CN103689599A - 增强免疫力的保健食品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种增强免疫力的保健食品及其制备方法，由金钗石斛、薏苡仁、西洋参按照一定的比例制成，具有增强体质，增强机体免疫力的功能，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性均有一定促进作用，是滋补强壮，健身益寿之佳品，且安全小，无副作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种增强免疫力的保健食品及其制备方法，属于保健食品的技术领域。
背景技术
免疫力是指人体免疫***抵御病原体感染的能力。免疫***由胸腺（***以后即逐渐萎缩、退化）、脾脏和淋巴组织等组成。一个健全的人体免疫***是机体主要的防御***，可以保护机体不受损害，帮助机体消灭外来的细菌、病毒，修补已受损的器官和组织使其恢复原来的功能等等。而每个人的免疫力是不同的，免疫力强的人不易生病，免疫力弱的人容易被病原菌感染而诱发各种病症。免疫球蛋白是由免疫***产生，免疫力的强弱取决于其球蛋白的数量和活力，免疫球蛋白是国内外科学界公认的并且是被广泛应用的提高人体抗病能力的物质。0～12岁前的儿童免疫器官发育不完善，体内有抗体活性的免疫球蛋白分泌量少，免疫功能不健全，这时的孩子极容易生病。13～45岁期间是免疫功能相对稳定期，免疫功能相对完善。但是由于这一阶段的人容易受到生活、学习、工作的压力影响，使体内的抗体和生长因子分泌量大幅度波动，这种就会造成体内的免疫球蛋白含量不稳定，导致免疫力下降而生病。46岁以后人体的免疫器官功能开始衰退，体内有抗体活性的免疫球蛋白和生长因子分泌下降，免疫力下降；开始诱发老年性疾病。 据世界卫生组织调查，全球约有35%以上的人处于疲劳状态，尤其是中年男性人群疲劳状态者高达60－75%。专家指出，长期睡眠不佳、持续过度疲劳容易引发慢性咽喉炎、颈部或腋窝***肿痛、肌肉酸痛以及多发性关节性关节疼痛等病症，最终导致免疫力下降，而免疫力下降之后，又使“疲劳综合症”更加突出和恶化，从而形成一个恶性循环。随着社会的发展，科技的进步，生活节奏的加快，文化和物质生活的丰富，不仅中年人处于亚健康的疲劳状态，各大中院校学生也都存在过度疲劳现象。所以研究和开发一种增强机体自身免疫力的中药保健类产品具有广泛而深远的意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种增强免疫力的保健食品及其制备方法，该保健品具有增强体质，提高机体免疫力的作用，且无毒副作用。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案实现：
一种增强免疫力的保健食品，由有效药物成分和辅料制成，按照重量份计算，使用的有效药物成分为：金钗石斛500-800份、薏苡仁800-1200份、西洋参200-500份。
具体地说,所述增强免疫力的保健食品按照重量份计算，使用的有效药物成分为：金钗石斛 670份、薏苡仁1000份、西洋参330份。
所述增强免疫力的保健食品的制备方法为：取金钗石斛、薏苡仁和西洋参，与药用辅料进行组合，并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
具体地说，所述增强免疫力的保健食品的制备方法为：薏苡仁取部分粉碎，过80-200目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加水浸泡0.3-1小时后，煎煮1-3次，每次加入4-8倍量水煎煮0.5-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，加入薏苡仁细粉及药用辅料混匀，减压干燥，粉碎，再并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
更具体地说，所述增强免疫力的保健食品的制备方法为：薏苡仁取处方量的22%粉碎，过120目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入薏苡仁细粉及药用辅料混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，再并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
所述制剂为胶囊剂。
所述胶囊剂这么制备：薏苡仁取处方量的22%粉碎，过120目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入薏苡仁细粉混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，过40目筛，装入胶囊，即得。
中医的虚证主要见于现代医学的免疫性疾病患者，尤其是免疫功能低下的患者。多数补益药能增强机体的免疫功能，用以治疗因免疫功能低下而引起的疾病，起到免疫增强剂的作用；在《医学正传》中也指出：“虚者，正气虚也；为色惨形瘦，为神衰气怯……皆虚证之当补也。
本发明所述增强免疫力的保健食品由金钗石斛、薏苡仁、西洋参及辅料制备而成。其中金钗石斛性微寒，味甘，归胃、肾经，具有除脾下气、补五脏虚劳、强阴滋精的功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少欲呕；病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸痨热，目暗不明，筋骨瘘软等病症。薏苡仁气微、味微甜，性凉。归脾、胃、肺经，具有利水渗湿、健脾止泻、除痹、排脓、解毒散结的作用。用于水肿、脚气、小便不利、脾虚泄泻、湿痹拘挛、肺痈、肠痈、赘疣、癌肿。西洋参性凉，味甘、微苦；归心、肺、肾，具有补气养阴，清热生津的功效，常用于气虚阴亏，虚热烦倦，咳喘痰血内热消渴，口燥咽干等病症。该复方中以金钗石斛益胃生津、滋阴清热为君药；配薏苡仁利水渗湿、健脾止泻，即可助石斛健脾益胃，为臣药；西洋参补气养阴、清热生津，助石斛清热生津，为佐药。三药同用，共奏益胃生津、滋阴清热之功。全方配伍合理，标本兼顾，能有效起到增强免疫力作用，是良好的增强免疫力的保健食品。
实验例1：工艺研究
1.总皂苷含量测定方法
对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re标准品20.0mg，用甲醇溶解并定容至10ml，即得2.0mg/ml的人参皂苷Re标准溶液。
供试品溶液的制备：精密称取本发明胶囊内容物2g置具塞锥形瓶中，加入40ml水，超声30min，再定容至100ml，摇匀，放置，备用。
柱层析：以Amberlite-xad2大孔吸附树脂装柱3cm，再以中型氧化铝装柱1cm，用25ml70%乙醇洗脱，再用25ml水进行洗脱，弃去洗脱液，精密吸取备用的供试品溶液1m上柱进行层析分离，用25ml水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用25ml 70%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，60℃水浴蒸干，以此作显色用。
测定法：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2ml 5%香草醛冰醋酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加0.8ml高氯酸，混匀后移入10ml闭塞管中，塞紧盖子于60℃以下水浴上加温15min，冷却后准确加入冰醋酸5.0ml，摇匀后以相应试剂为空白，于560nm处测定吸光度。
2. 多糖含量测定方法
对照品溶液的制备：取葡萄糖对照品适量，精密称定，加蒸馏水制成每1ml含葡萄糖0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备：精密称取本发明胶囊内容物2g，蒸干，残渣置具塞锥形瓶中，加95%乙醇50ml水浴回流1h，滤过，残渣用95%乙醇20ml洗涤，滤过，弃去滤液，残渣加蒸馏水50ml水浴回流1h，滤过，残渣用蒸馏20ml洗涤，滤过，合并滤液，定容至100ml，移取5ml滤液置50ml量瓶中，稀释至刻度，即得。
测定法：分别移取对照品溶液和供试品溶液各3ml置10ml具塞锥形瓶中，加入5%苯酚溶液1ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5ml，摇匀，室温放置1h，于480nm处测定，即得。
3. 提取溶剂的选择
方中三味药，薏苡仁为禾本科植物薏苡的干燥成熟种仁，有关研究结果表明，薏苡仁多糖具有提高机体免疫力功能作用。金钗石斛为兰科植物金钗石斛的干燥茎，其化学成分主要生物碱类、黄酮类及多糖类等其他物质，其中多糖类具有多方面的免疫增强作用。西洋参为五加科植物西洋参的干燥根茎，主要有效成分有西洋参多糖、西洋参皂苷及其他微量元素。
综上所述，方中主要有效成分总多糖、总皂苷为水溶性成分，可用水煎煮提取，且三药中医传统用药为煎剂，故提取溶剂选用水。
4. 提取工艺正交试验设计：由药材提取原理可知，提取效率除与药材的性质有关外，还与溶剂种类、溶剂用量，提取时间、提取次数等因素有关。由于已确定该方提取溶剂为水，故考察水提工艺。
分别以加水量、提取次数、提取时间为考察因素，每个因素设3个水平，见表1。选用L9（34）正交表安排实验，以浸膏量、总多糖含量、总皂苷含量为考察指标，并计算总评分优选提取工艺，见表2。
总评分=（总多糖含量测定值/总多糖含量最大值）*50+（总皂苷含量测定值/总皂苷含量最大值）*50
表1 因素水平表
表 2 正交试验结果
分析结论：以总评分为指标，由表2直观分析可得最佳提取工艺为A1B2C2，极差大小为RC>RB>RA ，即提取次数>提取时间>加水量，确定提取工艺为：提取2次，每次加6倍量水煎煮1小时。
5. 浓缩工艺的研究
因采用的水提工艺，为防止有效成分长时间受热破坏，所以采用减压浓缩（真空度为常规的-0.08Mpa）的工艺进行浓缩工艺研究的基础方法，以粗多糖、总皂苷的含量为测评指标优选出最佳的浓缩工艺参数。取300ml水提液，按表3的工艺参数进行浓缩至30ml，记录浓缩所需时间并测定粗多糖、总皂苷含量，结果见表3。结果表明采用真空减压浓缩设备在真空度为-0.08Mpa，浓缩温度75℃条件下进行浓缩时，耗用时间较短，而有效成分的含量最高，综合考虑粗多糖、总皂苷保留率和生产效率确定为浓缩的工艺参数。同时根据药物的性质，设备性能及操作条件，确定清膏相对密度为1.25～1.35(80℃)，这样更方便清膏干燥的操作。
表3 浓缩工艺研究
6. 干燥工艺的研究
为防止有效成分长时间受热破坏，所以采用真空减压干燥（真空度为常规的-0.08Mpa）的工艺进行干燥工艺研究的基础方法，以粗多糖、总皂苷的含量为测评指标优选出最佳的干燥工艺参数。取300ml浓缩液，按表的工艺参数进行干燥，记录干燥所需时间并测定粗多糖、总皂苷含量，结果见表4。综合考虑粗多糖、总皂苷保留率和生产效率，最终确定的干燥参数是采用-0.08Mpa的真空度，75℃减压干燥。
表4 干燥工艺研究
实验例2：功能学研究
1试验动物与造模
昆明种SPF 级小鼠，雌性，由重庆市实验动物中心提供，体质量为16～18 g，放入动物房适应3d后，体质量为18～22g开始造模，腹腔内注射100 mg/kg环磷酰胺，1次/d，连续3天。
2分组与给药剂量
每个实验分为四组，即阴性对照组、高剂量组、中剂量组、低剂量组(药物按照本发明实施例1的方法进行制备)，每组10只。高剂量组为成人一天服用量20倍，中剂量组为10倍，低剂量组为5倍。按成人每天6粒（2.4g）算，加蒸馏水调配成小鼠服用量0.2ml/20g，对照组给生理盐水0.2ml/20g。
3试验方法
3.1 体重、脏器/体质量比值 各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30d 后称量，颈椎脱臼处死，解剖动物，取出胸腺和脾脏，用滤纸吸干血迹后称量，计算脏器和体质量之间的比值。
3.2 脾淋巴细胞转化实验 采用同位素掺入法。各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后制备各组小鼠脾细胞，做为反应细胞。刺激细胞的制备：无菌制备C57 BL/ 6 小鼠脾细胞悬液，用浓度为25mg/ L 的丝裂霉素C 在37摄氏度下处理30min后，离心去上清，再洗2遍后，用含10%小牛血清的RPMI1640恢复到5 * 109/L, 并加入到96孔板中。细胞培养6d后，每孔加3H-TdR使终浓度为18.5*104Bq/孔继续培养6h。收集细胞于玻璃纤维滤纸上，液闪仪计数每分钟脉冲数。
3.3 迟发型***反应实验 采用耳肿胀法。各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后，于第1、第5 天每只小鼠后肢皮内注射7% DNFB丙酮溶液0. 02mL 进行致敏，于第1次致敏的第8天，用1% DNFB 丙酮溶液0. 02mL涂布于右耳进行攻击，左耳涂布生理盐水作为对照。次日处死动物，用直径8mm 的打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重并计算左右耳重量的差值进行单因素方差分析。
3.4 抗体生产细胞检测 采用Jerne改良玻片法。各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后用SRBC致敏，5d后颈椎脱臼处死，取出肝脏制成细胞悬液，在5mlRPMI1640培养液中技术细胞，并将细胞浓度调整为5*106个/ml。将表层培养基加热溶解后，放 50℃水浴保温，与等量pH7.2-7.4、2倍浓度的Hank's液视合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加50μl10%SRBC，20μl脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于己刷琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上.放入二氧化碳培养箱中孵育1-1.5h然后用SA缓冲液稀释的补体加入到玻片架凹槽内，继续温育1-1.5h后，计数溶血空斑数。
3.5 血清溶血素测定 采用测定半数溶血值法。各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后用SRBC致敏，5天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液稀释。将稀释后的血清1ml置试管内.依次加入10% SRBC 0.5ml,补体1ml。另设不加血清的对照管（以SA缓冲液代替）。置37℃恒温水浴中保温巧20min后.冰浴终止反应，2000r/min离心10min，取上情液1ml加都氏试剂3ml，同时取10% SRBC 0.25ml加都氏试剂至4mL，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值，即为血清半数溶血值（血清HC50）。
3.6 碳廓清实验 各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后后小鼠的尾静脉按每10g体质量0.1ml注入浓度为25%墨汁，注射墨汁间隔2、10min，分别从小鼠内毗静脉丛取血20μL，加入到2 ml的Na2CO3( w = 0.1%)溶液中。以Na2CO3溶液作空白对照，用722可见分光光度计在600 nm 下测定吸光度。然后将小鼠处死，取肝脏和脾脏，用滤纸吸干脏器表面血污，称量，算出吞噬指数α。
3.7 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后，向每只小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬液lml，30min后，颈椎脱臼处死动物，解剖小鼠腹腔，注入2ml生理盐水，吸取腹腔液制作涂片，用吉姆萨工作液染色15～30 min，再用蒸馏水漂洗、晾干，显微镜下计数，计算吞噬指数和吞噬百分率。
3.8 NK细胞活性测定 用MTT法：取处于对数生长期的Yac-1细胞为靶细胞。各组小鼠脾淋巴细胞置培养瓶中贴壁2h去除贴壁的巨噬细胞后为效应细胞，按下式计算杀伤率：
杀伤率（%） = 1-(OD( E+ T ) - ODE)/ODT
OD( E+ T) ：指NK+ 靶细胞孔OD值。ODE：指同一组效应细胞对照孔OD值。ODT ：指相应靶细胞对照孔OD值。
4结果
4.1 对小鼠体质量，脾脏、胸腺指数影响 与阴性对照组比较，各给药组小鼠体重增加差异不显著( P＞0. 05)；脾脏/体质量与胸腺/体质量中高剂量组均可显著提高小鼠脾脏或胸腺指数，差异具有显著性( P＜0. 05）。（见表5）。
表5 对小鼠体质量及脾脏、胸腺质量的影响（n=10，x±s）
注：与对照组比较* P＜0.05
4.2 对小鼠脾淋巴细胞转化影响 与阴性对照组比较，各剂量组显著抑制Con A 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，且差异有统计学意义。( P＜0. 05）。（见表6）。
表6 对小鼠脾淋巴细胞转化影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | Con A （cpm） |
| 阴性对照组 | 10 | 13568±2186 |
| 低剂量组 | 10 | 9054±1856* |
| 中剂量组 | 10 | 7695±1547* |
| 高剂量组 | 10 | 5385±1225* |
注：与对照组比较* P＜0.05
4.3 对小鼠迟发型***反应影响 与阴性对照组比较，各剂量组小鼠右耳经1% DNFB 丙酮溶液攻击后明显肿胀，重量高于左耳，其中、高剂量组左右耳重量的差值明显高于对照组，且差异有统计学意义。( P＜0. 05）。（见表7）。
表7 对小鼠迟发型***反应影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | 左右耳重量差值（*10-3） |
| 阴性对照组 | 10 | 8.76±3.19 |
| 低剂量组 | 10 | 10.86±2.38 |
| 中剂量组 | 10 | 12.52±2.68* |
| 高剂量组 | 10 | 14.76±3.23* |
注：与对照组比较* P＜0.05
4.4 对小鼠抗体生成细胞影响 与阴性对照组比较，中、高剂量组小鼠脾抗体形成细胞明显增强，且差异有统计学意义。( P＜0. 05）。（见表8）。
表8 对小鼠抗体生成细胞影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | 抗体形成细胞 |
| 阴性对照组 | 10 | 5.02±0.13 |
| 低剂量组 | 10 | 5.21±0.18 |
| 中剂量组 | 10 | 5.95±0.21* |
| 高剂量组 | 10 | 6.28±0.19* |
注：与对照组比较* P＜0.05
4.5 对小鼠血清溶血素影响 与阴性对照组比较，各给药组均能升高血清HC50，差异显著( P＜0. 05)。（见表9）。
表9 对小鼠血清溶血素影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | 血清HC50 |
| 阴性对照组 | 10 | 123 |
| 低剂量组 | 10 | 228* |
| 中剂量组 | 10 | 276* |
| 高剂量组 | 10 | 305* |
注：与对照组比较* P＜0.05
4.6 对小鼠碳廓清及巨噬细胞吞噬功能影响 与阴性对照组比较，以高剂量灌胃时可以明显提高小鼠的碳廓清能力，差异具有统计学意义( P＜0. 05) 。中高剂量组能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，差异显著( P＜0. 05)。（见表10）。
表10 对小鼠碳廓清及巨噬细胞吞噬功能影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | 碳廓清吞噬指数 | 吞噬百分数/% | 吞噬指数 |
| 阴性对照组 | 10 | 4.43±0.76 | 34.33±10.83 | 0.45±0.14 |
| 低剂量组 | 10 | 5.02±0.86 | 35.28±14.20 | 0.47±0.12 |
| 中剂量组 | 10 | 4.89±0.73 | 53.58±15.36* | 0.61±0.17* |
| 高剂量组 | 10 | 5.71±0.58* | 57.89±16.22* | 0.66±0.15* |
注：与对照组比较* P＜0.05
4.7 对小鼠NK细胞活性影响 与阴性对照组比较，各给药组均能提高小鼠NK细胞活性，差异显著( P＜0. 05)。（见表11）。
表11 对小鼠NK细胞活性影响（n=10，x±s）
| 组 别 | n | 杀伤率（%） |
| 阴性对照组 | 10 | 43.2±4.5 |
| 低剂量组 | 10 | 61.7±6.5* |
| 中剂量组 | 10 | 69.5±3.3* |
| 高剂量组 | 10 | 71.4±7.8* |
注：与对照组比较* P＜0.05
5结论
本发明胶囊各项功能学实验结果均为阳性，证明本发明专利本发明胶囊具有增强免疫力功能。
实验例3。急性毒性试验
（一）实验材料与条件
1、动物：昆明种小鼠，体重20±2g，雌雄各半，由中国人民解放军第三军医大学实验动物研究中心提供。
2、保健品：按照本发明实施例1所述方法制成胶囊剂，用时倒出内容物，用蒸馏水配成所需的供试药液。
3、溶剂：蒸馏水。
4、条件：温度 22-25℃，湿度为50%-60%。
（二）实验方法
1、动物分组：设四个剂量组，每组10只小鼠，雌雄各半。
2、剂量和给予方式：实验设1000、2150、4640、10000mg/ kg/d 4个剂量组。采用经口灌胃方式给药, 每天灌胃1次, 连续观察7天,
（三）实验结果：实验结果见表12。
表12 本发明胶囊对小鼠急性毒性实验结果
由表4可知，观察期内未见实验小鼠出现中毒症状和死亡情况，本发明胶囊对小鼠的LD50值大于10000mg/kg，根据急性毒性分级标准，其急性毒性属于实际无毒类。
实验例4：协同增效实验
申请人对本发明进行了协同增效实验研究，通过实验数据说明本发明的有益效果。
1试验动物与造模
昆明种SPF 级小鼠，雌性，由重庆市实验动物中心提供，体质量为16～18 g，放入动物房适应3d后，体质量为18～22g开始造模，腹腔内注射100 mg/kg环磷酰胺，1次/d，连续3天。
2药物、分组与给药剂量
2.1 药物
A提取物组：
组方：金钗石斛670g
工艺：金钗石斛加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，按所得提取物溶于5000ml水的比例制成溶液，即得。
B提取物组：
组方：薏苡仁1000g+西洋参330g
工艺：薏苡仁取处方量的222g粉碎，过120目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入薏苡仁细粉混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，按所得提取物溶于5000ml水的比例制成溶液，即得。
C提取物组：
组方：金钗石斛670g +薏苡仁1000g+西洋参330g
工艺：薏苡仁取220g粉碎，过120目筛，得细粉121℃、0.1MPa湿热灭菌30分钟，备用，其余药材加水适量浸泡0.5小时，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至相对密度为1.35～1.38(80℃)的稠膏，加入薏苡仁细粉混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，按所得提取物溶于5000ml水的比例制成溶液，即得。
2.2分组及剂量
每个实验分为四组，即阴性对照组、A提取物组（金钗石斛）、B提取物组（薏苡仁+西洋参）、C提取物组（金钗石斛+薏苡仁+西洋参），每组10只。药物组剂量均为0.2ml/20g，对照组给生理盐水0.2ml/20g。
3试验方法
3.1 脾淋巴细胞转化实验 采用同位素掺入法。各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30 d 后制备各组小鼠脾细胞，做为反应细胞。刺激细胞的制备：无菌制备C57 BL/ 6 小鼠脾细胞悬液，用浓度为25mg/ L 的丝裂霉素C 在37摄氏度下处理30min后，离心去上清，再洗2遍后，用含10%小牛血清的RPMI1640恢复到5 * 109/L, 并加入到96孔板中。细胞培养6d后，每孔加3H-TdR使终浓度为18.5*104Bq/孔继续培养6h。收集细胞于玻璃纤维滤纸上，液闪仪计数每分钟脉冲数。
3.2 巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验 各组小鼠按规定给药剂量给药，连续灌胃30d 后，向每只小鼠腹腔注射20%的鸡红细胞悬液lml，30min后，颈椎脱臼处死动物，解剖小鼠腹腔，注入2ml生理盐水，吸取腹腔液制作涂片，用吉姆萨工作液染色15～30 min，再用蒸馏水漂洗、晾干，显微镜下计数，计算吞噬指数和吞噬百分率。
3.3 NK细胞活性测定 用MTT法：取处于对数生长期的Yac-1细胞为靶细胞。各组小鼠脾淋巴细胞置培养瓶中贴壁2h去除贴壁的巨噬细胞后为效应细胞，按下式计算杀伤率：
杀伤率（%） = 1-(OD( E+ T ) - ODE)/ODT
OD( E+ T) ：指NK+ 靶细胞孔OD值。ODE：指同一组效应细胞对照孔OD值。ODT ：指相应靶细胞对照孔OD值。
4结果
4.1 对小鼠脾淋巴细胞转化影响 与阴性对照组比较，各剂量组显著抑制Con A 诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖，且差异有统计学意义。( P＜0. 05）。采用金氏公式评价合并用药对小鼠脾淋巴细胞增殖抑制率影响，结果增效指数q值为1.26（见表13）。
表13 对小鼠脾淋巴细胞转化影响（n=10，x±s）
注：与对照组比较* P＜0.05
4.2 对小鼠巨噬细胞吞噬功能影响 与阴性对照组比较，各组均能明显提高小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力，差异显著( P＜0. 05)。采用金氏公式评价合并用药对小鼠巨噬细胞吞噬功能影响，结果增效指数q值为1.21（见表14）。
表14 对小鼠巨噬细胞吞噬功能影响（n=10，x±s）
注：与对照组比较* P＜0.05
4.3 对小鼠NK细胞活性影响 与阴性对照组比较，各给药组均能提高小鼠NK细胞活性，差异显著( P＜0. 05)。采用金氏公式评价合并用药对小鼠NK细胞活性影响，结果增效指数q值为1.23（见表15）。
表15 对小鼠NK细胞活性影响（n=10，x±s）
注：与对照组比较* P＜0.05
5结论
三组实验增效指数分别为1.26、1.21、1.23，由于q>1.15，显示药物合用后作用增强，说明金钗石斛与薏苡仁、西洋参合用具有明显的增效作用。
与现有技术相比，本发明选用金钗石斛、薏苡仁、西洋参为主要原料制成保健食品，具有增强体质，增强机体免疫力的功能，对细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬功能和NK 细胞活性均有一定促进作用，是滋补强壮，健身益寿之佳品。且安全小，无副作用；更令人惊喜的是，方中药物联用后还能产生协同增效的作用，达到了发明目的。
具体实施方式
实施例1：
组方：金钗石斛 670g、薏苡仁1000g、西洋参330g。
制备方法：薏苡仁取220g粉碎，过120目筛，得细粉121℃、0.1MPa湿热灭菌30分钟，备用，其余药材加水适量浸泡0.5小时，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至相对密度为1.35～1.38(80℃)的稠膏，加入薏苡仁细粉混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，过40目筛，装入1号胶囊，制成1000粒，即得。
规格：0.4g/粒
用法用量：口服，一日2次，每次3粒。
Claims (7)
1.一种增强免疫力的保健食品，由有效药物成分和辅料制成，其特征在于：按照重量份计算，使用的有效药物成分为：金钗石斛500-800份、薏苡仁800-1200份、西洋参200-500份。
2.如权利要求1所述增强免疫力的保健食品，其特征在于：按照重量份计算，使用的有效药物成分为：金钗石斛 670份、薏苡仁1000份、西洋参330份。
3.制备权利要求1或2所述增强免疫力的保健食品的方法，其特征在于：取金钗石斛、薏苡仁和西洋参，与药用辅料进行组合，并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
4.根据权利要求3所述增强免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于：薏苡仁取部分粉碎，过80-200目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加水浸泡0.3-1小时后，煎煮1-3次，每次加入4-8倍量水煎煮0.5-3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成稠膏，加入薏苡仁细粉及药用辅料混匀，减压干燥，粉碎，再并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
5.根据权利要求4所述增强免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于：薏苡仁取处方量的22%粉碎，过120目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入薏苡仁细粉及药用辅料混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，再并按照常规的制备方法制成相应的制剂。
6.根据权利要求3或4所述增强免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于：所述制剂为胶囊剂。
7.根据权利要求5所述增强免疫力的保健食品的制备方法，其特征在于：所述胶囊剂这么制备：薏苡仁取处方量的22%粉碎，过120目筛，所得细粉湿热灭菌20-50分钟，备用；剩余薏苡仁、西洋参及金钗石斛加适量水浸泡0.5小时后，煎煮两次，每次加6倍量水煎煮1小时，滤过，合并滤液，-0.08Mpa、75℃浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的稠膏，加入薏苡仁细粉混匀，-0.08Mpa、75℃减压干燥，粉碎，过40目筛，装入胶囊，即得。
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