发明内容
本发明目的在于提供一种注射液的含量测定方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现:
本发明药物组合物注射液的含量测定方法,包括如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg10.5-2mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入3%-7%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.4ml、高氯酸0.6-1.0ml,混匀,50-70℃水浴加热10-20分钟,取出,加入冰醋酸3-7ml,混匀,置冰浴冷却1-2分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水7-13ml,0.5%-2%乙酸溶液10-20ml,水10-20ml,5%-20%甲醇溶液7-13ml,75%-85%甲 醇溶液10-20ml,洗脱,取75%-85%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.9-1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水8-12ml,0.8%-1.2%乙酸-水13-18ml,水13-18ml,8%-12%甲醇-水8-12ml,75%-85%甲醇-水13-18ml,洗脱;将75%-85%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入4.5%-5.5%的香草醛冰醋酸溶液0.1-0.3ml,高氯酸0.6-1.0ml混匀,于60℃进行显色反应12-17min,加入冰醋酸3-7ml,混匀,冰浴冷却,0.5-1.5min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
本发明药物组合物注射液的含量测定方法,优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸溶液15ml,水15ml,10%甲醇溶液10ml,80%甲醇溶液15ml,洗脱,取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置 试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸-水15ml,水15ml,10%甲醇-水10ml,80%甲醇-水15ml,洗脱;将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml混匀,于60℃进行显色反应15min,加入冰醋酸5ml,混匀,冰浴冷却1min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
本发明药物组合物注射液的含量测定方法,优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg10.6mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml,混匀,55℃水浴加热18分钟,取出,加入冰醋酸4ml,混匀,置冰浴冷却2分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水8ml,1.8%乙酸溶液12ml,水18ml,6%甲醇溶液12ml,76%甲醇溶液18ml,洗脱,取76%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.9mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水9ml,1.1%乙酸-水14ml,水17ml,9%甲醇-水11ml,76%甲醇-水17ml,洗脱;将77%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml,高氯酸0.7ml混匀,于60℃进行显色反应16min,加入冰醋酸4ml,混匀,冰浴冷却,1.2min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
本发明药物组合物注射液的含量测定方法,优选如下以人参皂苷Rg1和/或黄芪甲苷测定注射液总皂苷含量的方法:
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.5mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml,混匀,65℃水浴加热12分钟,取出,加入冰醋酸6ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水12ml,0.6%乙酸溶液18ml,水12ml,15%甲醇溶液8ml,82%甲醇溶液12ml,洗脱,取82%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水11ml,0.9% 乙酸-水17ml,水14ml,11%甲醇-水9ml,83%甲醇-水14ml,洗脱;将83%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml,高氯酸0.9ml混匀,于60℃进行显色反应13min,加入冰醋酸6ml,混匀,冰浴冷却,0.6min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪25~35重量份、人参8~12重量份、苦参素0.5~1.5重量份;本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药,人参用60~80%的乙醇,回流提取1~3次,每次1~2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,备用;黄芪加水煎煮1~3次,每次1~3小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置10~18小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.15的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调值PH至6~7,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到40体积份,用氢氧化钠调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤;用氢氧化钠调PH值至6~7,加活性炭,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至6~7,100~120℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至规定量,滤过,灌装,即得。
上述本发明药物组合物注射液的原料药组成为:黄芪30重量份、人参10重量份、苦参素1重量份;本发明药物组合物注射液的制备方法为:以上三味药,人参用75%的乙醇,回流提取3次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,备用;黄芪加水煎煮2次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置12小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.15的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调值PH至6~7,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到40体积份,用氢氧化钠调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤;用氢氧化钠调PH值至6~7,加活性炭,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏, 抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至规定量,滤过,灌装,即得。
上述重量份与体积份的关系为克与毫升的关系。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明药物组合物注射液含量测定方法,更加明确了产品的有效成分及其含量测定方法,能更好的控制产品质量,保证产品更安全、有效。实验结果表明该方法线性关系良好,精密度、稳定性、重复性良好。
附图:
图1为检测波长;
图2为Rg1标准曲线图;
图3为黄芪甲苷标准曲线图。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明;本发明实验例中药物组合物注射液均由实施例1方法制备。
实验例1 本发明药物注射液测定实验
1仪器与药品
日立U-3310紫外可见分光光度计
标准品:人参皂苷Rg1(含量大于98%),超纯水,甲醇为色谱纯,高氯酸,其他试剂为分析纯。
2方法与结果
2.1溶液制备
2.1.1对照品溶液制备
取人参皂苷Rg1对照品适量,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg的溶液,摇匀,即得。
2.1.2供试品溶液
精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱(C-18,500mg。活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗),依次采用水10ml,1%乙酸溶液15ml,水15ml,10%甲醇溶液10ml,80%甲醇溶液15ml,洗脱。取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液。
2.2本发明药物注射液测定
2.2.1检测波长的确立
吸取对照品溶液适量,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1 分钟。以空白溶液作参比,显色体系在400~700nm波长范围内扫描,确定最大吸收波长为552nm(见附图1)。
2.2.2本发明药物注射液测定
精密量取供试品溶液200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟。以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中含人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得。
实验例2 线性关系考察
精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟。以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线为y=4.4231x-0.0286,在(29.7μg-198μg)范围内,与吸光度具有良好的线性关系(r=0.9996)(见附图2)。
实验例3 精密度实验
取“2.1.1”项下的对照品溶液适量,氮气吹干,在上述条件下测定吸光度,连续测定6次,结果见表1。
表1精密度结果
结果表明,本方法精密度良好。
实验例4 稳定性实验
取同一供试品溶液2.5ml,静置,分别于0,2,4,6,8,12h按2.1.2项下方法测定。结果见表2。
表2稳定性结果
表明供试品溶液在12h内稳定。
实验例5 重复性实验
取同一批本发明药物注射液(实施例1方法制备)共6份,每份2.5ml,按“2.1.2”项下方法操作,平行制备供试品溶液6份,在上述条件下进行分析测定。结果见表3。
表3重复性实验结果
结果表明该方法的重复性良好。
实验例6 加样回收率实验
精密称取本发明药物注射液(实施例1方法制备)1.25ml,共9份,分别按药物注射液中总皂苷的80%、100%、120%质量浓度分别精密加入各自对照品溶液适量,按“2.1.2”项下方法操作,制备每一浓度的溶液各3份,在上述条件下测定。结果见表4。
表4加样回收率结果(n=3)
结果表明本法回收率较好,方法可行。
实验例7 阴性对照实验
1供试品溶液制备
配制10mg/ml的苦参素溶液10ml,精密量取本发明药物注射液(实施例1制备)2.5ml,注入固相萃取柱(C-18,500mg。活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗),依次采用水10ml,1%乙酸溶液15ml,水15ml,10%甲醇溶液10ml,80%甲醇溶液15ml,洗脱。取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液。
2本发明药物注射液测定
精密量取供试品溶液200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟。以相应试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,即得。
表5阴性对照样品(苦参素溶液)测定结果
总皂苷样品的吸光度为0.46~0.48之间,而以苦参素溶液(生产中康艾注射液的配置浓度)为阴性对照,经样品前处理,供试品溶液制备,552nm下测定的吸光度值为0.007~0.012之间,只占总皂苷测定吸光度的1.5~2.6%之间,在该方法测定误差范围之内,不会对总皂苷测定结果产生影响。
实验例8 本发明药物注射液测定
取13批本发明药物注射液样品(实施例1所述方法制备),按“2.2.2”项下方法制 备供试品溶液,在上述条件下取样分析,记录吸光度,计算含量。结果见表6。
表6总皂苷的含量测定结果(n=13)
实验例9 以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法实验
精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;
精密量取药物组合物注射液(实施例1制备)2.5ml,注入固相萃取柱(C-18,500mg。活化步骤:使用前先用无水甲醇5ml、再用5ml双蒸水冲洗),依次采用水10ml,1%乙酸-水15ml,水15ml,10%甲醇-水10ml,80%甲醇-水15ml,洗脱;将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;
分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml混匀,于60℃进行显色反应15min,加入冰醋酸5ml,混匀,冰浴冷却1min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;标准曲线方程:y=3.5125x-0.0385 r=0.9996(见附图3),分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷(C41H68O14)计,不得少于0.30mg。
表7总皂苷的含量测定结果(按黄芪甲苷标准曲线计算)
下述实施例均能实现上述实验例所述的效果。
实施例1 以人参皂苷Rg1和黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷含量的方法
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸溶液15ml,水15ml,10%甲醇溶液10ml,80%甲醇溶液15ml,洗脱,取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸-水15ml,水15ml,10%甲醇-水10ml,80%甲醇-水15ml,洗脱;将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml混匀,于60℃进行显色反应15min,加入冰醋酸5ml,混匀,冰浴冷却1min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法 测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg;
所述药物组合物注射液的制备方法为:取黄芪300g,人参100g,苦参素10g,人参用75%的乙醇,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.10~1.20(65℃)的清膏,备用。黄芪加水煎煮二次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为1.10~1.20(65℃)的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置12小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.10~1.15(65℃)的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到400ml,用氢氧化钠调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤。用氢氧化钠调PH值至6~7,加活性炭适量,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至1000ml。
实施例2 以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷含量的方法
对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.0mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml,混匀,60℃水浴加热15分钟,取出,加入冰醋酸5ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸溶液15ml,水15ml,10%甲醇溶液10ml,80%甲醇溶液15ml,洗脱,取80%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
所述药物组合物注射液的制备方法为:取黄芪300g,人参100g,苦参素10g,人参用75%的乙醇,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.10~1.20(65℃)的清膏,备用。黄芪加水煎煮二次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为1.10~1.20(65℃)的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置12小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相 对密度为1.10~1.15(65℃)的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调PH值至6~7,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到400ml,用氢氧化钠调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤。用氢氧化钠调PH值至6~7,加活性炭适量,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至6~7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至1000ml。
实施例3 以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法
精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.95mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水10ml,1%乙酸-水15ml,水15ml,10%甲醇-水10ml,80%甲醇-水15ml,洗脱;将80%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5%的香草醛冰醋酸溶液0.2ml,高氯酸0.8ml混匀,于60℃进行显色反应15min,加入冰醋酸5ml,混匀,冰浴冷却1min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
实施例4 总皂苷的含量测定方法
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg10.6mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入6%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml、高氯酸0.9ml,混匀,55℃水浴加热18分钟,取出,加入冰醋酸4ml,混匀,置冰浴冷却2分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水8ml,1.8%乙酸溶液12ml,水18ml,6%甲醇溶液12ml,76%甲醇溶液18ml,洗脱,取76%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物 组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成0.9mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水9ml,1.1%乙酸-水14ml,水17ml,9%甲醇-水11ml,76%甲醇-水17ml,洗脱;将77%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入4.6%的香草醛冰醋酸溶液0.25ml,高氯酸0.7ml混匀,于60℃进行显色反应16min,加入冰醋酸4ml,混匀,冰浴冷却,1.2min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg。
所述药物组合物注射液的制备方法为:黄芪32g、人参9g、苦参素1.2g;人参用62%的乙醇,回流提取2次,每次1小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,备用;黄芪加水煎煮2次,每次3小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.20的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至7,静置12小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为65℃1.10~1.15的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调值PH至7,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到40ml,用氢氧化钠调PH值至7,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤;用氢氧化钠调PH值至7,加活性炭,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至7,110℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至规定量,滤过,灌装,即得。
实施例5 总皂苷的含量测定方法
A.以人参皂苷Rg1测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人参皂苷Rg11.5mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml,混匀,65℃水浴加热12分钟,取出,加入冰醋酸6ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试 品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水12ml,0.6%乙酸溶液18ml,水12ml,15%甲醇溶液8ml,82%甲醇溶液12ml,洗脱,取82%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg;
B.以黄芪甲苷测定药物组合物注射液总皂苷的含量测定方法为:精密称取黄芪甲苷标准品,置于容量瓶中,甲醇溶解并定容,配制成1.0mg/ml的黄芪甲苷储备溶液;精密量取药物组合物注射液2.5ml,注入C-18,500mg固相萃取柱,依次采用水11ml,0.9%乙酸-水17ml,水14ml,11%甲醇-水9ml,83%甲醇-水14ml,洗脱;将83%甲醇-水洗脱部分水浴蒸干,取甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;分别精密吸取对照品溶液30、50、100、150、200μL,置于试管中,氮气吹干,加入5.2%的香草醛冰醋酸溶液0.15ml,高氯酸0.9ml混匀,于60℃进行显色反应13min,加入冰醋酸6ml,混匀,冰浴冷却,0.6min;以相应试剂作空白,按照附录ⅤA紫外-可见分光光度法,在552nm波长处测定吸光度;以吸光度为纵坐标,总皂苷含量为横坐标,绘制标准曲线;分别吸取供试品溶液200μL,置于试管中,按照标准曲线的制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度;代入标准曲线方程,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以黄芪甲苷C41H68O14计,不得少于0.30mg;
本发明药物组合物注射液的制备方法为:黄芪28kg、人参12kg、苦参素0.9kg,人参用75%的乙醇,回流提取三次,每次2小时,合并提取液,减压浓缩至相对密度为1.10(65℃)的清膏,备用;黄芪加水煎煮二次,每次2小时,滤过,合并滤液,减压浓缩至相对密度为1.20(65℃)的清膏,与人参清膏合并,加乙醇使含醇量达75%,用氢氧化钠调PH值至6,静置12小时,取上清液,回收乙醇,减压浓缩至相对密度为1.10(65℃)的清膏;再加乙醇使含醇量达85%,用氢氧化钠调值PH至6,静置,滤过,滤液回收乙醇至无醇味,加注射用水到400ml,用氢氧化钠调PH值至6,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤;用氢氧化钠调PH值至6,加活性炭适量,搅匀,煮沸15分钟,滤过,滤液备用;另取苦参素溶解,用稀盐酸调PH值至6,100℃灭菌30分钟,冷藏,抽滤,与脱炭后的药液合并,混匀,加注射用水至规定量,滤过,灌装,即得。
实施例5 总皂苷的含量测定方法
对照品溶液制备,取人参皂苷Rg1对照品,精密称定,加甲醇溶解制成每1ml含人 参皂苷Rg11.5mg的溶液,摇匀,即得;标准曲线的制备,精密量取对照品溶液30μl、50μl、100μl、150μl、200μl,置试管中,氮气吹干,加入4%的香草醛冰醋酸溶液0.3ml、高氯酸0.7ml,混匀,65℃水浴加热12分钟,取出,加入冰醋酸6ml,混匀,置冰浴冷却1分钟,以相应的试剂作空白,照紫外-可见分光光度法(中国药典2010年版一部附录ⅤA),在552nm波长处测定吸光度,以吸光度为纵坐标,人参皂苷Rg1含量为横坐标,绘制标准曲线;供试品溶液制备,用无水甲醇5ml冲洗、再用5ml蒸馏水冲洗C-18,500mg固相萃取柱,精密量取本发明药物组合物注射液2.5ml,注入固相萃取柱,依次采用水12ml,0.6%乙酸溶液18ml,水12ml,15%甲醇溶液8ml,82%甲醇溶液12ml,洗脱,取82%甲醇洗脱部分的溶液水浴蒸干,用甲醇溶解,定容于2ml量瓶中,制成供试品溶液;测定法,精密量取供试品溶液200μl,置试管中,照标准曲线制备项下的方法,自“氮气吹干”起,依法测定吸光度,从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Rg1的浓度,计算,即得;药物组合物注射液每1ml含总皂苷以人参皂苷Rg1(C42H72O14)计,不得少于0.30mg。