CN103833735B - 一种防治葡萄霜霉病的化合物及应用其的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种防治葡萄霜霉病的有机化合物及其组合物，其可制备成可溶性液剂、微乳剂、水乳剂、悬乳剂、种衣剂、可湿性粉粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂、水分散粒剂、干悬乳剂，或直接使用的颗粒剂等剂型。所述组合物用于防治葡萄霜霉病。

Description

一种防治葡萄霜霉病的化合物及应用其的组合物

技术领域

本发明涉及农药化合物及其组合物领域，特别涉及一种防治葡萄霜霉病化合物及其组合物。

背景技术

葡萄霜霉病是由真菌引起的一种世界性病害，病菌原生于北美洲东部的野生葡萄上。19世纪后期，伴随欧洲种葡萄向全球引种栽培，葡萄霜霉病传播到全世界所有葡萄栽培区，如最早发明的化学杀菌剂波尔多液就是针对该病害发生而发现的。我国各葡萄种植区均有发生，病害主要侵染植株的幼嫩器官，危害叶片、嫩梢和幼果。如果防治不及时，霜霉病对葡萄树势及其产量和质量影响很大。葡萄霜霉病再各葡萄产区几乎均有分布。葡萄霜霉病主要危害叶片，也能侵染新梢幼果等幼嫩组织。叶片被害，初生淡黄色水渍状边缘不清晰的小斑点，以后逐渐扩大为褐色不规则形或多角形病斑，数斑相连变成不规则形大斑。天气潮湿时，于病斑背面产生白色霜霉状物，即病菌的孢囊梗和孢子囊。发病严重时病叶早枯早落，嫩梢受害，形成水渍状斑点，后变为褐色略凹陷的病斑，潮湿时病斑也产生白色霜霉。病重时新梢扭曲，生长停止，甚至枯死。卷须、穗轴、叶柄有时也能被害，其症状与嫩梢相似。幼果被害，病部褪色，***下陷，上生白色霜霉，很易萎缩脱落。果粒半大时受害，病部褐色至暗色，软腐早落。果实着色后不再侵染。

病菌以卵孢子在病组织中或随病残体在土壤中越冬，可存活1～2年。翌年春季萌发产生芽孢囊，芽孢囊产生游动孢子，借风雨传播到寄主叶片上，通过气孔侵入，菌丝在细胞间隙蔓延，并长出圆锥形吸器伸人寄主细胞内吸取养料，然后从气孔伸出孢囊梗，产生孢子囊，借风雨进行再侵染。病害的潜育期在感病品种上只有4～13天，抗病品种则需20天。秋末病菌在病组织中经藏卵器和雄精器配合，形成卵孢子越冬。

气候条件对发病和流行影响很大。该病多在秋季发生，是葡萄生长后期病害，冷凉潮湿的气候有利发病。病菌卵孢子萌发温度范围13～33℃，适宜温度25℃，同时要有充足的水分或雨露。孢子囊萌发温度范围5～27℃，适宜温度10～15℃，并要有游离水存在。孢子囊形成温度13～28℃，15℃左右形成孢子囊最多，要求相对湿度95～100％。游动孢子产出温度范围12～30℃，适宜温度18～24℃，须有水滴存在。试验表明：孢子囊有雨露存在时，21℃萌发40-50％，10℃时萌发95％；孢子囊在高温干燥条件能存活4～6天，在低温下可存活14～16天；游动孢子在相对湿度70～80％时能侵入幼叶，相对湿度在80～100％时老叶才能受害。因此秋季低温、多雨易引致该病的流行。

长期以来，控制葡萄霜霉病主要依靠化学药剂如石硫合剂、瑞毒锰锌可湿性粉剂、乙磷铝可湿性粉剂、瑞毒霉、代森锰锌、甲霜灵、苯霜灵、杀毒矾等，最近研制药剂有烯酰吗啉、氟吗啉、霜脲氰等。近年来，由于长期单一使用，病菌产生不同程度的抗药性，甲霜灵在葡萄老产区已几乎失去防效，乙磷铝、雷多米尔等内吸杀菌剂防效也逐渐降低。

发明内容

本发明目的在于提供一种防治葡萄霜霉病的有机化合物及其组合物，所要解决的技术问题是防治葡萄霜霉病。

所述防治葡萄霜霉病的有机化合物，其具有如下化学结构式

优选地，其是晶体，所述晶体属于斜方晶系，其空间群为P2₁， β=89.5°。

所述的有机化合物和农药上可接受的助剂、表面活性剂、溶剂和载体制备成农药组合物；

所述助剂和表面活性剂优选为扩散剂NNO、十二烷基硫酸钠、扩散剂MF、木质素磺酸钠、农乳600#、脂肪醇聚氧乙烯醚、萘磺酸甲醛缩聚物、硫酸铵、乳化剂603#、十二烷基苯磺酸钙500#中的一种或几种；所述溶剂优选异丙醇、二甲基甲酰胺、环己酮、乙酸乙酯、二甲苯中的一种或几种；所述载体优选白炭黑、高岭土、水、陶土中的一种或几种。

所述的组合物可制备为可溶性液剂、微乳剂、水乳剂、悬乳剂、种衣剂、可湿性粉粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂、水分散粒剂、干悬乳剂，或直接使用的颗粒剂；

所述组合物可防治葡萄霜霉病。

附图说明

图1是本发明制备实施例1化合物的氢核磁图谱

具体实施方式

下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述制备方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均购自SigmaBiochemicalandOrganicCompoundsforResearchandDiagnosticClinicalReagents公司。

制备实施例1

合成步骤：

(1)在配有机械搅拌和回流冷凝管的反应瓶中加入0.4mol2-氟-4溴甲苯和14.4g过氧化苯甲酰，搅拌下加热至回流后，将0.4mol2-溴-2，5-吡咯二酮(NBS)于20分钟内分批加入反应瓶，加热回流2小时，反应产率65％(GC)。反应液加碳酸钠中和，浓缩，用工业无水乙醇(1g：1mL)回流溶解，冷却至-15℃进行重结晶，纯度约90％(GC)。多次重结晶后得到白色晶体产品，其纯度>99％。

(2)氮气保护下，在配有机械搅拌及回流冷凝管的反应瓶中加入0.05mol咔唑，100mLDMF，冰浴中冷却至5℃，搅拌下缓慢滴加三氯氧磷0.1mol，滴加完成后，除去冰浴，1小时后升至室温。加热回流12小时。反应液加入100mL水，再用400mL乙酸乙酯分4次进行萃取，有机相合并，水洗至中性，无水硫酸镁干燥，除去乙酸乙酯后，硅胶柱色谱纯化，得白色固体，分离产率62％。

(3)氮气保护下，在配有机械搅拌及回流冷凝管的反应瓶中加入0.03mol步骤(1)产物，0.09mol亚磷酸三乙酯，搅拌下加热至回流，反应1小时。反应停止后，减压蒸馏出过量的亚磷酸三乙酯。蒸馏完成后，冷却至室温，用冰浴中冷却反应温度至5℃。保持反应温度为5℃，在20分钟内分批加入0.03mol叔丁醇钾，反应1小时后，滴加含有0.03mol步骤(2)产物的THF溶液35mL，反应2小时。反应液加入100mL水和100mL二氯甲烷，分液，水相再用100mL二氯甲烷萃取，合并有机相并用水及少量稀盐酸洗至中性后，无水硫酸镁干燥，除去二氯甲烷，硅胶柱色谱纯化，得黄色固体，分离产率45％。

(4)氮气保护下，在配有机械搅拌、回流冷凝管的反应瓶中加入0.01mol步骤(3)产物，0.012mol2-(三丁基锡基)***，3％mol四(三苯基膦基)钯，50mL甲苯，搅拌，加热至回流，反应48小时。反应液在真空下干燥，加入100mL二氯甲烷溶解，用6M盐酸60mL分三次洗涤，水相在冷却状态下用10％氨水中和，再用100mL二氯甲烷萃取，合并有机相，加入50mL水并用10％氨水洗涤至中性。收集有机相，干燥，过硅胶柱色谱提纯，得黄色固体，分离产率43％。

结构鉴定：

1HNMR(DMSO-d6)：δ(ppm)，11.66(s，1H，NH)，8.19(d，1H，CH)，8.12(d，1H，CH)，7.63(s，1H，CH)，7.62(d，1H，CH)，7.56(d，1H，CH)，7.22(d，1H，H)，6.78(s，1H，H)，4.22(m，2H，CH₂)，2.30(s，1H，NH).

元素分析：实测C：74.14，N：15.72，H：4.81，F：5.33：

经测定，该物质的熔点为171-172℃。

制备实施例2

将上述第(4)步制备的有机化合物放置在石英管(quartzampoule)中。在温度100℃下，将该制备的化合物真空脱水。将该管脱开，并放置在晶体生长炉内。在具有隔离膜的双重炉(doublefurnace)中通过布里奇曼(Bridgman)法生长晶体。最终，得到无色条状晶体。对该晶体进行单晶X-射线衍射晶体学分析，其晶体学参数如下所示：为斜方晶系，其空间群为P21， β=89.5°。

制备实施例3

以上原料等按配比称量后加入到剪切罐中，剪切30分钟使物料混合均匀，打开循环水，将物料球磨以一定量的流量，温度控制40度以下，细度过325目筛，研磨1.5h后，即得均匀乳状液体。

制备实施例4

将各原材料加入双螺旋混合机中混合搅拌，再经过气流粉碎机粉碎，通过325目筛后再次经过双螺旋混合机混合即得产品。

制备实施例5

将各原材料加入双螺旋混合机中混合搅拌，再经过气流粉碎机粉碎，通过325目筛后再次经过双螺旋混合机混合，后加入捏合剂造粒，所得的混合物造粒、干燥即得产品。

制备实施例6

将上述混合物均匀混合，气流粉碎，加入适量水并捏合，所得的混合物造粒、干燥即得产品。萘磺酸甲醛缩聚物、十二烷基硫酸钠、硫酸铵、陶土等助剂的加入，既为剂型制作提供保障，又可使产品保持良好的分散性，对靶标表面的附着性比较好。

生物活性实施例1：

本发明的由式I表示的化合物的PPARδ活性通过转染检测确认。另外，对于PPAR亚型PPARα和PPARγ的选择性也进行检验。通过MTT检测测试细胞毒性，通过动物实验研究体内活性。

本检测中使用的是CV-1细胞。将所述细胞接种至含有添加有10％FBS、DBS(非特异性牛血清，经脱脂)和1％青霉素/链霉素的DMEM的96孔板中，并在37℃、5％CO₂的培养箱中培养。实验按照接种、转染、样品施用和确认的步骤进行。具体地说，将CV-1细胞接种至96孔板(5000个细胞/孔)，24小时后转染。将全长PPAR质粒DNA、因具有荧光素酶活性而可以确认PPAR活性的报告DNA、提供有关转染效率信息的β-半乳糖苷酶DNA和转染试剂用于转染。将样品溶解在二甲亚砜(DMSO)中，通过介质将其以不同浓度施用到细胞中。在培养箱中培养细胞24小时后，通过使用裂解缓冲液使细胞裂解。使用光度计和酶标仪测量荧光素酶活性和β-半乳糖苷酶活性。使用β-半乳糖苷酶的值修正获得的荧光素酶的值。利用这些值绘制图形，并计算出EC₅₀。

化合物	hPPARδ	hPPARα	hPPARγ
				I	2.5nM	ia	ia

由此可见本发明的化合物对于PPARδ具有高选择性。

执行MTT检测是为了测试本发明的由式(I)表示的化合物的细胞毒性。MTT是溶于水的黄色物质，但是当其被引入活细胞中时会通过线粒体中的脱氢酶变成紫色不溶的晶体。在将MTT溶解在二甲亚砜中后可以通过测量OD550确认细胞毒性。实验如下进行。

将CV-1细胞接种于96孔板中(5000个细胞/孔)。在37℃、5％CO₂的培养箱中培养所述细胞24小时，并对其施用不同浓度的样品。然后，再次将所述细胞培养24小时，向其中加入MTT试剂。培养15分钟后，生成的紫色晶体溶解在二甲亚砜中。使用酶标仪测量光密度，以确认细胞毒性。

结果，由式(I)表示的化合物被确认对于PPAR不具有细胞毒性，即使在其浓度为EC₅₀值的100倍～1000倍时亦如此。

生物活性实施例2：

供试药剂：制备实施例3乳液。

供试作物：葡萄，品种红提。

试验地：试验选择在贵州省贵阳市花溪区养牛村，试验地地势平整，土质良好为壤土，肥水管理一致，葡萄树体长势均匀整齐，树龄3年，试验地自然发病。

试验设计：试验共设个药剂处理区。处理A：制备实施例3乳液；B：清水空白对照。

采用区组间随机排列，重复3次，共计18个小区，每小区取5株葡萄树调查，整个试验调查葡萄90株。

施药时间、次数和方法：当葡萄枝条中下部开始发病，对葡萄进行第一次喷药，施药采用工农16型背式手动喷雾器，药液喷雾均匀周到，喷液量为40ml/800m²。间隔7天喷施1次，共施3次。

病情调查方法：每次调查随机取，每小区10个新梢，每梢自上而下调查15片叶，分别记载病级，按分级标准记录，计算病情指数及防治效果。

霜霉病叶片分级方法：

0级：无病斑；

1级：病斑面积占整个叶面积的10％以下；

3级：病斑面积占整个叶面积的11％～25％；

5级：病斑面积占整个叶面积的26％～40％；

7级：病斑面积占整个叶面积的41％～65％；

9级：病斑面积占整个叶面积的65％以上。

药效计算公式：

结果与分析：

可以看出实施例1的化合物具有良好的抗葡萄霜霉病活性。

Claims (5)

1.一种防治葡萄霜霉病的有机化合物，其特征在于以如下化学结构式表示：

2.根据权利要求1所述的有机化合物，其特征在于，其是晶体，所述晶体属于斜方晶系，其空间群为P2₁， β＝89.5°。

3.一种农药组合物，其特征在于，其包括权利要求1-2任一所述的有机化合物以及农药上可接受的助剂。

4.权利要求3所述的组合物，其可制成可溶性液剂、微乳剂、水乳剂、悬乳剂、种衣剂、可湿性粉粒剂、缓释颗粒剂、控释颗粒剂、水分散粒剂。

5.权利要求3所述的组合物在防治葡萄霜霉病方面的用途。