CN103445971A - 促进毛发生长的组成物及方法 - Google Patents
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Abstract
本发明是关于一种用于促进毛发生长的组成物和方法。本发明组成物包含类黄酮衍生物和腺苷化合物,特别是包含儿茶素衍生物和腺苷,作为活性成份,以及一化妆品或药学上可接受的载剂。在本发明的一较佳实施例中,本发明组成物更包含一种来自于毛囊毛乳突细胞培养物的上清液。
Description
【技术领域】
本发明是关于一种用于促进毛发生长的组成物和方法。本发明组成物包含类黄酮衍生物和腺苷化合物,特别是包含儿茶素衍生物和腺苷,作为活性成份,以及一化妆品或药学上可接受的载剂。在本发明的一较佳实施例中,本发明组成物更包含一种来自于毛囊毛乳突细胞培养物的上清液。
【背景技术】
落发(hair loss)在临床上的表现是秃发或脱毛。这样的症状虽然未必会导身体上的实质不适,但可能因个人美观上的要求而造成心理上的妨碍。在临床上,服用药物、皮肤外伤、皮肤病变、营养障碍,代谢障碍、内分泌异常、发高烧等皆可能造成落发。
毛发一般是由毛囊所制造。人类的毛囊位于皮肤表皮层与真皮层之间,底部有血管提供养份,并与竖毛肌相连。正常时,毛发产生的过程会不断循环,称之为毛发生长周期(hair cycle),大致分为生长期(Anagen)、退化期(Catagen)和休止期(Telogen)。目前已知,毛囊毛乳突细胞控制毛囊发育和毛发生长周期。处于生长期的毛囊具有发育完备的血管组织,有利于制造发干。当毛囊进入退化期末期,发干停止生长,而基底细胞大量分化淍亡,毛囊毛乳突细胞变小。在休止期,则会观察到毛囊周边血管组织消失。
利用外科显微手术可以从毛囊切除纯化毛囊毛乳突(dermal papilla),以供体外培养。体外培养所产生的毛囊毛乳突细胞呈现多边形且发生相互堆迭的现 象,是研究毛发生物学非常重要的体外生物模型。
儿茶素(catechins)是一种多酚类抗氧化剂,在化学结构上归属于类黄酮(flavonoids)中的黄烷酮(flavanols)类化合物,富含于绿茶叶片中。日本专利第2831592号揭示一种含有类黄酮的化妆品组成物,用于维持或增进毛发机械强度与弹性,其中类黄酮是选自于黄烷酮(flavanones)、黄酮(flavones)、黄酮醇(flavonols)、二氢黄酮醇(dihydroflavonols)、儿茶素(catechins)或白花色苷元(leucoanthocyanidines)。日本专利早期公开案特开2005170927号揭示一种含有原花青素(proanthocyanidin)的生发剂,原花青素是以表儿茶素(epicatechin)作为主要结构单元,且该原花青素特别是选自于表儿茶素-(4β→8)-儿茶素、表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素、儿茶素-(4α→8)-儿茶素、表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素、表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素、儿茶素-(4α→8)-儿茶素-(4α→8)-儿茶素、表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素或是表儿茶素-(4β→8)-表儿茶素-(4β→8)-儿茶素。进一步的科学研究显示,儿茶素可以剂量相依的方式促进体外培养的人类毛囊毛乳突细胞的生长,因为儿茶素不但可以增进毛囊毛乳突细胞的增殖,也可以延缓细胞的淍亡,从而延长毛发生长周期中的生长期(Kwon et al.,Phytomedicine 14(2007),p.551-555)。这些专利案件和科学文献的全部揭示内容皆纳入于本发明中供作为参考。
上述专利案件和科学文献大致上可显示出,类黄酮化合物具有促进毛发生长的能力。然而,其毛发促生效果仍无法令人完全满意。因此,本项技术领域中仍需要一种新而有用且对于人体安全无刺激性的组成物和方法,用以促进毛发的生长。
【发明内容】
本发明发明人意外地发现到,类黄酮衍生物(flavonoid derivatives)与腺苷化合物所构成的组合,特别是由儿茶素衍生物与腺苷所构成的组合,能够在促进毛发生长上展现出协乘功效。换言之,本发明组成物在促进毛发生长上所达成的功效明显地高于单独使用类黄酮衍生物或是腺苷化合物所达成的功效。特别值得注意的是,这些活性成份早就已经使用于人体,故本发明组成物对于人体是安全且不会引起不良副作用的。再者,本发明组成物经证实不仅适用于促进男性生发,也适于改善女性的发质和丰厚度。
因此,依据本发明之一目的,其提供一种用于促进毛发生长的组成物,其包含类黄酮衍生物和腺苷化合物,特别是儿茶素衍生物(catechin derivative)和腺苷,作为活性成份,以及一化妆品或药学上可接受的载剂(cosmetically or pharmaceutically acceptable carrier)。在本发明的一较佳实施例中,本发明组成物更包含一种来自于毛囊毛乳突细胞培养物的上清液,与上述活性成份协同促进毛发生长。
依据本发明的另一目的,其提供一种用于促进毛发生长的方法,其包含将上述组成物施用在带有毛囊组织的皮肤部位。
依据本发明的再一目的,其提供一种上述活性成份在制造促进毛发生长组成物上的用途。
【附图说明】
第1A、1B图显示将本发明组成物施加在一位男性受试者头部后所得到的头发生长效果,其中第1A图显示受试前情形,第1B图显示受试10周的结果。
第2A、2B及2C图显示将本发明组成物施加在男性受试者头部历时5周所 得到的头发生长效果。
第3A、3B及3C图显示将本发明组成物施加在男性受试者头部历时10周所得到的头发生长效果。
【主要元件符号说明】
1、2、3、4 箭头
【具体实施方式】
如本发明所属技术领域人士所知悉,「类黄酮(flavonoids)」此用语包括黄烷酮类(flavanones)、黄酮类(flavones)、黄酮醇类(flavonols)、黄烷醇类(flavanols)、异黄酮类(isoflavonoids)、花青素类(anthocyanidins)和原花青素类(proanthocyanidins)化合物。本发明说明书中所使用的「类黄酮衍生物」此用语意欲涵盖上述化合物的实质纯质形式和部分纯化形式,以及由天然产品萃取而得且富含类黄酮的萃出物。在本发明的一较佳具体实施例中,类黄酮衍生物为黄烷醇类化合物或是富含类黄酮的萃出物,更佳为儿茶素衍生物(catechin derivatives),即儿茶素类化合物或是富含儿茶素类化合物的植物萃出物。
在另一具体实施例中,前述儿茶素衍生物是选自于由表儿茶素(epicatechin)、儿茶素(catechin)、表没食子儿茶素(epigallocatechin)、没食子儿茶素(gallocatechin)、表儿茶素表没食子酸酯(epicatechin-3-gallate)、儿茶素表没食子酸酯(catechin-3-gallate)、表没食子儿茶素表没食子酸酯(EGCG)和没食子儿茶素表没食子酸酯(gallocatechin-3-gallate)所构成的群组中,其中尤以表没食子儿茶素表没食子酸酯(EGCG)为佳。
在另一具体实施例中,前述类黄酮衍生物,较佳为儿茶素衍生物,乃是源自于茶树的叶片、茎部、枝条或其他植物部分。在一较佳具体实施例中,前述 儿茶素衍生物是从红茶等发酵茶叶、乌龙茶或包种茶等半发酵茶叶、或是绿茶等未发酵茶叶萃取而得。如本发明所属技术领域人士所知悉,可以运用乙醇等低碳数醇类溶剂;丙酮、***、乙酸乙酯或水等极性溶剂;非极性溶剂;或是这些溶剂的混合物,在常温或高温下萃取茶叶而获得富含类黄酮衍生物的萃出物。为增进萃取效率,较佳为先将茶叶研磨成粉状,再将其浸入溶剂中,以达成萃取。在一更佳具体实施例中,前述儿茶素衍生物是绿茶萃出物。
前述类黄酮衍生物在本发明组成物的含量可以依实际使用状况而有所调整,只要能够与搭配使用的腺苷化合物在促进毛发生长上产生协乘作用即可。通常来说,依据本发明组成物总重量为基准,类黄酮衍生物的含量为0.0001至1重量%,较佳为0.001至1重量%。就浓度而言,类黄酮衍生物在本发明组成物中的浓度为0.001至1000μM,例如0.01至100μM或是0.1至10μM。
本发明说明书中所使用的「腺苷化合物」此用语是意欲涵盖腺苷(adenosine)、AMP、ADP和ATP等腺嘌呤核苷酸(adenine nucleotides)以及它们的衍生物和类似物,如肌苷(inosine)等。本发明「腺苷化合物」也意欲涵盖经人体或动物体吸收后会代谢或转变成为腺苷、腺嘌呤核苷酸或是其衍生物和类似物的化合物。
如本发明后文所示,腺苷化合物与类黄酮衍生物搭配使用的可以在促进毛发生长上产生协乘作用。虽然不希望被任何理论所束缚,但我们相信毛囊毛乳突细胞表面可能存在有某种对于腺苷化合物具有敏感性的受体,因而能经由细胞中的讯息传导作用与类黄酮衍生物协同启始或促进毛发生长周期。
因此,前述腺苷化合物在本发明组成物的含量可以依实际使用状况而有所调整,只要能够与搭配使用的类黄酮衍生物在促进毛发生长上产生协乘作用即 可。就浓度而言,腺苷化合物在本发明组成物中的浓度为0.01μM至10nM,例如0.1μM至1nM或是1至100μM。
在本发明的一较佳实施例中,本发明组成物更包含一种来自于毛囊毛乳突细胞培养物的上清液。虽然不希望被任何理论所束缚,但我们推测,毛囊毛乳突细胞在体外培养过程中会在培养基中释放出某些能够促进毛发生长的物质。纵使这些物质仍有待鉴定,但本发明后文所载实施例显示,毛囊毛乳突细胞培养物的上清液能够与腺苷化合物和类黄酮衍生物等成份协同促进毛发生长,甚至于改善毛发的品质和丰厚度。这种上清液的制备方法叙述于本发明发明人所著「鼠类触须毛囊毛乳突细胞对药物早期反应之研究」此篇论文中(夏静吾,阳明大学医学生物技术研究所硕士学位论文,2003年出版,第16-17页),该篇学术论文的全部揭示内容纳入于本发明说明书中以供参考。该制备方法大致上包括利用外科显微手术可以从人体或动物体上切下毛囊,以获取毛囊毛乳突细胞。在一具体实施例中,毛囊毛乳突细胞是源自于鼠类触须毛囊,例如源自于雄性Sprague Dawley(SD)、Wistar及Long-Evans Hooded等大鼠品系的触须毛囊。将毛囊毛乳突细胞培养于培养基中,经历一段时间以使细胞释出能够促进毛发生长的物质,例如经历12至72小时,较佳为16至48小时或是24至36小时。所使用的培养基类型可为熟悉细胞培养技术人士所选定,较佳者包括利用无血清培养基,例如RPMI-1640培养基、MEM培养基或DMEM培养基,搭配10-15%胎牛血清进行培养。也可以运用常用技术使细胞感受到环境压力而使细胞释出更大量的促进毛发生长物质,例如在获取上清液之前先将细胞培养于无血清培养基中。其他培养条件亦可为熟悉细胞培养技术人士所选定,例如在37℃的温度和5%CO2下进行培养。可以利用如层析及/或离心及/或过滤等习用 技术从细胞培养物中分离出上清液。如熟悉细胞培养技术人士所知悉,毛囊毛乳突细胞的培养规模可以有所变化,例如实验室规模的多井孔培养皿,乃至工业规模的大型培养槽。
前述培养物上清液在本发明组成物的含量可以依实际使用状况而有所调整,只要不会影响腺苷化合物与类黄酮衍生物之间所产生的协乘功效即可。就体积比例而言,前述上清液较佳为占本发明组成物总体积的0.1至10体积%,例如0.5至5.0体积%或是1.0至2.5体积%。
本发明组成物可以依据本项技术中具有通常知识者所知悉的任何方式进行调制,例如先行配制类黄酮衍生物和腺苷化合物的初始溶液及/或毛囊毛乳突细胞培养物的上清液,再将它们掺入一种化妆品或药学上可接受的载剂中,而达到所希望的最终浓度。「化妆品或药学上可接受的载剂」此用语意指所有适合于承载本发明组成物中的活性组份并将它们传送至施用位置的载剂、赋形剂或稀释剂,它们一般被认可为可以安全地运用于人体和动物体上,不会对人体和动物体造成伤害。较佳为所述化妆品或药学上可接受的载剂不会影响本发明组成物中的活性组份的活性,特别是不会影响腺苷化合物与类黄酮衍生物之间所产生的协乘功效。本发明所使用的化妆品或药学上可接受的载剂包括水性载剂、非水性载剂和彼等之混合物,也可以包括由数种载剂所构成的载剂***。就给予的形式而言,本发明组成物通常是呈一种适合于施用在带有毛囊组织的皮肤部位的局部组成物。在一较佳具体实施例中,这种局部组成物是呈现水性溶液、油性溶液、悬浮液、乳剂、水凝胶(hydrogel)、脂凝胶(lipogel)、喷剂、雾化剂、油膏、乳霜、敷料等形式。本发明组成物中也可以视需要另外含有界面活性剂、酸碱值调节剂、稠化剂、粘度调节剂、渗透压调整剂、防腐剂、安定剂、 缓冲剂、润滑剂、抗氧化剂、香精、色素等辅助添加剂。在一具体实施例中,本发明组成物主要含有水性载剂,尤以水溶液为佳。
在一较佳具体实施例中,本发明组成物基本上由类黄酮衍生物、腺苷化合物和化妆品或药学上可接受的载剂所组成。在一更佳具体实施例中,本发明组成物基本上由类黄酮衍生物、腺苷化合物、毛囊毛乳突细胞培养物的上清液和化妆品或药学上可接受的载剂所组成。
在另一较佳具体实施例中,本发明组成物是由类黄酮衍生物、腺苷化合物和化妆品或药学上可接受之载剂所组成。在另一更佳具体实施例中,本发明组成物是由类黄酮衍生物、腺苷化合物、毛囊毛乳突细胞培养物的上清液和化妆品上可接受的载剂所组成。
依组成物所调配的形式而定,本发明组成物可以任何常用的适合方式施加至有需要的人体或动物体部位,例如带有毛囊组织的皮肤部位,以使本发明组成物与毛囊和其周边组织相接触。
本发明说明书所称「毛发」包括人体或哺乳类动物体任何部位的毛发,特别是人体的毛发,例如位于人体头顶、腋窝、***、眉部、睫毛、眼睑、嘴唇上方、下巴、腮部、胸部、手臂、腿部等部位的毛发。本发明说明书所称「促进毛发生长」包含使毛囊毛乳突细胞增殖、延缓毛囊毛乳突细胞的淍亡,使毛囊容易萌发新发,而所生长的毛发数目增加、长度变长、直径***、寿命增长、机械强度/抗拉强度增加及/或整体丰厚程度增加。
本发明适用于因抗癌剂等药品所引起的落发或脱毛、放射线治疗所引起的落发或脱毛、分娩后脱毛、圆秃(alopecia areata)或雄性秃(androgenetic alopecia)等现象的改善、缓和或解除。另外,本发明亦适用于绵羊、貂等需要毛及毛皮 的领域做为促进长毛用剂。
本发明说明书进一步提供下列实施例供熟悉本行业普通技术人士作为参考,这些实施例仅供例示参考之用,不应该被解读为对于本发明技术构思或是所请求保护的范围构成任何限制。
实施例
实施例1─毛囊毛乳突细胞的体外培养
8周龄雄性SD大鼠购自于国家科学委员会实验动物中心。在解剖显微镜下运用显微手术从大鼠触须毛囊取得毛囊毛乳突。第零代毛囊毛乳突细胞培养在35mm培养皿(购自于Falcon,Bedford,MA,USA),添加RPMI-1640培养基(购自于Invitrogen,Carlsbad,CA,USA),并补充以10%胎牛血清(购自于Hyclone,Logan,Utah,USA)、2mM的L-麸酰胺酸、50IU/ml的青霉素和50μg/ml的链霉素。以下简称此种补充有血清的RPMI-1640培养基为培养基A,而未补充有血清的RPMI-1640培养基则简称为培养基B。当细胞长到80%满时,重新培养在100mm培养皿(购自于Falcon,Bedford,MA,USA),并记录为第一代。毛乳突细胞是培育在37°C下的恒温培养箱中,并添加5%CO2。
实施例2─EGCG和腺苷的协乘功效
在24孔培养皿中(购自于Falcon,Bedford,MA,USA),每孔种入0.5ml实施例2所得到的毛乳突细胞,细胞密度为1×104/ml。将没食子儿茶素表没食子酸酯(EGCG)(购自于Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)及/或腺苷(购自于Sigma-Aldrich,St.Louis,MO,USA)加入培养基中,分别达到0.5μM和5μM的最终浓度。在37°C和5%CO2的条件下培养24小时后,以0.4%锥蓝溶液染色来计算毛乳突细胞的数目。相同的实验重复4次,结果显示于下表1。
表1
表1中细胞数目的单位是1×104/ml
如表1所示,若将仅以培养基A所培养而得到的毛乳突细胞数目设定为100%,则单独使用EGCG可以使细胞数目增加约17%,而单独使用腺苷则无法显著增加细胞数目。又,相较于单独使用EGCG或是腺苷所达成的功效,由EGCG和腺苷所构成的组合可以使细胞数目增加约26%,明显地更能够促进毛乳突细胞的生长。此结果明确指出,EGCG和腺苷在促进毛乳突细胞的增殖上能够产生协乘功效。
实施例3─毛囊毛乳突细胞培养物的上清液的制备
将10ml毛囊毛乳突细胞(1x106个细胞/ml)种入100-mm培养皿中。在培养基A中培养24小时后,收集培养物上清液,并在4°C下,以3000×g的速率下予以离心15分钟以去除细胞碎片。使所得液体滤经0.2μm孔径的滤膜,以获得上清液C,储存在-70°C下备用。
另一方面,将10ml毛囊毛乳突细胞(1x106个细胞/ml)种入100-mm培养皿中,在培养基A中培养至隔日。移去培养基A,再以RPMI-1640培养基洗条细胞3次,每次5分钟。以10ml RPMI-1640培养基来培养至少8小时,产生不含血清的培养物上清液。收集培养物上清液,并在4°C下,以3000×g的速率下 予以离心15分钟以去除细胞碎片。使所得液体滤经0.2μm孔径的滤膜,以获得上清液D,储存在-70°C下备用。
实施例4─促进毛发生长组成物的制备
将EGCG和腺苷分别溶解于无菌水中,分别达到0.5μM和5μM的最终浓度,以配制成组成物E,储存在-4°C下备用。
在组成物E中添加1%上清液C,以配制成组成物F,储存在-4°C下备用。
在组成物E中添加0.5%上清液C和0.5%上清液D,以配制成组成物G,储存在-4°C下备用。
在组成物E中添加5%上清液C,以配制成组成物H,储存在-4°C下备用。实施例5─本发明组成物可促进头发生长
将组成物F涂抹在一位47岁男性受试者的头部,每日2次(第1A图显示受试前)。经过约2周后可以观察到,该位男性的头顶上萌生数量众多的幼毛,代表刚由休止期进入生长期的头发数量增加,而且黑发也相对增加。如第2A、2B、2C图显示该位男性受试者使用5周后的头发生长情形,其中箭头1标示处于生长期发育成熟的头发,箭头2标示刚由休止期进入生长期的幼毛,箭头3标示处于生长期初期的幼发,而箭头4标示处于生长期后期的幼发。虽然这些新生的头发比成熟的头发细,但持续使用组成物F后,新生的头发能持续生长***变长,不会提早脱落。第1B图为受试10周后的头发生长情形。第3A、3B、3C图为第1B图的三个局部放大图,显示施用组成物F后所生出的许多幼发已经***。
另外,以类似方式将组成物G涂抹在一位女性受试者的头部,也可以观察到相似的结果,且头发的丰厚度增加,不易断裂脱落或分岔,整体外观也更加 乌黑柔亮。而且,根据受试者陈述,组成物G不但不会引起过敏或其他不适症状,甚至一并改善了以往经常发生的头皮痒情形。
实施例6─本发明组成物可促进睫毛生长
将组成物H刷涂在一位女性受试者的睫毛。经过一段时间后可以观察到,该位女性受试者的睫毛不仅明显变长且数量增加,且不易断裂脱落。
以上所述仅本发明的较佳实施例而已,当不能以此限定本发明实施的范围,依照本发明权利要求书及说明书内容所作简单的等效变化与修饰,皆仍属本发明专利涵盖的范围内。
Claims (9)
1.一种用于促进毛发生长的组成物,其包含类黄酮衍生物和腺苷化合物,特别是包含儿茶素衍生物和腺苷,作为活性成份,以及一化妆品或药学上可接受的载剂。
2.如权利要求1所述的组成物,其中该类黄酮衍生物为儿茶素衍生物,且该腺苷化合物为腺苷。
3.如权利要求2所述的组成物,其中该儿茶素衍生物是选自于由表儿茶素(epicatechin)、儿茶素(catechin)、表没食子儿茶素(epigallocatechin)、没食子儿茶素(gallocatechin)、表儿茶素表没食子酸酯(epicatechin-3-gallate)、儿茶素表没食子酸酯(catechin-3-gallate)、表没食子儿茶素表没食子酸酯(EGCG)和没食子儿茶素表没食子酸酯(gallocatechin-3-gallate)所构成的群组中。
4.如权利要求2所述的组成物,其中该儿茶素衍生物是绿茶萃出物。
5.如权利要求1所述的组成物,其中该类黄酮衍生物在组成物中的浓度是位在0.001至1000μM的范围内。
6.如权利要求1所述的组成物,其中该腺苷化合物在组成物中的浓度位在0.01μM至10nM的范围内。
7.如权利要求1所述的组成物,其另包含一种来自于毛囊毛乳突细胞培养物的上清液。
8.如权利要求7所述的组成物,其中该上清液占组成物总体积的0.1至10体积%。
9.一种用于促进毛发生长的方法,其包含将如申请专利范围第1-8项中任一项的组成物施用在带有毛囊组织的皮肤部位。
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PB01 | Publication | ||
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C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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