CN103540681A - 一种同步检测5种植物病毒的方法 - Google Patents
一种同步检测5种植物病毒的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103540681A CN103540681A CN201310274031.1A CN201310274031A CN103540681A CN 103540681 A CN103540681 A CN 103540681A CN 201310274031 A CN201310274031 A CN 201310274031A CN 103540681 A CN103540681 A CN 103540681A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- mol
- tmv
- plant
- pvy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2537/00—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature
- C12Q2537/10—Reactions characterised by the reaction format or use of a specific feature the purpose or use of
- C12Q2537/143—Multiplexing, i.e. use of multiple primers or probes in a single reaction, usually for simultaneously analyse of multiple analysis
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Virology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种同步检测5种植物病毒的方法,该方法包括植物总RNA的提取、逆转录反应制备cDNA模板,多重PCR反应,电泳检测确定病毒种类。通过设计5种病毒的特异性引物,对引物浓度及PCR反应条件进行优化,实现了同步检测5种植物病毒。本发明检测方法快速准确,避免了普通PCR检测的重复性,检测稳定性好,特异性强,适用于对植物样品进行快速检测,从而指导作物生产,减少病害损失。
Description
技术领域
本发明属于植物病毒检测技术领域,特别是涉及一种同步检测5种植物病毒的方法。
背景技术
植物病毒作为重要的病原物,其引起的病害数量占植物病害的第2位,在全世界范围内可引起多种植物严重的病毒病。侵染植物的病毒种类繁多,其中,烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)是为害蔬菜、烟草及果树的主要病毒种类,危害严重。以黄瓜花叶病毒(CMV)为例,其能侵染包括单、双子叶植物在内的1000多种植物,是部分农作物的重要毁灭性病原之一。CMV可严重抑制许多作物的正常生长,如引起黄瓜叶片花叶黄化、番茄叶片丝状畸形、香蕉花叶(心腐)、辣椒叶片斑驳畸形等症状,对世界各国的农作物生产造成严重的经济损失。因而,建立这几种重要的植物常见病毒准确快速的检测方法是有效控制和预防农作物病毒病大发生,减少经济损失的最有效手段。
目前,植物病毒的检测技术主要有3种:生物学鉴定、免疫学鉴定及核酸鉴定。其中,以核酸鉴定法最准确,最灵敏,操作也相对简便。自1988年Chamberlain等首先报道用多重PCR诊断杜式肌营养不良症(DMD)以来,至今已有大量文献报道针对动物尤其是人类疾病的检测,而在植物病理学研究中,对多重PCR技术的研究应用却相对较少。目前,生产上常用的植物病毒检测方法为ELISA,准确性和灵敏度不高。而且研究发现,目前田间植物上病毒复合侵染现象普遍,且类型复杂,如果利用常规的单一RT-PCR技术需要多次重复实验,逐一检测各种病毒,不仅耗时长,而且成本高。上述5种植物常见病毒的多重RT-PCR检测体系未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同步检测5种植物病毒的方法,该方法包括植物总RNA的提取、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应和电泳检测确定病毒种类等。5种植物病毒为:烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)及芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)。
本发明所述的一种同步检测5种植物病毒的方法,通过以下步骤实现:
(1)取待测植物叶片,提取总RNA ,以提取的总RNA为模板,反转录为cDNA;
(2)以cDNA为模板,采用5对引物进行多重PCR扩增,得到扩增产物,反应体系为:2.5μL 10×PCR buffer(Mg2+ free),0.6μL rTaqDNA酶(5U/μL),3μL dNTP Mixture(2.5mmol/L),2μL MgCl2(25mmol/L),0.5μL TMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TMV-R引物(20μmol/L),0.5μL CMV-F引物(20μmol/L),0.5μL CMV-R引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-R引物(20μmol/L),0.5μL PVX-F引物(20μmol/L),0.5μL PVX-R引物(20μmol/L),0.5μL PVY-F引物(20μmol/L),0.5μL PVY-R引物(20μmol/L),5μL反转录产物作为cDNA模板,其余用ddH2O补充至25μL;反应程序为:94℃预变性3min后开始以下循环反应:94℃变性45s,58℃退火45s,72℃延伸100s,35个循环结束后,72℃延伸10min;
(3)用TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶,取8μL PCR产物在水平电泳槽中进行电泳,120V/100mA电泳35分钟,根据条带图判定病毒种类。
步骤(2)多重RT-PCR反应所用5对引物分别为:
第1对引物:
CMV-F:5'-GATAAGAAGCTTGTTTCGCG-3'
CMV-R:5'-GCTCGATGTCGACATGAAGT-3'
第2对引物:
TuMV-F:5'-GTGCATTGAGAACGGAACCTC-3'
TuMV-R:5'-GATTAACGTCCTCGGTCGTATG-3'
第3对引物:
PVX-F:5'-GGATCCATGACTGCACCAGCTAGC-3'
PVX-R:5'-GAATTCTGGTGGTGGTAGAGTGAC-3'
第4对引物:
PVY-F:5'-GCGCGGATCCGCAAATGACACAATGGCATGCAG-3'
PVY-R:5'-GCGCGGTACCTCACATGTTCTTGACTCCAAGT-3'
第5对引物:
TMV-F:5'-CAGCTGCTATTGACCTTGAAAC-3'
TMV-R:5'-CAATATCAATGATGCCAGAC-3'。
附图说明
图1为 5种植物病毒多重RT-PCR同步检测的电泳结果
M:DL2000;N:阴性对照;1:CMV+TuMV+PVX+PVY+TMV;
2:CMV;3:TuMV;4:PVX;5:PVY;6:TMV
图2 为多重RT-PCR同步检测6种田间植物的电泳结果
M:DL2000;N:阴性对照;1:白菜(CMV+TuMV);2:烟草(TuMV+PVX+TMV);3:番茄(PVY+TMV);4:马铃薯(PVY);5:辣椒(PVX+TMV);6:南瓜(PVY)
本发明的优点是:
本发明所述方法较ELISA具有更高的准确性和灵敏性,其检测灵敏度可达ELISA检测灵敏度的一万倍以上。应用本发明方法可同时检测5种病毒,与单一PCR检测相比,操作量大大减少,检测效率得以较大提高,可显著降低试验成本,缩短实验时间。
具体实施方式
取白菜、烟草、番茄、马铃薯、辣椒和南瓜等6个植物样品,按本发明方法实施检测,结果如图2所示。从图中可以明确判定每个样品受侵染的病毒种类,证实了本发明方法用于同步检测5种植物病毒的可行性和准确性。
具体操作步骤:
(1)总RNA提取
对6个植物样品分别取0.1g新鲜叶片,按照试剂盒(RNAisoTM Plus,TaKaRa)方法提取总RNA。
(2)多重RT-PCR
以提取的总RNA为模板,采用反转录试剂盒(PrimeScript RT reagent Kit,TaKaRa公司)合成第一链cDNA,反转录体系为10μL:2.5μL总RNA,2μL 5×PrimeScript Buffer,0.5μL Oligo dT Primer,0.5μL Random 6 mers,0.5μL PrimeScript RT Enzyme Mix I,4μL RNase Free dH2O,反应程序为:37℃15min,85℃20s;
以上述cDNA为模板,采用前述5对引物进行多重PCR扩增,得到扩增产物,反应体系为:2.5μL 10×PCR buffer(Mg2+ free),0.6μL rTaqDNA酶(5U/μL),3μL dNTP Mixture(2.5mmol/L),2μL MgCl2(25mmol/L),0.5μL TMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TMV-R引物(20μmol/L),0.5μL CMV-F引物(20μmol/L),0.5μL CMV-R引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-R引物(20μmol/L),0.5μL PVX-F引物(20μmol/L),0.5μL PVX-R引物(20μmol/L),0.5μL PVY-F引物(20μmol/L),0.5μL PVY-R引物(20μmol/L),5μL反转录产物作为cDNA模板,其余用ddH2O补充至25μL;
反应程序为:94℃预变性3min后开始以下循环反应:94℃变性45s,58℃退火45s,72℃延伸100s,35个循环结束后,72℃延伸10min。
(3)电泳检测
用TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶,取8μL PCR产物在水平电泳槽中进行电泳。120V/100mA电泳35分钟,根据条带图判定病毒种类。
下表为引物序列的信息。
引物名称 | 序列(5'-3') | 产物大小(bp) |
TMV-F | 5'-CAGCTGCTATTGACCTTGAAAC-3' | 1515 |
TMV-R | 5'-CAATATCAATGATGCCAGAC-3' | |
CMV-F | 5'-GATAAGAAGCTTGTTTCGCG-3' | 322 |
CMV-R | 5'-GCTCGATGTCGACATGAAGT-3' | |
TuMV-F | 5'-GTGCATTGAGAACGGAACCTC-3' | 413 |
TuMV-R | 5'-GATTAACGTCCTCGGTCGTATG-3' | |
PVX-F | 5'-GGATCCATGACTGCACCAGCTAGC-3' | 723 |
PVX-R | 5'-GAATTCTGGTGGTGGTAGAGTGAC-3' | |
PVY-F | 5'-GCGCGGATCCGCAAATGACACAATGGCATGCAG-3' | 825 |
PVY-R | 5'-GCGCGGTACCTCACATGTTCTTGACTCCAAGT-3' |
上述引物由北京六合华大基因科技股份有限公司合成。
Claims (2)
1.一种同步检测5种植物病毒的方法,其特征在于通过以下步骤实现:
(1)取待测植物叶片,提取总RNA ,以提取的总RNA为模板,反转录为cDNA;
(2)以cDNA为模板,采用下列5对引物进行多重PCR扩增,得到扩增产物;
第1对引物:
CMV-F:5'-GATAAGAAGCTTGTTTCGCG-3'
CMV-R:5'-GCTCGATGTCGACATGAAGT-3'
第2对引物:
TuMV-F:5'-GTGCATTGAGAACGGAACCTC-3'
TuMV-R:5'-GATTAACGTCCTCGGTCGTATG-3'
第3对引物:
PVX-F:5'-GGATCCATGACTGCACCAGCTAGC-3'
PVX-R:5'-GAATTCTGGTGGTGGTAGAGTGAC-3'
第4对引物:
PVY-F:5'-GCGCGGATCCGCAAATGACACAATGGCATGCAG-3'
PVY-R:5'-GCGCGGTACCTCACATGTTCTTGACTCCAAGT-3'
第5对引物:
TMV-F:5'-CAGCTGCTATTGACCTTGAAAC-3'
TMV-R:5'-CAATATCAATGATGCCAGAC-3'
(3)用TAE电泳缓冲液配制1%琼脂糖凝胶,取8μL PCR产物在水平电泳槽中进行电泳,120V/100mA电泳35分钟,根据条带图判定病毒种类;
5种植物病毒为:烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)和马铃薯X病毒(Potato virus X,PVX)。
2.根据权利要求1所述的一种同步检测5种植物病毒的方法,其特征在于步骤(2)多重PCR扩增反应体系为:2.5μL 10×PCR buffer(Mg2+ free),0.6μL rTaqDNA酶(5U/μL),3μL dNTP Mixture(2.5mmol/L),2μL MgCl2(25mmol/L),0.5μL TMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TMV-R引物(20μmol/L),0.5μL CMV-F引物(20μmol/L),0.5μL CMV-R引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-F引物(20μmol/L),0.5μL TuMV-R引物(20μmol/L),0.5μL PVX-F引物(20μmol/L),0.5μL PVX-R引物(20μmol/L),0.5μL PVY-F引物(20μmol/L),0.5μL PVY-R引物(20μmol/L),5μL反转录产物作为cDNA模板,其余用ddH2O补充至25μL;反应程序为:94℃预变性3min后开始以下循环反应:94℃变性45s,58℃退火45s,72℃延伸100s,35个循环结束后,72℃延伸10min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310274031.1A CN103540681B (zh) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | 一种同步检测5种植物病毒的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201310274031.1A CN103540681B (zh) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | 一种同步检测5种植物病毒的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN103540681A true CN103540681A (zh) | 2014-01-29 |
CN103540681B CN103540681B (zh) | 2015-04-22 |
Family
ID=49964528
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201310274031.1A Expired - Fee Related CN103540681B (zh) | 2013-07-02 | 2013-07-02 | 一种同步检测5种植物病毒的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN103540681B (zh) |
Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106967844A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-07-21 | 西南大学 | 一种快速灵敏检测烟草马铃薯y病毒的方法 |
CN110066888A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-07-30 | 华南农业大学 | 一种同步检测TMV、CMV和PVY的三重实时荧光定量RT-qPCR方法 |
CN111424118A (zh) * | 2020-04-24 | 2020-07-17 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种西番莲病毒病原多重复合pcr检测方法 |
CN111455111A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-07-28 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 快速同时检测八仙花HdCMV和HdRSV病毒的引物组、检测方法及应用 |
CN111518958A (zh) * | 2020-06-03 | 2020-08-11 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 鉴定或辅助鉴定葫芦科作物种传病毒的多重pcr引物对组合物与应用 |
CN112029907A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-04 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法 |
CN113667772A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-11-19 | 福建省中科生物股份有限公司 | 一种用于鉴定病毒TuMV的引物组合及鉴定方法 |
CN116622917A (zh) * | 2023-07-17 | 2023-08-22 | 青岛农业大学 | 一种用于检测四种蔬菜病毒的rt-pcr试剂盒及应用 |
CN117187439A (zh) * | 2023-04-06 | 2023-12-08 | 三峡大学 | 一种重楼芜菁花叶病毒的检测引物,检测试剂盒及检测方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1424326A (zh) * | 2002-12-24 | 2003-06-18 | 浙江大学 | 八种植物病毒的单克隆抗体及其检测方法 |
CN1687421A (zh) * | 2005-04-25 | 2005-10-26 | 浙江大学 | 芜菁花叶病毒外壳蛋白基因和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因双价抗病载体 |
CN101875982A (zh) * | 2010-07-21 | 2010-11-03 | 陕西省烟草研究所 | 一种同步检测多种烟草病毒的方法 |
-
2013
- 2013-07-02 CN CN201310274031.1A patent/CN103540681B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1424326A (zh) * | 2002-12-24 | 2003-06-18 | 浙江大学 | 八种植物病毒的单克隆抗体及其检测方法 |
CN1687421A (zh) * | 2005-04-25 | 2005-10-26 | 浙江大学 | 芜菁花叶病毒外壳蛋白基因和黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因双价抗病载体 |
CN101875982A (zh) * | 2010-07-21 | 2010-11-03 | 陕西省烟草研究所 | 一种同步检测多种烟草病毒的方法 |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106967844A (zh) * | 2017-04-19 | 2017-07-21 | 西南大学 | 一种快速灵敏检测烟草马铃薯y病毒的方法 |
CN110066888A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-07-30 | 华南农业大学 | 一种同步检测TMV、CMV和PVY的三重实时荧光定量RT-qPCR方法 |
CN111424118B (zh) * | 2020-04-24 | 2022-10-25 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种西番莲病毒病原多重复合pcr检测方法 |
CN111424118A (zh) * | 2020-04-24 | 2020-07-17 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种西番莲病毒病原多重复合pcr检测方法 |
CN111455111A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-07-28 | 中国农业科学院蔬菜花卉研究所 | 快速同时检测八仙花HdCMV和HdRSV病毒的引物组、检测方法及应用 |
CN111518958A (zh) * | 2020-06-03 | 2020-08-11 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 鉴定或辅助鉴定葫芦科作物种传病毒的多重pcr引物对组合物与应用 |
CN111518958B (zh) * | 2020-06-03 | 2023-04-07 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 鉴定或辅助鉴定葫芦科作物种传病毒的多重pcr引物对组合物与应用 |
CN112029907B (zh) * | 2020-09-04 | 2023-04-11 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法 |
CN112029907A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-04 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法 |
CN113667772A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-11-19 | 福建省中科生物股份有限公司 | 一种用于鉴定病毒TuMV的引物组合及鉴定方法 |
CN113667772B (zh) * | 2021-07-19 | 2023-12-29 | 福建省中科生物股份有限公司 | 一种用于鉴定病毒TuMV的引物组合及鉴定方法 |
CN117187439A (zh) * | 2023-04-06 | 2023-12-08 | 三峡大学 | 一种重楼芜菁花叶病毒的检测引物,检测试剂盒及检测方法 |
CN117187439B (zh) * | 2023-04-06 | 2024-05-31 | 三峡大学 | 一种重楼芜菁花叶病毒的检测引物,检测试剂盒及检测方法 |
CN116622917A (zh) * | 2023-07-17 | 2023-08-22 | 青岛农业大学 | 一种用于检测四种蔬菜病毒的rt-pcr试剂盒及应用 |
CN116622917B (zh) * | 2023-07-17 | 2024-02-02 | 青岛农业大学 | 一种用于检测四种蔬菜病毒的rt-pcr试剂盒及应用 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN103540681B (zh) | 2015-04-22 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN103540681B (zh) | 一种同步检测5种植物病毒的方法 | |
CN102162011B (zh) | 一个水稻抗稻瘟病基因的分子标记方法 | |
Fayad-André et al. | Spread of viruses in garlic fields cultivated under different agricultural production systems in Brazil | |
CN102586481B (zh) | 同时检测柑桔4种重要病原的一步法多重pcr检测方法 | |
CN103382508A (zh) | 一种同步检测4种苹果病毒和类病毒的方法 | |
CN104357580A (zh) | 两步法检测葫芦科作物多种病毒的多重rt-pcr方法及其专用引物组 | |
CN105331743A (zh) | 一步快速检测甜瓜多种病毒的试剂盒及其快速检测方法 | |
CN102605092B (zh) | 柑橘黄龙病的lamp快速检测方法 | |
Al Rwahnih et al. | Association of a circular DNA virus in grapevines affected by red blotch disease in California | |
CN104232785B (zh) | 梨小食心虫荧光pcr检测方法与应用 | |
CN103805610B (zh) | 禾谷缢管蚜EF1-α内参基因部分序列、克隆方法及其应用 | |
CN103498010B (zh) | 快速检测番茄褪绿病毒的引物、试剂盒及其应用 | |
CN104946798A (zh) | 烟草花叶病毒lamp检测用的引物及方法 | |
CN103866038A (zh) | 用于检测烟草对tmv抗性的n基因特异性引物对、检测方法及试剂盒 | |
CN102329858B (zh) | 甘蔗黑穗病菌巢式pcr快速检测方法 | |
CN103820462B (zh) | 禾谷缢管蚜act1内参基因部分序列、克隆方法及应用 | |
CN103773860B (zh) | 异色瓢虫特异性coi引物、含有该引物的试剂盒及其检测方法 | |
CN104946796A (zh) | 用于rt-lamp法检测番茄斑萎病毒的试剂盒及检测方法 | |
CN107849566A (zh) | 用于检测白粉病的方法和试剂盒 | |
CN103451185B (zh) | 龟纹瓢虫特异性coi引物、含有该引物的试剂盒及其检测方法 | |
CN105177182A (zh) | 一种检测葡萄卷叶伴随病毒3号实时荧光pcr的dpo引物及试剂盒 | |
CN102534007B (zh) | 温室白粉虱特异性scar标记、特异性引物及快速分子鉴定方法 | |
CN107893129A (zh) | 检测苹果绿皱果病毒的方法 | |
KR102213231B1 (ko) | 고추 감염 바이러스 검출을 위한 프라이머 세트 및 이의 용도 | |
CN103882108B (zh) | 检测甘蔗梢腐病温度敏感型小种gx2的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20150422 Termination date: 20170702 |