CN103585198B - 网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用。其制备方法是将网眼瓦韦提取后，通过两次大孔吸附树脂纯化，得到网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C，将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C按一定比例混合，即为网眼瓦韦提取物。该网眼瓦韦提取物，可与药学上可接受的载体或其他适宜赋形剂相结合，按照常规方法制成口服给药的剂型，可用于制备预防和治疗糖尿病的药物。

Description

网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种中药材提取物的制备方法及应用，具体是涉及网眼瓦韦提取物的制备方法及其在制备预防和治疗糖尿病药物中的应用。

背景技术

随着世界人口的老龄化，糖尿病已经成为一种常见病、多发病，在工业发达国家其发病率呈上升趋势。据统计，全世界约有1.5亿糖尿病患者，80%为非胰岛素依赖型糖尿病（2型），其中我国约有3000万。由糖尿病并发症引起的死亡人数在发达国家已是继心脑血管疾病、癌症之后列第三位，引起了世界各国的高度重视，纷纷对糖尿病的发病机制、药物防治等进行研究。由于1型糖尿病病因已基本明确，只需补充胰岛素即可，而2型糖尿病则较复杂，目前我国医学界对其采取的是包括饮食疗法、药物治疗与其它辅助疗法的综合治疗措施。西药虽然层出不穷，但不能从根本上解决问题，而且西药治疗具有一定的副作用及“治疗失效”。中医药治疗糖尿病历史悠久，临床经验丰富，疗效显著，已成为近年来国内外研究热点。中医学对糖尿病的认识与西医不同，中医强调整体观，以阴、阳二者的变化反映疾病的本质。正常机体是“阴平阳秘”，阴阳平衡，即机体内环境维持稳态，糖代谢也维持稳定；并且中药的毒副作用相对较小，病人可长期服用，这是西药所不能比拟的独特的优势。

中医认为糖尿病是由肺、胃、肾三脏热灼阴亏，水谷转输失常所致。其基

本病机为阴津亏耗，燥热偏盛，肾阴亏虚为本，肺胃燥热为标，病久则阴损气耗阳伤，而致气阴两伤，阴阳俱虚，脉络瘀阻，筋脉失养，脏腑受损，渐致出现一系列兼症。

糖尿病的病程是阴损及阳的过程。以阴辨证，从轻到重，则是阴虚—气阴两虚—阴阳两虚的转化。而脉络瘀阻贯穿于本病及兼症的全过程。

近年来，有的学者探讨了糖尿病中医辨证分型与临床生化指标的关系。从胰岛功能、血脂水平、血浆性激素、皮质激素水平、免疫功能机血液流变学等变化，观察消渴病分型与以上指标改变的相关性，发现各种指标的异常变化，从轻到重，多随阴虚—气阴两虚—阴阳两虚方向发展。体现了中西医结合探讨消渴病分型的物质基础。

辨证论治是中医理论的精髓。中医根据消渴病的主要病机，辨别燥热与阴虚的标本轻重，用药时重视养阴，有燥热者则须清热，阴阳气血均亏，则阴阳气血并补。根据现代药理概念，对中药抗糖尿病的作用研究主要如下。单味中药:黄连及小檗碱、苦瓜、人参、黄芪、黄芩、桑叶、中药多糖（如银耳多糖，银耳孢子多糖、木耳多糖、猴头多糖、紫菜多糖、麦冬多糖、褐藻淀粉（laminarin）、枸杞多糖-X、枸杞多糖-D、番瓜多糖及丹皮多糖等）、水飞蓟素、大黄。此外，口服黄酮类葛根素（puerarin）或黄皮香豆精（clausenacoumarine）对ALX动物的高血糖也有降低作用。中医治疗糖尿病的基本原则可概括为：滋阴清热、益气养阴、补肾健脾及活血化瘀等。常用经典方剂有人参白虎汤、六味地黄丸、八位地黄丸及千金黄连丸等，根据不同证型及上述治则组方或用古方进行加减。

网眼瓦韦为水龙骨科植物网眼瓦韦Lepisorus clathratus (Clarke) Ching的干燥叶。收载于《中华人民共和国***药品标准 藏药（第一册）》，标准编号：WS3-BC-0036-95。其性凉，味苦，具有愈疮，干脓，涩精，固骨髓，清热解毒,接补头骨之功效。用于胸腹腔疾病，烧伤，湿热腰痛。为我国藏蒙等少数民族地区的常用药物。但有关网眼瓦韦的基础研究尚十分有限，使该药材的后续推广和应用受到限制。现代研究表明，网眼瓦韦含有绿原酸和蜕皮甾酮以及槲皮素、山奈酚等黄酮类化合物，其他化学成分不详；药理作用未见报道。

国内专利检索，未见网眼瓦韦相关专利报道。

上述文献及专利等，尚未见网眼瓦韦或网眼瓦韦提取物用于制备预防和治疗糖尿病药物的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用，尤其是在制备预防和治疗糖尿病药物中的应用。

本发明所用网眼瓦韦为菊科植物网眼瓦韦（Picris japonica T hunb.）的干燥地上部分。

网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用，所述网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.10-1.12，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C，按一定比例混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.10-1.12，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.11，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过D101非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱D101非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

本发明的网眼瓦韦提取物制备方法，所采用的非极性大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为X-5大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。

本发明的网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于：所述的网眼瓦韦提取物主要含有：蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素等昆虫***激素类成分，以及荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素等黄酮类成分。

本发明的网眼瓦韦提取物，可通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上的片剂、颗粒剂、胶囊等口服剂型。

本发明网眼瓦韦提取物的制备方法的应用，为在制备预防和治疗糖尿病药物中的应用。本发明的网眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C，可用于制备预防和治疗糖尿病药物。

本发明的网眼瓦韦提取物的制备方法，在制备网眼瓦韦提取物与化学药或中药或天然药物组成预防和治疗糖尿病药物中的应用。本发明的网眼瓦韦提取物与化学药或中药或天然药物组成预防和治疗糖尿病药物。

本发明的网眼瓦韦提取物的制备方法，在制备网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C与化学药或中药或天然药物组成预防和治疗糖尿病药物中的应用。本发明的网眼瓦韦提取物、网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C与化学药或中药或天然药物组成预防和治疗糖尿病药物。

本发明首次对网眼瓦韦采用两次大孔吸附树脂纯化技术进行降糖提取物制备研究，分离得到了具有降糖活性的提取物，包括网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C。制备工艺操作简便，生产成本低，适于工业化大生产。

本发明提供的网眼瓦韦提取物，通过降血糖、调节血脂作用研究，结果表明，网眼瓦韦提取物对糖尿病小鼠具有显著降血糖作用，同时可以调节糖尿病小鼠血脂水平。与模型组比较，眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C组均能显著降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖值(P<0.05)，且能显著降低肾上腺素致糖尿病小鼠血糖值(P<0．05)。给药组小鼠三酰甘油、低密度脂蛋白含量显著下降(P<0.05)，高密度脂蛋白含量显著升高(P<0.05)。

具体实施方式

下面通过具体实验例和实施例对网眼瓦韦提取物的制备方法及其应用做进一步说明但不限于本发明。

实施例1：网眼瓦韦提取物及单体化合物制备

（1）网眼瓦韦30kg，先用95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度d=1.11，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过D101非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱D101非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

网眼瓦韦提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素等昆虫***激素类成分，以及荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素等黄酮类成分。以上各化合物的化学结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于98%。

实施例2：网眼瓦韦提取物及单体化合物制备

（1）网眼瓦韦20kg，先用80%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的15倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用10%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为1小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.12，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过AB-8非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过LSA-40极性大孔树脂柱，再用浓度50%的乙醇溶液洗脱AB-8非极性大孔吸附树脂柱，收集50%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度70%的乙醇溶液洗脱LSA-40极性大孔吸附树脂柱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

网眼瓦韦提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素等昆虫***激素类成分，以及荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素等黄酮类成分。以上各化合物的化学结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于98%。

实施例3：网眼瓦韦提取物及单体化合物制备

（1）网眼瓦韦，先用100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为1小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1次，每次提取时间为4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度d=1.10，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过D101非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过X-5极性大孔树脂柱，再用浓度70%的乙醇溶液洗脱D101非极性大孔吸附树脂柱，收集70%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度50%的乙醇溶液洗脱X-5极性大孔吸附树脂柱，收集50%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得本发明的网眼瓦韦提取物。

网眼瓦韦提取物再经200-300目硅胶柱层析，以三氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100:0-2.5:1），薄层跟踪检测，合并相同流份，静置析晶，抽滤，甲醇重结晶，分别得到蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素等昆虫***激素类成分，以及荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素等黄酮类成分。以上各化合物的化学结构均经质谱和核磁共振等波谱手段确证，纯度经高效液相色谱检测均大于98%。

实施例4:网眼瓦韦提取物片的制备

取实施例1网眼瓦韦提取物235g，加入淀粉75g，混匀，制粒，干燥，过筛，加微晶纤维素40g，硬脂酸镁1.5g，混匀，压制成1000片, 即得网眼瓦韦提取物片。

实施例5：网眼瓦韦提取物颗粒的制备

取实施例2网眼瓦韦提取物135g，加入糊精100g，混匀，制粒，整粒，即得网眼瓦韦提取物颗粒。

实施例6：网眼瓦韦提取物胶囊的制备

取实施例3网眼瓦韦提取物225g，加入淀粉80g，制粒，干燥，整粒，装胶囊100粒，即得网眼瓦韦提取物胶囊。

实验例1：网眼瓦韦提取物降血糖、调节血脂作用研究。

1．药物与试剂

实验用药物为网眼瓦韦提取物以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C（实施例1方法制备得到，批号分别为：20100708、20100709、20100710、20100711）。四氧嘧啶(美国Sigma公司)；葡萄糖试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：102401．201010)；总胆固醇试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：101051．201007)：三酰甘油试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：104101．201008)；高密度脂蛋白试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：100361)低密度脂蛋白试剂盒(中生北控生物科技股份有限公司，批号：100271)；格列本脲(天津力生制药股份有限公司，批号：1003013)；其余所用试剂均为分析纯。

．实验动物

昆明种小鼠，体重l8-22g，清洁级，雌雄各半，由山西医科大学实验动物中心提供。本实验所有动物饲养条件一致，开始实验前3d置本实验室观察饲养，自由摄食、饮水。各组饲料与饮用水来源均相同。

．仪器

旋转蒸发器RE-52AA (上海亚荣生化仪器厂)；752紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)；离心机LXJ-IIB(上海安亭科学仪器厂)；电子天平BS-124S(北京赛多利斯仪器***有限公司)。

4．实验方法。

4.1 对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖及血脂的影响

小鼠尾静脉注射新鲜配制的四氧嘧啶50 mg/kg造成糖尿病模型，72 h后。对禁食不禁水的小鼠眼眶后静脉丛采血，测血糖值，选取空腹血糖高于11.1mmol/L的小鼠用于实验。取合格模型小鼠50只，随机分为5组，格列本脲组(10只)，网眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C组(每组各10只)，糖尿病模型组，另取重量相近的正常小鼠作为正常组(10只)。连续给药14d后．于末次给药前小鼠禁食不禁水8h，给药后继续禁食不禁水后2h，摘眼球取血，测定各组的空腹血糖值、总胆固醇含量、三酰甘油含量、高密度脂蛋白含量、低密度脂蛋白含量。

对肾上腺素致糖尿病小鼠血糖的影响

取合格昆明种小鼠60只(雌雄各半)，随机分为6组，网眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C组(每组10只)和格列本脲组(10只)剂量同“4.1”，模型组(10只)和正常组(10只)灌胃等体积生理盐水．连续给药10d。于末次给药前小鼠禁食不禁水8h，给药后继续禁食不禁水6h后，除对照组外，每只小鼠腹腔注射肾上腺素0.2 mg，正常对照组则腹腔注射等容量生理盐水。30 min后，眼眶后静脉丛采血，测定各组的空腹血糖值。

统计学处理

实验数据用均数±标准差(X±S)表示，使 t检验进行比较组间差异的显著性。

结果。

5.1  对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖的影响

连续给药14 d后，网眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C组的小鼠血糖值与模型组相比均有显著性下降(P<0．05)，与格列本脲组小鼠血糖值差异无统计学意义(P>0．05)，结果见表1。

表1 网眼瓦韦提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖的影响( x±s)

注：与正常组比较，^#P<0.05；与模型组比较， ^*P<0.05。

5.2 对肾上腺素致糖尿病小鼠血糖的影响

给药l0 d后，腹腔注射盐酸肾上腺素，模型组小鼠血糖值显著高于正常组(P<0．05)；给药组小鼠血糖值均显著低于模型组(P<0.05)，与格列本脲组没显著性差异(P>0.05)。结果见表2。

表2 网眼瓦韦提取物对肾上腺素糖尿病小鼠血糖的影响(x±s)。

注：与正常对照组比较，^#P<0.05；与模型对照组比较， ^*P<0.05

5.3  对四氧嘧啶致糖尿病小鼠血脂水平的影响

给药14 d后，与正常组比较，糖尿病组小鼠TC、TG、LDL-C含量显著升高(P<0．05)，HDL-C含量显著下降(P<0．05)；与模型组比较，给药组小鼠TG、LDL-C含量显著下降(P<0．05)，HDL-C含量显著升高(P<0．05)，见表3。

表3 网眼瓦韦提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血脂的影响(x±s)

注：与正常组比较，^#P<0.05；与模型组比较，^*P<0.05

结果表明：网眼瓦韦提取物对糖尿病小鼠具有显著降血糖作用，同时可以调节糖尿病小鼠血脂水平。与模型组比较，眼瓦韦提取物、以及网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B和网眼瓦韦提取物C组均能显著降低四氧嘧啶致糖尿病小鼠血糖值(P<0.05)，且能显著降低肾上腺素致糖尿病小鼠血糖值(P<0.05)。给药组小鼠三酰甘油、低密度脂蛋白含量显著下降(P<0.05)，高密度脂蛋白含量显著升高(P<0.05)。

Claims (6)

1.含有蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素的网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.10-1.12，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得网眼瓦韦提取物。

2.含有蜕皮甾酮、20-羟基蜕皮甾酮、蜕皮激素、荭草素、荭草苷、异荭草素、牡荆素、异牡荆素的网眼瓦韦提取物在制备预防和治疗糖尿病药物中的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用浓度80%-100%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用浓度0-20%乙醇为溶剂，加热回流提取，提取次数为1-3次，每次提取时间为1-4小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的8-15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1.10-1.12，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过极性大孔树脂柱，再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱非极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度50%-70%的乙醇溶液洗脱极性大孔吸附树脂柱，收集不同浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得网眼瓦韦提取物。

3.根据权利要求1所述的网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于按以下步骤制备：

（1）网眼瓦韦，先用95%乙醇作为溶剂，加热回流提取，提取次数为3次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，得药渣A和提取液A，提取液A回收乙醇，浓缩，干燥，得网眼瓦韦提取物A；

（2）将步骤（1）得到药渣A用水为溶剂，加热回流提取，提取次数为2次，每次提取时间为2小时，每次溶剂用量为网眼瓦韦重量的12倍，滤过，提取液浓缩至相对密度1.11，滤过，得药液B；

（3）将步骤（2）得到的药液B，通过D101非极性大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，水洗脱液直接通过HPD600极性大孔树脂柱，再用浓度60%的乙醇溶液洗脱D101非极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物B；再用浓度60%的乙醇溶液洗脱HPD600极性大孔吸附树脂柱，收集60%浓度乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得网眼瓦韦提取物C；

（4）将上述网眼瓦韦提取物A、网眼瓦韦提取物B、网眼瓦韦提取物C混匀，即得网眼瓦韦提取物。

4.根据权利要求1所述的网眼瓦韦提取物的制备方法，其特征在于：所采用的非极性大孔吸附树脂为D101大孔吸附树脂、AB-8大孔吸附树脂；所采用的极性大孔吸附树脂为X-5大孔吸附树脂、LSA-40大孔吸附树脂、HPD600大孔吸附树脂。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物，通过加入药剂学允许的各种辅料，制成药剂学上口服的片剂、颗粒剂、胶囊。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于所述的网眼瓦韦提取物与化学药或中药或天然药物组成预防和治疗糖尿病药物中的应用。