CN101181561B - 一种中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药制药领域，公开了一种中药组合物及其制备方法和应用。该中药组合物的配方含有下列重量份的原料药材：蝉蜕400-450份，黄芩200-250份，地龙250-300份，僵蚕200-250份，荆芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，诃子200-250份。该中药组合药具有明显的抑菌、抗病毒、抗炎、解痉、止咳平喘、降低气道反应性等作用，安全有效，成本低，可用于制备止咳、抗病毒、平喘药物。

Description

一种中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于中药制药领域，涉及一种中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

呼吸道疾病是临床常见的疾病类型，通常伴有咳嗽、咳痰、气喘、炎症、气道反应性增高等症状。病因比较复杂，病毒感染、细菌感染、非特异性炎症、过敏等均可发生，治疗措施需要标本兼治。常见病有支气管炎、肺炎、支气管哮喘、病毒性感冒等，特别是急性支气管炎，其发病率为其它各种呼吸道疾病之首位，气道炎症导致的咳嗽是其主要症状，同时可因炎症导致的气道反应性增高，而使呼吸症状持续不解，造成临床治疗比较棘手。目前市场上存在多种中药和西药，均在不同方面有所侧重，部分药品价格较高，造成临床应用难以普及。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有止咳、平喘、抗炎、抑菌、抗病毒作用的中药组合物。

本发明另一个目的是提供上述中药组合物的制备方法。

本发明还有一个目的是提供上述中药组合物在制备止咳药物中的应用。

本发明的目的是通过下列技术措施实现的：

一种中药组合物，其配方含有下列重量份的原料药材：

蝉蜕400-450份，黄芩200-250份，地龙250-300份，僵蚕200-250份，荆芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，诃子200-250份。

所述的中药组合物，其配方含有下列重量份的原料药材：

蝉蜕414份，黄芩230份，地龙276份，僵蚕230份，荆芥230份，紫菀276份，百部414份，诃子230份。

所述的中药组合物，其剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂。

所述中药组合物的制备方法，包括下列步骤：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加适量水浸泡1～3小时后，提取挥发油2～4小时，药渣I及残液另置备用；

b.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加适量浓度为60～80％的乙醇回流提取2～4次，每次1～3小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液A备用；

c.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕及适量水，煎煮2～4次，每次2-3小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.2～1.4，与药液A合并，得药液B；

d.将挥发油与药液B合并，加入液体制剂常用辅料按液体制剂常规工艺制成液体制剂；或者

将挥发油加30～50倍量水，3～5倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合，滤过，包合物65～75℃烘干；另将药液B进行干燥，粉碎成细粉；根据所需固体制剂向细粉中加入相应常规辅料，加入包合物，常规工艺制成固体制剂。

所述中药组合物的制备方法，其中步骤e为：细粉加入适量糊精混匀，以80％乙醇制颗粒，将步骤b所得的包合物加入颗粒中，混匀，分装，制成颗粒剂。

所述中药组合物在制备止咳药物中的应用。

所述中药组合物在制备抗病毒药物中的应用。

所述中药组合物在制备平喘药物中的应用。

所述中药组合物在制备抑菌药物中的应用。

所述中药组合物在制备抗炎药物中的应用。

本发明的有益效果：

本发明提供的中药组合物疏风热、清肺络、宣肃止咳，具有明显的抑菌、抗病毒、抗炎、解痉、止咳平喘、降低气道反应性等作用，无明显急性毒性反应，也无明显蓄积性毒性和延迟性毒性作用，安全有效，稳定性好，价格低廉，为广大患者提供了更多的选择。本发明提供的制备方法简单易行，成本低。

一、本发明中药组合物的药效学实验：

实验1：本发明药物对小鼠氨水引咳作用的影响

实验材料：

1受试药物：本发明药物(按实施例1制备，以下简称蝉蜕，下同)，由河南省奥林特制药厂生产，批号980320。规格：9袋/盒，10克/袋。临床用量：每日3次，每次1袋。每克成品约相当于原生药2.30g。因制成颗粒时，已加入糊精，所以不用加其它助悬剂，使用时用蒸馏水配成40％、20％、10％三种浓度溶液。

2阳性对照药：神奇枇杷止咳颗粒(简称枇杷止咳)，贵州神奇制药有限公司生产，批号98090601(成人用量5g/人/次，3次/日)，使用时用蒸馏水配成20％浓度。

3试剂：氨水，开封化学试剂厂生产，批号：9700108。

4动物：昆明种小鼠，购于河南省实验动物中心。合格证号：医动字99007。

实验方法：

1、分组与给药：取健康昆明种小鼠50只，体重18～20g，雌雄各半，随机均分为5组，灌胃给药，每天一次，连续三天。

空白对照组：生理盐水，10ml/kg；阳性对照组：枇杷止咳颗粒，2g/kg；蝉蜕高剂量组：4g/kg；蝉蜕中剂量组：2g/kg；蝉蜕低剂量组：1g/kg。

2、氨水引咳与指标测定：末次给药1小时后，分别置于4L的玻璃钟罩内，用雾化器将14％的氨水雾化导入钟罩5秒钟，记录小鼠咳嗽的潜伏期(由喷入至小鼠咳嗽所需时间)。

3、统计学方法：结果进行组间比较t检验。

实验结果：各组动物经氨水熏吸后，本发明药物组及神奇枇杷止咳颗粒组较生理盐水组，咳嗽潜伏期明显延长(表1)。

表1本发明药物对氨水所致小鼠咳嗽潜伏期的影响

生理盐水组比较。^**P＜0.01。

结论：本实验利用氨水诱发小鼠咳嗽，观察本发明药物的止咳作用，结果表明，本发明药物能明显延长小鼠氨水引咳潜伏期，与空白对照组比较有显著性差异。

实验2、本发明药物对豚鼠枸橼酸引咳作用的影响

实验材料：

1受试药物：本发明药物，同前。

2阳性对照药：神奇枇杷止咳颗粒，同前。

3试剂：枸橼酸钠，开封化学试剂厂生产，批号：950910。

4动物：豚鼠，体重200～250g，雌雄各半，由河南省实验动物中心提供。

实验方法：

1、动物筛选：取豚鼠分别置于4L密闭钟罩内，以雾化器雾化17.5％的枸橼酸钠导入钟罩内，雾化1分钟，记录5min内豚鼠的咳嗽次数，将次数少于10次者弃除。

2、分组与给药：取合格豚鼠50只，雌雄各半，随机均分为5组，灌胃给药，每天一次，连续三天。

空白对照组：生理盐水，10ml/kg；阳性对照组：枇杷止咳颗粒，2g/kg；蝉蜕高剂量组：4g/kg；蝉蜕中剂量组：2g/kg；蝉蜕低剂量组：1g/kg。

3、枸橼酸引咳与指标测定：末次给药1小时，用枸橼酸钠雾化60秒引咳，记录5分钟内咳嗽潜伏期及咳嗽次数。

4、统计学方法：结果进行组间比较t检验。

实验结果：本发明药物对枸橼酸所致豚鼠咳嗽，可以明显延长潜伏期及减少咳嗽次数，见表2。

表2本发明药物对枸橼酸引咳的作用

与生理盐水组比较，^**P＜0.01。

结论：本实验利用枸橼酸诱发豚鼠咳嗽，观察本发明药物的止咳作用，结果表明，本发明药物能明显延长豚鼠枸橼酸引咳潜伏期，显著减少咳嗽次数，与空白对照组比较有显著性差异。

实验3：本发明药物对电刺激猫喉上神经引咳的影响

实验材料：

1受试药物：本发明药物，同前。实验时配成30％、15％和7.5％三种浓度。

2阳性对照药：

神奇枇杷止咳颗粒：同前，使用时用去离子水配成20％浓度。

***(复方磷酸可待因口服液)，每5毫升磷酸含可待因5mg，盐酸麻黄碱4mg，扑尔敏1mg，氯化铵110mg，深圳市制药厂生产，批号981072，临床成人用量10-15ml/次，3次/日。该药是临床常用西药止咳药。

3仪器：

3.1SEN-7103型电子刺激器，日本NIHOW KOHDEN生产。

3.2LMS-2B生理记录仪，成都仪器厂生产。

4动物：杂种家猫，体重2.38±0.33kg，雌雄各半，河南省中医药研究院动物中心提供。

实验分组：

1、本发明药物，高剂量组3g/kg(以成药计，药物30g加蒸馏水至100ml，10mi/kg体重ig)；中剂量组1.5g/kg(以成药计，药物15g加蒸馏水至100ml，10ml/kg体重ig)；低剂量组0.75g/kg(以成药计，药物7.5g加蒸馏水至100ml，10ml/kg体重ig)。

2、***，4.5mg/kg(以磷酸可待因含量计)，药液45ml加蒸馏水至100ml，10ml/kg体重ig。

3、神奇枇杷止咳颗粒，1.8g/kg，药物18g加蒸馏水至100ml，10ml/kg体重ig)。

4、溶剂对照组，蒸馏水10ml/kg，ig。

实验方法：

1、取健康猫，称重，用戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射麻醉，背位固定于手术台上，沿颈中线切开皮肤，分离皮下组织，暴露甲状软骨，找出一侧迷走神经，沿迷走神经向头端找出结神经节，即可见喉上神经由神经结分出，然后仔细分离出喉上神经(不要损伤神经)按上保护电级，并在电极处滴数滴液体石蜡，以防干燥。

2、于腹部切开皮肤暴露一部分腹直肌，缝一丝线于肌肉上，另一端固定于拉力换能器上，用记录仪记录猫咳嗽情况。

3、调节电子刺激器，有关参数如下：波宽0.5ms，脉冲频率50次/秒，每次刺激持续时间5秒钟，相邻两次刺激间隔时间不小于5分钟。调节刺激输出电压由低到高递增，测出给药前刺激喉上神经时引起咳嗽的电压阈值即为该猫的咳嗽阈值(以连续两次刺激阈值不变为准)，然后对猫灌胃给药一次，测定给药后阈值变化情况。

4、观察指标：电刺激阈值，包括给药前阈值，给药后最大阈值，并计算前后差值，提高率等。

阈值提高差值(V)＝给药后最大阈值-给药前阈值

结果：实验结果显示：本发明药物高、中剂量组能明显提高致咳刺激电压阈值，***亦具有同样作用，见表3。

表3本发明药物对电刺激猫喉上神经致咳电压阈值的影响(n＝10，X±SD)

注：与给药前比较：^△P＜0.05，^△△p＜0.01；与空白对照组比较：^*P＜0.05，^**P＜0.01。

结论：本实验利用电刺激猫喉上神经引咳法，观察本发明药物止咳作用，结果表明，本发明药物3g/kg、1.5g/kg、0.75g/kg三个剂量组分别对猫灌胃给药，可3g/kg及1.5g/kg明显提高电刺激猫喉上神经致咳的电压阈值，并随剂量增加，作用增强。结果表明本发明药物对猫具有中枢性镇咳作用。

实验4：本发明药物对豚鼠离体气管平滑肌的影响

实验材料：

1、本发明药物及神奇枇杷止咳颗粒，同前，使用时用生理盐水分别配成40％及20％的浓度。

2、磷酸组织胺，批号：960711。中国科学院上海生化研究所产品。

3、氯化乙酰胆碱，批号：971125，上海试剂三厂产品。

4、动物：成年豚鼠，雌雄不拘，体重367±42g，由河南省实验动物中心提供。

5、仪器、离体器官侧定仪。DC-001型，南京分析仪器厂生产。

实验方法：

取健康豚鼠，用木捶猛击头部致昏后，股动脉放血致死，迅速剪开颈部皮肤，分离气管，从甲状腺软骨以下至气管分叉处整条气管剪下，放入盛有Krebs营养液的培养器皿中(营养液0℃，预先充O₂饱和)，剪除气管周围的***，将气管剪成约3mm宽的螺旋条。放入离体器官测定仪，加入营养液，通气(95％O₂和5％CO₂)。让气管在营养液中平衡120min，更换三次营养液。接通记录仪电源，记录一段正常曲线后，再按下列步骤进行。

(1)加入0.01％磷酸组织胺(His)0.2ml，待出现高峰时，分别观察加入累计加入

本发明药物(0.4g/ml)0.2ml，0.4ml，0.8ml；神奇枇杷止咳颗粒(0.2g/ml)0.2ml，0.4ml，0.8ml，空白对照；累计加入生理盐水0.2ml，0.4ml、0.8ml后平滑肌收缩情况。

(2)加入0.05％乙酰胆碱(Ach)0.2ml，待出现高峰时，分别观察药物同(1)，并记录平滑肌收缩情况。

结果：本发明药物对豚鼠离体气管平滑肌His及Ach所致痉挛有明显对抗作用。(表4，5)

表4蜕止咳颗粒对豚鼠离体气管平滑肌His致痉后的影响

与给药前比较，**P＜0.01

表5本发明药物对豚鼠离体气管平滑肌Ach致痉后的影响

与给药前比较，^**P＜0.01。

结论：本发明药物对豚鼠离体气管平滑肌组胺(His)致痉具有解痉作用：对乙酰胆碱(Ach)致痉后，也有明显的解痉作用。

实验5：本发明药物的抗炎作用

实验材料：

1、本发明药物，同前。

2、动物：昆明种小鼠，雄性，体重25～30g，由河南省实验动物中心提供。合格证号：医动字99007。

3、巴豆油致炎液：巴豆油2％，***78％，无水乙醇20％，混匀，置磨口瓶中，5℃冰箱保存备用。

4、阿斯匹林，郑州化学制药厂提供原料药，使用时用1％糊精溶液配成20mg/ml，即2％浓度。

实验方法：

实验选用小鼠60只，随机均分为6组：(1)空白对照组：ig生理盐水10ml/kg：(2)蝉蜕大剂量组：ig蝉蜕4g/kg，(3)蝉蜕中剂量组：ig蝉蜕2g/kg，(4)蝉蜕小剂量组：ig蝉蜕1g/kg，(5)神奇枇杷止咳颗粒组：ig神奇枇杷止咳颗粒2.0g/kg，(6)阿斯匹林组，ig阿斯匹林200mg/kg。各组动物，每天ig一次，共6天。第6天给药30min后，每只小鼠左耳两面均匀涂上巴豆油致炎液0.5ml，4小时后，小鼠脱椎处死，用8mm直径打孔器在相同部位打下两耳片，称重，求出两耳片差异，按下列公式计算抑制率：

结果：结果见表6，蝉蜕大、中、小剂量组及枇杷止咳颗粒组与生理盐水组比较，小鼠两耳重量差均有所降低，其中蝉蜕大剂量组作用最强。

表6：本发明药物对小鼠耳肿胀的影响

注：与模型对照组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01

结论：本发明药物有明显的抗炎作用。

实验6：本发明药物对免疫***的影响

实验材料：

1、本发明药物，同前；

2、2，4-二硝基氯苯，批号：970611，上海试剂一厂；

3、伊文思蓝，批号：950415，上海化学试剂采购供应站；

4、鸡红细胞悬液，常规鸡翼静脉取血，放2倍阿氏液4℃保存；

5、都氏试剂，碳酸氢钠1.0g，***0.05g，高铁***0.2g，加蒸馏水至1000ml；

6、补体制备：新鲜豚鼠血清，用生理盐水1∶10稀释备用。

7、动物：昆明种小鼠，雌雄各半，体重18～22g；由河南省中医药研究院动物房提供。合格证号：医动字99012。

实验方法：

1、对2，4-二硝基氯苯(DNCB)所致迟发型皮肤超敏反应(DTH)的影响

实验选用小鼠50只，随机均分为5组，分组及给药方法见表7，于小鼠颈下脱毛后滴0.5g/ml DNCB液2ul/只致敏，给药当日连续给药10天后，在小鼠腹部脱毛皮肤上滴0.025g/ml DNCB液20ul/只进行攻击。24小时后iv 1mg/ml伊文思蓝10mg/kg，30min后处死动物，取腹部蓝染皮肤，剪碎置试管中，用1∶1丙酮生理盐水5ml浸泡24小时，取上清液比色(λ＝610nm)。

结果：本发明药物对小鼠DTH反应的强度没有显著影响，给药组OD值低于对照组(表7)。

表7本发明药物对DNCB诱导小鼠DTH反应的影响

注：与空白对照组比较，^*P＜0.05

2、本发明药物对血清溶血素的影响

选用昆明种小鼠50只，随机均分为5组，分组及给药方法见表8，各组动物连续ig给药7天，于实验当天ip 2％鸡红细胞混悬液0.2ml/只。7天后摘除眼球取血20ul/只，加入1ml生理盐水中，每管加入5％鸡红细胞0.5ml，置37℃水浴30min，冰箱终止反应，离心，2500rpm 5分钟，取上清液1ml加入3ml都氏试剂静置10min后，722分光光度计540nm处比色。

结果：给药组动物与空白组比较，OD值无显著性差异(表8)。

表8本发明药物对小鼠血清溶血素生成的影响

结论：本发明药物对DNBC诱导小鼠DTH以及对小鼠血清溶血素生成没有显著影响，只有降低趋势。

实验7：本发明药物的体内外抑菌实验

实验材料：

1、实验动物：昆明种小鼠，体重14±1g，雌雄兼用。由中国医学科学院动物养殖场提供。合格证号：SCXK11-00-0006。

2、受试药物：本发明药物，同前。

3、阳性药物：环丙沙星注射液，德国拜耳公司制造，批号：960701，体外实验时用肉汤培养基稀释成含0.2mg/ml的原药液用于实验；环丙沙星片，天津市中央药业有限公司制造，批号：010336，实验时按临床等效剂量灌胃给药。

4、细菌菌株：金黄色葡萄球菌(260032-18)；白色葡萄球菌(26101)；乙型溶血性链球菌(32172 10)；肺炎杆菌(11 14)；大肠杆菌(44113 23)；绿脓杆菌(10211 55)；变形杆菌(49101 1)；卡它球菌(29108)；***(29106)。分别购自***药品生物制品检定所及北京市医药生物技术研究所，为半年内临床分离菌株或标准株。

5、肉汤培养基：***药品生物制品检定所生产，批号：980226。

6、24孔一次性培养板。37℃培养箱。

方法及结果：

1、对乙型溶血性链球菌所致小鼠死亡的保护作用

1.1感染小鼠最小致死量(MLD)的确定

将乙型溶血性链球菌用生理盐水进行10⁵-10⁹个菌/ml的稀释后，给小鼠腹腔注射进行感染。每只0.5ml，每个稀释度感染10只，记录感染后各组小鼠的死亡情况，连续观察7天。将在3天内小鼠的死亡率达80％以上的稀释度定为最小致死量。经反复观察，本实验中乙型溶血性链球菌在10⁸个菌/ml稀释时，小鼠3天内累计死亡率可达80％以上，故将其定为最小致死量，用于感染动物。

1.2对小鼠死亡的保护作用

取小鼠100只，体重14±1g，按体重随机分为5组，实验组分别给予本发明药物3.0g、2.0g、1.0g成药/kg/d；环丙沙星片组0.143g/kg/d；细菌感染对照组给予同体积的蒸馏水。连续三天，第四天取已增菌18小时的乙型溶血性链球菌菌液(含10⁸个菌/ml)，0.5ml/只，腹腔注射，作致死性攻击，感染后再继续给药二天。每日记录感染后动物死亡数，连续1周，计算死亡率、保护率及生命延长率，以X²及t检验进行统计学处理。结果见表9、10。

表9本发明药物对乙型溶血性链球菌致小鼠死亡率的影响

与细菌感染组比较：^**P＜0.01

表10本发明药物对乙型溶血性链球菌致小鼠存活时间的影响

与细菌感染组比较：^**P＜0.01  ^*P＜0.05

表9、10结果显示：小鼠感染细菌7天内，本发明药物3.0g/kg/d剂量组小鼠的死亡数较感染对照组相对减少(保护率为40％)，但在统计学上无明显差异。但小鼠的平均存活天数较感染对照组明显延长，统计学有显著性差异(P＜0.05)。表明本发明药物在此剂量时对乙型溶血性链球菌感染致小鼠死亡有一定的保护作用。

2.本发明药物的体外抑菌实验

用肉汤培养基将受试药物进行1∶5～1∶160倍倍比稀释后，加至24孔细胞培养板上，每个稀释度各设2孔，每孔加入药液培养基1.0ml，再加入105个菌/ml的菌液0.1ml，置37℃温箱中培养24小时，观察各孔中细菌生长情况。同时设细菌对照和阳性对照药对照。结果见表11。

表11：本发明药物的体外抑菌实验

+：表示有细菌生长    -：表示无细菌生长

2.2结果显示：经24小时培养后，细菌对照孔均有细菌生长。本发明药物对所试的9种细菌、15个菌株均有不同程度的抑制作用，最低抑菌浓度分别在6.25～25mg/ml之间，抑菌效价分别在1∶10～1∶40之间。环丙沙星在所试剂量时对体外细菌的生长均有明显的抑制作用。

小结：本实验观察了本发明药物的体内外抑菌作用，结果显示：本发明药物在对乙型溶血性链球菌所致小鼠死亡保护实验中，可明显延长小鼠的生存天数，小鼠的死亡数有减少的趋势；在体外实验，本发明药物对所试的9种细菌、15个菌株均有不同程度的抑制作用，最低抑菌浓度在6.25～25mg/ml之间，抑菌效价为1∶10～1∶40。说明本发明药物在体内外实验中均有明显的抑菌作用。

实验8：本发明药物体内抗病毒试验

实验材料：

1、动物：瑞士种小鼠，体重12-15g，雌雄各半。由中国医学科学院实验动物研究所繁殖场提供，合格证号：01-3001。

2、病毒：流感病毒亚甲型鼠肺适应株FM1，-60℃低温冰箱保存备用。

3、免疫血清：用鸡胚尿囊液传代的FM1病毒免疫家兔，获得高效价的免疫血清，冻存于-60℃冰箱备用。

4、标记抗体：羊抗兔IgG-FITC，华美生物工程公司出品，-20℃保存备用。

5、受试药物：本发明药物，同前。实验时按11、5.5、2.75g/kg/d小鼠灌胃给药。

6、阳性对照药：神奇枇杷止咳颗粒，贵州神奇制药有限公司生产，批号：98040201；病毒唑：湖北省医药工业研究所出品，为原料药。

方法和结果：

1、对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用

取小鼠70只按体重随机分成7组。分别给予本发明药物上述三个剂量；病毒唑(0.07g/kg/d)组；神奇枇杷止咳颗粒组(2.75g/kg/d)；病毒感染对照组及正常动物对照组。除正常对照组外，将小鼠用***轻度麻醉，以15个LD₅₀流感病毒液滴鼻感染，每只0.05ml。从感染前一天开始灌胃给药，连续5天，病毒对照组以等容量蒸馏水灌胃。第6天称取小鼠体重后解剖，肉眼观察肺部病变，记录肺部肝样实变的程度，摘取全肺称重，逐个计算肺指数值，并求出肺指数抑制率。

肺指数＝[肺重(g)/体重(g)]×100

结果采用组间t检验进行统计学处理。见表12。

表12本发明药物对小鼠流感病毒性肺炎的抑制作用

与病毒对照组比较：^**P＜0.01，^*P＜0.05

结果显示：蝉蜕大、中剂量组动物的肺指数值均低于病毒对照组，与病毒对照组比较有显著性差异。表明蝉蜕在11、5.5g/kg/d剂量时对流感病毒引起的小鼠肺炎有明显的抑制作用。

2、对小鼠肺内流感病毒增殖量的影响

除病毒感染量为1000LD₅₀外，动物分组、给药方法等均同上一个实验，但去掉正常对照组。感染病毒后48小时处死小鼠，解剖取肺，摘取左侧中叶肺固定，常规脱水、包埋、制作石蜡切片。以间接免疫荧光法染色，以荧光素标记的抗流感病毒血清作示踪原，通过间接免疫荧光结合，观察感染鼠肺内特异性的病毒抗原，判断药物对病毒增殖的作用，荧光阳性数多，表明病毒颗粒增殖多，并作组间比较。

表13：本发明药物对小鼠肺内流感病毒增殖量的影响

与病毒对照组比较：^**P＜0.01

结果显示：蝉蜕颗粒大剂量组的肺内流感病毒增殖量明显少于病毒对照组，与病毒对照组比较有显著性差异(P＜0.01)。说明蝉蜕在11g/kg/d剂量时对小鼠肺内流感

病毒增殖量有显著的抑制作用。

小结：流感病毒感染小鼠肺脏后，可引起肺组织的炎性改变形成病毒性肺炎。由于肺组织充血、渗出使肺脏重量增加，且肺重量的增加与其炎症的程度成正相关。在试验室常采用肺指数(肺重量/体重)来表示肺脏炎症轻重的程度，肺指数越大表明肺的炎症病变越重，反之亦然。此外，流感病毒在引起肺脏炎症改变的同时，常在肺内进行繁殖，在实验室采用特异性免疫荧光抗体进行标记可反映病毒增殖的程度，特异荧光标记的比率越高表示病毒增殖量越大，因此，常做为判断药物抗病毒作用的另一常用指标。本试验观察了本发明药物对小鼠流感病毒性肺炎及肺内流感病毒增殖量的影响，结果显示：在11g/kg/d、5.5g/kg/d剂量时对小鼠流感性肺炎有明显抑制作用；在11g/kg/d剂量时对小鼠肺内流感病毒增殖有明显抑制作用。

实验9：本发明药物对大鼠高气道反应的影响

动物：SD大鼠，雄性，由河南省实验动物中心提供，体重160～180g。合格证号：医动字01006。

药物：

本发明药物：同前。

阿斯美胶囊：日本三共株式会社生产，批号MN531；进口药品证号：20000006；生产日期：2001年7月；每粒胶囊成份：盐酸甲氧那明12.5mg，那可丁7mg，氨茶碱25mg，马来酸氯苯那敏2mg，共46.5mg/粒；适应症：哮喘、过敏性咳嗽；成人用量：2粒/次，3次/日。是临床上常用的治疗哮喘及过敏性咳嗽的药品之一，该药作为西药阳性对照药。

神奇枇杷止咳颗粒：同前。

仪器：雾化器：YC-Y800型，医用超生雾化器，北京亚都科技股份有限公司生产。Pclab生物信号采集***：北京微信斯达科技发展有限责任公司生产。压力传感器：MPX5050DP Motorola，美国产。γ-计数仪：SN-695放免测定仪，上海产。

试剂：

1、卵蛋白：华美生物工程公司提供，批号：0111。

2、白细胞介素-4(IL-4)放免药盒，北京东亚免疫技术研究所提供，批号：20020628。

3、白细胞介素-6(IL-6)放免药盒，北京东亚免疫技术研究所提供，批号：20020628。

4、白细胞介素-8(IL-8)放免药盒，北京东亚免疫技术研究所提供，批号：20020628。

5、白栓素B2(TXB2)放免药盒，北京东亚免疫技术研究所提供，批号：20020628。

6、内皮素(ET-1)放免药盒，北京华英生物技术研究所提供，批号：20020630。

7、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)放免药盒，北京华英生物技术研究所提供，批号：20020630。

方法：

将大鼠分别放入4L玻璃钟罩内，以1mg/ml的卵蛋白雾化导入1分钟，1分钟内出现咳嗽动物为合格的敏感动物，挑选合格大鼠随机分为以下各组：1、空白组。2、模型组。3、阿斯美治疗组：7mg/kg。4、枇杷止咳治疗组：0.23g/kg。5、蝉蜕治疗组大剂量：4g/kg。6、蝉蜕治疗组中剂量：2g/kg。7、蝉蜕治疗组小剂量：1g/kg。8、阿斯美预防组：7mg/kg。9、枇杷止咳预防组：0.23g/kg。10、蝉蜕预防组大剂量：4g/kg。11、蝉蜕预防组中剂量：2g/kg。12、蝉蜕预防组小剂量：1g/kg。

将氢氧化铝干粉以10％的比例溶入蒸馏水，加热煮沸10分钟，不停搅拌，制成氢氧化铝溶胶液，过滤，取上清液，以此做为佐剂，溶入卵蛋白，配1mg/ml的卵蛋白溶液。各组动物(除空白组外)以新鲜配制的1％卵蛋白溶液作皮下液射，每鼠在两后足跖、两腹股沟、腰两侧、背两侧、颈两侧共取10点，每点皮下注射0.05ml，同时腹腔注射0.5ml，共计1ml，空白对照组仅注射氢氧化铝佐剂，1周后再重复一次，使大鼠致敏。

预防给药的各组大鼠于第一次注射卵蛋白开始灌胃不同的药物，治疗给药的各组大鼠于第二次注射卵蛋白一周后开始给药，空白对照组及模型组只灌胃去离子水2ml/100g。

各组动物均于第二次注射卵蛋白一周后开始高气道反应激发处理，将大鼠置于4L的玻璃钟罩内，连接超声雾化器，雾化吸入0.4mg/ml的卵蛋白(正常对照组以生理盐水代之)15min，雾量控制在1ml/2min，以激发哮喘。连续激发2周，同时各组给予不同药物，两周后将动物置于下面装置中测动物清醒状态下的咳喘潜伏期、咳喘次数、呼吸频率等。

次日将动物麻醉，腹主动脉取血；取右侧肺，用10ml生理盐水灌洗3次，回收肺泡灌洗液，作下列检测：肺泡灌洗液白细胞计数，然后1500转/分离心15分钟，上清液测IL-8、IL-6、IL-4、TXB2、ET-1、GM-CSF等，血液也测IL-4、IL-6、IL-8、TXB2、ET-1、GM-CSF等。

表14本发明药物对大鼠高气道反应的影响

注：与模型组比较^**P＜0.01

表15本发明药物对高气道反应大鼠咳喘次数、咳喘潜伏期的影响

注：与模型组比较^**P＜0.01

结果：本发明药物对卵蛋白激发后高气道反应大鼠，可以抑制其咳喘次数、减少呼吸频率及呼吸幅度，延长哮喘潜伏期，对肺泡灌洗液中的血细数及炎性细胞因子有抑制作用，对血液中的炎性细胞因子也有明显的抑制作用，但对ET-1无明显作用。

结论：本发明药物对高气道反应模型大鼠的高过敏性(咳喘及肺部炎症)有明显的抑制作用。

二、急性毒性实验

本发明药物急性毒性试验

实验材料：

1、受试药物：本发明药物(以下简称蝉蜕)，由河南省奥林特制药厂生产。规格：9袋/盒，10克/袋。临床用量：每日3次，每次1袋。每克成品约相当于原生药2.30g。为提高用药浓度，实验用浸膏粉(每克含生药4.18克)，用蒸溜水配成73.3％浓度。浸膏粉由河南省奥林特药厂提供批号，010912。

2、实验动物：昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重18～20g，由河南省实验动物中心提供，合格证号：医动字01006。

方法与结果：

1方法：实验用昆明种小鼠，禁食12小时(自由饮水)后，灌胃给药，一日内灌胃三次，每次0.4ml/10g体重，间隔5小时。每天观察动物毛发、活动、精神状态、食量、饮水量及动物死亡情况等，连续观察7天。

2结果：小鼠灌胃给药后，7天内动物毛发、活动、精神状态、食量及***物等均未见异常，无动物死亡，体重增长见表18。测得小鼠一日累计本发明药物灌胃的最大给药量为367.7g生药/kg体重，相当于临床用药量的319.7倍。

结论：本发明药物以小鼠能耐受的最大浓度和最大可灌胃容积灌胃给药，观察7天，未发现明显急性毒性反应，无动物死亡。测得本发明药物小鼠灌胃给药的最大给药量为367.7g生药/kg体重(相当于临床用量的319.7倍)。

表18：本发明药物急性毒性实验体重变化表

三、长期毒性实验

本发明药物以28.88g生药/kg体重、21.66g生药/kg体重和14.44g生药/kg体重(分别相当于临床用药量的80倍、60倍和40倍)三个剂量给大鼠连续灌胃给药90天及停药14天，观察对大鼠可能产生的蓄积性毒性和延迟性毒性反应。实验结果表明：给药期间及停药后，三个剂量组动物体重增长、血常规、血液生化测定、各主要脏器指数和组织病理学检查均未见异常，与空白对照组比较无显著性差异。说明本发明药物对大鼠无明显蓄积性毒性和延迟性毒性反应。

参考文献：

1、徐叔云主编.小鼠氨水引咳法，药理实验方法，第二版，1992：1167，人民卫生出版社。

2、徐叔云主编.豚鼠枸橼酸引咳法，药理实验方法，第二版，1992：1168人民卫生出版社。

3、徐叔云主编.猫电刺激引咳法，药理实验方法，第二版，1992：1167-1169，人民卫生出版社。

4、徐叔云主编.离体气管、肺条实验法.药理实验方法，第二版，1992：1171-1173，人民卫生出版社。

5、徐叔云主编.耳肿胀法，药理实验方法，第二版，1992：719，人民卫生出版社。

6、李仪奎主编.溶血素测定法.中药药理实验方法学.1991：159-160，上海科学技术出版社。

7、杨峻，许静亚，李东真等.雷酚内酯的抗炎免疫药理作用.中草药1995；26(1)：24-27。

8、张均田主编.抗菌、抗病毒药物的实验方法与技术.现代药理实验方法.1999：1409-1470。

9、魏尔清，张伟萍，陆智勇等.清醒无拘束豚鼠气道反应性测定方法.中国应用生理学杂志，1997；13(1)：86-87。

10、赵孟辉，张丽芬，张伟萍，等.大鼠哮喘模型中气道炎症的定量研究.浙江医科大学学报，1997；26(3)：100。

具体实施方式

以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。

实施例1：

配方：

蝉蜕414g，黄芩230g，地龙276g，僵蚕230g，荆芥230g，紫菀276g，百部414g，诃子230g。

制备方法：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加水浸泡2小时后，提取挥发油3小时，药渣I及残液另置备用；

b.挥发油加40倍量水，4倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合10分钟，滤过，包合物70℃烘干，另置备用；

c.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加14720ml 70％乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液备用；

d.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕，加水18400ml，煎煮3次，每次2.5小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.3，与步骤c所得药液合并，真空干燥，粉碎成细粉；

e.细粉加入糊精450g混匀，以80％乙醇制颗粒，将步骤b所得的包合物加入颗粒中，混匀，分装，制成颗粒剂。

实施例2：

配方：

蝉蜕400g，黄芩230g，地龙250g，僵蚕250g，荆芥200g，紫菀270g，百部430g，诃子240g。

制备方法：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加水浸泡2小时后，提取挥发油2.5小时，药渣I及残液另置备用；

b.挥发油加45倍量水，5倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合10分钟，滤过，包合物68℃烘干，另置备用；

c.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加14720ml 70％的乙醇回流提取4次，每次1.5小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液备用；

d.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕，加水18400ml，煎煮3次，每次2.5小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.3，与步骤c所得药液合并，真空干燥，粉碎成细粉；

e.细粉加入糊精450g混匀，以80％乙醇制颗粒，将步骤b所得的包合物加入颗粒中，混匀，分装，制成颗粒剂。

实施例3：

配方：

蝉蜕450g，黄芩230g，地龙290g，僵蚕240g，荆芥230g，紫菀280g，百部420g，诃子220g。

制备方法：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加水浸泡2小时后，提取挥发油3小时，药渣I及残液另置备用；

b.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加14720ml 70％的乙醇回流提取3次，每次3小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液A备用；

d.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕，加水18400ml，煎煮2次，每次3小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.2，与药液A合并，得药液B；

e.挥发油与药液B合并，加入矫味剂，混匀，加水定容至10000ml，分装，灭菌，制成口服液，每支10ml。

实施例4：

配方：

蝉蜕420g，黄芩200g，地龙260g，僵蚕238g，荆芥225g，紫菀276g，百部427g，诃子232g。

制备方法：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加适量水浸泡2小时后，提取挥发油4小时，药渣I及残液另置备用；

b.挥发油加50倍量水，5倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合10分钟，滤过，包合物75℃烘干，另置备用；

c.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加14720ml 70％的乙醇回流提取2次，每次3小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液备用；

d.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕，加水18400ml，煎煮2次，每次3小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.4，与步骤c所得药液合并，真空干燥，粉碎成细粉；

e.细粉加入淀粉450g，再加入步骤b所得的包合物，混匀，压片，制成片剂。

实施例5：

配方：

蝉蜕436g，黄芩215g，地龙273g，僵蚕243g，荆芥241g，紫菀260g，百部435g，诃子227g。

制备方法：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加适量水浸泡3小时后，提取挥发油2小时，药渣I及残液另置备用；

b.挥发油加45倍量水，4倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合，滤过，包合物70℃烘干，另置备用；

c.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加14720ml 70％的乙醇回流提取3次，每次2小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液备用；

d.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕，加水18400ml，煎煮2次，每次3小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.3，与步骤c所得药液合并，真空干燥，粉碎成细粉；

e.细粉加入糊精450g混匀，以80％乙醇制颗粒，将步骤b所得的包合物加入颗粒中，混匀，灌装胶囊，制成胶囊剂。

Claims (10)

1.一种止咳、平喘、抗炎、抑菌或抗病毒的中药组合物，其特征是该中药组合物的配方为下列重量份的原料药材：

蝉蜕400-450份，黄芩200-250份，地龙250-300份，僵蚕200-250份，荆芥200-250份，紫菀250-300份，百部400-450份，诃子200-250份。

2.根据权利要求1所述的中药组合物，其特征是该中药组合物的配方为下列重量份的原料药材：

蝉蜕414份，黄芩230份，地龙276份，僵蚕230份，荆芥230份，紫菀276份，百部414份，诃子230份。

3.根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征是该中药组合物的剂型为片剂、颗粒剂、胶囊剂、丸剂、口服液、注射剂。

4.权利要求1或2所述中药组合物的制备方法，其特征在于该方法包括下列步骤：

a.按配方取原料药材，其中荆芥加适量水浸泡1～3小时后，提取挥发油2～4小时，药渣I及残液另置备用；

b.蝉蜕、黄芩、地龙、紫菀、百部、诃子加适量浓度为60～80％的乙醇回流提取2～4次，每次1～3小时，滤过，得药渣II及滤液，滤液合并，回收乙醇至无醇味，得药液A备用；

c.药渣II与步骤a的药渣I与残液合并，加入僵蚕及适量水，煎煮2～4次，每次2-3小时，合并滤液，滤过，滤液减压浓缩至70℃相对密度约为1.2～1.4，与药液A合并，得药液B；

d.将挥发油与药液B合并，加入液体制剂常用辅料按液体制剂常规工艺制成液体制剂；或者

将挥发油加30～50倍量水，3～5倍量β-环糊精，以胶体磨研磨包合，滤过，包合物65～75℃烘干；另将药液B进行干燥，粉碎成细粉；根据所需固体制剂向细粉中加入相应常规辅料，加入包合物，常规工艺制成固体制剂。

5.根据权利要求4所述中药组合物的制备方法，其特征在于步骤d为：细粉加入适量糊精混匀，以80％乙醇制颗粒，将所得的包合物加入颗粒中，混匀，分装，制成颗粒剂。

6.权利要求1或2所述中药组合物在制备止咳药物中的应用。

7.权利要求1或2所述中药组合物在制备抗病毒药物中的应用。

8.权利要求1或2所述中药组合物在制备平喘药物中的应用。

9.权利要求1或2所述中药组合物在制备抑菌药物中的应用。

10.权利要求1或2所述中药组合物在制备抗炎药物中的应用。