CN103627685B - 一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用 - Google Patents

一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用，该突变体是对马拉色霉菌（Malassezia globosa）偏甘油酯脂肪酶进行定点突变获得的酶突变体，其中突变位点为278位的Phe，所述278位的Phe突变为Ile或Gly。本发明所得突变体Phe278Ile和Phe278Gly为偏甘油酯水解活性提高的突变体，更适合生物化工行业的应用。经改造后的SMG1Phe278Ile和SMG1Phe278Gly突变体的水解偏甘油酯的活性有不同程度的提高，分别是野生型的SMG1脂肪酶的水解活性的1.84倍和1.68倍，具有更好的水解偏甘油酯的活性，可以应用于去除油脂中偏甘油酯。

Description

一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用
技术领域
本发明属于生物技术领域，涉及一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用。
背景技术
脂肪酶（EC3.1.1.3）即三酰基甘油酰基水解酶，能够催化水解天然底物油脂生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯。而偏甘油酯脂肪酶是一种只水解甘油单酯和甘油二酯，而不水解甘油三酯的一种脂肪酶。脂肪酶参与的催化反应类型广泛，包括催化解脂、酯交换、酯合成等反应，广泛应用于饲料添加剂、油脂加工、食品行业、生物医药、日用化工等领域。
偏甘油酯脂肪酶特异的底物选择特性可以被利用于将油脂中的甘油单酯和甘油二酯选择性地去除。专利JP62061590公开了一种利用混合的催化剂Lipase G和Rhizopus deremer lipase制备低甘油二酯含量的硬质奶油。中国专利201210549885.1公开了一种利用混合的偏甘油脂肪酶和单甘油脂肪酶用于去除油脂中的偏甘油酯。尽管这些方法可以有效地降低油脂中偏甘油酯的含量，但是需要使用两种不同类型脂肪酶制剂，增加了生产过程中的成本投入，从而导致最终产品价格的上升。使用高水解甘油单酯和甘油二酯的活性的偏甘油脂肪酶，用去除偏甘油酯是一种可行的方法，但此类型的脂肪酶试剂仍然缺乏。
蛋白质工程是一种能够改善酶蛋白质特性的可行的方法，借助分子生物学和生物信息学的方法对蛋白进行定向突变和理性改造，而获得性能提高蛋白或酶突变体，由于该方法具有工作量小和获得阳性突变体的概率大，因此被广泛应用于酶分子改造的应用领域。
发明内容
本发明解决的技术问题是提供一种对偏甘油酯水解活性提高的SMG1脂肪酶突变体，可以应用于选择性去除油脂产品中的偏甘油酯。通过理性选择突变位点，是由马拉色霉菌属（Malassezia globosa）SMG1脂肪酶基因（Genbank登录号XM_001732152.1），通过对其蛋白结构（PDB：3UUE）的分析，运用定点突变的方法而获得的脂肪酶突变体。进行定点突变获得酶突变体，亲本SMG1氨基酸序列SEQ ID NO：1中在氨基酸取代位置发生突变，采用“原始氨基酸-位置-替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸，所述偏甘油酯脂肪酶突变体为：Phe278Ile和Phe278Gly。
本发明的技术方案具体如下：
一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体，该突变体是对马拉色霉菌（Malassezia globosa）偏甘油酯脂肪酶进行定点突变获得的酶突变体，其中突变位点为278位的Phe，所述278位的Phe突变为Ile或Gly。
所述突变体的DNA序列为SEQ NO.2或SEQ NO.3。
所述突变体的氨基酸序列为SEQ NO.4或SEQ NO.5。
上述突变体在去除油脂产品中偏甘油酯的应用。该应用主要包括如下步骤：
（1）利用偏甘油酯脂肪酶突变体制备突变体表达质粒：
a、利用重叠延伸PCR方法引入目的突变氨基酸位点，先分段扩增含有突变氨基酸位点的上下游基因片段，然后将带有突变位点的基因片段拼接成含有突变位点全长基因片段；
b、将上述扩增基因PCR产物经DNA纯化后，限制性内切酶Kpn I和SalI分别对纯化的基因片段和质粒pGAPZαA进行双酶切消化，连接，转化至大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，得到突变体表达质粒；
（2）利用突变体表达质粒制备重组菌株：
a、将步骤（1）的突变体表达质粒经限制性内切酶Bln I线性化后，电转至宿主细胞；
b、将转化液涂布于含有100mg/ml博莱霉素的YPD平板中，30℃培养3天后，平板上长出酵母单菌落为重组菌株；
（3）将重组菌株重组表达的偏甘油酯脂肪酶用于去除油脂产品中的偏甘油酯。
步骤（1）所述PCR的引物序列如下：
SMG For5’-GGGGTACCAGCAGTATTTACGCCCGTGGCCG-3’
3'AOX5’-GGCAAATGGCATTCTGACAT-3’
Phe278Ile For5'-GCTCGCGAGTTCAACATTGACGACCACCAAG-3'
Phe278Ile Rev5'-CTTGGTGGTCGTCAATGTTGAACTCGCGAGC-3'
Phe278Gly For5'-GTTGCTCGCGAGTTCAACGGTGACGACCACCA
AGGTAT-3'
Phe278Gly Rev5'-ATACCTTGGTGGTCGTCACCGTTGAACTCGCGA
GCAAC-3'
步骤（2）所述宿主细胞为巴斯德毕赤酵母X-33（Pichia pastoris）。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明所得突变体Phe278Ile和Phe278Gly为偏甘油酯水解活性提高的突变体，更适合生物化工行业的应用。经改造后的SMG1Phe278Ile和SMG1Phe278Gly突变体的水解偏甘油酯的活性有不同程度的提高，分别是野生型的SMG1脂肪酶的水解活性的1.84倍和1.68倍，具有更好的水解偏甘油酯的活性，可以应用于去除油脂中偏甘油酯。
附图说明
图1为脂肪酶SMG1三维结构图，箭头指向的是278位氨基酸的Phe位点。
图2为脂肪酶SMG1及突变体的蛋白纯化图，泳道一是蛋白分子量marker，泳道二是纯化后的SMG1，泳道三是纯化后的SMG1-Phe278Ile泳道四是纯化后的SMG1-Phe278Gly。
图3为脂肪酶SMG1及突变体水解偏甘油酯释放脂肪酸的相对含量。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步具体详细描述，但本发明的实施方式不限于此，对于未特别注明的工艺参数，可参照常规技术进行。
实施例1
脂肪酶SMG1野生型毕赤酵母表达载体的构建
根据Genbank的球形马拉色偏甘油脂肪酶smg1基因（登录号：XM_001732152），委托上海生工生物工程公司利用人工合成的方法，并根据毕赤酵母密码子偏好性对序列进行优化（序列SEQ ID NO：1）。基因合成后，利用引物SMG For：5’-GGGGTACCAGCAGTATTTACGCCCGTGGCCG-3’及SMG Rev：5’ACGCGTCGACTTAATGAGCACCAACCTGAGCT-3’扩增成熟肽序列，PCR扩增条件：94℃5min；94℃20s，53℃30s，72℃80s，25个循环；72℃7min。PCR扩增产物经DNA纯化试剂盒纯化后，限制性内切酶Kpn I和Sal I分别对纯化的基因片段和质粒pGAPZαA进行双酶切消化，连接，转化至大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞。涂布于LB（含25ug/ml zeocion）平板。挑取阳性克隆通过Kpn I和SalI双酶切鉴定及基因测序，结果表明获得了野生型pGAPZαA-SMG1表达质粒。
实施例2
脂肪酶SMG1278氨基酸位点突变体构建
采用定点突变技术构建突变体SMG1Phe278Gly和SMG1Phe278Ile，利用重叠延伸PCR方法引入目的突变位点，以SMG1野生型基因pGAPZαA-SMG1为模板，定点突变反应条件：
扩增突变上游片段：
10X pfu buffer： 5
d NTP： 2.5
SMG for： 2.5
Phe278Ile rev： 2.5
Pfu DNA聚合酶： 1.5
双蒸水： 40
PGAPZαA-SMG1： 2
扩增突变下游片段：
10X pfu buffer 5
dNTP： 2.5
Phe278Ile for： 2.5
3’AOX： 2.5
Pfu DNA聚合酶： 1.5
双蒸水： 40
PGAPZαA-SMG1： 2
扩增带有突变位点的全长基因片段：
10Xpfu buffer： 10
dNTP： 5
SMG for： 5
3’AOX： 5
Pfu DNA聚合酶： 3
双蒸水： 8
上游片段： 5
下游片段： 5
使用的引物，见下表：
PCR扩增条件：94℃5min；94℃20s，53℃30s，72℃80s，25个循环；72℃7min。重叠延伸PCR扩增产物经DNA纯化试剂盒纯化后，限制性内切酶Kpn I和Sal I分别对纯化的基因片段和质粒pGAPZαA进行双酶切消化，连接，转化至大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞。涂布于LB（含25ug/mlzeocion）平板。生长15h后，挑取平板上10个单菌落进行菌落PCR，挑取阳性克隆通过Kpn I和SalI双酶切鉴定及基因测序，结果表明获得了正确的突变表达质粒pGAPZαA-SMG1Phe278Gly和pGAPZαA-SMG1Phe278Ile。
实施例3
脂肪酶SMG1及其突变体的重组表达及纯化
将突变体表达质粒经限制性内切酶Bln I线性化后，电转至毕赤酵母X-33感受态态细胞。将转化液涂布于YPD（100ug/ml Zeocin）平板，30℃培养3天后，挑取平板上单菌落于100ml YPD培养基中发酵72小时后，离心并浓缩发酵液进行SDS-PAGE检测，获得能够表达脂肪酶SMG1突变体阳性重组菌株。
将野生型菌株以及各脂肪酶突变体菌株，接种至100ml YPD培养基中，30℃，200rpm振荡培养48-72小时后，收集发酵上清液（10，000rpm，离心20min，4℃）。
将SMG1野生型及其突变体菌株的发酵上清液用0.22um的滤膜抽滤。后用10KD膜胞（Vivaflow200，Sartorius）将发酵液置换成20mM pH8.0Tris-HCl缓冲液，并将发酵液浓缩到大约30ml。浓缩发酵上清利用Q SepharoseTM FastFlow阴离子交换层析柱，流速5ml/min，最后用pH8.0含1M NaCl的Tris-HCl缓冲液梯度洗脱，目标蛋白在80mM盐离子浓度处被洗脱下来。利用SDS-PAGE电泳对纯化的重组蛋白进行纯度鉴定（见图2）。
实施例4
偏甘油酯的水解
在25mL具塞三角瓶中加入3.5mL的偏甘油酯底物，加入经纯化后的SMG1-WT、SMG1-Phe278Gly或SMG1-Phe278Ile，加酶量为100U/mL(U/v，相对于油脂体积)酶液，酶液利用50mM Na2HPO4-NaH2PO4缓冲溶液稀释至1.5mL，混合均匀后预热20min。反应温度为25℃，摇床转速为200rpm，反应过程中分别在1h、3h、5h、7h及16h进行取样。将所取100μL样品溶于1mL的流动相中，流动相的比例为：正己烷/异丙醇/甲酸=15:1:0.003（体积比），震荡均匀后，于10000rpm下离心5min，除去下层水相，将上层有机相用0.45μm的有机相滤膜过滤后，取10μL进行HPLC-IR分析。
HPLC检测的条件为：色谱柱为Luna5u Silica(2)100A，250×4.60mm，(phenomenex)，流动相为正己烷:异丙醇:甲酸=15:1:0.003(体积比)；流动相流速为1.0mL/min，柱温保持30℃；进样量为10μL，每个样品检测时间约为30min，数据处理软件为Breeze工作站。不同酶处理后脂肪酸的释放量（见图3），经16小时的反应SMG1-Phe278Ile、SMG1-Phe278Gly及SMG1-WT的脂肪酸释放量分别为92.54%、84.16%及50.06%。突变体SMG1-Phe278Ile和SMG1-Phe278Gly水解偏甘油酯的效率是SMG1-WT的1.84倍和1.68倍。

Claims (6)

1.一种活性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体，其特征在于，该突变体是对马拉色霉菌(Malassezia globosa)偏甘油酯脂肪酶进行定点突变获得的酶突变体，其中突变位点为278位的Phe，所述278位的Phe突变为Ile或Gly；所述突变体的DNA序列为SEQ NO.2或SEQ NO.3。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列为SEQ NO.4或SEQ NO.5。
3.权利要求1～2任意一项突变体在去除油脂产品中偏甘油酯的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
(1)利用偏甘油酯脂肪酶突变体制备突变体表达质粒：
a、利用重叠延伸PCR方法引入目的突变氨基酸位点，先分段扩增含有突变氨基酸位点的上下游基因片段，然后将带有突变位点的基因片段拼接成含有突变位点全长基因片段；
b、将上述扩增基因PCR产物经DNA纯化后，限制性内切酶Kpn I和SalI分别对纯化的基因片段和质粒pGAPZαA进行双酶切消化，连接，转化至大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞，得到突变体表达质粒；
(2)利用突变体表达质粒制备重组菌株：
a、将步骤(1)的突变体表达质粒经限制性内切酶Bln I线性化后，电转至宿主细胞；
b、将转化液涂布于含有100mg/ml博莱霉素的YPD平板中，30℃培养3天后，平板上长出酵母单菌落为重组菌株；
(3)将重组菌株重组表达的偏甘油酯脂肪酶用于去除油脂产品中的偏甘油酯。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(1)所述PCR的引物序列如下：
SMG For    5’-GGGGTACCAGCAGTATTTACGCCCGTGGCCG-3’
3'AOX         5’-GGCAAATGGCATTCTGACAT-3’
Phe278Ile For 5'-GCTCGCGAGTTCAACATTGACGACCACCAAG-3'
Phe278Ile Rev 5'-CTTGGTGGTCGTCAATGTTGAACTCGCGAGC-3'
Phe278Gly For 5'-GTTGCTCGCGAGTTCAACGGTGACGACCACCA
              AGGTAT-3'
Phe278Gly Rev 5'-ATACCTTGGTGGTCGTCACCGTTGAACTCGCGA
              GCAAC-3'。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤(2)所述宿主细胞为巴斯德毕赤酵母X-33(Pichia pastoris)。
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Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107201352B (zh) * 2014-09-29 2020-05-12 中国农业科学院生物技术研究所 一种具有高转糖苷活性的β-半乳糖苷酶组合突变体及其制备方法和应用
CN106566658B (zh) * 2016-10-10 2020-06-19 华南理工大学 一种高酸价油脂的酶法脱酸方法
CN106906194A (zh) 2017-03-09 2017-06-30 华南理工大学 一种偏甘油酯脂肪酶及富含pufa的油脂的酶法脱酸方法
CN107916257B (zh) * 2018-01-09 2020-07-28 华南理工大学 T1脂肪酶突变体和应用
CN108642026B (zh) * 2018-05-17 2020-06-19 华南理工大学 一种偏甘油酯脂肪酶突变体及其应用
CN108504643A (zh) * 2018-05-31 2018-09-07 华南理工大学 一种来源于米曲霉的偏甘油酯脂肪酶及其制备方法和晶体结构
CN110951796B (zh) * 2019-12-31 2023-08-18 华南理工大学 一种脂肪酸乙酯转化为甘油二酯的方法
CN112574975B (zh) * 2020-09-30 2022-04-01 华南理工大学 甘油酯脂肪酶突变体g28c-p206c及其编码基因与应用
CN112592910B (zh) * 2020-09-30 2021-10-15 华南理工大学 一种甘油酯脂肪酶突变体及其应用
CN112592909B (zh) * 2020-09-30 2023-02-28 广州永华特医营养科技有限公司 一种甘油酯脂肪酶smg1突变体及其编码基因与应用
CN116426500B (zh) * 2023-05-18 2024-04-30 华东理工大学 一种高酯化能力的脂肪酶突变体及其表达应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102851263A (zh) * 2011-07-01 2013-01-02 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 脂肪酶基因突变库高通量筛选方法和脂肪酶突变基因
CN102965404A (zh) * 2012-11-13 2013-03-13 华南理工大学 一种高纯度甘油二酯的制备方法
CN103045559A (zh) * 2012-10-23 2013-04-17 浙江工业大学 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体、编码基因及其应用
CN103361326A (zh) * 2013-07-08 2013-10-23 华南理工大学 一种耐热性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及突变质粒、重组菌株和制备方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2854912A1 (en) * 2004-07-05 2006-01-12 Novozymes A/S Alpha-amylase variants with altered properties
CN103261409B (zh) * 2010-12-14 2014-08-20 福建福大百特科技发展有限公司 甘露聚糖酶、其编码基因及其生产
CN103243078B (zh) * 2013-05-29 2016-03-02 南京工业大学 一种提高枯草芽孢杆菌脂肪酶a热稳定性的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102851263A (zh) * 2011-07-01 2013-01-02 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 脂肪酶基因突变库高通量筛选方法和脂肪酶突变基因
CN103045559A (zh) * 2012-10-23 2013-04-17 浙江工业大学 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶突变体、编码基因及其应用
CN102965404A (zh) * 2012-11-13 2013-03-13 华南理工大学 一种高纯度甘油二酯的制备方法
CN103361326A (zh) * 2013-07-08 2013-10-23 华南理工大学 一种耐热性提高的偏甘油酯脂肪酶突变体及突变质粒、重组菌株和制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
扩展青霉脂肪酶基因克隆、密码子优化及表达;张正平等;《微生物学报》(第02期);全文 *
紫外诱变原生质体提高脂肪酶活力;晋青波等;《安徽工程科技学院学报(自然科学版)》;20080315(第01期);全文 *

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