CN103478443A - 微生态制剂及其在提高肉鸡生产性能、免疫性能和鸡肉品质中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了微生态制剂及其在提高肉鸡生产性能、免疫性能和鸡肉品质中的应用。该微生态制剂的活性成分是用发酵培养基培养复合菌剂得到的培养物；复合菌剂的活性成分由枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和植物乳杆菌组成。该微生态制剂能显著提高鸡肉的缬氨酸含量、蛋氨酸含量、赖氨酸含量、苯丙氨酸含量、胱氨酸含量、酪氨酸含量、脯氨酸含量、粗蛋白含量、胸肌嫩度、胸肌弹性、鸡腿肌肉的咀嚼性，降低鸡肉的胆固醇含量、脂肪含量和滴水损失；能显著提高肉鸡的出栏率、肉料比、蛋白质、钙和磷的表观消化率、体重、胸腺指数、脾脏指数、法氏囊指数、红细胞C3b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率、血清中的蛋白含量、α-淀粉酶含量和胆碱酯酶的含量。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生态制剂及其在提高肉鸡生产性能、免疫性能和鸡肉品质中的应用。
背景技术
肉鸡在长期进化过程中，消化道内的微生物与宿主形成了稳定的共生关系，可保持肉鸡体内的微生态平衡，具有促进消化器官发育、抵御致病微生物侵害、缓冲不利因素突发影响等功能，有利于肉鸡保持良好的健康水平和生产性能。近年来，肉鸡养殖规模逐渐扩大，工业化的养殖规模虽然为养殖户带来了较大的经济效益，但集约化饲养伴随的养殖环境恶化、抗生素等预防药物滥用、疫病的流行等不利因素极大的影响了肉鸡体内的微生态平衡，导致肉鸡的消化道发育、生理代谢功能、抗应激能力等处于较低的水平，进而造成肉鸡的生产性能下降，遗传潜力无法充分发挥。随着现代肉鸡养殖业的飞速发展，肉鸡饲养规划化、集约化的进程日益加快，有利的保障了国内市场对鸡肉产品的消费需求。但是，近年来人们生活水平的不断提高，对鸡肉品质提出了更高的要求。目前，肉鸡生长速度以每年1.0％-1.5％的速度递增，肉鸡出现胴体过肥，肉质变得粗老、疏松、缺少风味。随着科学技术的发展，人们健康意识的提高，抗生素的副作用逐渐引起了人们的关注。在肉鸡的饲养过程中，作为预防疾病使用的抗生素长期应用会导致肉鸡细胞免疫和体液免疫机能下降，产生抗药耐药菌株，造成疾病流行难以控制。同时，抗生素在肉鸡产品及其***物中的残留，直接威胁人类的健康与安全，对生态环境产生不良影响。因而，探索安全、有效的技术手段，改善肉鸡的生产性能、免疫性能和鸡肉产品的品质是肉鸡养殖亟待解决的重要技术问题。
微生态制剂是绿色、安全的添加剂，无药物残留、不引起环境危害，对产品质量安全和人类生存环境不会造成现实和潜在威胁，是安全饲料添加剂的发展方向之一。
发明内容
本发明所要解决的一个技术问题是提供一种可提高肉鸡生产性能和/或提高肉鸡鸡肉品质和/或提高肉鸡免疫功能的微生态制剂。
本发明所提供的该微生态制剂，它的活性成分是用发酵培养基培养复合菌剂得到的培养物(培养容器内的所有物质)；所述复合菌剂的活性成分由枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和植物乳杆菌组成。
该微生态制剂中，所述枯草芽孢杆菌可为枯草芽孢杆菌RJGP16、所述酿酒酵母为酿酒酵母CICC1562和所述植物乳杆菌为植物乳杆菌CICC22696。
上述微生态制剂中，所述复合菌剂的活性成分中，所述枯草芽孢杆菌、所述酿酒酵母和所述植物乳杆菌的集落形成单位数目比可为1∶1-3∶1(如1∶3∶1或1∶1∶1)。
上述微生态制剂中，所述复合菌剂具体可为将所述枯草芽孢杆菌的液体菌种、所述酿酒酵母的液体菌种和所述植物乳杆菌的液体菌种按照1∶1-3∶1(如1∶3∶1或1∶1∶1)的集落形成单位数目比混合得到的混合物。
上述微生态制剂中，所述枯草芽孢杆菌的液体菌种可为用所述发酵培养基在30-32℃培养18-24h得到的培养物(培养容器内的所有物质)；
所述酿酒酵母的液体菌种可为用所述发酵培养基在28-30℃培养32-40h(如36小时)得到的培养物(培养容器内的所有物质)；
所述植物乳杆菌的液体菌种可为用所述发酵培养基在35-37℃培养46-54h(如48小时)得到的培养物(培养容器内的所有物质)。
上述微生态制剂中，所述微生态制剂的菌体含量可为5×108-8×109cfu/g，如6×109cfu/g。
上述微生态制剂中，所述用发酵培养基培养复合菌剂采用的培养条件可为：培养温度34-36℃，培养时间42-48小时，所述复合菌剂的接种量(接入的所述复合菌剂的体积与所述发酵培养基的体积比)为6％(体积比)。
上述微生态制剂在制备提高肉鸡生产性能和/或提高肉鸡鸡肉品质和/或提高肉鸡免疫功能的产品中的应用也属于本发明的保护范围。
上述应用中，所述提高肉鸡鸡肉品质可为下述A1)-A15)中的全部或部分：
A1)提高肉鸡鸡肉的缬氨酸含量；
A2)提高肉鸡鸡肉的蛋氨酸含量；
A3)提高肉鸡鸡肉的赖氨酸含量；
A4)提高肉鸡鸡肉的苯丙氨酸含量；
A5)提高肉鸡鸡肉的胱氨酸含量；
A6)提高肉鸡鸡肉的酪氨酸含量；
A7)提高肉鸡鸡肉的脯氨酸含量；
A8)提高肉鸡鸡肉的粗蛋白含量；
A9)降低肉鸡鸡肉的胆固醇含量；
A10)降低肉鸡鸡肉的脂肪含量；
A11)降低肉鸡鸡肉的滴水损失；
A12)提高肉鸡的胸肌嫩度；
A13)提高肉鸡的胸肌弹性；
A14)提高肉鸡鸡腿肌肉的咀嚼性；
A15)提高肉鸡鸡胸肌肉的咀嚼性；
所述生产性能可为下述B1)-B6)中的全部、或五种、或四种、或三种、或两种、或一种：
B1)出栏率；
B2)肉料比；
B3)蛋白质的表观消化率；
B4)钙的表观消化率；
B5)磷的表观消化率；
B6)体重；
所述提高肉鸡免疫功能可体现为下述C1)-C8)中的全部或部分：
C1)提高肉鸡胸腺指数；
C2)提高肉鸡脾脏指数；
C3)提高肉鸡法氏囊指数；
C4)提高肉鸡红细胞C3b受体花环率；
C5)提高肉鸡红细胞免疫复合物花环率；
C6)提高肉鸡血清中的总蛋白含量；
C7)提高肉鸡血清中的胆碱酯酶含量；
C8)提高肉鸡血清中的α-淀粉酶的含量。
上述应用中，所述提高肉鸡生产性能和/或肉鸡鸡肉品质和/或肉鸡免疫性能的产品为含有上述微生态制剂的肉鸡饲料。
上述应用中，所述含有微生态制剂的肉鸡饲料具体可为a)或b)或c)：
a)向所述肉鸡普通日粮中添加是所述肉鸡普通日粮质量的0.02％所述微生态制剂得到的饲料；
b)向所述肉鸡普通日粮中添加是所述肉鸡普通日粮质量的0.025％所述微生态制剂得到的饲料；
c)向所述肉鸡普通日粮中添加是所述肉鸡普通日粮质量的0.02％-0.025％所述微生态制剂得到的饲料。
上述应用中，所述肉鸡普通日粮可为肉鸡育雏期普通日粮和/或肉鸡育成期普通日粮，相应地，所述含有微生态制剂的肉鸡日粮可为含有微生态制剂的肉鸡育雏期日粮和/或含有微生态制剂的肉鸡育成期日粮；
所述含有微生态制剂的肉鸡育雏期日粮是向所述肉鸡育雏期普通日粮中添加是所述肉鸡育雏期普通日粮质量的0.015％-0.05％所述微生态制剂得到的饲料，所述肉鸡育雏期普通日粮中不含有所述微生态制剂；
所述含有微生态制剂的肉鸡育成期日粮是向所述肉鸡育成期普通日粮中添加是所述肉鸡育成期普通日粮质量的0.015％-0.05％所述微生态制剂得到的饲料，所述肉鸡育成期普通日粮中不含有所述微生态制剂。
所述含有微生态制剂的肉鸡育雏期日粮和所述含有微生态制剂的肉鸡育成期日粮中，所述微生态制剂的质量含量均可为0.02％-0.025％、0.02％或0.025％。
上文中，所述微生态制剂可只有由所述微生态制剂的活性成分组成。所述微生态制剂也可由所述微生态制剂的活性成分和载体组成；所述载体具体可为磷酸钙、稻壳粉、麸皮、米糠、脱脂奶粉、麦芽糊精、蔗糖、甘油和淀粉中的至少一种。
上文中，所述育雏期可为第1-第28日龄，所述育成期可为第29日龄-出栏，如第29日龄-第42日龄、第29日龄-第46日龄、第29日龄-第46日龄。
在本发明的一个实施方式中，所述肉鸡为爱拔益加肉鸡或艾维茵肉鸡。
所述肉鸡普通日粮可含有能量饲料、蛋白质饲料、矿物质饲料和维生素饲料。
所述能量饲料可为常用的能量饲料，如可选自下述物质中的至少一种：谷实、糠麸、薯、草籽和树实等。所述蛋白质饲料可为常用的蛋白质饲料，如可选自下述物质中的至少一种：大豆粕、棉籽粕、玉米胚芽粕、肉骨粉、菜籽粕、花生粕和葵粕等。
所述矿物质饲料可选自石粉、碳酸氢钙、食盐、贝壳粉、骨粉、磷酸氢钙、碳酸钙、食盐、硫酸铜、硫酸亚铁、硫酸锰、碘化钾、氧化锌、***钠和氯化钴等。
所述维生素饲料可为常用的维生素饲料，如可选自下述物质中的至少一种：维生素A，维生素D3，维生素E，维生素K3，维生素B1g，维生素B2，维生素B6，维生素B12，烟酸，D-泛酸钙，生物素，氯化胆碱所述抗氧化剂可为维生素E(α-生育酚)或丁基羟基茴香醚(BHA)。
在本发明的一个实施方式中，所述肉鸡育雏期普通日粮和肉鸡育成期普通日粮的组成如表1。
实验证明，用含有本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂1日龄的肉鸡，14日龄时含有0.015％本发明微生态制剂的肉鸡日粮、含有0.025％本发明微生态制剂的肉鸡日粮和含有0.05％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的鸡体重显著高于对照组(P＜0.05)；21日龄时，含有0.025％本发明微生态制剂的肉鸡日粮和含有0.05％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的鸡体重显著高于对照组(P＜0.05)；42日龄时含有0.015％本发明微生态制剂的肉鸡日粮、含有0.025％本发明微生态制剂的肉鸡日粮和含有0.05％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的鸡体重显著高于对照组(P＜0.05)；含有0.02％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的鸡的出栏率、粗蛋白、钙和磷的表观消化率以及肉料比都显著高于对照组。用含有本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的肉鸡，其氨基酸总量高于对照组(用肉鸡普通日粮饲喂)，必需氨基酸的总量显著高于对照组，其中缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸含量显著高于对照组；用含有本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的肉鸡，鸡肉的粗蛋白含量、胸肌嫩度、胸肌弹性、鸡腿肌肉和胸肌肉的咀嚼性均显著高于对照组；用含有本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂的肉鸡，鸡肉的胆固醇含量、脂肪含量和滴水损失均显著低于对照组。用含有本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂1日龄的肉鸡，14、21、28日龄时，0.015％微生态制剂组(用含有0.015％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂)、0.025％微生态制剂组(用含有0.025％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂)和0.05％微生态制剂组(用含有0.05％本发明微生态制剂的肉鸡日粮饲喂)这三个试验组的胸腺、脾脏、法氏囊指数均显著高于对照组(用肉鸡普通日粮饲喂)；0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组这三个试验组的21日龄的红细胞C3b受体花环率和红细胞免疫复合物花环率均显著高于对照组；在42d的饲养周期中，肉鸡血清中总蛋白、α-淀粉酶和胆碱酯酶的含量逐渐升高，并且0.015％微生态制剂组的含量均显著高于对照组。说明本发明的微生态制剂可用于制备提高肉鸡生产性能和/或肉鸡鸡肉品质和/或肉鸡免疫功能的饲料。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均为常规材料或试剂，均可从商业途径得到。
下述实施例中的枯草芽孢杆菌RJGP16(邓军，李云锋，杨倩.枯草芽孢杆菌和猪源乳酸杆菌混合饲喂对仔猪肠绒毛发育的影响.畜牧兽医医学报》.2013年02期；李云锋，邓军，张锦华，等.枯草芽孢杆菌对仔猪小肠局部天然免疫及TLR表达的影响[J].畜牧兽医学报，2011，(04)：562-566.)，公众可从本申请的申请人获得该菌种，以重复本申请实验。
下述实施例中的酿酒酵母CICC1562购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(China Center of Industrial Culture Collection，CICC)。
下述实施例中的植物乳杆菌CICC22696购自中国工业微生物菌种保藏管理中心(China Center of Industrial Culture Collection，CICC)。
下述实施例中的肉鸡普通日粮的配方如表1所示。
表1、肉鸡普通日粮组成及配比
表1中，每千克预混料含：CuSO4·5H2O0.64g，FeSO4·H2O516g，ZnSO4·H2O4g，MnSO4·H2O318g，Na2SeO30.016g，VA16IU，VD3415IU，VE400IU，VK90mg，VB160mg，VB2200mg，烟酸550mg，泛酸钙220mg，叶酸12mg，其余为石粉。
表1中的“％”为质量百分含量。
实施例1、肉鸡用复合菌剂的制备
本实施例涉及两种肉鸡用复合菌剂，分别为肉鸡用复合菌剂A和肉鸡用复合菌剂B。
肉鸡用复合菌剂A是将枯草芽孢杆菌RJGP16的液体菌种、酿酒酵母CICC1562的液体菌种和植物乳杆菌CICC22696的液体菌种均用无菌水分别稀释至108cfu/ml后按照1∶3∶1的集落形成单位数目比混合得到的混合物。
肉鸡用复合菌剂B是将枯草芽孢杆菌RJGP16的液体菌种、酿酒酵母CICC1562的液体菌种和植物乳杆菌CICC22696的液体菌种均用无菌水分别稀释至108cfu/ml后按照1∶1∶1的集落形成单位数目比混合得到的混合物。
其中，枯草芽孢杆菌RJGP16的液体菌种是用发酵培养基A在30-32℃培养18-24h得到的培养物(培养容器内的所有物质)。具体制备方法如下：将活化好的枯草芽孢杆菌RJGP16接种于装有100ml的发酵培养基A的500ml三角瓶中，30-32℃、180rpm(旋转半径20mm)振荡培养20小时，三角瓶内的所有物质(培养物)即为枯草芽孢杆菌RJGP16的液体菌种。该枯草芽孢杆菌RJGP16的液体菌种的枯草芽孢杆菌RJGP16含量为2×108cfu/ml。
酿酒酵母CICC1562的液体菌种是用发酵培养基A在28-30℃培养32-40h得到的培养物(培养容器内的所有物质)。具体制备方法如下：将活化好的酿酒酵母CICC1562接种于装有100ml的发酵培养基A的500ml三角瓶中，28-30℃、180rpm(旋转半径20mm)振荡培养36小时，三角瓶内的所有物质(培养物)即为酿酒酵母CICC1562的液体菌种。该酿酒酵母CICC1562的液体菌种的酿酒酵母CICC1562含量为1.5×108cfu/ml。
植物乳杆菌CICC22696的液体菌种是用发酵培养基A在35-37℃培养46-54h得到的培养物(培养容器内的所有物质)。具体制备方法如下：将活化好的植物乳杆菌CICC22696接种于装有100ml的发酵培养基A的500ml三角瓶中，35-37℃、静置培养48小时，三角瓶内的所有物质(培养物)即为植物乳杆菌CICC22696的液体菌种。该植物乳杆菌CICC22696的液体菌种的植物乳杆菌CICC22696含量为4.5×108cfu/ml。
每升发酵培养基A按照如下方法配制：10g葡萄糖，10g蛋白胨，1.5g KH2PO4、0.80g MnSO4、1.00g MgSO4、1.0g NaCl，用蒸馏水定容至1000mL，pH值6.5；121℃条件下灭菌20分钟。
实施例2、肉鸡用微生态制剂的制备
本实施例提供了两种肉鸡用微生态制剂，分别称为肉鸡用微生态制剂A和肉鸡用微生态制剂B。
肉鸡用微生态制剂A是采用实施例1的发酵培养基A培养实施例1的肉鸡用复合菌剂A得到的培养物。具体制备方法如下：将实施例1的肉鸡用复合菌剂A按照6％(体积比)的接种量(接入的复合菌剂的体积与发酵培养基的体积比)接入装有200L实施例1的发酵培养基A的500L发酵罐中，在34℃，通气量为600L/h，搅拌转速为150rpm的条件下培养42小时，收集发酵罐内所有的培养得到的物质(发酵液)，加入稻壳粉在50℃进行干燥，得到肉鸡用微生态制剂A。该肉鸡用微生态制剂A中的总菌体含量为6×109cfu/g。其中，稻壳粉事先经过微粉化处理(90％的粉体粒度小于100μm，平均粒径小于50μm，所述平均粒径为50％粉体粒径)。
肉鸡用微生态制剂B是采用实施例1的发酵培养基A培养实施例1的肉鸡用复合菌剂B得到的培养物。具体制备方法如下：将实施例1的肉鸡用复合菌剂B按照6％(体积比)的接种量(接入的复合菌剂的体积与发酵培养基的体积比)接入装有200L实施例1的发酵培养基A的500L发酵罐中，在34℃，通气量为600L/h，搅拌转速为150rpm的条件下培养42小时，收集发酵罐内所有的培养得到的物质(发酵液)，加入稻壳粉在50℃进行干燥，得到肉鸡用微生态制剂B。该肉鸡用微生态制剂B中的总菌体含量为4×109cfu/g。其中，稻壳粉事先经过微粉化处理(90％的粉体粒度小于100μm，平均粒径小于50μm，所述平均粒径为50％粉体粒径)。
实施例3、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A提高肉鸡体重
1.1试验动物
选择体重为50±5克的爱拔益加——快大型白羽肉鸡的1日龄健雏12000只，随机均分为4个处理组，即对照组、0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组。每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.015％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.025％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.05％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为四种，肉鸡育成期普通日粮、0.015％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、0.025％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、0.05％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；0.015％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.015％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.025％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.025％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.05％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.05％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮。
1.3试验方法
试验期42天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂，在第29-42日龄用表1的肉鸡育成期普通日粮进行饲喂；0.015％微生态制剂组在第1-28日龄用0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用0.015％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；0.025％微生态制剂组在第1-28日龄用0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用0.025％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；0.05％微生态制剂组在第1-28日龄用0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用0.05％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂。
测定试验期间肉鸡的体重。测定方法为：分别于7日龄、14日龄、21日龄、28日龄、42日龄分别称重一次，清晨禁食禁水称重。称重时，每个重复随机抽取100只鸡，分别记录。
2数据统计
试验所有数据采用SPSS12.0(SPSS Inc.，USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。
3试验结果
不同添加量肉鸡用微生态制剂对肉鸡增重的影响见表2。在饲养过程中，0.025％微生态制剂处理组的肉鸡体重均保持高于其他处理的水平。7日龄时，肉鸡体重以0.025％微生态制剂处理组最大，高于对照组，但差异不显著(P＞0.05)；14日龄时，0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组、0.05％微生态制剂组，肉鸡活重显著高于对照组(P＜0.05)；21日龄时，0.025％微生态制剂组、0.05％用微生态制剂组与对照组相比，肉鸡活重显著高于对照组(P＜0.05)；28日龄时，0.025％微生态制剂组的肉鸡活重高于对照组，但差异不显著(P＞0.05)；35日龄，0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组表现出肉鸡活重较高的趋势，但与对照组间差异不显著(P＞0.05)；42日龄时，所有添加肉鸡用微生态制剂组的肉鸡活重均显著高于对照组(P＜0.05)，其中以0.025％微生态制剂组添加效果最为明显。综合分析，本发明的肉鸡用微生态制剂对提高肉鸡活重具有良好的促进作用，其中以0.025％添加量的作用效果最好。
表2肉鸡用微生态制剂对肉鸡活重的影响(g)
注：表中同行的英文字母表示差异显著程度，相同字母的处理间在0.05水平无显著差异，字母不同的处理间在0.05水平有显著差异。
实施例4、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A和肉鸡用微生态制剂B提高肉鸡生产性能
1.1试验动物
选择体重为50±5克艾维茵-白羽肉鸡的1日龄健雏9000只，随机均分为三组：对照组、肉鸡用微生态制剂A组、肉鸡用微生态制剂B组，每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为肉鸡育成期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、肉鸡用微生态制剂B育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
1.3试验方法
试验期46天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂，在第29-46日龄用表1的肉鸡育成期普通日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂A组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-46日龄用肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂B组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮进行饲喂，在第29-46日龄用肉鸡用微生态制剂B育成期日粮进行饲喂。
测定试验期间肉鸡的死亡率、出栏率、采食量以及料肉比。于第36日龄至42日龄采集肉鸡粪样和日粮样品，以内源指示剂法(4mol/L盐酸不溶灰分)测定肉鸡的营养物质表观消化率。日粮和粪样中的粗蛋白(CP)含量采用GB/T6432-1994饲料中粗蛋白测定方法，钙含量采用NY/T1944-2010饲料中钙的测定原子吸收分光光谱法，磷含量采用GB/T6437-2002饲料中总磷的测定分光光度法。
计算公式如下：
死亡率(％)＝死亡鸡只数(只)/入舍鸡只数(只)×100；
出栏率(％)＝出栏鸡只数(只)/入舍鸡只数(只)×100：
采食量(kg/只)＝饲料消耗量(kg)/出栏数(只)；
料肉比＝采食量(kg)/出栏重(kg)；
日粮营养物质表观消化率(％)＝[1-(b/a)×(c/d)]×100。其中，a为日粮中某营养成分的含量(％)；b为粪便中某营养成分的含量(％)；c为日粮中盐酸不溶灰分的含量(％)；d为粪便中盐酸不溶灰分的含量(％)。
2数据统计
试验所有数据采用SPSS12.0(SPSS Inc.，USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。
3试验结果
表3为肉鸡用微生态制剂对肉鸡出栏均重和料肉比的影响。在出栏时，对照组肉鸡均重为2.55kg，而肉鸡用微生态制剂A组出栏均重为2.61kg，肉鸡用微生态制剂A组比对照组高0.06kg，显著高于对照组(P＜0.05)，表明实施例2的肉鸡用微生态制剂A有利于提高肉鸡的出栏重，肉鸡用微生态制剂B组比对照组出栏中略高，但差异不显著(P＞0.05)。由表3中数据可知，在试验过程中，对照组肉鸡的料肉比最高，为1.98；而肉鸡用微生态制剂A组肉鸡的肉料比仅为1.88，显著低于对照组(P＜0.05)；肉鸡用微生态制剂B组的料肉比介于肉鸡用微生态制剂A组与对照组之间，具有降低料肉比的趋势，但与对照组间差异不显著(P＞0.05)。说明使用肉鸡用微生态制剂A能够降低肉鸡料肉比，使用肉鸡用微生态制剂B组具有降低料肉比的趋势，但效果不显著。
表3肉鸡用微生态制剂对肉鸡料肉比的影响
| 处理 | 出栏均重(kg) | 料肉比 |
| 对照组 | 2.55b | 1.98a |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 2.61a | 1.88b |
| 肉鸡用微生态制剂B组 | 2.58ab | 1.94ab |
注：同列标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
肉鸡用微生态制剂对肉鸡死亡率和出栏率的影响见表4。由表中数据可知，对照组死亡率为14.18％，而肉鸡用微生态制剂A组死亡率显著低于对照组(P＜0.05)，仅为9.50％，肉鸡用微生态制剂A组的出栏率达到90％以上，显著高于对照组(P＜0.05)；肉鸡用微生态制剂B组的死亡率和出栏率也显著优于对照组(P＜0.05)，但改善效果不及微生态制剂A组。说明使用肉鸡用微生态制剂A和B能够降低肉鸡死亡率，提高出栏率，其中肉鸡用微生态制剂A优于肉鸡用微生态制剂B。
表4肉鸡用微生态制剂对肉鸡死亡率的影响
| 处理 | 死亡率(％) | 出栏率(％) |
| 对照组 | 14.18a | 85.82b |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 9.50b | 90.50a |
| 肉鸡用微生态制剂B组 | 10.19b | 89.81a |
注：同列标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
表5所示为肉鸡用微生态制剂对肉鸡日粮表观消化率的影响。添加肉鸡用微生态制剂A、B后，蛋白质的表观消化率分别由51.70％提高到64.04％和60.77％，显著高于对照组(P＜0.05)，肉鸡用微生态制剂A组表现出消化率更高的趋势，但两种微生态制剂处理组间无显著差异(P＞0.05)；肉鸡用微生态制剂A组的钙、磷消化率亦显著高于对照组(P＜0.05)；肉鸡用微生态制剂B组的钙、磷消化率与对照组相比均具有改善趋势，其中磷消化率显著高于对照组(P＜0.05)，而钙消化率与对照组无显著差异(P＞0.05)：肉鸡用微生态制剂B组改善钙磷消化率的效果不及肉鸡用微生态制剂A组。说明本发明的肉鸡用微生态制剂可大幅提高肉鸡粗蛋白、钙、磷的表观消化率。
表5肉鸡用微生态制剂对肉鸡日粮表观消化率的影响
注：同列标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
实施例5、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A和肉鸡用微生态制剂B改善肉鸡肌肉品质
1.1试验动物
选择体重为50±5克艾维茵-白羽肉鸡的1日龄健雏9000只，随机均分为三组：对照组、肉鸡用微生态制剂A组、肉鸡用微生态制剂B组，每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为肉鸡育成期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、肉鸡用微生态制剂B育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
1.3试验方法
试验期47天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂，在第29-47日龄用表1的肉鸡育成期普通日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂A组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-47日龄用肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂B组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮进行饲喂，在第29-47日龄用肉鸡用微生态制剂B育成期日粮进行饲喂。
试验期结束前一天，每重复选取体重相近的鸡3只，颈部放血屠宰，宰前禁食12h。测定鸡全身肌肉中胆固醇含量、粗蛋白含量、氨基酸含量、脂肪含量、水分含量、肌肉滴水损失、pH；测定胸肌的肉色、嫩度；利用质构仪测定鸡翅、鸡腿和鸡胸部位肌肉的弹性、粘性、内聚性、咀嚼性。
1.3.1胆固醇含量按照GB/T5009.128-2003《食品中胆固醇的测定》标准进行测定。
1.3.2粗蛋白质含量测定
称取肉样，然后用组织捣碎机捣碎，放入烘箱恒温烘干。在消解管中加入2g肉样、2.5g抗氧化剂和10mL浓硫酸，然后在高温消解炉上进行样品消化。应用凯氏定氮仪进行测定，计算公式为：
粗蛋白％=(A-A0)×0.014×6.25×0.1612/W×100％
A0为空白对照，W为肉样重(g)，0.1612为硫酸浓度，A为机读数。
1.3.3粗脂肪含量测定
取肉样，然后用组织捣碎机捣碎混匀，在烘箱中恒温烘干，在滤纸筒内放置1g样品；烘干滤纸筒，直至称量为恒重，在脂肪测定仪上进行粗脂肪的测定。
1.3.4水分含量测定
取肉样，捣碎后称重G，放入水分皿内称重为W，然后放入烘箱，在250℃下烘干4h，放入干燥皿，干燥冷却30min，然后再称重，记录为A，根据如下公式计算水分含量：水分含量=(W-A/G)×100％。
1.3.5肉色测定
取无筋踺和脂肪的新鲜肉样25g和水50mL，立即在组织捣碎机里捣碎打浆，取其全部放入50mL离心管中，然后进行第一次离心，取上清液分别装入2-3个小离心管中进行第二次离心沉淀，离心条件为在3000r/min下离心10min，当取出离心管后，用滤纸除去液面脂肪，然后将上清液置于比色杯中(光径1cm)，在540nm波长条件下用紫外分光光度计测定光密度值。
1.3.6嫩度的测定
在100mL不锈钢匀浆杯中放入10g肉样，同时加入等量的冷的蔗糖(0.24mol/L)和氯化钾(0.2mol/L)混合液50ml，静置5min，然后用匀浆机将样品全速搅切40s。用孔径为250μm并且知道重量的滤网过滤，过滤完毕后，滤网及残渣用吸水纸吸干，然后称重。计算不能通过滤网的肉样碎段重量(大于250μm)，然后换算成每100g肉样中所含有的残渣重量，把这一残渣重量称为肌肉破碎指数(FI)。FI能够反映肌肉嫩度，FI值越小，表明肌肉越细嫩。
1.3.7肌肉滴水损失的测定
取样品称重，重量为W1，然后把样品置于封口塑料袋中，在4℃冰箱中放置24h，取出后用滤纸擦去肉表面水分，然后进行第二次称重，重量为w2。用如下公式进行计算：肌肉滴水损失(％)=(W1-W2)/W1×100％。
1.3.8氨基酸含量测定
按照GB/T5009.124-2003《食品中氨基酸的测定》标准进行测定
2数据统计
试验所有数据采用SPSS12.0(SPSS Inc.，USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。
3试验结果
3.1改善鸡肌肉的营养成分
结果如表6所示，肉鸡用微生态制剂A组肌肉的胆固醇含量和粗脂肪含量显著低于对照组，粗蛋白含量显著高于对照组(P＜0.05)。肉鸡用微生态制剂B组的胆固醇含量和粗脂肪含量低于对照组，但与对照组无显著差异(P＞0.05)；粗蛋白含量显著高于对照组(P＜0.05)，与肉鸡用微生态制剂A组无显著差异(P＞0.05)。说明饲喂本发明微生态制剂可以有效的改善肉鸡肉质的营养成分。
表6肉鸡用微生态制剂对肌肉营养成分的影响
| 检测指标 | 对照组 | 肉鸡用微生态制剂A组 | 肉鸡用微生态制剂B组 |
| 胆固醇(mg/100g) | 79.10±2.89a | 76.70±2.71b | 77.81±2.54ab |
| 粗蛋白(％) | 24.71±0.21b | 26.72±0.54a | 26.39±0.40a |
| 粗脂肪(％) | 4.46±0.19a | 3.78±0.15b | 3.99±0.21ab |
注：同行标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
如表7所示，肉鸡用微生态制剂A组的氨基酸总量高于对照组，必需氨基酸的总量显著高于对照组(P＜0.05)，其中缬氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、胱氨酸、酪氨酸、脯氨酸含量显著高于对照组(P＜0.05)。肉鸡用微生态制剂B组也具有与A组类似的改善效果，氨基酸总量和必需氨基酸总量均高于对照组，其中必需氨基酸总量显著高于对照组(P＜0.05)；多种氨基酸含量表现出高于对照组的趋势，其中蛋氨酸、缬氨酸、胱氨酸和酪氨酸的含量显著高于对照组(P＜0.05)。缬氨酸含量的增加，可以使血浆中丙氨酸升高，并且提高动物机体免疫机能；蛋氨酸含量的增加，可以提高机体免疫力、降低日粮粗蛋白质水平，同时在一定的程度上提高生产性能；赖氨酸的升高，可以提高胃液分泌功效，起到增进食欲、促进生长与发育的作用，提高钙的吸收及其在体内的积累，加速骨骼生长。
表7肉鸡用微生态制剂对肌肉氨基酸含量的影响
注：同行标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
3.2改善鸡肌肉的嫩度和系水能力
结果如表8和9所示，各组肌肉的pH值、水分和肉色差异不显著；对于胸肌的嫩度来说，肉鸡用微生态制剂A组和鸡用微生态制剂B组的胸肌嫩度显著高于对照组(P＜0.05)；肉鸡用微生态制剂A组和B组胸肌的滴水损失显著低于对照组(P＜0.05)，，说明肉鸡用微生态制剂A组和B组具有较好的系水能力。此外，使用微生态制剂对鸡肉pH值、水分和肉色也表现出一定的改善作用，但与对照组间差异不显著(P＞0.05)。综上所述，饲喂本发明肉鸡用微生态制剂可以有效的改善鸡肉的品质。
表8肉鸡用微生态制剂对肌肉的pH、水分和滴水损失的影响
| 处理 | pH值 | 水分(％) | 滴水损失(％) |
| 对照组 | 6.34±0.05a | 74.02±0.88a | 2.47±0.48a |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 6.38±0.07a | 74.12±0.39a | 2.21±0.22b |
| 肉鸡用微生态制剂B组 | 6.39±0.09a | 74.05±0.67a | 2.33±0.42b |
注：同列标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
表9肉鸡用微生态制剂对胸肌嫩度和肉色的影响
| 处理 | 嫩度(g/100g) | 肉色 |
| 对照组 | 17.45±0.05b | 1.11±0.14a |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 18.89±0.14a | 1.19±0.16a |
| 肉鸡用微生态制剂B组 | 18.80±0.21a | 1.17±0.07a |
注：同列标注不同字母为差异显著(P＜0.05)。
3.3改善鸡胸肌弹性
如表10所示，肉鸡用微生态制剂A组的鸡翅和鸡腿肌肉的弹性与对照组差异不显著(P＞0.05)，对于鸡胸的弹性来说，肉鸡用微生态制剂A组鸡胸的弹性显著高于对照组(P＜0.05)，说明饲喂本发明肉鸡用微生态制剂可以有效的改善鸡胸肉质的弹性。
表10肉鸡用微生态制剂对鸡肉弹性的影响
| 鸡翅 | 鸡腿 | 鸡胸 |
| 对照组 | 1.65±0.07 | 1.81±0.06 | 2.03±0.04 |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 1.71±0.24 | 2.43±0.24 | 2.77±0.08* |
注：表中标注“*”表示差异显著(P＜0.05)。
3.4对鸡肉粘性的影响
如表11所示，肉鸡用微生态制剂A组的鸡翅、鸡腿和鸡胸肌肉的粘性与对照组差异不显著(P＞0.05)。
表11肉鸡用微生态制剂对鸡肉粘性的影响
| 鸡翅 | 鸡腿 | 鸡胸 | |
| 对照组 | 0.27±0.02 | 0.24±0.49 | 0.23±0.49 |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 0.38±0.03 | 0.18±0.01 | 0.28±0.06 |
3.5对鸡肉内聚性的影响
如表12所示，肉鸡用微生态制剂A组的鸡翅、鸡腿和鸡胸肌肉的内聚性与对照组差异不显著(P＞0.05)。
表12肉鸡用微生态制剂对鸡肉内聚性的影响
| 鸡翅 | 鸡腿 | 鸡胸 | |
| 对照组 | 0.45±0.03 | 0.58±0.02 | 0.57±0.04 |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 0.45±0.03 | 0.58±0.05 | 0.59±0.02 |
3.6改善鸡腿和鸡胸肌肉的咀嚼性
如表13所示，肉鸡用微生态制剂A组的鸡翅肌肉的咀嚼性与对照组差异不显著(P＞0.05)，肉鸡用微生态制剂A组的鸡腿和鸡胸肌肉的咀嚼性的咀嚼性显著高于对照组(P＜0.05)。说明饲喂本发明肉鸡用微生态制剂可以有效的提高鸡腿和鸡胸肉质的咀嚼性。
表13肉鸡用微生态制剂对鸡肉咀嚼件的影响
| 鸡翅 | 鸡腿 | 鸡胸 | |
| 对照组 | 2.45±0.32 | 1.76±0.47 | 2.61±0.36 |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 2.68±0.31 | 4.02±0.97* | 5.58±0.39* |
注：表中标注“*”差异显著(P＜0.05)
实施例6、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A提高肉鸡免疫器官指数和红细胞免疫功能
1.1试验动物
选择体重为50±5克的爱拔益加——快大型白羽肉鸡的1日龄健雏12000只，随机均分为4个处理组，即对照组、0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组。每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.015％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.025％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.05％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为四种，肉鸡育成期普通日粮、0.015％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、0.025％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、0.05％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；0.015％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.015％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.025％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.025％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；0.05％肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.05％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮。
1.3试验方法
试验期28天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂；0.015％微生态制剂组在第1-28日龄用0.015％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂；0.025％微生态制剂组在第1-28日龄用0.025％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂；0.05％微生态制剂组在第1-28日龄用0.05％肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂。
分别于14日龄、21日龄、28日龄测定肉鸡的脾脏、胸腺和法氏囊指数。测定方法为：每个重复随机抽取20只鸡，早晨空腹称重，屠宰后摘取脾脏、法氏囊以及两侧胸腺，剔除脂肪后用电子天平称重，计算免疫器官指数。免疫器官指数=免疫器官重(mg)/体重(g)。按照如下方法测定21日龄肉鸡红细胞C3b受体花环(E-C3bR)率和红细胞免疫复合物花环(E-ICR)率：每组每个重复随机抽取6只鸡，采血抗凝，离心取红细胞，配成1.25×107个/mL的红细胞悬液，作为待测红细胞悬液。将酵母菌用生理盐水洗涤3次后，配成1％悬液，置水浴内煮沸20min，充分混匀。用二层定性滤纸过滤，除去小凝块，在低倍镜下呈单个酵母菌细胞分散状态。加等量小白鼠血清，混匀后置37℃水浴致敏15min。用生理盐水洗涤一次，2500r/min离心10min。去尽上清，用生理盐水重混悬。计数后配成1×108/ml补体(C3)致敏的酵母菌悬液。按照如下步骤进行测定：
(1)取两支小试管，每管加待测红细胞悬液100ul，第一管再加补体致敏酵母菌悬液100ul，第二管加未致敏的酵母菌悬液100ul，摇匀放37℃水浴30min；
(2)取出用手腕轻轻摇匀，加生理盐水200ul；
(3)混匀后，再加0.25％戊二醛75μl并轻轻混匀；
(4)分别取1/3量水平涂片、吹干、加甲醇固定；
(5)用瑞氏法染色，油镜下计数。涂片染色后RBC为红色，酵母菌为蓝色。红细胞上粘附2个或2个以上酵母菌者为花环。分别计数200个红细胞，算出花环阳性细胞百分率。第一管为RBC-C3b受体花环率，第二管为RBC-IC花环率。
花环形成百分率(％)=(红细胞花环数/200)×100。
2数据统计
试验所有数据采用SPSS12.0(SPSS Inc.，USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。
3试验结果
结果如表14所示，14、21、28日龄时，0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组这三个试验组与对照组比较，胸腺、脾脏、法氏囊指数均具有显著差异(P＜0.05)，在14日龄时，0.015％微生态制剂组、0.025％微生态制剂组和0.05％微生态制剂组这三个试验组与对照组比较，脾脏和胸腺指数达到极显著差异(P＜0.01)。表明肉鸡用微生态制剂对肉鸡脾脏、法氏囊和胸腺的发育具有促进作用。
表14肉鸡用微生态制剂对肉鸡免疫器官指数的影响(mg/g)
注：同行数据标注不同小写字母者差异显著(P＜0.05)，标注不同大写字母者差异极显著(P＜0.01)。
如表15所示，微生态制剂处理组的(E-C3bR)率、(E-ICR)率都大于对照组，表明不同剂量的肉鸡用微生态制剂对鸡红细胞免疫功能都有促进作用。其中，0.025％微生态制剂组的效果最好，其它试验组次之。在(E-C3bR)中，0.015％微生态制剂组、0.05％微生态制剂组与对照组相比差异显著(P＜0.05)，但二者之间不具有显著差异(P＞0.05)；而0.025％微生态制剂组与对照组、0.015％微生态制剂组、0.05％微生态制剂组间均存在极显著差异(P＜0.01)。在(E-ICR)中，0.025％微生态制剂组与对照组、其它试验组间亦存在极显著差异(P＜0.01)，0.05％微生态制剂组与对照组存在极显著差异(P＜0.01)。
表15肉鸡用微生态制剂对21日龄肉鸡红细胞花环率的测定结果(％)
注：同列数据标注不同小写字母者差异显著(P＜0.05)，标注不同大写字母者差异极显著(P＜0.01)。
实施例7、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A和肉鸡用微生态制剂B提高肉鸡肉鸡免疫器官指数
1.1试验动物
选择体重为50±5克艾维茵-白羽肉鸡的1日龄健雏9000只，随机均分为三组：对照组、肉鸡用微生态制剂A组、肉鸡用微生态制剂B组，每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为肉鸡育成期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、肉鸡用微生态制剂B育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
1.3试验方法
试验期42天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂，在第29-42日龄用表1的肉鸡育成期普通日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂A组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂B组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用肉鸡用微生态制剂B育成期日粮进行饲喂。
42日龄测定肉鸡的脾脏、胸腺和法氏囊指数。实验方法同实施例6。
2数据统计
试验所有数据采用SPSS12.0(SPSS Inc.，USA)统计软件的独立样本t检验处理统计。
3试验结果
如表16所示，肉鸡用微生态制剂A组的鸡胸腺和脾脏免疫器官指数显著高于对照组(P＜0.05)，法氏囊免疫器官指数差异不显著(P＞0.05)，肉鸡用微生态制剂B组的鸡胸腺和法氏囊免疫器官指数显著高于对照组(P＜0.05)，脾脏免疫器官指数差异不显著(P＞0.05)。说明饲喂微生态制剂对肉鸡脾脏、法氏囊和胸腺的发育均有促进作用，从而提高肉鸡的免疫力。
表16肉鸡用微生态制剂对肉鸡免疫器官指数的影响(mg/g)
| 处理 | 胸腺指数 | 脾脏指数 | 法氏囊指数 |
| 对照组 | 2.55±0.52c | 0.72±0.12b | 0.46±0.14b |
| 肉鸡用微生态制剂A组 | 3.76±0.76a | 1.16±0.35a | 0.45±0.01b |
| 肉鸡用微生态制剂B组 | 3.01±0.60b | 0.78±0.24b | 0.58±0.12a |
注：同列数据标注不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
实施例8、用实施例2的肉鸡用微生态制剂A和肉鸡用微生态制剂B提高肉鸡免疫功能
1.1试验动物
选择体重为50±5克艾维茵-白羽肉鸡的1日龄健雏9000只，随机均分为三组：对照组、肉鸡用微生态制剂A组、肉鸡用微生态制剂B组，每个处理组3个重复，每个重复1000只鸡。
1.2日粮
肉鸡育雏期日粮分为肉鸡育雏期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮、肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮。其中，肉鸡育雏期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮是在表1的肉鸡育雏期普通日粮中添加是表1的肉鸡育雏期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
肉鸡育成期日粮分为肉鸡育成期普通日粮、肉鸡用微生态制剂A育成期日粮、肉鸡用微生态制剂B育成期日粮。其中，肉鸡育成期普通日粮如表1所示；肉鸡用微生态制剂A育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂A得到的日粮；肉鸡用微生态制剂B育成期日粮是在表1的肉鸡育成期普通日粮中添加是表1的肉鸡育成期普通日粮质量的0.02％的实施例2的肉鸡用微生态制剂B得到的日粮。
1.3试验方法
试验期42天，试验期间所有肉鸡自由采食和饮水，按照常规免疫程序进行免疫，除饲喂的日粮不同外，其它饲养条件完全相同。其中，对照组在第1-28日龄用表1的肉鸡育雏期普通日粮进行饲喂，在第29-42日龄用表1的肉鸡育成期普通日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂A组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂A育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用肉鸡用微生态制剂A育成期日粮进行饲喂；肉鸡用微生态制剂B组在第1-28日龄用肉鸡用微生态制剂B育雏期日粮进行饲喂，在第29-42日龄用肉鸡用微生态制剂B育成期日粮进行饲喂。
分别于7日龄、14日龄、21日龄、28日龄、35日龄和42日龄测定肉鸡血液总蛋白含量、α-淀粉酶含量和胆碱酯酶含量。测定方法为：每组随机抽取20只鸡，采血前禁水禁食12h，翅静脉采血6mL，分离血清于-20℃冰箱保存备用，采用如下试剂盒分别测定血清中的总蛋白、胆碱酯酶和α-淀粉酶的含量：总蛋白测定试剂盒(双缩脲法)，上海荣盛生物技术有限公司；胆碱酯酶试剂盒-CHE，北京市化康泰临床试剂有限公司；淀粉酶测定试剂盒，江西特康科技有限公司。
3试验结果
结果如表5所示，表明添加微生态制剂后，在42d的饲养周期中，肉鸡血清中总蛋白、α-淀粉酶和胆碱酯酶的含量逐渐升高，并且肉鸡用微生态制剂A组的含量均显著高于对照组(P＜0.05)；肉鸡用微生态制剂B组的肉鸡血清中，总蛋白、α-淀粉酶和胆碱酯酶的含量表现出高于对照组的趋势，且在饲养早期改善效果较为显著，饲养28天后，与对照组间差异不显著(P＞0.05)；总体来看，肉鸡用微生物制剂A组对肉鸡血液免疫指标的改善效果优于微生态制剂B组。说明本发明的肉鸡用微生态制剂可提高肉鸡的血液免疫机能。
表17肉鸡用微生态制剂对肉鸡血液生化指标的影响
注：同行、列数据标注不同小写字母者差异显著(P＜0.05)。
Claims (10)
1.微生态制剂，它的活性成分是用发酵培养基培养复合菌剂得到的培养物；所述复合菌剂的活性成分由枯草芽孢杆菌、酿酒酵母和植物乳杆菌组成。
2.根据权利要求1所述的微生态制剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌RJGP16、所述酿酒酵母为酿酒酵母CICC1562和所述植物乳杆菌为植物乳杆菌CICC22696。
3.根据权利要求1或2所述的微生态制剂，其特征在于：所述复合菌剂的活性成分中，所述枯草芽孢杆菌、所述酿酒酵母和所述植物乳杆菌的集落形成单位数目比为1∶1-3∶1。
4.根据权利要求1-3中任一所述的微生态制剂，其特征在于：所述复合菌剂为将所述枯草芽孢杆菌的液体菌种、所述酿酒酵母的液体菌种和所述植物乳杆菌的液体菌种按照1∶1-3∶1的集落形成单位数目比混合得到的混合物。
5.根据权利要求4所述的微生态制剂，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌的液体菌种是用发酵培养基在30-32℃培养18-24h得到的培养物；
所述酿酒酵母的液体菌种是用所述发酵培养基在28-30℃培养32-40h得到的培养物；
所述植物乳杆菌的液体菌种是用所述发酵培养基在35-37℃培养46-54h得到的培养物。
6.根据权利要求1-5中任一所述的微生态制剂，其特征在于：所述微生态制剂的菌体含量为5×108-8×109cfu/g。
7.根据权利要求1-6中任一所述的微生态制剂，其特征在于：所述用发酵培养基培养复合菌剂采用的培养条件为：培养温度34-36℃，培养时间42-48小时，所述复合菌剂的接种量为6％(体积比)。
8.权利要求1-7中任一所述的微生态制剂在制备提高肉鸡生产性能和/或提高肉鸡鸡肉品质和/或提高肉鸡免疫功能的产品中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：
所述提高肉鸡鸡肉品质为下述A1)-A15)中的全部或部分：
A1)提高肉鸡鸡肉的缬氨酸含量；
A2)提高肉鸡鸡肉的蛋氨酸含量；
A3)提高肉鸡鸡肉的赖氨酸含量；
A4)提高肉鸡鸡肉的苯丙氨酸含量；
A5)提高肉鸡鸡肉的胱氨酸含量；
A6)提高肉鸡鸡肉的酪氨酸含量；
A7)提高肉鸡鸡肉的脯氨酸含量；
A8)提高肉鸡鸡肉的粗蛋白含量；
A9)降低肉鸡鸡肉的胆固醇含量；
A10)降低肉鸡鸡肉的脂肪含量；
A11)降低肉鸡鸡肉的滴水损失；
A12)提高肉鸡的胸肌嫩度；
A13)提高肉鸡的胸肌弹性；
A14)提高肉鸡鸡腿肌肉的咀嚼性；
A15)提高肉鸡鸡胸肌肉的咀嚼性；
所述生产性能为下述B1)-B6)中的全部、或五种、或四种、或三种、或两种、或一种：
B1)出栏率；
B2)肉料比；
B3)蛋白质的表观消化率；
B4)钙的表观消化率；
B5)磷的表观消化率；
B6)体重；
所述提高肉鸡免疫功能体现为下述C1)-C8)中的全部或部分：
C1)提高肉鸡胸腺指数；
C2)提高肉鸡脾脏指数；
C3)提高肉鸡法氏囊指数；
C4)提高肉鸡红细胞C3b受体花环率；
C5)提高肉鸡红细胞免疫复合物花环率；
C6)提高肉鸡血清中的总蛋白含量；
C7)提高肉鸡血清中的胆碱酯酶含量；
C8)提高肉鸡血清中的α-淀粉酶的含量。
10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于：所述提高肉鸡生产性能和/或肉鸡鸡肉品质和/或肉鸡免疫性能的产品为含有权利要求1-6中任一所述的微生态制剂的肉鸡饲料。
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