CN102028707B - 麝香酮的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药物检测领域,涉及一种麝香酮的检测方法,本发明所解决的技术问题为提供一种操作简便、专属性强、稳定且重复性好麝香酮的检测方法。本发明检测方法采用高效液相色谱法测定,检测条件及方法如下:色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(90-95∶5-10)或乙腈-水(90-95∶5-10);检测波长为283nm。制备对照品溶液:精密称取麝香酮对照品适量,以乙腈或甲醇溶解麝香酮;以麝香或含麝香的制剂为检测对象制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪,测定,即可。本发明检测方法无需柱前衍生化,样品制备简单,设备条件要求不高,专属性强,稳定且重复性好,且便于操作。
Description
技术领域
本发明属于药物检测领域,涉及一种麝香酮的检测方法。
背景技术
麝香属名贵香料与名贵中药,其芳香气味主要来源于其中所含的麝香酮。药理研究表明,麝香酮是天然麝香中的重要生理活性成分,该成分的检测是评价麝香药材质量的重要指标之一。
现有麝香酮检测法主要有气相色谱法、薄层色谱法、柱前衍生化高效液相色谱法、高效液相色谱法质谱联用技术测定及比色法等。
应用气相色谱法检测麝香酮为中国药典2005年版采用方法,其分析的准确性毋庸质疑,但因在分析中使用高压、可燃性气体等,安全性要求较高。
应用薄层色谱法检测麝香酮时,因该法应用手工制备薄层板,较开放的展开方式及显色方法,定性检测尚可,定量检测重现性较差。
应用柱前衍生高效液相色谱法检测麝香酮,即在进样分析前将样品及对照品与2,4二硝基苯肼反应生成苯腙,利用苯腙的吸收峰进行检测,该法操作繁琐。
应用高效液相色谱法质谱联用技术检测麝香酮,该法是一种较好的检测方法,但仪器昂贵,不易普及。
应用比色法检测麝香酮,因该法必须先将样品分离纯化再显色测定,其操作更加繁琐。
本领域急需一种操作简便、专属性强、稳定重复性好的方法用于检测麝香酮。
发明内容
本发明所解决的技术问题为提供一种新的麝香酮的检测方法,该方法无需柱前衍生化。
本发明检测方法采用高效液相色谱法测定,具体地,检测条件及方法如下:
1、色谱条件与***适用性试验:
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-水(90-95∶5-10)或乙腈-水(90-95∶5-10)为流动相;检测波长为280-286nm。理论板数按麝香酮峰计算应不低于16000。
其中,根据检测波长确定麝香酮在283nm有最大紫外吸收峰,但考虑到因仪器需校正等因素的偏差,故可设定麝香酮的检测波长为280-286nm,使用时可根据各仪器的实际情况确定该仪器最适合的检测波长。
2、测试溶液制备:
(1)对照品溶液的制备:精密称取麝香酮对照品适量,以乙腈或甲醇溶解麝香酮即可;
具体地,可制成乙腈或甲醇每1ml含麝香酮2mg。
(2)供试品溶液的制备:
以麝香为检测对象时,供试品溶液的制备方法如下:取麝香粉末约0.2g,精密称定,以***超声提取或索氏提取后,取提取液,溶剂挥至近干,加乙腈溶解,定容,摇匀,滤过,即得。
其中,超声提取的制备方法为:取麝香粉末约0.2g,精密称定,置离心管中,密塞,***超声提取3次,每次加***溶剂3ml,超声15min,离心,合并上清液,溶剂挥至近干,加乙腈或甲醇溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。
其中,索氏提取的制备方法为:取麝香粉末约0.2g,精密称定,置索氏提取器中,加***适量,提取8小时,取提取液置水浴挥至近干,加乙腈或甲醇溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。如乙醇、甲醇、乙腈等溶剂也可以作为麝香供试品的提取溶液。
以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时,供试品溶液的制备方法为:取含天然麝香或人工麝香的制剂适量,加***或石油醚进行超声或索氏提取,直至麝香酮提取完全,提取液置水浴挥至近干,加乙腈或甲醇溶解,定容摇匀,滤过,即得。
3、测定法:
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即可。
应用本发明检测方法检测麝香、含麝香或人工麝香的制剂时,无需柱前衍生化,样品制备简单,设备条件要求不高,专属性强,稳定且重复性好,且便于操作。
附图说明
图1色谱柱选择diamonsil(钻石)C185μm 200*4.6mm。
图2色谱柱选择diamonsil(钻石)C185μm 250*4.6mm。
图3色谱柱选择Agilent Tc-C185μm 250*4.6mm。
图4流动相选择供试品甲醇-水(90∶10)。
图5流动相选择麝香酮对照品甲醇-水(90∶10)。
图6流动相选择供试品乙腈-水(90∶10)。
图7流动相选择麝香酮对照品乙腈-水(90∶10)。
图8流动相比例考察供试品甲醇-水(90∶10)。
图9流动相比例考察供试品甲醇-水(90∶10)。
图10流速考察0.5ml/min。
图11流速考察0.8ml/min。
图12流速考察1.0ml/min。
图13柱温的影响15℃。
图14柱温的影响25℃。
图15柱温的影响35℃。
图16麝香酮紫外光谱图。
图17空白样品色谱图。
图18麝香酮对照品色谱图。
图19供试品色谱图。
图20线性关系图。
具体实施方式
以下通过检测条件的筛选试验说明本发明检测方法的有益效果。
1、仪器、材料和试剂
仪器Agilent1200高效液相色谱仪;(UV-8500)紫外可见分光光度计(中国上海天美公司);BP211D型电子分析天平(Max:210g,d=0.1mg;北京赛多利仪器***有限公司);KQ-600DE超声波清洗器(40KHZ昆山市超声仪器有限公司)。
材料麝香:为林麝(Moschus berezovskii Flerov.)成熟雄体香囊中的干燥分泌物,购自四川养麝研究所,批号为:080403;麝香酮对照品(供含量测定用):批号为110719-200409,中国药品生物制品检定所提供。
试剂甲醇(色谱纯,Fisher),水为重蒸水,其他试剂均为分析纯。
2、方法与结果
2.1色谱条件
注:考察色谱条件时,所用对照品溶液及供试品溶液为按照2.2和2.3确定的方法进行制备。
2.1.1不同色谱柱比较:
考察了diamonsil(钻石)C185μm 250*4.6mm和Agilent Tc-C185μm250*4.6mm,分离度相当。试验结果见图1-3。
2.1.2流动相的选择
分别考察了甲醇水及乙腈水***。两***分离度相当。试验结果见图4-图7。因甲醇-水***价格较低,故试验以其为主。
2.1.3流动相比例的考察
分别考察了甲醇-水(90∶10)和甲醇-水(95∶5),试验结果见图8图9。由图8图9可见甲醇-水(90∶10)对麝香酮峰分离度较好。
2.1.4流速考察
考察了0.5ml/min、0.8ml/min和1.0ml/min,测定结果相当,但0.5ml/min、0.8ml/min麝香酮峰较宽,因此采用1.0ml/min作为测定流速。试验结果见图10图12。
2.1.5柱温的影响
考察了柱温15℃、25℃及35℃。柱温为15℃时柱压较高,麝香酮峰较宽,理论塔板数降低,柱温为25℃及35℃所测麝香酮含量相当,暂定25℃作为测定温度。试验结果见图1315
2.1.6测定波长的选择
通过紫外分光光度计对麝香酮对照品的乙腈溶液,在190-400nm波长范围内进行扫描,结果发现麝香酮在283nm处有最大紫外吸收峰,试验结果见图16。因此,选择283nm作为含量测定的检测波长。
综上,色谱条件为:色谱柱为Agilent C18柱(250mm×4.6mm,5μm);甲醇水(90∶10)为流动相;检测波长为283nm;流速1.0ml/min;柱温:25℃;进样量10μl。理论塔板数按麝香酮峰计不少于16000。
2.2对照品溶液的制备
精密称取麝香酮对照品适量,加乙腈制成每1ml含麝香酮2.041mg,即得。
2.3供试品溶液的制备
2.3.1提取方法考察
超声提取:取麝香粉末约0.2g,精密称定,置离心管中,密塞,超声提取3次,每次加***溶剂3ml,超声15min,离心,合并上清液,溶剂挥至近干,加乙腈溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。
索氏提取:取麝香粉末约0.2g,精密称定,置索氏提取器中,加***适量,提取8小时,取提取液置水浴挥至近干,加乙腈溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。
两供试液依2.1确定的色谱条件测定,试验结果见表1。结果表明,两提取方法提取率相当。
2.3.2提取溶剂的考察
取麝香粉末约0.2g,精密称定,分别以乙醇、***为提取溶剂,超声提取,制备供试品溶液,依2.1确定的色谱条件测定,试验结果见表1。结果表明,***提取率较高。
2.3.3超声提取次数的考察
取麝香粉末约0.2g,精密称定,以***为提取溶剂,考察超声提取次数,制备供试品溶液,依2.1确定的色谱条件测定,试验结果见表1。结果表明,提取2次已基本提取完全。
表1供试品溶液制备考察
综上,供试品溶液制备方法为:取麝香粉末约0.2g,精密称定,置离心管中,密塞,超声提取3次,每次加***溶剂3ml,超声15min,离心,合并上清液,溶剂挥至近干,加乙腈溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。
2.4空白样品溶液的制备
于离心管中加***溶剂3ml,按照供试品溶液制备方法制得空白样品溶液。
2.5专属性试验
分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液各10μl,采用2.1确定的色谱条件注入高效液相色谱仪,HPLC图谱见图17-图19。结果表明空白样品溶液对麝香酮的含量测定无干扰。
2.6线性范围
精密吸取麝香酮对照品溶液2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl、12.0μl,依选定色谱条件,测定各自峰面积值,以对照品进样量(mg)为横坐标,峰面积值为纵坐标,求得线性方程为y=6954.7x-0.1348,R=0.9995结果表明在0.004082mg-0.024490mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。试验结果见图20及表2。
表2线性范围试验结果
2.7精密度试验
2.7.1日内精密度
精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl,重复进样6次,结果表明,日内精密度RSD为1.00%。试验结果见表3。
表3日内精密度试验结果
2.7.2日间精密度
精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl,按选定色谱条件于0d、1d、2d、3d、4d进行测定,结果表明,日间精密度RSD为2.02%。试验结果见表4。
表4精密度试验结果
2.8稳定性试验
2.8.1对照品溶液稳定性试验
精密吸取麝香酮对照品溶液10μl,按选定色谱条件于0d、1d、2d、3d、4d测定麝香酮峰面积值,RSD为2.13%表明对照品溶液在4d内稳定。试验结果见表5。
表5对照品溶液稳定性试验结果
2.8.2供试品溶液的稳定性试验
精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl,按选定色谱条件于0h、2h、4h、6h、8h、12h测定供试品中麝香酮峰面积值,RSD为1.79%,表明供试品溶液在12h内稳定。试验结果见表6。
表6供试品溶液稳定性试验结果
2.9加样回收率试验
取已知含量的天然麝香粉末0.1g,精密称定,平行6份,精密加入麝香酮对照品适量,按2.3制备供试品溶液,依据已确定的色谱条件测定,计算回收率,试验结果见表7。
表7加样回收率试验结果
2.10样品测定
取天然麝香3份,按照2.3制备供试品溶液,进样10μl,依据已确定的色谱条件测定,按峰面积值用外标一点法计算样品中麝香酮含量。试验结果见表8.
表8样品测定结果
2.11检测限
按信噪比S/N=3计算检测限为20ng。
现有较常用的检测方法为柱前衍生高效液相色谱法检测麝香酮,麝香酮直接紫外测定,其摩尔吸光系数较低,要影响其检测,故需要在柱前衍生化处理才能进行检测。应用本发明检测方法时无需进行柱前衍生化,依然能够得到稳定且重复性好的检测结果,而且样品制备简单,设备条件要求不高,操作简便。
Claims (2)
1.麝香酮的检测方法,它是采用高效液相色谱法测定,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl注入液相色谱仪,测定,即可;其特征在于:
色谱条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇—水或乙腈—水为流动相;
检测波长为283nm;
柱温为25℃;
流速为1.0ml/min;
流动相中甲醇与水的体积比为90︰10,乙腈与水的体积比为90︰10;
制备对照品溶液:精密称取麝香酮对照品适量,以乙腈溶解麝香酮,即得;对照品溶液中每1ml含麝香酮2mg;
以麝香为检测对象时,供试品溶液的制备方法如下:取麝香粉末约0.2g,精密称定,以***超声提取或索氏提取后,取提取液,溶剂挥至近干,加乙腈溶解,定容,摇匀,滤过,即得;
以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时,供试品溶液的制备方法如下:取含天然麝香或人工麝香的制剂适量,加***或石油醚进行超声或索氏提取,直至麝香酮提取完全,提取液置水浴挥至近干,加乙腈溶解,定容摇匀,滤过,即得。
2.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法,其特征在于:
以麝香为检测对象时,超声提取制备供试品溶液的方法如下:
取麝香粉末约0.2g,精密称定,置离心管中,密塞,***超声提取3次,每次加***溶剂3ml,超声15min,离心,合并上清液,溶剂挥至近干,加乙腈溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得;
以麝香为检测对象时,索氏提取制备供试品溶液的方法如下:
取麝香粉末约0.2g,精密称定,置索氏提取器中,加***适量,提取8小时,取提取液置水浴挥至近干,加乙腈溶解,并定容至2ml,摇匀,滤过,即得。
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卢忠魁,等.应用高效液相色谱法测定麝香酮及黄蜀葵酮含量.《中国卫生工程学》.2006,第5卷(第6期),354-355. * |
崔文花,等.麝香酮的提取分离及测定方法的研究概况.《延边医学院学报》.1995,第18卷(第1期),73-78. * |
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