CN103585633A - 一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法。所述组合物包括的各成分及其在冻干原液中的初始浓度为：蔗糖90~300g/L、甘露醇300~600g/L和甘油100～400ml/L。本发明还提供了使用本冻干保护剂用于提高rPoIFNα1产品的稳定性用途。

Description

一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法

技术领域

本发明主要涉及一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂及其制备方法，尤属于治疗性兽用生物制品生产工艺技术领域。

背景技术

冷冻干燥是目前保持微生物、动物组织、细胞及蛋白质等物质生物活性的一个有效的、方法。制品经完全冻结并在一定的真空条件下使冰晶升华，从而达到低温脱水的目的，此过程即称为冷冻干燥，简称冻干，是冷冻和干燥的结合。

冷冻干燥技术具有与其他干燥方法无可比拟的优点，在低温下干燥，各种成分、酶的活性丧失少，复水性好，保存期长，储存运输方便。但是，在真空冷冻干燥过程中，冷冻和干燥不可避免地会影响蛋白质的生物学活性。为防止在冻干过程中蛋白质的损失，人们在冻干过程中常添加糖、蛋白质、氨基酸等物质来起保护作用，保护剂可以改变生物样品冷冻干燥时的物理、化学环境，减轻或防止冷冻干燥或复水对蛋白质的损失，尽可能保持原有的各种生理生化特性和生物活性，冻干保护剂还影响到保藏期间蛋白质的稳定性。目前干扰素产品的保护剂产品通常用的是白蛋白，而白蛋白价格昂贵导致干扰素产品生产成本提高。本发明通过多次试验探索到一种能既能保护重组猪干扰素α1活性免受冷冻干燥过程多种因素的影响，又能降低成本的保护剂配方，非常适合重组猪干扰素α1冻干规模化生产需要。

发明内容

本发明目的就是提供一种用作重组猪干扰素α1冻干保护剂及其制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用作重组猪干扰素α1冻干保护剂，包括以下组分及其在配伍时的初始浓度为：蔗糖90～300g/L、甘露醇300～600g/L和甘油100～400ml/L，溶剂为注射用水。

所述的蔗糖在冻干原液中的初始浓度为90～300g/L。

所述的甘露醇在冻干原液中的初始浓度为300～600g/L。

所述的甘油在冻干原液中的初始浓度为100～400mL/L。

一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将上述重量份的各原料混合配制为冻干原液；

（2）高压灭菌，充分混匀，即得所述用作重组猪干扰素α1冻干保护剂。

本发明的优点是：

第一：降低了生产成本。本发明冻干保护剂使用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料价格均非常低廉。

第二：安全。本发明采用的蔗糖、甘露醇以及甘油等原材料均可通过高压蒸汽灭菌。

第三：保存期长，易于储存。

具体实施方式

实施例1

（1）取rPoIFNα1原液若干。

（2）按照蔗糖90～300g/L、甘露醇300～600g/L和甘油100～400ml/L配制为冻干原液。

（3）将配方原液配制好后，高压灭菌，充分混匀。

（4）将高压灭菌后的配方原液和rPoIFNα1原液按照3:1的比例混匀,分装，加好橡胶塞盖子，放入冻干机冻干。

（5）冻干结束后，压盖，关掉冻干机。

（6）rPoIFNα1冻干品质量检验

随机抽取不同批次rPoIFNα1冻干品分别按照以下方案检测，结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNα1成品质量均合格（如表1所示）。

无菌检验：按《中国生物制品规程》通则《生物制品无菌试验规程》A项进行；

安全性实验：用体重18～20g小白鼠5只，每只腹腔注射0.5ml（rPoIFNα1冻干品溶于2ml生理盐水），观察7天，动物应健存，每只体重增加判为合格；

外观检测：观察rPoIFNα1冻干品是否有塌缩、凹陷、缺损等现象，如无则判为合格；

复溶效果监测：取rPoIFNα1冻干品加生理盐水2ml，1min后观察是否完全溶解以及有无无肉眼可见颗粒，如无则判为合格；

含水量检测，是利用费休氏法测定，低于3%判为合格。

（7）rPoIFNα1冻干品37℃保存稳定性试验

如表2所示：随机抽取各批次干扰素，放置于37℃温箱中，各时间点取样，采用WISH细胞VSV检测***，以微量细胞病变抑制法测定样品的效价，计算效价降低百分率，低于5%判为合格。通过检测结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNα1成品37℃可稳定保存1个月以上。

（8）rPoIFNα1冻干品4℃保存稳定性试验

如表3所示：随机抽取各批次干扰素，放置于4℃冰箱中，各时间点取样，采用WISH细胞VSV检测***，以微量细胞病变抑制法测定样品的效价，计算效价降低百分率，低于5%判为合格。通过检测结果表明采用本冻干保护剂配方冻干后的rPoIFNα1成品4℃可稳定保存24个月以上。

表1rPoIFNα1冻干品质量检验结果

表2rPoIFNα1冻干品37℃保存稳定性试验（效价降低百分率）

表3rPoIFNα1冻干品4℃保存稳定性试验（效价降低百分率）

Claims (5)

1.一种用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于包括以下组分及其在配伍时的初始浓度为：蔗糖90~300g/L、甘露醇300~600g/L和甘油100~400ml/L，溶剂为注射用水。

2.根据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的蔗糖在冻干原液中的初始浓度为90~300g/L。

3.据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的甘露醇在冻干原液中的初始浓度为300~600g/L。

4.据权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂，其特征在于所述的甘油在冻干原液中的初始浓度为100~400mL/L。

5.一种如权利要求1所述的用作重组猪干扰素α1的冻干保护剂的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将上述重量份的各原料混合配制为冻干原液；

（2）高压灭菌，充分混匀，即得所述用作重组猪干扰素α1冻干保护剂。