CN103739704B - 龟鳖胶原蛋白及其提取方法 - Google Patents
龟鳖胶原蛋白及其提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103739704B CN103739704B CN201310748889.7A CN201310748889A CN103739704B CN 103739704 B CN103739704 B CN 103739704B CN 201310748889 A CN201310748889 A CN 201310748889A CN 103739704 B CN103739704 B CN 103739704B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enzymolysis
- raw material
- collagen
- extracting method
- lipase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims abstract description 56
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 39
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims abstract description 35
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 63
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 56
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 claims abstract description 35
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 claims abstract description 35
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 26
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims abstract description 25
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 24
- 241001482311 Trionychidae Species 0.000 claims abstract description 18
- 241000270666 Testudines Species 0.000 claims abstract description 17
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 14
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000003292 glue Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000000703 high-speed centrifugation Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 23
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 21
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims description 20
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 14
- 102000035101 Aspartic proteases Human genes 0.000 claims description 10
- 108091005502 Aspartic proteases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 10
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 claims description 10
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 7
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 claims description 5
- 101000906492 Arabidopsis thaliana Endoglucanase 1 Proteins 0.000 claims description 3
- 101001036014 Ruminiclostridium josui Endoglucanase 2 Proteins 0.000 claims description 3
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 3
- 235000008935 nutritious Nutrition 0.000 abstract description 3
- 241000270708 Testudinidae Species 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 7
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N docosahexaenoic acid Natural products CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 description 3
- 239000000428 dust Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000007781 pre-processing Methods 0.000 description 3
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 2
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 16-Epiaffinine Natural products C1C(C2=CC=CC=C2N2)=C2C(=O)CC2C(=CC)CN(C)C1C2CO PXFBZOLANLWPMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010003210 Arteriosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 241000270711 Malaclemys terrapin Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 229940088623 biologically active substance Drugs 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC=CC=CC=CC=CC=CC=CC(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000050 nutritive effect Effects 0.000 description 1
- 208000005368 osteomalacia Diseases 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- -1 steroid compound Chemical class 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明公开了一种龟鳖胶原蛋白，其是采用龟壳和/或鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物。该龟鳖胶原蛋白的提取方法包括：先以经过预处理后的龟、鳖壳为原料，经清洗、粉碎后加入酸性浸泡盐液中进行恒温浸泡；然后置入脂肪酶酶解液中进行酶解处理，将酶解后的原料置入蛋白酶酶解液中进行酶解处理，最后将酶解后的胶液进行高速离心分离，分离后的上层胶原清液经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白。本发明的产品纯度较高、杂质少、原料来源广泛、且营养丰富，本发明的提取方法对原料利用充分，工艺成本低，产品产率高、质量好。
Description
技术领域
本发明涉及一种从动物材料中提取出的胶原蛋白及其提取方法，尤其涉及一种从动物的背壳等材料中提取出的胶原蛋白及其提取方法。
背景技术
从我国的中医药历史来看，对龟鳖有“千年王霸万年龟”之称。《本草纲目》、《中国中医药药典》等历史著作中论其功能有治疗疾病和养生益寿的双重功效，具体的，龟鳖之壳可以显著提高机体的免疫能力，对细胞的生长增殖有显著促进作用和抗衰老作用；而且，龟鳖之壳还具有滋阴补肾、养血补心、增强性机能、软坚散结、破癥瘕痎疟、抑制***增生的作用。
现代医学研究指出龟鳖之壳富含胶原蛋白、多种氨基酸、不饱和脂肪酸（DHA和EPA）及微量元素，胶原蛋白则以骨胶原、角蛋白为富含的特点，其次还含有甾体类化合物。高级不饱和脂肪酸以DHA（廿二碳六烯酸为主），它亦是人类生活中具有重要作用的生物活性物质，能改善大脑机能、活化大脑神经细胞，降低血液中胆固醇浓度，防止血栓形成及动脉硬化等症，能很好地改善老年人的痴呆病。此外，龟鳖含有较多的氨基酸、多肽和多糖，它们对人体的生命活性同样具有很重要的功能。国际生命科学会成立年会还指出：激活机体免疫功能的物质，调节人体代谢生理平衡的物质，影响生物钟节律的物质，抑制人体过早衰老及老年病自由基的物质，亲和活化细胞诱导细胞产生干扰素的物质，这些都是生命活动的生物活性物质，而龟鳖之壳经生化处理的产物会不同程度地包含上述物质的作用和功能。可见，如何高效、低成本地从龟鳖之壳中提取出人体所需的各种营养物质，成为本领域技术人员面临的一个技术难题。
长久以来，我们从各种动物皮（例如猪皮、牛皮等）和制革的废料中提取明胶，再从明胶中分离出胶原蛋白。随着科技的不断发展，人们也开始从大量的鱼鳞废料和鱼皮中提取胶原蛋白。近年来，又发展出从豆类、薯类及其它高等植物中提取胶原蛋白。然而，如何从海洋生物龟鳖类的废壳中提取胶原蛋白和其他重要成份，这在本领域技术人员中很少涉及和关注。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种纯度较高、杂质少、原料来源广泛、且营养丰富的龟鳖胶原蛋白，还相应提供一种原料利用充分、工艺成本低、产品产率高、质量好的龟鳖胶原蛋白的提取方法。
为解决上述技术问题，本发明提出的技术方案为一种龟鳖胶原蛋白，所述龟鳖胶原蛋白是采用龟壳和/或鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物。
作为一个总的技术构思，本发明还提供一种上述的龟鳖胶原蛋白的提取方法，包括以下步骤：
（1）浸泡：以经过预处理后的龟壳和/或鳖壳为原料，经清洗、粉碎后加入酸性浸泡盐液中进行恒温浸泡；浸泡后的原料漂洗至中性后，可优选加入到含TQ纤维素酶2%～6%的处理液中进行预处理，预处理时可调pH至6.5～7.5，在30℃～50℃温度下进行酶解预处理，冷却后再进入下一步；
（2）脂肪酶酶解：将经步骤（1）浸泡后的原料清洗，然后置入脂肪酶酶解液中进行酶解处理，再灭酶漂洗至中性；
（3）蛋白酶酶解：将经步骤（2）酶解后的原料置入蛋白酶酶解液中进行酶解处理，再灭酶活处理；
（4）分离纯化：将经步骤（3）酶解后的胶液以4000r/min～8000r/min转速进行高速离心分离，分离后的上层胶原清液经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白。
上述的提取方法，所述步骤（1）中优选的，所述酸性浸泡盐液中含有NaCl和乙酸，所述酸性浸泡盐液中NaCl的质量分数为2%～4%，所述酸性浸泡盐液中乙酸的质量浓度为0.5%～1.5%。酸性浸泡盐液的用量优选为所述原料质量的2倍～4倍。
上述的提取方法，所述步骤（1）中优选的，恒温浸泡的温度为30℃～40℃，恒温浸泡时间不少于12h。
上述的提取方法，所述步骤（2）中优选的，所述脂肪酶酶解液主要由脂肪酶（TZF）和水配制而成，所述脂肪酶的用量为初始原料质量（即指浸泡前的原料质量，下同）的0.2%～0.6%，所述水的用量为初始原料质量的2倍～4倍。
上述的提取方法，所述步骤（2）中优选的，酶解处理的温度为30℃～50℃，酶解处理的pH值为6.5～8.0，酶解处理的时间为8h～12h。
上述的提取方法，所述步骤（3）中优选的，所述蛋白酶酶解液主要由碱性蛋白酶（TJD）、酸性蛋白酶（TSD）、胃蛋白酶和水配制而成，所述碱性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.08%～1.0%，所述酸性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.4%～1.0%，所述胃蛋白酶的用量为初始原料质量的0.02%～0.08%，所述水的用量为初始原料质量的2倍～4倍。
上述的提取方法，所述步骤（3）中优选的，酶解处理的温度为40℃～60℃，酶解处理的pH值为6.0～7.5，酶解处理的时间为8h～10h。
上述的提取方法，所述步骤（1）中的预处理优选包括以下步骤：取龟壳和/或鳖壳经清洗、干燥后粉碎成原料小块，将原料小块加入至预处理液中进行浸泡预处理（加入预处理液浸泡前可先置于醋酸溶液中浸泡），所述预处理液中含有NaCl和Na2CO3，所述预处理液中NaCl的质量分数为2%～4%，所述预处理液中Na2CO3的质量分数为10%～20%；浸泡预处理的温度控制在30℃～50℃，浸泡预处理的时间不少于12h，浸泡预处理后的原料小块经过滤、漂洗、干燥后得到步骤（1）中的原料。通过采用以上的预处理，主要是使龟鳖壳的骨质软化，有利于骨胶原、角蛋白等被下一步的蛋白酶酶解，同时除去杂蛋白提高酶解率；另外还可防止少数胶原蛋白纤维化。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明提供了一种龟鳖胶原蛋白产品，该产品主要是从龟壳和/或鳖壳中，不仅原料来源广泛，而且提取步骤简便易行，提取后所得的胶原蛋白产品不仅纯度较高，杂质少，而且营养丰富。另外，本发明的提取方法不仅操作简单，而且设备投入小，通过增加预处理、浸泡等操作使得后续工艺的酶解效率大大提高；整个提取工艺不仅原料利用充分，工艺成本低，且产品产率高，为胶原蛋白的工业化生产应用提供了前提和基础。
具体实施方式
以下结合说明书具体实施例对本发明的优选实施方案作进一步的描述。
一种本发明的龟鳖胶原蛋白，该龟鳖胶原蛋白是采用龟壳和/或鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物。
上述本发明的龟鳖胶原蛋白的提取方法，具体包括以下步骤。
1.原料预处理：
以无霉变且经晒干（或烘干）后的整体龟壳和/或鳖壳为原材料，取100kg用水清洗干净，烘干或晒干后粉碎成1cm～2cm的原料小块，将原料小块加入至200kg的预处理液中于控温罐内进行浸泡预处理，预处理液中含有NaCl和Na2CO3，预处理液中NaCl的质量分数为2%～4%，预处理液中Na2CO3的质量分数为10%～20%；浸泡预处理的温度控制在30℃～50℃，恒温下浸泡预处理的时间不少于12h，浸泡预处理后的原料小块经过滤、漂洗，再进行烘干或晒干后完成对原料的预处理过程。
2.浸泡：
以经过上述预处理后的龟壳和/或鳖壳为初始原料，经清水漂洗后烘干，再研磨粉碎成粗粉粒并盛入保温罐内，向保温罐中加入2倍于初始原料质量的酸性浸泡盐液进行恒温浸泡；酸性浸泡盐液中含有NaCl和乙酸（CH3COOH），酸性浸泡盐液中NaCl的质量分数为2%～4%，酸性浸泡盐液中乙酸的浓度为0.5%～1.5%；恒温浸泡的温度为30℃～40℃，恒温浸泡至少12h过夜。
3.脂肪酶酶解：
将经步骤2的浸泡液过滤，对浸泡后的原料用清水漂洗三次，然后置入酶解罐的脂肪酶酶解液中进行酶解处理，脂肪酶酶解液主要由脂肪酶（TZF）和温水配制而成，脂肪酶的用量为初始原料质量的0.2%～0.6%，温水的用量为初始原料质量的2倍～4倍；酶解处理的温度控制在30℃～50℃，酶解处理的pH值约为6.5～8.0，酶解处理的间隔搅拌反应的总时间为8h～12h；酶解处理完成后再灭酶，过滤清水漂洗至中性。
4.蛋白酶酶解：
将经步骤3脂肪酶酶解后的原料再次置入酶解罐内于蛋白酶酶解液中进行酶解处理，蛋白酶酶解液主要由TJD碱性蛋白酶、TSD酸性蛋白酶、胃蛋白酶和温水配制而成，碱性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.08%～1.0%，酸性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.4%～1.0%，胃蛋白酶的用量为初始原料质量的0.02%～0.08%，温水的用量为初始原料质量的2～4倍；酶解处理的温度控制在40℃～60℃，酶解处理的pH值为6.0～7.5，酶解处理的间隔搅拌反应时间为8h～10h；酶解处理完成后再灭酶活处理。
5.分离纯化：
将经步骤4蛋白酶酶解后的胶液以4000r/min～8000r/min转速进行高速离心分离，分离后的上层胶原清液再经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白。该胶原蛋白再经生化处理分离纯化后可得到胶原蛋白精粉。
实施例1：
一种本发明的龟鳖胶原蛋白，该龟鳖胶原蛋白是采用龟壳和鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物。
上述本发明的龟鳖胶原蛋白的提取方法，具体包括以下步骤。
1.原料预处理：
以无霉变且经晒干（或烘干）后的整体龟壳和鳖壳为初始原料，取100kg用水清洗干净，烘干或晒干后粉碎成1cm～2cm的原料小块，将原料小块加入至200kg的预处理液中于控温罐内进行浸泡预处理，预处理液中含有NaCl和Na2CO3，预处理液中NaCl的质量分数为2%，预处理液中Na2CO3的质量分数为15%；浸泡预处理的温度控制在50℃，恒温下浸泡预处理的时间不少于12h，浸泡预处理后的原料小块经过滤、漂洗，再进行烘干或晒干后完成对原料的预处理过程。
2.浸泡：
以经过上述预处理后的龟壳和鳖壳为原料，经清水漂洗后烘干，再研磨粉碎成粗粉粒并盛入保温罐内，向保温罐中加入2倍于原料质量的酸性浸泡盐液进行恒温浸泡；酸性浸泡盐液中含有NaCl和乙酸（CH3COOH），酸性浸泡盐液中NaCl的质量分数为2%，酸性浸泡盐液中乙酸的浓度为0.5%；恒温浸泡的温度为30℃，恒温浸泡12h过夜。
3.脂肪酶酶解：
将经步骤2的浸泡液过滤，对浸泡后的原料用清水漂洗三次，然后置入酶解罐的脂肪酶酶解液中进行酶解处理，脂肪酶酶解液主要由脂肪酶（TZF）和温水配制而成，脂肪酶的用量为初始原料质量的0.4%，温水的用量为初始原料质量的2倍；酶解处理的温度控制在40℃，酶解处理的pH值约为7.0，酶解处理的间隔搅拌反应的总时间为8h～12h；酶解处理完成后再灭酶，过滤清水漂洗至中性。
4.蛋白酶酶解：
将经步骤3脂肪酶酶解后的原料再次置入酶解罐内于蛋白酶酶解液中进行酶解处理，蛋白酶酶解液主要由TJD碱性蛋白酶、TSD酸性蛋白酶、胃蛋白酶和温水配制而成，碱性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.08%，酸性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.4%，胃蛋白酶的用量为初始原料质量的0.02%，温水的用量为初始原料质量的2倍；酶解处理的温度控制在40℃～60℃，酶解处理的pH值为7.0～7.5，酶解处理的间隔搅拌反应时间为8h～10h；酶解处理完成后再灭酶活处理。
5.分离纯化：
将经步骤4蛋白酶酶解后的胶液以8000r/min转速进行高速离心分离20min，分离后的上层胶原清液再经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白。该胶原蛋白再经生化处理分离纯化后可得到胶原蛋白精粉。
实施例2：
一种本发明的龟鳖胶原蛋白，该龟鳖胶原蛋白是采用龟壳和鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物。
上述本发明的龟鳖胶原蛋白的提取方法，具体包括以下步骤。
1.原料预处理：
以无霉变且经晒干（或烘干）后的整体龟壳和鳖壳（质量比为1∶1）为初始原料，取1kg用水清洗干净，烘干或晒干后粉碎成1mm的原料小块，加入2kg～3kg清水，再加入食醋1kg煮沸，冷却到室温过滤弃去滤液；将过滤后的1kg原料小块再加入至3L的预处理液中于控温罐内进行浸泡预处理，预处理液中含有NaCl和Na2CO3，预处理液中NaCl的质量分数为4%，预处理液中Na2CO3的质量分数为10%；浸泡预处理的温度控制在30℃，恒温下浸泡预处理12h，浸泡预处理后的原料小块经过滤、漂洗，再进行烘干或晒干后完成对原料的预处理过程。
2.浸泡：
以经过上述预处理后的龟壳和鳖壳为原料，经清水漂洗后烘干，再研磨粉碎成粗粉粒并盛入保温罐内，向保温罐中加入2倍于原料质量的酸性浸泡盐液进行恒温浸泡；酸性浸泡盐液中含有NaCl和乙酸（CH3COOH），酸性浸泡盐液中NaCl的质量分数为4%，酸性浸泡盐液中乙酸的浓度为1%；恒温浸泡的温度为35℃，恒温浸泡12h过夜；浸泡后的原料漂洗至中性，再加入含TQ纤维素酶2%～6%的处理液2L，调pH6.5～7.5，在30℃～50℃温度下酶解6h，冷却至30℃过滤弃去滤液。
3.脂肪酶酶解：
将经步骤2的原料用清水漂洗三次，然后置入酶解罐的脂肪酶酶解液中进行酶解处理，脂肪酶酶解液主要由脂肪酶（TZF）和温水配制而成，脂肪酶的用量为初始原料质量的0.6%，温水的用量为初始原料质量的3倍左右；酶解处理的温度控制在40℃，酶解处理的pH值约为7.0，酶解处理的间隔搅拌反应的总时间为8h；酶解处理完成后再升温至70℃～85℃灭酶处理5min～15min，冷却至30℃，过滤清水漂洗至中性。
4.蛋白酶酶解：
将经步骤3脂肪酶酶解后的原料再次置入酶解罐内于蛋白酶酶解液中进行酶解处理，蛋白酶酶解液主要由TJD碱性蛋白酶、TSD酸性蛋白酶、胃蛋白酶和温水配制而成，碱性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.08%，酸性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.4%，胃蛋白酶的用量为初始原料质量的0.02%，温水的用量为初始原料质量的3倍；酶解处理的温度控制在40℃～60℃，酶解处理的pH值为7.0～7.5，酶解处理的间隔搅拌反应时间为8h；酶解处理完成后再升温至70℃～85℃灭酶活处理5min~20min，灭酶完成后降温至40℃立即进入下一步的处理。
5.分离纯化：
将经步骤4蛋白酶酶解后的胶液以2%～5%活性炭脱色（或5%～10%硅藻土脱色），再以6000r/min转速进行高速离心分离30min，分离后的上层胶原清液再经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白。该胶原蛋白再经生化处理分离纯化后可得到胶原蛋白精粉。
Claims (7)
1.一种龟鳖胶原蛋白的提取方法，所述龟鳖胶原蛋白是采用龟壳和/或鳖壳为原料经过浸泡、脂肪酶酶解、蛋白酶酶解及分离纯化后得到的胶原蛋白产物，其提取方法包括以下步骤：
（1）浸泡：以经过预处理后的龟壳和/或鳖壳为原料，经清洗、粉碎后加入酸性浸泡盐液中进行恒温浸泡；浸泡后的原料漂洗至中性后，加入到含TQ纤维素酶2%～6%的处理液中进行预处理，预处理时调pH至6.5～7.5，在30℃～50℃温度下进行酶解预处理；
（2）脂肪酶酶解：将经步骤（1）浸泡后的原料清洗，然后置入脂肪酶酶解液中进行酶解处理，再灭酶漂洗至中性；
（3）蛋白酶酶解：将经步骤（2）酶解后的原料置入蛋白酶酶解液中进行酶解处理，再灭酶活处理；
（4）分离纯化：将经步骤（3）酶解后的胶液以4000r/min～8000r/min转速进行高速离心分离，分离后的上层胶原清液经真空浓缩、真空干燥后得到胶原蛋白；
所述步骤（1）中的预处理包括以下步骤：取龟壳和/或鳖壳经清洗、干燥后粉碎成原料小块，将原料小块加入至预处理液中进行浸泡预处理，所述预处理液中含有NaCl和Na2CO3，所述预处理液中NaCl的质量分数为2%～4%，所述预处理液中Na2CO3的质量分数为10%～20%；浸泡预处理的温度控制在30℃～50℃，浸泡预处理的时间不少于12h，浸泡预处理后的原料小块经过滤、漂洗、干燥后得到步骤（1）中的原料；
所述步骤（3）中，所述蛋白酶酶解液主要由碱性蛋白酶、酸性蛋白酶、胃蛋白酶和水配制而成，所述碱性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.08%～1.0%，所述酸性蛋白酶的用量为初始原料质量的0.4%～1.0%，所述胃蛋白酶的用量为初始原料质量的0.02%～0.08%，所述水的用量为初始原料质量的2倍～4倍。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中，所述酸性浸泡盐液中含有NaCl和乙酸，所述酸性浸泡盐液中NaCl的质量分数为2%～4%，所述酸性浸泡盐液中乙酸的浓度为0.5%～1.5%。
3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中，酸性浸泡盐液的用量为所述原料质量的2倍～4倍。
4.根据权利要求1、2或3所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（1）中，恒温浸泡的温度为30℃～40℃，恒温浸泡时间不少于12h。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中，所述脂肪酶酶解液主要由脂肪酶和水配制而成，所述脂肪酶的用量为初始原料质量的0.2%～0.6%，所述水的用量为初始原料质量的2倍～4倍。
6.根据权利要求1或5所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（2）中，酶解处理的温度为30℃～50℃，酶解处理的pH值为6.5～8.0，酶解处理的时间为8h～12h。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于：所述步骤（3）中，酶解处理的温度为40℃～60℃，酶解处理的pH值为6.0～7.5，酶解处理的时间为8h～10h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310748889.7A CN103739704B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 龟鳖胶原蛋白及其提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310748889.7A CN103739704B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 龟鳖胶原蛋白及其提取方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103739704A CN103739704A (zh) | 2014-04-23 |
| CN103739704B true CN103739704B (zh) | 2016-03-09 |
Family
ID=50496788
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310748889.7A Expired - Fee Related CN103739704B (zh) | 2013-12-31 | 2013-12-31 | 龟鳖胶原蛋白及其提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103739704B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6454481B2 (ja) * | 2014-05-19 | 2019-01-16 | 学校法人近畿大学 | メラニン生成抑制組成物 |
| CN104962597A (zh) * | 2015-07-09 | 2015-10-07 | 严宜昌 | 一种龟甲胶原蛋白多肽的提取方法及其在制备睡眠面膜中的应用 |
| CN106721773A (zh) * | 2016-11-08 | 2017-05-31 | 张智斌 | 一种中华鳖酶解物配制保健食品及其制备方法 |
| CN108103129A (zh) * | 2017-11-16 | 2018-06-01 | 金华市艾力生物科技有限公司 | 生物酶解法制备的天然抗菌肽 |
| CN108740697A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-11-06 | 广西山水牛畜牧业有限责任公司 | 一种牛皮的加工方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1994329A (zh) * | 2006-12-15 | 2007-07-11 | 湖北华光制药有限责任公司 | 液体龟甲胶、鹿角胶的酶水解制备法及其在制备龟鹿二仙膏中的应用 |
| CN102199192A (zh) * | 2011-03-29 | 2011-09-28 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种从龟甲胶中分离功能多肽的方法 |
| CN102702346A (zh) * | 2012-06-20 | 2012-10-03 | 江南大学 | 一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法及所得到的产品 |
-
2013
- 2013-12-31 CN CN201310748889.7A patent/CN103739704B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1994329A (zh) * | 2006-12-15 | 2007-07-11 | 湖北华光制药有限责任公司 | 液体龟甲胶、鹿角胶的酶水解制备法及其在制备龟鹿二仙膏中的应用 |
| CN102199192A (zh) * | 2011-03-29 | 2011-09-28 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种从龟甲胶中分离功能多肽的方法 |
| CN102702346A (zh) * | 2012-06-20 | 2012-10-03 | 江南大学 | 一种从鱼皮中提取酸溶性胶原蛋白的方法及所得到的产品 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Preparation and characterization of collagen from soft-shelled turtle (Pelodiscus sinensis) skin for biomaterial applications;Nagai N.等;《J Biomater Sci Polym Ed.》;20091231;第20卷(第5-6期);摘要 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103739704A (zh) | 2014-04-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103739704B (zh) | 龟鳖胶原蛋白及其提取方法 | |
| CN102533914B (zh) | 一种高纯度无腥异味的鱼胶原蛋白肽及其制备方法 | |
| CN102613384B (zh) | 一种用活体螺旋藻制备螺旋藻多肽粉的方法 | |
| CN101455264A (zh) | 一种鲍鱼活性肽的制备方法 | |
| CN103397066B (zh) | 从钦州石金钱龟中提取活性肽的方法 | |
| CN103849670A (zh) | 一种水解鮟鱇鱼皮制备高f值胶原蛋白肽的方法 | |
| CN101096697B (zh) | 从禽卵中酶法制取卵蛋白多肽的工业生产方法 | |
| CN103271217B (zh) | 一种罗非鱼鱼皮及鱼鳞提取鱼胶原蛋白粉的生产方法 | |
| CN103361393A (zh) | 一种大鲵低聚肽的制备方法 | |
| CN109504732A (zh) | 一种牡蛎活性肽的制备方法 | |
| CN110128530A (zh) | 利用鲟鱼原料提取胶原蛋白的工艺 | |
| CN106832021A (zh) | 一种肉桂渣粗多糖的制备方法 | |
| CN101928744A (zh) | 从鲑鳟鱼废弃物中提取活性胶原肽的工艺 | |
| CN106480145A (zh) | 一种小分子牡蛎多肽的提取方法 | |
| CN105154504A (zh) | 从辣木中提取一种胶原蛋白肽的制备方法 | |
| CN106892994A (zh) | 一种蓝莓渣粗多糖的制备方法 | |
| CN108018326A (zh) | 新型微生物蛋白酶水解制备东海乌参胶原蛋白肽 | |
| CN104388512A (zh) | 一种制取水解胶原蛋白的方法 | |
| CN104404094A (zh) | 基于蛤利用酶转化法提取牛磺酸的方法 | |
| CN102071180A (zh) | 一种菠萝蛋白酶制备新工艺 | |
| CN106892989A (zh) | 一种黑莓制备方法 | |
| CN105755081A (zh) | 鱼低聚肽的生产工艺 | |
| CN109601437A (zh) | 泥鳅粘液胁迫分泌并收集的方法 | |
| CN104152517A (zh) | 一种从海马提取短肽的方法 | |
| CN106636267A (zh) | 一种小分子参蚝多肽的提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20160309 Termination date: 20161231 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |