CN103483459A

CN103483459A - 浙贝母多糖的超声辅助提取工艺和含浙贝母多糖的保健品

Info

Publication number: CN103483459A
Application number: CN201310372605.9A
Authority: CN
Inventors: 郑赛; 张旭; 周丹楠; 叶美良; 郑志飞; 吴明江
Original assignee: Wenzhou University
Current assignee: Wenzhou University
Priority date: 2013-08-23
Filing date: 2013-08-23
Publication date: 2014-01-01

Abstract

本发明公开了一种浙贝母多糖的超声辅助提取工艺和含浙贝母多糖的保健品，包括以下步骤：（1）除脂（2）水提取，取干燥后的浙贝母，粉碎，按超声辅助提取工艺提取多糖，即提取条件为：料液比为1：15，超声波作用功率为120W，提取温度80℃，提取时间为1.5h；滤渣至少重复提取三次，合并滤液，得到浙贝母多糖水提液；（3）醇沉（4）脱蛋白，得纯化的浙贝母多糖。本发明的优点是提取时间短，效率高，而且含浙贝母多糖的保健品有消除自由基，抗氧化性强的保健效果。

Description

浙贝母多糖的超声辅助提取工艺和含浙贝母多糖的保健品

技术领域

本发明属于化合物提取领域，具体是指浙贝母多糖的超声辅助提取工艺。

背景技术

多糖作为来自高等植物、动物和微生物细胞中的天然高分子化合物，是由多个单糖分子缩合、失水而成的一类分子结构复杂且庞大的糖类物质，是构成生命的四大基本物质之一。多糖由于其重要的生理功能及广泛的应用被不断挖掘，多糖作为药物始于1943年，目前人们已成功地从许多生物材料中提取出了多糖，这些多糖具有非常重要与特殊的生理活性。

浙贝母（Fritillaria thunbergiiMiq.）为百合科贝母属的一种多年生草本植物。地下鳞茎具有清热散结、化痰止咳的功能，可用于治疗风热犯肺、痰火咳嗽、肺痈、乳痈、瘰疬和疮毒，是“浙八味”之一。

现代药学对浙贝母活性成分的研究主要针对生物碱等小分子化合物，剩余的废渣在提取的过程中白白浪费。然而，浙贝母中多糖含量高，对多糖的开发利用研究仅见提取工艺研究，尚未见多糖结构和活性的研究报道，超声辅助提取方法研究也尚未见文献报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种耗时少，耗能少，提取率更高的浙贝母多糖的超声辅助提取工艺。

本发明的另一个目的是，提供一种包括有纯化的浙贝母多糖和溶剂，该纯化的浙贝母多糖的浓度≥12mg/mL。

为实现上述目的，本发明的技术方案是提供一种含浙贝母多糖的保健品。

（1）除脂

将浙贝母整理去杂，用95%乙醇浸没，80℃的水浴回流，至少3h后取出浙贝母，并干燥；

（2）水提取

取干燥后的浙贝母，粉碎，按超声辅助提取工艺提取多糖，即提取条件为：料液比为1：15，超声波作用功率为120W，提取温度80℃，提取时间为1.5h；滤渣至少重复提取三次，合并滤液，得到浙贝母多糖水提液。

（3）醇沉

将浙贝母多糖水提液浓缩，加入3-4倍体积的95%的乙醇溶液，边加边搅拌，出现絮状粗多糖沉淀物，而后置于4℃的冰箱中保存，至少24h后，取出，缓慢倒出上层液体，下层物质在4500r/min以上的转速下离心至少20min，离心沉淀物即为粗多糖；

（4）脱蛋白

将粗多糖溶解制成5%的糖溶液，加入1/5体积的氯仿-正丁醇溶液，在调速振荡器上充分振荡，至少30min后，于4500r/min以上的转速下离心至少10min，得到三层液体，取最上层黄色液体，重复3-5次，得纯化的浙贝母多糖。

本发明的优点是：多糖的提取率（8.61%）较传统提取工艺的提取率（7.43%）提高1.18%。而且本发明提取时间短，效率高。具体参见本申请实施例中的实验例部分。

为实现本发明的第二个发明目的，本发明的技术方案是含浙贝母多糖的保健品，包括有纯化的浙贝母多糖和溶剂，该纯化的浙贝母多糖的浓度≥12mg/mL。本发明的保健品具有较强的抗氧化活性，对羟自由基的清除率高达98.17%，可以作为保健药品开发。

下面结合说明书附图和具体实施方式对本发明做进一步介绍。

附图说明

图1浙贝母多糖清除羟自由基活性的曲线图；

图2料液比对多糖提取率的影响的曲线图；

图3 温度对多糖提取率的影响曲线图；

图4功率对多糖提取率的影响曲线图；

图5提取时间对多糖提取率的影响曲线图。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体的描述，只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限定，该领域的技术工程师可根据上述发明的内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。

实施例1：

1 除脂

将浙贝母整理去杂，准确称取500g，用95%乙醇浸没，80℃的水浴回流，3h后取出浙贝母样品，干燥。

水提取

取干燥后的浙贝母，粉碎，按超声辅助提取工艺提取多糖，即提取条件为：料液比为1：15，超声波作用功率为120W，提取温度80℃，提取时间为1.5h。滤渣重复提取三次，合并滤液，得到浙贝母多糖水提液。

醇沉

将浙贝母多糖水提液浓缩成500ml，加入4倍体积的95%的乙醇溶液（贝母多糖溶液：乙醇溶液=1：4），边加边搅拌，出现絮状粗多糖沉淀物，而后置于4℃的冰箱中保存。24h后，取出，缓慢倒出上层液体，下层物质在4500r/min的转速下离心20min，离心沉淀物即为粗多糖。干燥后样品重量为119.7 g。

法脱蛋白

将粗多糖溶解制成5%的糖溶液，用Sevag法除蛋白，即加入1/5体积的氯仿-正丁醇溶液（贝母粗多糖：氯仿-正丁醇=5:1），在调速振荡器上充分振荡。30min后，于4500r/min的转速下离心10min，得到三层液体。取最上层黄色液体，重复3-5次，每次脱蛋白后用考马斯亮蓝测量蛋白质含量，直至蛋白质接近于无。多糖样品冻干，得纯化多糖38.9g。

实施例2：

1 除脂

将浙贝母整理去杂，准确称取5000g，用95%乙醇浸没，80℃的水浴回流，3h后取出浙贝母样品，干燥。

水提取

醇沉

将浙贝母多糖水提液浓缩成1500ml，加入4倍体积的95%的乙醇溶液（贝母多糖溶液：乙醇溶液=1：4），边加边搅拌，出现絮状粗多糖沉淀物，而后置于4℃的冰箱中保存。24h后，取出，缓慢倒出上层液体，下层物质在4500r/min的转速下离心20min，离心沉淀物即为粗多糖。干燥后样品重量为586.4 g。

法脱蛋白

将粗多糖溶解制成5%的糖溶液，用Sevag法除蛋白，即加入1/5体积的氯仿-正丁醇溶液（贝母粗多糖：氯仿-正丁醇=5:1），在调速振荡器上充分振荡。30min后，于4500r/min的转速下离心10min，得到三层液体。取最上层黄色液体，重复3-5次，每次脱蛋白后用考马斯亮蓝测量蛋白质含量，直至蛋白质接近于无。多糖样品冻干，得纯化多糖196.2g。

实施例3

将本发明工艺提纯的浙贝母多糖配置成浓度≥12mg/mL的保健品，具有优异的抗氧化活性。如图1所示，浙贝母多糖对羟自由基的清除率随着浓度的升高而升高，清除能力与浓度之间有明显的量效关系。当浓度在2~8mg/mL范围内，多糖对羟自由基的清除作用显著，当浓度再次增加时，多糖对对羟自由基的清除作用基本保持不变。当浓度达到12mg/mL时，清除率高达98.17%。

实验例

1 超声波辅助提取的单因素实验

1.1 不同料液比对多糖提取率的影响

提取温度70℃，超声波作用功率120w，提取时间2.5h的条件下，改变料液比，多糖的提取率如图2。由图2可得，提取率多糖的提取率随着料液比的增大而提高，当料液比从1：10提高到1：15时，提取率显著增加，从2.43%提高到6.93%。当料液比大于1：15，随着料液比的提高，提取率反而有降低的趋势。因此，超声波提取的最适料液比是1：15附近。

不同提取温度对多糖提取率的影响

料液比为1：20，超声波作用功率120w，提取时间2.5h的条件下，改变提取温度，多糖的提取率如图3。由图3可得，提取率多糖的提取率随着温度的增大而提高，升温有利于获得较高的提取率，但是当温度超过90℃，会破坏多糖的糖苷键。从图中显示，当提取温度等于70℃时，多糖的提取率为6.78%，当提取温度大于70℃时，多糖的提取率趋于平缓，从能耗等多个方面综合考虑，选择70℃和80℃的提取温度较为妥当。

不同功率对多糖提取率的影响

提取温度为70℃，料液比为1：20，提取时间2.5h的条件下，改变超声波的作用功率，多糖的提取率如图4。超声波功率提高，不仅能加速水的循环，加快物质的溶解，还能产生振动改变细胞内部结构，从而加速多糖的转移。由图3可得，提取率多糖的提取率随着温度的增大而提高。当功率为160W时，提取率为9.02%；当功率大于160W时，多糖提取率有下降的趋势。可能是由于超声波的剧烈震荡引起多糖的讲解，造成多糖提取率下降。因此，超声波作用功率最佳为160W~200W。

不同提取时间对多糖提取率的影响

提取温度为70℃，料液比为1：20，超声波作用功率120W的条件下，改变提取时间，多糖的提取率如图4。时间在1.0h—1.5h内，多糖的提取率呈现上升趋势，当提取时间为1.5h时，多糖的提取率为8.49%，当提取时间大于1.5h，多糖的提取率明显下降，在4%—5%之间。所以，多糖的最佳提取时间为1.5h。

超声波提取工艺的正交实验

在超声波辅助提取的单因素实验的基础上，对影响浙贝母多糖含量的主要因素，即提取温度、提取时间、料液比和超声波作用功率进行L₉(3⁴)的正交实验。因素水平分析见表1，结果分析见表2，方差分析见表3。

表1 因素水平表

Figure 2013103726059100002DEST_PATH_IMAGE001

表2 L₉(3⁴)的正交实验结果

Figure 2013103726059100002DEST_PATH_IMAGE002

表3 正交试验方差分析表

Figure 2013103726059100002DEST_PATH_IMAGE003

从表2可知，极差从大到小依次为提取时间、料液比、提取温度和超声波作用功率，说明在试验因素和水平范围内，影响浙贝母多糖提取的因素主次顺序应为：B＞C＞A＞D，即提取时间＞料液比＞提取温度＞超声波作用功率。综合单因素提取实验，最后确定最佳提取工艺条件为：A₂B₂C₃D₁，即提取时间为1.5h，料液比为1：15，提取温度为80℃，超声波作用功率为120W。在此条件下多糖的提取率为8.61%。

方差分析显示，提取温度、提取时间、料液比3个因素的F值均大于F_0.05(2，2)=19.00，这说明提取温度、提取时间、料液比3个因素对浙贝母多糖的超声波辅助提取有显著的影响，贡献率分别为26.7%、36.93%、32.79%。

本研究采用单因素实验和正交试验的方法，结合实际情况确定了超声波辅助浙贝母多糖的最佳工艺条件：料液比为1：15，超声波作用功率为120W，提取温度80℃，提取时间为1.5h，多糖的提取率最高，为8.61%。超声波辅助提取多糖在一定程度上能提高多糖的提取率，与传统最佳提取条件相比，具有耗时少，耗能少，提取率更高的优点。

Claims

1.一种浙贝母多糖的超声辅助提取工艺，其特征在于包括以下步骤：

（1）除脂

（2）水提取

取干燥后的浙贝母，粉碎，按超声辅助提取工艺提取多糖，即提取条件为：料液比为1：15，超声波作用功率为120W，提取温度80℃，提取时间为1.5h；滤渣至少重复提取三次，合并滤液，得到浙贝母多糖水提液；

（3）醇沉

（4）脱蛋白

2.一种如权利要求1的工艺所提纯的含浙贝母多糖的保健品，其特征在于：包括有纯化的浙贝母多糖和溶剂，该纯化的浙贝母多糖的浓度≥12mg/mL。