)、1nM霍乱毒素(cholera toxin)的DMEM培养基中进行培养。将培养的Mel-Ab细胞用0.25％的胰蛋白酶-EDTA消化下来后，在24孔板中以105细胞/孔的浓度培养细胞。从第二天开始连续三天分别添加各个试验物质进行培养。试验物质为氢醌和上述制备例1以及比较制备例1的白甘菊以及黄甘菊提取物，将它们分别调整为25ppm的浓度后使用。其中，上述氢醌作为阳性对照组使用。之后，去除培养液，用PBS洗涤后，用1N氢氧化钠溶解细胞，在400nm波长下测定吸光度，并根据下述数学式2计算出黑色素生成抑制率，其结果如下述表4所示(杜利的方法)。
数学式2
黑色素生成抑制率(％)＝100-(试验物质的吸光度/对照组的吸光度×100)
表4
试验物质 黑色素生成抑制率(％)
非处理组 100
氢醌(阳性对照组) 48.2
白甘菊提取物(制备例1) 54.9
黄甘菊提取物(比较制备例1) 29.4
如上述表4所示，确认了本发明的白甘菊提取物显示出了与已知的美白物质(即氢醌)类似程度的黑色素生成抑制率。与黄甘菊提取物相比可更有效地抑制黑色素的生成，故其具有优异的美白效果。
[试验例5]刺激性试验
为了比较公知的美白物质曲酸与作为本发明的有效成分而使用的白甘菊提取物的使用性，将对刺痛、灼痛等刺激性敏感的15名受试者作为对象，试验了刺痛、灼痛等刺激性的程度。
给受试者随机地更换涂抹0.5ml左右的曲酸(kojic acid，通过YM化学购买)和白甘菊提取物，后以0.1分为单位，在0-3.0分区间内打分数。其结果如下述表5所示。
<评价标准>
0-0.4:没有刺激
0.5-1.0：有略微的刺激
1.1-2.0：有普通程度的刺激
2.1-3.0：有严重的刺激
表5
区分 曲酸 白甘菊提取物(制备例1)
刺痛 0.91 0.23
灼痛 0.43 0.14
平均 0.67 0.19
如上述表5所示，曲酸对于刺痛或灼痛，显示出了略微的刺激性。，相反，确认了本发明中使用的白甘菊提取物对于刺痛或灼痛，总体上反应为没有刺激性。因此，可确认与曲酸不同，本发明的白甘菊提取物没有刺激性，可提供更加良好的使用感。
[试验例6]皮肤保湿试验-人角质形成细胞的分化诱导试验
为了确认通过制备例1以及比较制备例1获得的白甘菊以及黄甘菊提取物的皮肤屏障功能以及皮肤保湿力，进行利用吸光度的试验。
将人新生儿角质形成细胞(HEK)(瑞士龙沙集团(Lonza)，NHEK-Neo-新生儿人表皮角化细胞(Neonatal Normal HumanEpidermal Keratinocytes)，Pooled)以5×104细胞/孔的浓度接种于含有培养基(KBM-gold)的6孔板培养器中，并在37℃、5％的CO2条件下培养24小时，之后将白甘菊以及黄甘菊提取物分别以50ppm、100ppm的浓度添加于上述培养液中，继续培养5天，直至细胞长满至底板面积的80-90％。收获细胞，用磷酸盐缓冲溶液(PBS，Phosphatebuffered saline)洗涤后，添加1ml的含有2％十二烷基硫酸钠(SDS，Sodium Dodecyl Sulfate)和20mM浓度的二硫代苏糖醇(DTT，Dithiothreitol)的10mM浓度的Tris-盐酸缓冲液(Tis-HCl，pH7.4)，进行3分钟的超声破碎(sonication)，然后煮10分钟。以1200rpm的速度，离心分离30分钟，并将分离出的沉淀物重新悬浮于1ml的PBS中，在340nm波长下测定吸光度。
额外地，取部分上述超声破碎后的溶液，测定蛋白质含量，作为评价细胞分化程度时的基准。将低钙(0.03mM)处理组和高钙(1.2mM)处理组分别作为阴性/阳性对照组，且对在低钙浓度中添加试验物质后角质形成细胞分化时所产生的角质化包膜(Cornified Envelop，CE)的量进行测定，从而比较促进细胞分化的效果。其结果如下述表6所示。
表6
如上述表6所示，可知根据本发明的白甘菊提取物可促进角质形成细胞的分化。尤其是，白甘菊提取物相比于黄甘菊提取物，可更加有效的促进角质形成细胞的分化，从而可强化皮肤的屏障功能，增强皮肤的保湿能力。
工业实用性
本发明提供一种含有白甘菊提取物的组合物，其具有优异的皮肤抗氧化、抗老化、皮肤美白以及皮肤保湿的效果，且对皮肤无刺激性。

Claims (8)

1.一种皮肤外用剂组合物，其特征在于，其含有白甘菊提取物作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，相比于组合物总重量，所述白甘菊提取物的含量为0.001-10重量％。
3.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗氧化。
4.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于抗老化。
5.根据权利要求1或者2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于增强皮肤弹性。
6.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于改善皮肤皱纹。
7.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于保湿。
8.根据权利要求1或2所述的皮肤外用剂组合物，其特征在于，所述组合物用于美白。
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