发明内容:
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点,提供一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法。
为实现上述目的,本发明采用的技术方案是:
一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干桑黄粉碎后用乙醇加热回流提取;
(2)将经步骤(1)处理的桑黄提取液抽滤,将滤液减压回收乙醇,得初提物;
(3)所获初提物用酸调其PH值为2.0~2.5,静置、抽滤、并用水洗涤至中性,减压浓缩得桑黄总黄酮粗提物;
(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附;
(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得桑黄总黄酮半成品,其含量为35%以上;
(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇以不同体积比例进行洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得桑黄总黄酮,其含量在90%以上。
所述的步骤(1)中,桑黄粉碎后过30~80目筛在进行乙醇提取。
所述的步骤(1)中,乙醇浓度为80%。
所述的步骤(1)中,提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
所述的步骤(1)中,加入乙醇的体积为桦树皮粉碎体积的5~10倍。
所述的步骤(4)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种,吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(5)中所述的洗脱为用40-80%的乙醇进行洗脱。
所述的在步骤(5)和(7)中,所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。
所述的步骤(7)中所采取的丙酮,甲醇的体积比为1~7∶1。
本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法分离纯化桑黄总黄酮,对桑黄总黄酮的吸附选择性良好,吸附快解析也快,吸附容量较大;提取方便快捷,原料来源丰富,生产成本低廉,分离效果明显,提取纯度高,可以得到含量35%以上的桑黄总黄酮半成品和含量90%以上的桑黄总黄酮终产品,克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂,不容于酸、碱及有机媒,对有机物选择性较好,不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响,可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附桑黄总黄酮,吸附快、解析也快,吸附容量较大。
具体实施方式:
实施例1:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干桑黄粉碎后过60目筛,用桑黄粉体积5倍的乙醇回流提取3次,每次1.5h;
(2)将经步骤(1)处理的桑黄提取液抽滤,将滤液减压回收乙醇得初提物;
(3)所获初提物用酸调其PH值为2.0,静置、抽滤、并用水洗涤至中性,减压浓缩得桑黄总黄酮粗提物;
(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂;
(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依次进行梯度洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量为35%桑黄总黄酮半成品;
(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量92%桑黄总黄酮。
实施案例2:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干桑黄粉碎后过30目筛,用桑黄粉体积8倍的乙醇回流提取3次,每次2h;
(2)将经步骤(1)处理的桑黄提取液抽滤,将滤液减压回收乙醇得初提物;
(3)所获初提物用酸调其PH值为2.3,静置、抽滤、并用水洗涤至中性,减压浓缩得桑黄总黄酮粗提物;
(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂;
(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量%桑黄总黄酮半成品;
(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量94%桑黄总黄酮。
实施案例3:一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化桑黄中桑黄总黄酮的方法,其步骤如下:
(1)将干桑黄粉碎后过80目筛,用桑黄粉体积10倍的乙醇回流提取3次,每次2.5h;
(2)将经步骤(1)处理的桦树皮提取液抽滤,将滤液减压回收乙醇得初提物;
(3)所获初提物用酸调其PH值为2.5,静置、抽滤、并用水洗涤至中性,减压浓缩得桑黄总黄酮粗提物;
(4)将所得桑黄总黄酮粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附,所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂;
(5)用40%、50%、60%、70%、80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱,用薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮各阶段洗脱液;
(6)将桑黄总黄酮各阶段洗脱液浓缩回收乙醇,得到含量38%桑黄总黄酮半成品;
(7)将所得桑黄总黄酮半成品上硅胶层析柱,并用丙酮,甲醇依次以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1、6∶1、7∶1的体积比进行梯度洗脱,薄层色谱法跟踪检测,收集桑黄总黄酮洗脱液;
(8)将所收集的桑黄总黄酮洗脱液,采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95%桑黄总黄酮。