CN103483272B - 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

Info

Publication number
CN103483272B
CN103483272B CN201310456775.5A CN201310456775A CN103483272B CN 103483272 B CN103483272 B CN 103483272B CN 201310456775 A CN201310456775 A CN 201310456775A CN 103483272 B CN103483272 B CN 103483272B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pyrimidine
preparation
compound
cyano
dmso
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201310456775.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103483272A (zh
Inventor
刘新泳
李潇
展鹏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong University
Original Assignee
Shandong University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong University filed Critical Shandong University
Priority to CN201310456775.5A priority Critical patent/CN103483272B/zh
Publication of CN103483272A publication Critical patent/CN103483272A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103483272B publication Critical patent/CN103483272B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/47—One nitrogen atom and one oxygen or sulfur atom, e.g. cytosine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D239/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings
    • C07D239/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D239/24—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D239/28—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazine or hydrogenated 1,3-diazine rings not condensed with other rings having three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D239/46—Two or more oxygen, sulphur or nitrogen atoms
    • C07D239/48—Two nitrogen atoms

Abstract

本发明涉及一种如通式Ⅰ所示的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其药学上可接受的盐、酯或前药，其制备方法以及含有一个或多个此类化合物的组合物在制备治疗和预防人免疫缺陷病毒(HIV)感染药物中的应用。

Description

间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种衍生物及其制备方法与应用，具体涉及间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用，属于医药技术领域。
背景技术
由人类免疫缺陷病毒(HIV)感染引起的获得性免疫缺陷综合征(艾滋病，AIDS)，目前仍是危害人类生命健康的重大传染性疾病之一。现有抗艾滋病药物的应用及高效抗逆转录病毒疗法(HAART)的实施虽然能够有效地延缓病情的进程，但也存在易产生耐药性、服药量大和价格昂贵等问题，因此新型抗艾滋病药物的研发刻不容缓。非竞争性非核苷类逆转录酶抑制剂(Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors,NNRTIs)因其高效、低毒的优点已成为HAART的重要组成部分。目前已经上市的该类药物有5个(nevirapine,delavirdine,efavirine,etravirine,rilpivirine)。但是由于NNRTIs结合位点的氨基酸易发生突变，导致耐药毒株的产生及蔓延，使该类药物的临床效价迅速降低。因此，寻找能克服现有药物问题的新结构的抗艾滋病新药是目前抗艾滋病药物研究的重要方向。（参见①《抗艾滋病药物研究》，刘新泳主编，人民卫生出版社，北京，2006，12.②Zhan P,Chen X,Li D,Fang Z,De Clercq E,Liu X.Med Res Rev.2013Jun;33Suppl1:E1-E72.）
DAPY类化合物(Diarylprimidines，二芳基嘧啶)是一类新型、高效抗耐药的HIV-1NNRTI。其中依曲韦林(etravirine,TMC125,2008)和rilpivirine(TMC278,2011)作为新一代非核苷类逆转录酶抑制剂已在临床得到广泛的应用。它们对野生型和多种耐药病毒株(如K103N,Y181C,K103N/Y181C等)均具有相当强的抑制活性(nM)。特别是2011年FDA批准上市的rilpivirine的抗野生型HIV-1活性和抗耐药株活性均比etravirine有所提高，而且具有长效的优点。因此，以DAPY类化合物为模板，进行广泛的结构修饰，对发现高效广谱抗耐药、生物利用度好且具有自主知识产权的新型抗HIV药物具有重要意义。
发明内容
根据现有技术的不足，本发明提供了一种间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐、酯或前药。本发明还提供上述化合物的制备方法以及活性筛选结果和应用。
一、间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物：
本发明的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物或其药学上可接受的盐、酯或前药，结构通式Ⅰ如下：
其中，
R1，R2各自独立地为-H、卤素、-NO2、-NH2、-NHR、-N(R)2、-NHCOCH3、-NHCOCF3、-CN、-OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-CF3、-COOH、-SO3H、-CONH2、-CONHR’或-COOR’，
或者，R1和R2可以一起形成-OCH2O-；
R3和R4各自独立地为卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-CF3、-NH2、-OH、-COOH、-SO3H或-COOR’；
R5为-CN、-HC=CH-CN、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-NH2、-OH、-NO2、-CF3、-CH=CH2、-C≡CH、-C≡CR’、-CH=CHR’、-CH=CHCOR’、CHO、含1-3个选自N、O、S的杂原子的五元杂芳基，并任选在其环结构上带有醛基、酮基、氰基、α，β不饱和的氰、烯、炔、醛基或酮基取代；
R6为-CN、-CH=CH2、-C≡CH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、-CF3、卤素、-NH2、-OH、-COOH、-SO3H、-C≡CR’或-CH=CHR’；
X为-NH-、-O-、-S-、-CH2-、CHOH-、-CHOR-、-NR-或-NCOR-;
其中R为C1-4烃基；R’为H或C1-6烃基。
优选的，本发明通式Ⅰ＇化合物结构通式如下：
其中，R1，R3，R4，R5同结构通式Ⅰ。
更为优选的，通式Ⅰ化合物为下列结构的化合物之一：
二、间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物或其可药用盐的制备方法
本发明间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物的制备以二卤素取代的嘧啶环为起始原料，与取代芳基胺即Ar1-NH2缩合得到中间体(Ⅳ)，再经过亲核取代反应得到间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物(Ⅰ)；
合成路线如下：
试剂和条件:(i)三乙胺,四氢呋喃,0℃;(ii)碳酸钾,NN-二甲基甲酰胺，,60℃。
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6及X的定义同上通式Ⅰ所述。
优选的，间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物的制备方法，
以5-硝基-2,4-二氯嘧啶(Ⅱ)为起始原料，与对氰基苯胺(Ⅲ)在三乙胺的碱性条件下缩合得到中间体(Ⅳ)；然后，与不同取代的苯酚(Ⅴ)经过亲核取代反应得到目标产物(Ⅰa)，再依次经过还原氢化反应、酰化反应得到目标产物(Ⅰb、Ⅰc、Ⅰd)；
合成路线如下：
试剂和条件:(i)三乙胺,四氢呋喃,0℃;(ii)碳酸钾,N,N-二甲基甲酰胺,60℃;(iii)氢气,钯碳;(iv)二氯化锡而水合物,乙醇;(v)三乙胺,三氟甲磺酸酐,二氯甲烷,0℃;(vi)三乙胺,乙酰氯,0℃。
其中R3、R4、R5的定义同上通式Ⅰ所述。
所述取代的苯酚（Ⅴ）为4-氰基-2,6-二甲基苯酚、2,4,6-三甲苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,4,6-三溴苯酚、4-溴-2,6-二甲基苯酚、2,6-二氯苯酚或4-醛基-2,6-二甲基苯酚。
三、本发明通式Ⅰ的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物类化合物的应用
本发明通式Ⅰ的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物类化合物在抑制HIV复制的细胞试验(MT-4细胞)中显示出显著的抗病毒活性和较高的选择性。因此，本发明还提供：
通式Ⅰ的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物类化合物在制备抗HIV的药物中的应用。
一种抗HIV药物组合物，包含本发明所述化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
本发明化合物既可以其本身也可以其药学上可接受的盐或溶剂化物的形式使用。通式Ⅰ化合物的药学上可接受的盐包括与药学上可接受的无机酸或有机酸、或者无机碱或有机碱形成的常规盐。合适的酸加成盐的例子包括与盐酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基苯甲酸、氢碘酸、苹果酸、鞣酸等形成的盐。合适的碱加成盐的例子包括与钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N,N’-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖按和普鲁卡因等形成的盐。本文中涉及到本发明化合物时，包括通式I化合物及其药学上可接受的盐或溶剂化物。
根据本发明，本发明式Ⅰ化合物可与常规药物载体或赋形剂组成药物组合物。该药物组合物可通过口服或非肠道途径给药。本发明的药物组合物可按本领域常规方法制备成各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊、溶液、悬浮液、颗粒剂或注射剂等，经口服或非肠道途径给药。
本专利发明人在对DAPY类化合物构效关系和分子模拟深入研究的基础上，按照生物电子等排药物设计原理，将TMC125中嘧啶环1位N用C代替并引入其他多样性的含氮基团，构建起能与HIV-1逆转录酶(RT)形成更强氢键作用的新型间二芳烃-多取代嘧啶杂环体系。同时在新环C-4位采用了DAPY类抑制剂的高活性取代基，而C-2位则选取DAPY类化合物不同类型、不同结构的新取代基以指导延伸π电子体系(探讨间距与芳香性)的结构多样性修饰，并探讨其与保守性氨基酸Trp229、Phe227的相互作用对抗耐药性的重要影响。对合成的新型间二芳烃-多取代嘧啶衍生物全部进行了体外抗HIV病毒活性试验。结果表明几乎所有化合物均具有了良好的抗野生型HIV-1活性，部分化合物对HIV-1(K103N/Y181C)突变病毒株显示出了较好的抑制活性。而且还意外的发现了两个化合物对HIV-2病毒株也具有一定的抑制活性。而在对细胞活性较好的化合物进行的体外抑制HIV-1逆转录酶活性试验中，其逆转录酶抑制活性好于对照药TMC125或与其相当，由此验证了该类化合物的作用靶点。因此，间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物具有较大的开发价值。在本发明的化合物上进行新的结构修饰及深入研究有助于开发出新的抗HIV药物。
具体实施方式
通过下述实施例有助于理解本发明，但是不能限制本发明的内容。
实施例1：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-1)的制备
2,4-二氯-5-硝基嘧啶(Ⅱ)(0.39g,2mmol)的四氢呋喃溶液(15mL)冰浴磁力搅拌下，缓慢滴加4-氨基苯乙腈(Ⅲ)与三乙胺的四氢呋喃溶液(15mL)。该反应保持0℃搅拌3小时后转为室温，TLC监测反应进程，待反应完全后，减压蒸除溶剂，加入20mL水，二氯甲烷萃取3次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速柱层析纯化得到关键中间体Ⅳ。黄色固体，产率65.0%，MS(ESI):m/z276.2(M+1),278.2(M+3),C11H6ClN5O2(275.65)。
将中间体Ⅳ0.15g(0.5mmol)，0.15g碳酸钾(1.0mmol)与0.096g2,6-二甲基-4-氰基-苯酚(0.6mmol)溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，磁力搅拌，60℃油浴反应5小时，TLC监测反应完全后减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速柱层析纯化得到目标产物Ⅰa-1，黄色固体，收率：62.2%.mp:226-230℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.50(s,1H,NH),9.31(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.53(m,6H,Ph-H,Ph’-H),2.19(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:164.69(C2-pyrimidine),160.27(C4-pyrimidine),154.60(C1-Ph’-N),153.09(C6-pyrimidine),140.08(C1-Ph-O),133.13(2×C),132.75(2×C),132.35(2×C),124.99,121.61(2×CN),118.11(2×C),110.33,109.00,16.31(2×CH3).ESI-MS:m/z387.4(M+1),404.5(M+18),C20H14N6O3[386.11].
实施例2：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-1)的制备
将通过上述方法制得的0.5g N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-1)(1.2mmol)与0.1g钯碳(10%)置于100ml圆底烧瓶中，向其中加入乙醇30mL。将该反应体系抽真空3次后通入氢气，并保持整个反应过程中氢气过量，反应15h后将反应液减压抽滤并浓缩。浓缩液用石油醚洗涤，再次减压抽滤，滤饼在空气中干燥，得目标化合物Ⅰb-1。白色固体，收率：70.4%.mp:218-221℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.93(s,1H,NH),7.72(s,3H,C6-pyrimidine-H,Ph-H),7.63(d,2H,J=8.80Hz,2H,Ph’-H),7.56(d,2H,J=8.80Hz,2H,Ph’-H),4.93(s,2H,NH2),2.08(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:155.66(C2-pyrimidine),154.96(C4-pyrimidine),150.36(C1-Ph’-N),144.51(C6-pyrimidine),141.55(C1-Ph-O),133.30(2×C),133.09(2×C),132.95(2×C),125.71,119.72,119.58(2×CN),119.24,107.99,103.77,16.28(2×CH3).ESI-MS:m/z357.4(M+1),474.4(M+18)C20H16N6O[356.14].
实施例3：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-1)的制备
通过上方法制得的0.2g N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-1)(0.5mmol)与三乙胺(1.0mmol)的四氢呋喃溶液(15mL)冰浴磁力搅拌下，缓慢滴加三氟乙酸酐(0.6mmol)，保持该温度反应5小时，TLC监测反应完全后减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速柱层析纯化得到目标产物Ⅰc-1。白色固体，收率：56.5%.mp:255-257℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.25(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.18(d,J=8.44Hz,2H,Ph’-H),7.94(d,J=8.44Hz,2H,Ph’-H),7.67(s,2H,Ph-H),2.13(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:161.82(C2-pyrimidine),155.38(C4-pyrimidine),153.50(C1-Ph-O),153.37(C6-pyrimidine),142.33(C1-Ph’-N),141.94,135.64,133.84(2×C),132.71(2×C),132.43(2×C),128.73,128.31(2×CN),118.53,117.2,114.88,109.83,16.41(2×CH3).ESI-MS:m/z435.5(C22H17F2N6O2 +),C22H15F3N6O2[452.12].
实施例4：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-1)的制备
通过上方法制得的0.2g N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-氰基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-1)(0.5mmol)与三乙胺(1.0mmol)的四氢呋喃溶液(15mL)冰浴磁力搅拌下，缓慢滴加乙酰氯(0.6mmol)，保持该温度反应5小时，TLC监测反应完全后减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速柱层析纯化得到目标产物Ⅰd-1。白色固体，收率：54.2%.mp:278-282℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.42(s,1H,NH),9.22(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.17(s,1H,NH),7.74(s,2H,Ph-H),7.64(s,4H,Ph’-H),2.10(s,6H,2×CH3),2.09(s,3H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:170.26(C=O),160.65(C2-pyrimidine),156.80(C4-pyrimidine),156.80(C1-Ph-O),155.83(C6-pyrimidine),154.31(C1-Ph’-N),143.59,133.08(3×C),133.01(2×C),120.67(2×C),119.50(2×CN),119.09,115.07,108.53,104.83,23.84,16.21(2×CH3).ESI-MS:m/z399.3(M+1),416.5(M+18),C22H18N6O2[398.15].
实施例5：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-2)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1的制备，所不同的是使用2,4,6-三甲基苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：65.8%.mp:185-189℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.44(s,1H,NH),9.34(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.40(s,4H,Ph’-H),6.99(s,2H,Ph-H),2.40(s,3H,CH3),2.07(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:165.70(C2-pyrimidine),160.41(C4-pyrimidine),154.37(C6-pyrimidine),147.91(C1-Ph’-N),140.52(C1-Ph-O),135.83,132.99(2×C),129.69(2×C),129.56(2×C),124.39,121.77,121.37,118.47,108.21,20.89(CH3),16.24(2×CH3).ESI-MS:m/z376.4(M+1),C20H17N5O3[375.13].
实施例6：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-2)的制备
操作方法同实施例2Ⅰb-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-2)。所得产物为白色固体，收率：75.5%.mp:207-209℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.99(s,1H,NH),7.72(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.68(d,2H,J=8.84Hz,Ph’-H),7.49(d,2H,J=8.84Hz,2H,Ph’-H),6.94(s,2H,Ph-H),4.90(s,2H,NH2),2.30(s,3H,CH3),1.98(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:156.55(C2-pyrimidine),150.30(C4-pyrimidine),148.93(C1-Ph’-N),144.83(C6-pyrimidine),142.02(C1-Ph-O),133.94,125.03,132.97(2×C),130.53(2×C),129.39(2×C),125.03,119.52(2×C),103.39,20.80(CH3),16.28(2×CH3).ESI-MS:m/z346.3(M+1),C20H19N5O[345.16].
实施例7：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-2)的制备
操作方法同实施例3Ⅰc-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-2)。所得产物为白色固体，收率：52.2%.mp:204-208℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.21(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.18(d,J=8.40Hz,2H,Ph’-H),7.94(d,J=8.40Hz,2H,Ph’-H),6.91(s,2H,Ph-H),2.24(s,3H,CH3),1.97(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:162.37(C2-pyrimidine),162.34(C4-pyrimidine),156.09(C6-pyrimidine),153.31(C1-Ph’-N),148.25(C1-Ph-O),136.71,134,71,134.23(2×C),130.00(2×C),129.75(2×C),129.58,128.71,119.82,118.37,117.11,113.81,20.79(CH3),16.45(2×CH3).ESI-MS:m/z424.4(C22H20F2N5O2 +),C22H18F3N5O2[441.14].
实施例8：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-2)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-1，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三甲基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-2)。所得产物为白色晶体，收率：49.9%.mp:222-226℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.62(s,1H,NH),8.35(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.20(s,1H,NH),7.39(dd,J1=32.00Hz,J2=8.40Hz,4H,Ph’-H),6.93(s,2H,Ph-H),2.35(s,3H,CH3),2.32(s,3H,CH3),2.07(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:171.13(C=O),161.89(C2-pyrimidine),155.60(C4-pyrimidine),153.46(C1-Ph-O),148.04(C6-pyrimidine),142.74(C1-Ph’-N),135.09,132.78(2×C),130.23(2×C),129.32(2×C),119.92(2×C),119.23,113.58,105.50,42.26(CH3),23.61,16.37(2×CH3).ESI-MS:m/z388.4(M+1),C20H15N5O4[387.17].
实施例9：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-3)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1的制备，所不同的是使用2,4,6-三氯苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：66.9%.mp:150-153℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.54(s,1H,NH),9.29(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.89(s,2H,Ph-H),7.70(d,J=8.68Hz,2H,Ph’-H),7.53(d,J=8.68Hz,2H,Ph’-H).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:164.16(C2-pyrimidine),160.28(C4-pyrimidine),154.55(C6-pyrimidine),144.33(C1-Ph’-N),141.64(C1-Ph-O),139.95(2×C),129.73,128.83(2×C),128.83,122.11,121.71,121.61(2×C),118.21,109.08.ESI-MS:m/z436.3(M+1),438.3(M+3),440.4(M+5),C17H8Cl3N5O3[434.97].
实施例10：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-3)的制备
将通过上方法制得的0.5g N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-3)(1.1mmol)与1.3g(5.5mmol)二水和二氯化锡置于100ml圆底烧瓶中，向其中加入乙醇30mL。该反应液室温反应10小时，TLC监测反应完全后，减压蒸除溶剂，加入20mL水，乙酸乙酯萃取3次，有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩并经快速柱层析纯化得到Ⅰb-3。所得产物为白色固体，收率：56.9%.mp:150-153℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.01(s,1H,NH),7.87(s,2H,Ph-H),7.74(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.65(m,4H,Ph’-H),5.00(s,2H,NH).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:154.92(C2-pyrimidine),150.21(C4-pyrimidine),145.78(C6-pyrimidine),144.34(C1-Ph’-N),141.33(C1-Ph-O),133.10(2×C),130.68,130.26(2×C),129.29(2×C),126.32,119.81(2×C),119.65,104.05.ESI-MS:m/z406.4(M+1),408.4(M+3),410.4(M+5),C17H10Cl3N5O[405.00].
实施例11：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-3)的制备
操作方法同实施例3Ⅰc-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-3)。所得产物为褐色油状固体，收率：41.2%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.45(s,1H,NH),10.14(s,1H,NH),9.58(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.40(s,4H,Ph’-H),7.30(s,2H,Ph-H).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:160.73(C2-pyrimidine),156.07(C4-pyrimidine),153.28(C6-pyrimidine),144.89(C1-Ph’-N),142.85(C1-Ph-O),136.51,134.26(2×C),131.53,129.74(2×C),129.64(2×C),129.46(2×C),118.32,116.99,114.28,113.97.ESI-MS:m/z484.2(C19H11Cl3F2N5O2 +),586.2(C19H11Cl3F2N5O2 ++2),C19H9Cl3F3N5O2[500.98].实施例12：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-3)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-3)。所得产物为白色固体，收率：40.5%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.40(s,1H,NH),8.29(s,1H,NH),8.20(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.90(s,2H,Ph-H)7.63(m,4H,Ph’-H),2.09(s,3H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:170.29(C=O),160.01(C2-pyrimidine),156.83(C4-pyrimidine),155.90(C1-Ph-O),145.20(C6-pyrimidine),143.36(C1-Ph’-N),133.04(2×C),131.29,129.92(2×C),128.99(2×C),121.03(2×C),119.44,115.66,105.16,23.84(CH3).ESI-MS:m/z448.2(M+1),450.2(M+3),452.3(M+5),C19H12Cl3N5O2[447.01].
实施例13：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-4)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1，所不同的是使用2,4,6-三溴苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：66.4%.mp:183-187℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.52(s,1H,NH),9.31(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.12(s,2H,Ph-H),7.67(d,J=8.60Hz,2H,Ph’-H),7.15(d,J=8.40Hz,2H,Ph’-H).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:163.32(C2-pyrimidine),160.54(C4-pyrimidine),154.56(C6-pyrimidine),147.03(C1-Ph’-N),141.08(C1-Ph-O),135.43(2×C),132.87(2×C),126.67,124.42(2×C),120.32,118.99,118.79(2×C),107.94.ESI-MS:m/z568.1(M+1),570.1(M+3),572.1(M+5),C17H8Br3N5O3[566.82].
实施例14：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-4)的制备
操作方法同实施例10Ⅰb-3制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-4)。所得产物为白色晶体，收率：55.8%.mp:160-164℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.98(s,1H,NH),8.09(s,2H,Ph-H),7.74(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.63(dd,J1=18.24Hz,J2=8.96Hz,4H,Ph’-H),4.97(s,2H,NH).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:154.84(C2-pyrimidine),150.08(C4-pyrimidine),148.30(C6-pyrimidine),144.38(C1-Ph’-N),141.41(C1-Ph-O),135.23(2×C),133.09(2×C),126.18,119.95(2×C),119.75(2×C),119.68,118.93,103.94.ESI-MS:m/z538.1(M+1),540.1(M+3),542.0(M+5),544.1(M+7),C17H10Br3N5O[536.84].
实施例15：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-4)的制备
操作方法同实施例3Ⅰc-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-4)。所得产物为褐色油状固体，收率：40.7%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.42(s,1H,NH),9.21(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.38(s,2H,Ph-H),7.97(d,J=8.60Hz,2H,Ph’-H),7.05(d,J=8.40Hz,2H,Ph’-H).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:164.32(C2-pyrimidine),163.44(C4-pyrimidine),158.55(C6-pyrimidine),150.66,148.13(C1-Ph’-N),146.08(C1-Ph-O),136.45(2×C),132.89(2×C),127.77,125.32(2×C),122.42,119.97,118.71(2×C),110.21,107.95.ESI-MS:m/z538.0(C17H11Br3N5O+),540.0(C17H10Br3N5O++2),633.8(M+1),636.0(M+3),637.8(M+5),C19H9Br3F3N5O2[632.83].
实施例16：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-4)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,4’-6’-三溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-4)。所得产物为白色晶体，收率：45.6%.mp:178-180℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.39(s,1H,NH),9.27(s,1H,NH),8.20(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.12(s,2H,Ph-H),7.61(s,4H,Ph’-H),2.09(s,3H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:170.26(C=O),159.93(C2-pyrimidine),156.68(C4-pyrimidine),155.96(C1-Ph-O),147.78(C6-pyrimidine),143.41(C1-Ph’-N),135.33(2×C),133.02(2×C),120.93(2×C),119.54(2×C),119.50,119.45,115.10,105.06,23.85(CH3).ESI-MS:m/z579.9(M+1),582.0(M+3),583.9(M+5),586.0(M+7),C19H12Br3N5O2[578.85].
实施例17：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-5)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1的制备，所不同的是使用2,6-二甲基-4-溴苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：70.0%.mp:190-195℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.44(s,1H,NH),9.35(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.49(d,J=8.68Hz,2H,Ph-H),7.39(d,J=8.68Hz,2H,Ph’-H),7.26(s,2H,Ph’-H),2.12(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:165.25(C2-pyrimidine),160.44(C4-pyrimidine),154.37(C6-pyrimidine),149.17(C1-Ph’-N),140.27(C1-Ph-O),133.12(2×C),132.99,132.50,131.75(2×C),124.67,121.43(2×C),119.16,118.29,108.71,16.17(2×CH3).ESI-MS:m/z440.4(M+1),442.4(M+3),C19H14BrN5O3[439.03].
实施例18：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-5)的制备
操作方法同实施例10Ⅰb-3的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-5)。所得产物为白色固体，收率：55.8%.mp:160-164℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.88(s,1H,NH),7.73(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.64(d,J=8.88Hz,2H,Ph’-H),7.53(d,J=8.88Hz,2H,Ph’-H),7.26(s,2H,Ph-H),4.87(s,2H,NH2),2.02(s,6H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:156.09(C2-pyrimidine),150.32(C4-pyrimidine),150.03(C6-pyrimidine),144.65(C1-Ph’-N),141.92(C1-Ph-O),133.49(2×C),130.30(2×C),128.91,128.29(2×C),125.31,119.73,119.57(2×C),103.62,16.83(2×CH3).410.4(M+1),412.4(M+3),C19H16BrN5O[409.05].
实施例19：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-5)的制备
操作方法同实施例3Ⅰc-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-5)。所得产物为褐色油状固体，收率：50.6%.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.34(s,1H,NH),10.11(s,1H,NH),9.25(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.60(d,J=8.68Hz,2H,Ph-H),7.48(d,J=8.68Hz,2H,Ph’-H),7.34(s,2H,Ph-H),2.32(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:166.26(C2-pyrimidine),161.14(C4-pyrimidine),155.35(C6-pyrimidine),150.67,148.27(C1-Ph’-N),147.28(C1-Ph-O),133.32(2×C),132.09,132.51,130.85(2×C),125.66,124.47(2×C),119.36,118.00,110.22,109.71,16.74(2×CH3).ESI-MS:m/z588.3(C21H17BrF2N5O2 +),590.3(C21H17BrF2N5O2 ++2),C21H15BrF3N5O2[505.04].
实施例20：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-5)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-5的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-5)。所得产物为白色晶体，收率：59.7%.mp:145-148℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.36(s,1H,NH),9.14(s,1H,NH),8.16(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.63(dd,J1=24.92Hz,J2=8.92Hz,4H,Ph’-H),7.29(s,2H,Ph-H),2.09(s,3H,CH3),2.05(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:170.29(C=O),161.06(C2-pyrimidine),156.73(C4-pyrimidine),156.02(C1-Ph-O),149.50(C6-pyrimidine),143.74(C1-Ph’-N),133.17(2×C),132.96(2×C),129.42,128.56(2×C),120.59(2×C),119.55,114.72,104.62,23.85(CH3),16.33(2×CH3).ESI-MS:m/z452.3(M+1),454.3(M+3),C21H18BrN5O2[451.06].
实施例21：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二氯-4’-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-6)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1的制备，所不同的是使用2,6-二氯苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：62.2%.mp:193-196℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.45(s,1H,NH),9.30(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.60(s,4H,Ph’-H),7.32(t,J=8.48Hz,1H,C4-Ph-H),6.85(d,J=8.52Hz,2H,Ph-H)13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:164.54(C2-pyrimidine),160.76(C4-pyrimidine),154.59(C6-pyrimidine),139.95(C1-Ph’-N),133.17(4×C),133.00,125.67,122.69(4×C),121.84,118.29,109.25.ESI-MS:m/z402.4(M+1),404.4(M+3),C17H9Cl2N5O3[401.01].
实施例22：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-6)的制备
操作方法同实施例10Ⅰb-3的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二氯-4’-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-6)。所得产物为白色固体，收率：78.2%.mp:114-117℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:8.95(s,1H,NH),7.76(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.64(m,6H,Ph-H,Ph’-H),7.41(t,1H,J=8.80Hz,C4-Ph-H),4.96(s,2H,NH2).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:155.11(C2-pyrimidine),150.04(C4-pyrimidine),146.36(C1-Ph’-N),144.51(C6-pyrimidine),141.34(C1-Ph-O),133.08(2×C),129.64(2×C),129.33(2×C),127.68,126.21,119.73,119.56(2×C),103.75.ESI-MS:m/z372.2(M+1),374.2(M+3),376.3(M+5),378.3(M+7),C17H11Cl2N5O[371.03].
实施例23：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-氯-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-6)的制备
操作方法同实施例3Ⅰc-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-6)。所得产物为褐色油状固体，收率：58.3%.mp:203-209℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.09(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.91(d,J=8.60Hz,2H,Ph’-H),7.64(d,J=8.60Hz,2H,Ph’-H),7.41(d,J=8.08Hz,2H,Ph-H),7.21(t,J=8.08Hz,1H,C4-Ph-H).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:161.51(C2-pyrimidine),155.05(C4-pyrimidine),153.45(C6-pyrimidine),145.59(C1-Ph-O),142.24(C1-Ph’-N),135.72,133.70(2×C),129.16(2×C),128.52(2×C),127.09(2×C),128.31(2×CN),119.26,117.36,114.61.ESI-MS:m/z450.2(C19H12Cl2F2N5O2 ++1),452.2(C19H12Cl2F2N5O2 ++2),C19H10Cl2F3N5O2[467.02].
实施例24：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-氯-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-6)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-氯-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-6)。所得产物为白色固体，收率：60.7%.mp:158-162℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.38(s,1H,NH),9.22(s,1H,NH),8.20(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.67(d,J=8.0Hz,2H,Ph-H),7.59(s,4H,Ph’-H),7.44(t,J=8.40Hz,1H,C4-Ph-H),2.09(s,3H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:170.33(C=O),160.28(C2-pyrimidine),156.79(C4-pyrimidine),156.06(C1-Ph-O),145.77(C6-pyrimidine),143.45(C1-Ph’-N),133.09(2×C),129.76(2×C),128.98(2×C),128.23,120.66(2×C),119.49,115.43,104.93,23.86(CH3).ESI-MS:m/z414.3(M+1),416.3(M+3),C19H13Cl2N5O2[413.04].
实施例25：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-醛基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-7)的制备
操作方法同实施例1Ⅰa-1的制备，所不同的是使用2,6-二甲基-4-醛基-苯酚。所得产物为黄色晶体，收率：66.9%.mp:171-173℃.1H NMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.46(s,1H,NH),10.01(s,1H,CHO),9.29(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.76(s,2H,Ph-H),7.64(s,4H,Ph’-H),2.15(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:192.68(H-C=O),164.27(C2-pyrimidine),160.45(C4-pyrimidine),154.84(C1-Ph-O),154.54(C6-pyrimidine),141.39(C1-Ph’-N),134.44,132.58(2×C),131.81(2×C),130.56(2×C),126.28,125.12,123.65(2×C),119.02,16.31(2×CH3).ESI-MS:m/z390.3(M+1),407.5(M+17),C20H15N5O4[389.11].
实施例26：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴醛基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-7)的制备
操作方法同实施例2Ⅰb-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-醛基-苯氧基)-5-硝基嘧啶(Ⅰa-7)。所得产物为白色固体，收率：78.2%.mp:293-297℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.02(s,1H,CHO),9.17(s,1H,NH),7.79(m,3H,C6-pyrimidine-H,Ph’-H),7.68(d,2H,J=8.80Hz,Ph-H),7.48(d,2H,J=8.80Hz,Ph-H),5.07(s,2H,NH2).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:192.81(CHO),156.10(C2-pyrimidine),155.76(C4-pyrimidine),150.26(C1-Ph’-N),144.68(C6-pyrimidine),141.47(C1-Ph-O),133.59,133.00(2×C),132.48(2×C),132.29,130.45(2×C)125.75,126.21,119.73,119.75(2×C),103.56.ESI-MS:m/z360.4(M+1),382.5(M+23),C20H17N5O2[359.14].
实施例27：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-醛基-苯氧基)-5-三氟乙酰基嘧啶(Ⅰc-7)的制备
操作方法同实施例3Ⅰb-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴醛基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-7)。所得产物为白色固体，收率：54.4%.mp:179-183℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:9.94(s,1H,H-C=O),9.13(s,1H,C6-pyrimidine-H),8.47(b,1H,NH)7.93(d,J=8.44Hz,2H,Ph’-H),7.67(s,2H,Ph-H),2.18(s,6H,2×CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:192.27(CHO),161.82(C2-pyrimidine),154.07(C4-pyrimidine),153.47(C6-pyrimidine),135.47(C1-Ph-O),133.86(2×C),133.83(4×C),131.89(2×C),130.74(2×C),128.40,128.26(2×C),117.16,114.61,16.51(2×CH3).ESI-MS:m/z438.4(C22H18F2N5O3 +),C22H16F3N5O3[455.12].
实施例28：N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-醛基-苯氧基)-5-乙酰基嘧啶(Ⅰd-7)的制备
操作方法同实施例4Ⅰd-1的制备，所不同的是使用N-(4’-氰基苯基)-2-(2’,6’-二甲基-4’-溴醛基-苯氧基)-5-氨基嘧啶(Ⅰb-7)。所得产物为白色固体，收率：53.3%.mp:167-170℃.1HNMR(400MHz,DMSO-d6,ppm)δ:10.00(s,1H,NH),9.94(s,1H,NH),9.81(s,1H,CHO),9.23(s,1H,C6-pyrimidine-H),7.45(s,2H,Ph-H),7.64(s,4H,Ph’-H),2.15(s,6H,2×CH3),2.00(s,3H,CH3).13C-NMR(100MHz,DMSO-d6,ppm)δ:193.88(H-C=O),166.37(C2-pyrimidine),161.44(C4-pyrimidine),160.34(C1-Ph-O),155.20(C6-pyrimidine),144.29(C1-Ph’-N),135.46,133.58(2×C),132.51(2×C),131.66(2×C),127.28,125.14,122.25(2×C),120.22,20.35(CH3),16.31(2×CH3).ESI-MS:m/z402.3(M+1),424.4(M+23),C22H19N5O3[401.15].
实施例29：抗HIV活性实验（MT-4细胞模型）
参见①Pauwels R,et al.J.Virol.Methods.1988,20,309.②Pannecouque C,et al.NatProtocols2008,3,427.
术语解释：
MT-4细胞：人急性淋巴母细胞白血病细胞。
MTT分析法：MTT即为3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝。
Nevirapine：抗艾滋病上市药物奈韦拉平。
AZT：抗艾滋病上市药物齐多夫定。
3TC：抗艾滋病上市药物拉米夫定。
Efavirenz：抗艾滋病上市药物依法韦仑。
Delavirdine：抗艾滋病上市药物地拉韦啶。
DMSO：二甲基亚砜。
测试原理
由于HIV感染的MT-4细胞在一定时间内(5-7天)会发生病变，因此向HIV感染的MT-4细胞悬浊液中加入适当浓度的待检测化合物溶液，经过一段时间(5-7天)的培养后，用MTT分析法测定MT-4细胞活力，得到保护50%细胞免于细胞病变的药物浓度(EC50)即可得出目标化合物的抗HIV的活性。同时得到目标化合物使50%未感染HIV的细胞发生病变的浓度(CC50)，计算出选择系数(selectivity index，SI=CC50/EC50)。
MTT分析法原理：MTT即溴化-3-(4,5-二甲基-2-噻唑基)-2,5-二苯基四唑氮,可与活的细胞内琥珀酸脱氢酶相结合，而不与死亡细胞发生反应。目前MTT法是一种快速、简洁反映细胞活力的酶分析方法。
测试材料和方法
(1)HIV-1(IIIB)、HIV-2(ROD)毒株、HIV-1双突变(K103N/Y181C)耐药株RES056：由比利时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供。
(2)MT-4细胞：由比利时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供。
(3)MTT：购自美国Sigma公司。
(4)样品处理：样品临用前溶于DMSO配成适当浓度，并用双蒸水作5倍稀释，各5个稀释度。
(5)阳性对照药：Nevirapine(NVP)、AZT、DDC、Efavirenz(EFV)、Delavirdine(DLV)。
(6)测试方法：样品稀释后加入到HIV感染MT-4细胞悬浊液中，经过一段时间后用MTT比色法测定细胞活力，于酶标仪中，在590nm下记录吸光度(A)值,计算出EC50，CC50以及SI。
(7)MTT染色法：加入样品培养一段时间后，再向每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，继续培养若干小时，弃染色液，并向每孔加入150μLDMSO，充分混合，于酶标仪中，在590nm下记录吸光度。
具体操作如下：将化合物用DMSO或水溶解后用磷酸盐缓冲液稀释，将3×105MT-4细胞与100μL不同浓度的化合物溶液在37℃共同预孵育1h。然后向该混合物中加入100μL适当浓度的病毒稀释液，将细胞于37℃孵育1h。洗涤三次后，将细胞再次分别悬浮于含有或不含化合物的培养基质中。接着将细胞在5%CO2环境中，于37℃下再孵育7天，并于感染后的第三天用含有或不含化合物的培养基质补充原培养液。每种培养条件都重复操作两次。对病毒的细胞病变作用每天都用反向光学显微镜监控。一般来讲，本实验中所用的病毒稀释液常常会在病毒感染后第五天发生细胞病变。药物抑制浓度以药物对病毒致细胞病变作用产生50%抑制作用而同时对细胞无直接毒性的浓度(EC50)表示。值得强调的是，当化合物水溶性较差，需要用DMSO才能溶解时，DMSO体积比浓度相对于水来讲，一般会低于10%(DMSO在MT-4细胞培养介质中最终浓度小于2%)。因为DMSO能影响测试化合物抗病毒活性，对含有相同浓度DMSO溶液的抗病毒活性对比空白实验也应该平行操作进行。另外，DMSO最终浓度(1/1000)远远低于影响HIV-1在MT-4细胞中复制所需浓度。
目标化合物的体外抗HIV-1(IIIB)、HIV-2(ROD)及HIV-1双突变RES056耐药株活性筛选数据由比利时Leuven大学Rega研究院微生物与免疫学研究所提供，所有的活性数据都经过至少两次独立、平行的实验测得，结果见表1。
表1化合物抗HIV-1(IIIB，RES056)及HIV-2(ROD)的活性和细胞毒性
实施例30：抗逆转录酶活性测试实验
本实验采用色度法逆转录酶活性测定实验，所使用试剂盒Reverse Transcriptase Assay,colorimetric Version13.0购自罗氏公司，阳性对照药物选用TMC125。(参见①Hofman,A.D.&Banapour,B.&Levy,J.A.(1985)Virology147,326–335.②Ukkonen,P.et al.(1988)Eur.J.Clin.Microbiol.&Infect.Dis.7,518–523.)
测试原理
色度法逆转录酶活性测定使用模板/引物聚合物poly(A)×oligo(dT)作为起始原料，并用地高辛和生物素标记的核苷酸代替用放射性同位素[3H]-或[32P]-标记的核苷酸，这些是此方法的优势之处。所合成出的DNA是测定逆转录酶活性的重要参数，检测和定量DNA使用了以下三明治式的ELISA测定方法：生物素标记的DNA能够与包被了抗生物素链霉菌素的微版模块(MP)的表面进行结合。在接下来的一步中，聚合了过氧化物酶的地高辛抗体需要结合到地高辛标记的DNA上。最终，加入过氧化物酶的底物2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)，使它们在酶的催化作用下分解，产生带有明显颜色的产物。通过酶标仪测定载有样品的微板吸光度，此吸光度值与逆转录酶的活性呈现直接的关联，通过公式计算可得到化合物对逆转录酶的抑制浓度。
测试方法
(1)首先配置各种工作溶液，并将样品用适量DMSO溶解，并用裂解缓冲液稀释成5个浓度梯度。在各个不同的反应管中，将4–6ng重组HIV-1-RT用裂解缓冲液(20μl/well)稀释。同时，准备只有裂解缓冲液而没有RT的阴性对照组。然后每个反应罐加入20μl含有不同浓度所测试样品的缓冲溶液以及20μl反应物混合液，在37摄氏度下孵育一个小时。
(2)准备足够的微版模块，按照方向牢固地安装在框架内。将孵育好的样品(60μl)转移到微板的孔中，用薄膜覆盖好后第二次37摄氏度孵育一小时。
将溶液移除，每孔用洗液仔细地冲洗5遍，每遍用250μl，保留30秒。每孔加入200μl抗地高辛-过氧化物酶聚合物，将微板用薄膜覆盖好后第三次在37摄氏度下孵育一小时。
(3)将溶液移除，每孔用洗液仔细地冲洗5遍，每遍用250μl，保留30秒。每孔加入200μlABTS溶液，在15-25摄氏度下孵育，直到绿颜色出现并足够通过光度检测(一般为10-30分钟)。
(4)用酶标仪测定载有样品在波长405nm处的吸光度值，通过以下公式计算可得化合物对逆转录酶的抑制浓度。
抑制率%=(阳性对照荧光强度-样品荧光强度)/(阳性对照荧光强度-背景荧光强度)×100%进行线性回归，将抑制率带入线性方程，求得的浓度C既是IC50，单位是(μg/mL)，再根据化合物分子量转化为μM，此实验选取了两个细胞活性最好的两个代表性化合物，以及阳性对照药依曲韦林（ETV），实验结果见表2。
表2代表化合物对HIV-1逆转录酶抑制活性
上述实验结果表明：具有本发明通式Ⅰ的化合物是一类具有新型结构骨架的HIV-1抑制剂，其中有多个化合物对野生型HIV-1的抑制活性处于纳摩尔水平，对耐药病毒株同样具有中等的抑制活性，尤其是化合物Ⅰb-1的活性与目前临床上广泛应用的抗艾滋病药物依曲韦林（ETV）相当，具有进一步研发的前景。此外，本发明还意外地发现Ⅰc-3和Ⅰc-5两个化合物对HIV-2也具有一定抑制活性，可作为先导化合物做进一步的研究与探讨。因此，本发明涉及的化合物极有可能对HIV耐药性病毒株产生强的抑制活性，具有发展成为一类全新结构抗HIV新药的潜力。

Claims (7)

1.具有通式(I)的间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物或药学上可接受的盐：
其中，
R1，R2各自独立地为-H、卤素、-NO2、-NH2、-NHR、-N(R)2、-NHCOCH3、-NHCOCF3；
R3和R4各自独立地为卤素、C1-6烷基；
R5为-CN、卤素、C1-6烷基、CHO；
R6为-CN；
X为-NH-、-O-；
其中R为C1-4烃基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于具有以下通式I＇的结构：
其中，R1，R3，R4，R5同结构通式I所述。
3.如权利要求1或2所述的化合物，其特征在于为下列结构的化合物之一：
4.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于以二卤素取代的嘧啶环为起始原料，与取代芳基胺即Ar1-NH2缩合得到中间体(IV)，再经过亲核取代反应得到间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物(I)；
合成路线如下：
试剂和条件:(i)三乙胺，四氢呋喃,0℃；(ii)碳酸钾，N,N-二甲基甲酰胺，60℃；
其中，R1、R2、R3、R4、R5、R6及X的定义同上通式Ⅰ所述。
5.如权利要求2所述的化合物的制备方法，其特征在于以5-硝基-2,4-二氯嘧啶(II)为起始原料，与对氰基苯胺(III)在三乙胺的碱性条件下缩合得到中间体(IV)；然后，与不同取代的苯酚(V)经过亲核取代反应得到目标产物(Ia)，再依次经过还原氢化反应、酰化反应得到目标产物(Ib、Ic、Id)；
合成路线如下：
试剂和条件:(i)三乙胺,四氢呋喃,0℃；(ii)碳酸钾,N,N-二甲基甲酰胺,60℃；(iii)氢气,钯碳；(iv)二氯化锡二水合物,乙醇；(v)三乙胺,三氟甲磺酸酐,二氯甲烷,0℃；(vi)三乙胺,乙酰氯,0℃；
其中R3、R4、R5的定义同上通式I所述；
所述取代的苯酚(V)为4-氰基-2,6-二甲基苯酚、2,4,6-三甲苯酚、2,4,6-三氯苯酚、2,4,6-三溴苯酚、4-溴-2,6-二甲基苯酚、2,6-二氯苯酚、4-醛基-2,6-二甲基苯酚。
6.一种抗HIV药物组合物，包含权利要求1-3任一项所述化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
7.权利要求1-3任一项所述化合物在制备抗HIV的药物中的应用。
CN201310456775.5A 2013-09-29 2013-09-29 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用 Active CN103483272B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310456775.5A CN103483272B (zh) 2013-09-29 2013-09-29 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201310456775.5A CN103483272B (zh) 2013-09-29 2013-09-29 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103483272A CN103483272A (zh) 2014-01-01
CN103483272B true CN103483272B (zh) 2015-10-21

Family

ID=49823921

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201310456775.5A Active CN103483272B (zh) 2013-09-29 2013-09-29 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103483272B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104876860B (zh) * 2015-05-07 2018-02-13 山东大学 一种二芳基吡啶衍生物及其制备方法与应用
CN112028836B (zh) * 2020-09-09 2021-12-07 山东大学 一种含有六元氮杂环的二芳基嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
CN115490642A (zh) * 2022-09-21 2022-12-20 山东大学 一种含醚键的二芳基嘧啶类化合物及其制备方法与应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1245567A1 (en) * 1998-03-27 2002-10-02 Janssen Pharmaceutica N.V. HIV inhibiting pyrimidine derivatives
WO2008092199A1 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 Cytopia Research Pty Ltd Thiopyrimidine-based compounds and uses thereof
CN101405283A (zh) * 2006-03-30 2009-04-08 泰博特克药品有限公司 Hiv抑制性5-酰氨基取代的嘧啶类化合物
CN101410394A (zh) * 2006-03-30 2009-04-15 泰博特克药品有限公司 抑制人免疫缺陷病毒的5-(羟基亚甲基和氨基亚甲基)取代的嘧啶
CN101573342A (zh) * 2006-12-29 2009-11-04 泰博特克药品有限公司 抑制hiv的5,6-取代的嘧啶类化合物

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1245567A1 (en) * 1998-03-27 2002-10-02 Janssen Pharmaceutica N.V. HIV inhibiting pyrimidine derivatives
CN101405283A (zh) * 2006-03-30 2009-04-08 泰博特克药品有限公司 Hiv抑制性5-酰氨基取代的嘧啶类化合物
CN101410394A (zh) * 2006-03-30 2009-04-15 泰博特克药品有限公司 抑制人免疫缺陷病毒的5-(羟基亚甲基和氨基亚甲基)取代的嘧啶
CN101573342A (zh) * 2006-12-29 2009-11-04 泰博特克药品有限公司 抑制hiv的5,6-取代的嘧啶类化合物
WO2008092199A1 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 Cytopia Research Pty Ltd Thiopyrimidine-based compounds and uses thereof

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DAPY类化合物抑制野生型HIV-1活性的QSAR研究;石春雨,等;《分子科学学报》;20120229;第28卷(第1期);第66-69页 *
Design, Synthesis, and Evaluation of Diarylpyridines and Diarylanilines as Potent Non-nucleoside HIV-1 Reverse Transcriptase Inhibitors;Xingtao Tian,等;《Journal of Medicinal Chemistry》;20101104;第53卷(第23期);第8287-8297页 *
Synthesis and SAR studies of trisubstituted purinones as potent and selective adenosine A2A receptor antagonists;Yuefei Shao,等;《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》;20090119;第19卷(第5期);第1399-1402页 *
二芳基胺类HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂研究进展;刘涛,等;《中国药物化学杂志》;20130228;第23卷(第1期);第55-61页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103483272A (zh) 2014-01-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Rawal et al. Design and synthesis of 2-(2, 6-dibromophenyl)-3-heteroaryl-1, 3-thiazolidin-4-ones as anti-HIV agents
CA2726588C (en) Compounds and methods for treating inflammatory and fibrotic disorders
CN104530078B (zh) 一种噻吩并[3,2‑d]嘧啶衍生物及其制备方法与应用
CN104926829A (zh) 一种噻吩并嘧啶类衍生物及其制备方法和应用
CN106831605B (zh) 一种取代二芳基嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
CN108218890B (zh) 一种五元非芳环并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN112920208B (zh) 一种含硼酸的吲哚芳基砜类衍生物及其制备方法与应用
CN103483272B (zh) 间二芳烃-多取代嘧啶类衍生物及其制备方法与应用
CN105175414B (zh) 咪唑[4,5‑b]吡啶巯乙酰胺类衍生物及其制备方法与应用
CN103360398B (zh) 一种***并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法与应用
CN108440559B (zh) 二芳基噻吩并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN104876860B (zh) 一种二芳基吡啶衍生物及其制备方法与应用
CN109369623B (zh) 一种取代1,2,3三氮唑类二芳基嘧啶衍生物及其制备方法与应用
CN111675661B (zh) 一种含有反式双键的二芳基嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN106866699B (zh) 一种二芳基噻吩并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN108218896B (zh) 一种噻唑并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN101638391A (zh) 2-[(取代苯氨基)羰基甲硫基]-6-(2,6-二氯苄基)-3h-嘧啶-4-酮类衍生物及其制备方法与应用
CN108586482A (zh) 一种含三氮唑环的二芳基嘧啶类hiv-1抑制剂及其制备方法和应用
CN112898193B (zh) 一种吲哚芳基砜类衍生物及其制备方法与应用
CN108409734A (zh) 吡啶并嘧啶类hiv-1逆转录酶抑制剂及其制备方法和应用
CN104016927B (zh) 嘧啶巯乙酰胺类衍生物及其制备方法与应用
Wang et al. Synthesis and in vitro anti-HIV evaluation of a new series of 6-arylmethyl-substituted S-DABOs as potential non-nucleoside HIV-1 reverse transcriptase inhibitors
CN108440500B (zh) 一种喹唑啉类hiv-1抑制剂及其制备方法和应用
CN114014866A (zh) 一种5,7-二氢呋喃并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法和应用
CN102516244B (zh) 六元芳杂环并咪唑巯乙酰胺类衍生物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant