CN1878530A - 用于毛发增粗的方法和组合物 - Google Patents
用于毛发增粗的方法和组合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1878530A CN1878530A CNA200480033275XA CN200480033275A CN1878530A CN 1878530 A CN1878530 A CN 1878530A CN A200480033275X A CNA200480033275X A CN A200480033275XA CN 200480033275 A CN200480033275 A CN 200480033275A CN 1878530 A CN1878530 A CN 1878530A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fgf
- cell
- hair
- adenosine
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
- A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
- A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
- A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
- G01N33/5008—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells for testing or evaluating the effect of chemical or biological compounds, e.g. drugs, cosmetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/60—Sugars; Derivatives thereof
- A61K8/606—Nucleosides; Nucleotides; Nucleic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q5/00—Preparations for care of the hair
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q7/00—Preparations for affecting hair growth
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/475—Assays involving growth factors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
- G01N2500/10—Screening for compounds of potential therapeutic value involving cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Birds (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Cosmetics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明提供了通过促进毛囊细胞优选地毛***细胞中角质形成细胞生长因子(FGF-7)的表达增加而维持和促进毛发增粗的方法,并提供了含有腺苷和/或其衍生物的促进FGF-7表达增加的组合物,尤其是提供了用于维持和促进毛发增粗的头皮外用剂。
Description
技术领域
本发明涉及通过促进毛囊细胞优选地毛***细胞中角质形成细胞生长因子(FGF-7)的表达增加而维持和促进毛发增粗的方法,并涉及促进FGF-7表达增加的组合物,尤其是用于维持和促进毛发增粗的头皮外用剂。
背景技术
在称为高龄化社会、压力社会的现代社会,由于多种原因引起头发暴露在脱毛危机的机会越来越多。为了对付这些情况,提供更好的“育毛料”,进行了多种尝试。作为育毛料,对毛发的效果主要包括1)发毛诱导效果(发毛促进效果、成长期诱导效果);2)维持毛发的粗度或促进所述粗度增粗,即增粗效果;3)延长毛发成长期的效果;4)阻碍5α-还原酶的效果(抑制向早期退化期移动的效果);5)促进血液循环的效果;6)杀菌效果;7)防止头皮的效果;8)保湿效果;9)抗氧化效果等。
男性型脱发普遍的特性为毛发成长期缩短而致毛囊矮小化、毛发径逐渐减小,变化为柔毛。在男性型脱毛者中,发现基本上观察不到毛发密度(每单位面积的毛发数)的减少,然而毛发径极剧减小的事实(特开2002-322094号公报)。基于此事实,注意到不仅诱导发毛具有重要性,而且上述增粗效果也具有重要性。
然而,至今为止尚未在生物化学和分子生物学水平解明毛发增粗与何种机制相关,因此,研究和开发含有对维持和促进毛发增粗有效的药物的育发物质尚处于探索阶段。如果能充分解明毛发增粗的机制,则可提供与现有的育发物质相比具有更显著效果的育发物质。
发明公开
本发明的课题是在生物学水平解明毛发增粗的机制、提供维持和促进毛发增粗的方法以及用于此目的的皮肤外用组合物。
FGF-7为由194个氨基酸组成的糖蛋白,为属于成纤维细胞增殖因子家族的一种生长因子。熟知的事实是:其由间叶系细胞的皮肤成纤维细胞等分泌,与表皮细胞上存在的特异性受体FGFR2 IIIb结合,通过旁分泌促进其增殖(Rubin J.S.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1989,86:802-806;Marchese C等,J.Cell Physiol.1990,144:326-332等)。此外,已显示FGF-7不仅促进表皮角质形成细胞的增殖,还促进肝实质细胞、肠管上皮细胞(Houseley R.M等,J.Clin.Invest.1994,94:1764-1777)等大范围的上皮系细胞增殖以及促进毛囊角质形成细胞的增殖(Pierce G.F.等,J.Exp.Med.1994,179:831-840)。而且,小鼠实验显示成长期的毛***细胞表达FGF-7,而表现其功能所需的受体FGFR2在毛***附近的毛母细胞上表达(Dev.Dyn.1996;205(4):379-386),教导了FGF-7与毛生长相关。但是,对于FGF-7在毛生长中究竟起到何种作用尚未解明。本说明书中,我们建立了以下作用假说:如果促进毛***细胞中的FGF-7表达增加,其介导认为是其靶细胞的毛母细胞等的增殖,通过对毛发生长期的延长作用而与毛发增粗相关。
首先,在探索将多种药剂作用于毛***细胞等而使FGF-7表达上升时,发现腺苷及其衍生物可促进FGF-7基因的表达增加。接下来,在对腺苷进行临床试验时,令人吃惊地发现了其具有毛发增粗的效果。根据特开2002-322094号公报所记载,认为为了维持和促进毛发增粗,至少以下三种成分即通过延长毛发生长期而发挥毛生长作用的成分(如苦参属植物提取物)、通过抑制早期移向退化期而发挥防止脱毛效果的成分(如睾酮)、以及发挥诱导自休止期向生长期作用效果的成分(如氧化癸基四癸基胺)是必要的,因此单一化合物具有如此效果是令人吃惊的。
本发明首次发现了毛***细胞等中FGF-7的表达增加,并且更不用说也首次发现了FGF-7的表达增加与毛发增粗有关。
因此,本发明提供了维持和促进毛发增粗的方法,其特征在于:促进毛囊细胞优选地毛***细胞中角质形成细胞生长因子(FGF-7)的表达增加。
毛囊细胞中FGF-7的表达增加可通过在头皮涂抹含有这样的促进毛囊细胞中的FGF-7的表达增加的一种或多种药剂(下文中有时称为“FGF-7表达增加剂”)的皮肤外用剂而实现,其中所述一种或多种药剂选自腺苷及其衍生物如腺苷-5’-磷酸、腺苷-5’-磷酸盐、以及CCPA(2-氯-N6-环戊基腺苷)、Cl-IB-MECA(2-氯-N6-(3-碘苄基)-9-[5-(甲基氨甲酰基)-β-D-呋喃核糖基]腺嘌呤)和NECA(N-乙基羧基酰胺腺苷)之中。优选地,所述药剂为腺苷。
另一方面,本发明提供了含有以这样的药剂为活性成分的促进FGF-7表达增加的组合物,所述药剂选自腺苷及其衍生物如腺苷-5’-磷酸、腺苷-5’-磷酸盐、以及CCPA、Cl-IB-MECA和NECA之中。
在合适的实施方案中,FGF-7的表达得到增加的细胞为毛***细胞或外毛根鞘细胞。
在合适的实施方案中,上述药剂为腺苷。
在合适的实施方案中,上述组合物为通过涂抹头皮而使毛发增粗得以维持和促进的皮肤外用剂。
进一步在其它的方面,本发明提供了筛选维持和促进毛发增粗的药剂的方法,其特征在于将候选药剂应用于细胞,优选地应用于毛囊细胞,更优选地应用于毛***细胞或外毛根鞘细胞,选择促进所述细胞的FGF-7表达增加的药剂。优选地,毛***细胞为永生化毛***细胞。
在合适的实施方案中,上述细胞的FGF-7的表达增加是通过测定细胞中FGF-7的量而确定的。
在更合适的实施方案中,上述测定是使用FGF-7的特异性抗体通过ELISA法或RIA法进行的。
在更合适的实施方案中,上述细胞的FGF-7的表达增加是通过测定自细胞提取的编码FGF-7的mRNA量而确定的。
在更合适的实施方案中,上述mRNA的测定是通过RT-PCR法(反转录-聚合酶链反应法)进行的。
本发明提供了可有效维持和促进毛发增粗的方法及用于此目的的组合物。
附图简述:
图1为将腺苷对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以FGF-7表达量(相对值)显示。
图2为将腺苷对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加3小时后FGF-7的相对表达量显示。
图3为将腺苷相关物质对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加2小时后FGF-7的相对表达量显示(实时PCR:n=4)。
图4为将双氢黄酮对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加2小时后FGF-7的相对表达量显示(实时PCR:n=4)。
图5为将3,4’-二甲基双氢黄酮对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加2小时后FGF-7的相对表达量显示(实时PCR:n=3)。
图6为将3-甲基双氢黄酮对毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加2小时后FGF-7的相对表达量显示(实时PCR:n=4)。
图7显示含有腺苷的育毛料的毛发增粗效果(80μm或以上的增粗率)。
图8为将腺苷对人永生化毛***细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加2小时后FGF-7的相对表达量显示。
图9为将腺苷对外毛根鞘细胞中FGF-7表达增加的效果以药剂添加3小时后FGF-7的相对表达量显示。
实施发明的最佳方案:
下文中,对本发明的实施方案进行说明。
本发明提供了维持和促进毛发增粗的方法,其特征在于促进毛囊细胞优选地毛***细胞中角质形成细胞生长因子(FGF-7)的表达增加。
本发明中所称的毛发增粗通常是指抑制通过毛根的矮小化而产生的柔毛化、维持毛发的粗度或使之***。对于判断有无毛发增粗的效果而言,由于毛发的粗度和质存在个体差异,故优选根据个人来确定。一般对于头部一定面积的区域如1cm2、2cm2、5cm2中一定直径的毛发如直径40μm、60μm、80μm或100μm或以上的毛发根数,当将本发明的FGF-7表达增加剂应用至头皮如连续应用1个月、3个月或6个月或以上后基本上没有减少时,如该减少率不到10%,优选地不到5%时,判断为维持毛发粗度;如直径40μm、60μm、80μm或100μm的毛发根数实质上增加时,如该增加率为5%或以上,优选地10%或以上,更优选地20%或以上时,判断为促进毛发增粗。
毛囊细胞优选地毛***细胞中FGF-7表达增加是通过将含有促进毛囊细胞中FGF-7表达增加的一种或多种这样的药剂的皮肤外用剂涂抹头皮而实现的,所述药剂选自腺苷及其衍生物如腺苷-5’-磷酸、腺苷-5’-磷酸盐、以及CCPA、Cl-IB-MECA和NECA之中。
腺苷为一种核苷,包括碱基部分为嘌呤衍生物的腺嘌呤。腺苷-5’-磷酸也称为5’-腺苷酸,为腺苷中核糖的5’位羟基结合了1分子磷酸的核苷酸。
另外,腺苷-5’-磷酸盐中,作为形成盐的反荷离子,可为任一与酸形成反荷离子的物质,包括如钠、钾、钙等。此外作为腺苷-5’-磷酸盐,也可使用其水合物。
CCPA、Cl-IB-MECA、NECA为腺苷相关物质。CCPA、Cl-IB-MECA、NECA可自Sigma公司获得。
上述腺苷、腺苷-5’-磷酸和腺苷-5’-磷酸盐、CCPA、Cl-IB-MECA和NECA可使用作为试剂而市售的腺苷、腺苷-5’-磷酸和腺苷-5’-磷酸盐、CCPA、Cl-IB-MECA和NECA。
本发明的FGF-7表达增加组合物可为皮肤外用剂,优选地为头皮外用剂,如为育毛料或养毛料。
本发明的FGF-7表达增加组合物中包含占总量如0.01~20.0质量%的上述FGF-7表达增加剂,优选地0.1~10.0质量%的上述FGF-7表达增加剂。由于该混合量不足所述组合物总量的0.01质量%时,上述成分不能充分发挥增粗效果,所以不优选,此外,该混合量超过所述组合物总量的20.0质量%时,给调剂带来障碍的倾向显著,有时不优选。
本发明的FGF-7表达增加组合物尤其是皮肤外用剂可通过直接涂抹或散布至皮肤而经皮施用。另外,由于其施用量随外用剂的具体形式、使用者的年龄、症状等变化,故不可明确限定,但当施与人时,对于体重1Kg和1天,上述FGF-7表达增加剂通常以0.01~100.0mg,优选地0.1~10.0mg的施用量施用,优选地将所述量1日1次或分为2~4次施用。
本发明的FGF-7表达增加组合物尤其是皮肤外用剂对于以人为首的哺乳动物显示良好的维持和促进毛发增粗作用,作为护发用药品、准药品或化妆品是有用的。
本发明的FGF-7表达增加组合物尤其是皮肤外用剂所采用的剂型优选地为可应用至表皮的外用剂剂型,可选择如液体状、乳液状、膏状、气溶胶状等剂型。此外,本发明的组合物的形态可为任一形态,可采用如营养水、发膏、摩丝、洗发香波、染发剂、乳液、化妆水、面膜、气溶胶等形态。特别优选将本发明的组合物涂抹表皮而使用。对涂抹方法无特别的限制,优选如对头皮1日涂抹1次或1次以上,如1日1至3次,根据涂抹的皮肤面积适量涂抹如涂抹1~5ml。
本发明的FGF-7表达增加组合物尤其是皮肤外用剂中,除了必需成分的上述香料外,根据需要且只要不影响本发明的预期效果,可混合在化妆品、准药品、药品等中通常使用的多种油性或水性成分、保湿剂、增稠剂、防腐剂、抗氧化剂、香料、着色剂、多种药剂等。
可混合例如高级脂肪酸、固态石蜡、流动石蜡、硅油、角鲨烷、单油酸甘油酯、橄榄油、肉豆蔻酸异丙酯、高级醇等油分;甘油、透明质酸、丙二醇、麦芽糖醇、端胶原(atelocollagen)、乳酸钠等保湿剂;榅桲粘质物、羧基乙烯基聚合物、黄原酸胶等增稠剂;烟酰胺、苄基烟酸酯、维生素E乙酸酯、当药提取物、卡普氯铵、乙酰胆碱衍生物等血管扩张剂;丝氨酸、甲硫氨酸、精氨酸等氨基酸类;维生素B6、维生素E类、生物素、泛酸等维生素类;烟酸、甲基烟酸酯、生育酚烟酸酯等烟酸酯类;千金藤素(cepharanthine)等皮肤功能亢进剂;***等的女性激素剂;甘草次酸、甘草酸、甘菊色素等消炎剂;扁柏硫醇、六氯苯酚、苯扎氯铵、十六烷基氯化吡啶、十一碳烯酸、三氯碳酰苯胺、硫氯酚等抗菌剂;薄荷醇等清凉剂;水杨酸、锌类、乳酸类等;柠檬酸等有机酸类。
可期待本发明的FGF-7表达增加组合物尤其是皮肤外用剂进一步通过加入除上述FGF-7表达增加剂以外的、认为具有育毛作用的已知育毛成分如敏乐定、环孢菌素等而具有更有效的育毛效果。
本发明还提供了筛选维持和促进毛发增粗的药剂的方法。所述方法的特征在于:将候选药剂应用至细胞,优选地应用至毛囊细胞,更优选地应用至毛***细胞或外毛根鞘细胞,选择使所述细胞的FGF-7表达增加的药剂。
作为毛***细胞,可使用来自人的正常毛***细胞,或可使用容易获得的而且增殖速度快的有利的永生化毛***细胞,如特开平11-89565号公报所记载的通过使用SV40大T抗原基因转化而获得的永生化毛***细胞等。另外,在筛选时,除了可使用毛***细胞外,还可使用产生FGF-7的间叶系细胞如自人分离的皮肤成纤维细胞、其它的来自毛囊的细胞如外毛根鞘细胞等。
细胞中FGF-7的表达增加可通过例如测定细胞中FGF-7的量而确定。优选地,所述测定可使用人FGF-7特异的抗体,通过本领域公知的方法如利用荧光物质、色素、酶等的免疫染色法、Western印迹法、免疫测定法如ELISA法、RIA法等多种方法实施。此外,可通过自细胞提取RNA,测定编码人FGF-7的mRNA量而确定。mRNA的提取、其量的测定也是本领域公知的,例如RNA的定量可通过逆转录后的定量聚合酶链反应法(RT-PCR)进行。例如,可使用以下的引物组合实施定量PCR。
组合1
正向引物:5’-CATGAACACCCGGAGCACTAC-3’(NM_002009:419-439)(序列编号1)
反向引物:5’-CACTGTGTTCGACAGAAGAGTCTTC-3’(NM_002009:669-646)(序列编号2)
PCR产物大小:251bp
组合2
正向引物:5’-CACAAATGGATACTGACATGGA-3’(NM_002009:449-470)(序列编号3)
反向引物:5’-TCACTCTTATATCCCCTCCTTC-3’(NM_002009:644-623)(序列编号4)
PCR产物大小:196bp(J Clin Endocrinol Metab 88(2),773-,2003)
组合3
正向引物:5’-CTTTGCTCTACAGATCATGCTTTC-3’(NM_002009:480-503)(序列编号5)
反向引物:5’-TTGCCATAGGAAGAAAGTGGGCTG-3’(NM_002009:1022-999)(序列编号6)
PCR产物大小:543bp(J Clin Invest 92,2408-,1993)
以下通过实施例对本发明进行更具体的说明,但所述实施例不应解释为对本发明技术范围的限定。另外,在以下的实施例等中,如果没有特别指出,所示混合量的值均表示相对于被混合的对象总体而言的质量%。
实施例:
实验1:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(1)
1)细胞培养
人毛***细胞(dermal papillae cell;DPC)使用来自34岁女性的、自作为整形手术的副产物而产生的人头皮分离并培养后冻结保存的DPC。以使细胞密度成为1.0~1.5×104个/cm2的细胞密度播种,在MEM(GIBCO)+10%FBS中,37℃ 5%CO2的条件下培养。每周2次更换培养基,至细胞密集(自播种10天~20天后),使用0.25%胰蛋白酶将细胞自培养皿剥离并回收,然后再以1.0~1.5×104个/cm2的密度播种。
2)培养细胞的药剂处理
解冻后经传代1-3次培养的DPC以4.0×104个/孔的密度播种至24孔板,4天后,向亚密集的细胞更换溶解有100μM浓度腺苷的MEM(未添加血清)。对照细胞仅使用MEM(未添加血清)并进行同样的处理。
3)RT-PCR
添加腺苷2、4、8、24小时后,使用MagNAPureLC(Roche Diagnos-tics公司)自培养细胞提取mRNA,使用逆转录酶SuperScript II(Invitrogen)的试剂盒合成cDNA。以所述cDNA为模板,通过LightCycler(RocheDiagnos-tics公司)使用与双链DNA小沟结合的荧光色素CyberGreen I进行实时PCR,进行表达量的比较。具体而言,使用LightCycler-FastStartDNA Master SYBR Green I试剂盒(Roche Diagnos-tics公司),根据所附的手册制备总量20μl的反应液(MgCl2 2mM,正向引物和反向引物各0.25μM),使用LightCycler进行PCR反应(酶活化95℃10分钟,热变性95℃/15秒、退火58℃/5秒、延伸反应72℃/10秒,热变性至延伸反应循环40次),检测每一循环延伸反应结束时的荧光强度。所述荧光强度反映在所述时间点的PCR产物量。在PCR产物呈指数函数的扩增期,假设初始模板量A的PCR产物Y对于PCR循环数X满足Y=A×2X,从直至获得一定量PCR产物的循环数算出基因表达量的相对值。以下为本研究所用的FGF-7扩增用引物。
正向引物:5’-CATGAACACCCGGAGCACTAC-3’(NM_002009:419-439)(序列编号1)
反向引物:5’-CACTGTGTTCGACAGAAGAGTCTTC-3’(NM_002009:669-646)(序列编号2)
PCR产物大小为251bp。
图1显示了该结果。如图1所示,观察到经腺苷处理的毛***细胞中FGF-7的表达显著增加。
实验2:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(2)
与实验1同样,但腺苷浓度为10μM和100μM两种,腺苷处理时间为3小时,实施RT-PCR实验。结果如图2所示。由图2,可确认经腺苷处理的毛***细胞中FGF-7的表达增加为腺苷浓度依赖性的。
实验3-1:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(3)
与实验1同样,但不使用腺苷,而使用腺苷相关物质CCPA(2-氯-N6-环戊基腺苷)(100μM)、Cl-IB-MECA(2-氯-N6-(3-碘苄基)-9-[5-(甲基氨甲酰基)-β-D-呋喃核糖基]腺嘌呤)(50μM)或NECA(N-乙基羧基酰胺腺苷)(10μM),药剂处理时间为3小时,实施RT-PCR实验。(此外,当药剂的溶解度低时,也可在包含未添加药物的对照的所有待加入药物的培养基中将DMSO的终浓度制备为0.1%。)
结果如图3所示。由图3,可确认经CCPA、Cl-IB-MECA或NECA处理的毛***细胞中FGF-7的表达显著增加。
实验3-2:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(4)
与实验1同样,但不使用腺苷,而分别使用双氢黄酮、3,4’-二甲基双氢黄酮(YGU427)、3-甲基双氢黄酮(YGU429)100μM,药物处理时间为2小时,实施RT-PCR实验。结果分别如图4、5、6所示。虽然显示任一药物均具有FGF-7表达增加结果,但由于没观察到腺苷受体阻断剂8-SPT(8-磺酰茶碱)引起的阻断,表明FGF-7的表达增加不是必须要腺苷受体。
实验4研究腺苷对毛发增粗的效果
在以上发现的具有FGF-7增加效果的多种药物中,采用以下的方法研究腺苷对毛发的增粗效果。
将具有下述组分1的含有腺苷的育毛料以及作为对照的具有下述组分2的含有烟酰胺的育毛料于呈现男性型脱毛的30-50岁男性受试者(每组51名)的头发以1日2次,适量(约2-3ml)涂抹使用6个月,通过与使用开始时比较而研究腺苷的毛发增粗效果。在本实验中,将柔毛定为具有直径不到40μm的毛发,直径60μm或以上的毛发定为粗毛,直径80μm或以上的毛发定为相当粗化的毛发。使用含有腺苷的育毛料后的第6个月时,与使用开始时比较,柔毛减少7%或以上,另外,直径60μm或以上的粗毛增加10%或以上。进一步地,直径80μm或以上的粗毛增加5%或以上。继续使用含有腺苷的育毛料,与使用含有烟酰胺的育毛料相比较,前者的粗毛增加量显著提高。结果如图7所示。
此外,在研究含有腺苷的育毛料和含有烟酰胺的育毛料对毛发密度的效果时,没有观察到两者之间具有统计学上的有意义差(数据未显示)。因此,明确了在培养毛***细胞中显示FGF-7表达增加效果的腺苷对毛发增粗的维持和促进是特别有效的。
含有腺苷的育毛料(组成1)
成分 | 混合量(质量%) |
腺苷 | 0.75 |
异十八烷醇 | 0.50 |
聚氧乙烯硬化蓖麻油 | 0.50 |
乙烯吡咯烷酮-N,N’-二甲基乙基甲基丙烯酸共聚物二乙基硫酸盐液 | 0.50 |
双丙甘醇 | 10.0 |
乙醇 | 50.0 |
纯水 | 残余量 |
DL-苹果酸 | 适量 |
含有烟酰胺的育毛料(组成2)
成分 | 混合量(质量%) |
烟酰胺 | 0.10 |
异十八烷醇 | 0.50 |
聚氧乙烯硬化蓖麻油 | 0.50 |
乙烯吡咯烷酮-N,N’-二甲基乙基甲基丙烯酸共聚物二乙基硫酸盐液 | 0.50 |
双丙甘醇 | 10.0 |
乙醇 | 50.0 |
纯水 | 残余量 |
DL-苹果酸 | 适量 |
实验5:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(4)
与实验1同样,但使用人永生化毛***细胞(特开平11-89565号公报所记载的通过使用SV40大T抗原基因转化而获得的人永生化毛***细胞)作为DPC,药物处理时间为2小时,实施RT-PCR实验。
结果如图8所示。由该图可见,即使使用人永生化毛***细胞作为毛***细胞,也可确认由腺苷所致的FGF-7表达增加。因此,明确了在筛选FGF-7表达增加剂时,可使用人永生化毛***细胞。
实验6:通过定量PCR实验研究FGF-7的表达增加(5)
1)细胞培养
人外毛根鞘细胞(outer root sheath cell:ORS)使用来自40岁女性的、自作为整形手术的副产物而产生的人头皮分离并培养后冻结保存的ORS。以使细胞密度成为1.0~1.5×104个/cm2的密度播种,在K-SFM培养基(GIBCO)中,37℃5%CO2的条件下培养。以2.0×104个/孔的密度将P3的ORS播种至24孔板,3天后,向亚密集的细胞替换溶解有10或100μM浓度腺苷的KBM培养基(クラボゥ)。对照细胞仅使用KBM培养基,并进行同样的处理。与实验1同样的方式进行RT-PCR。
结果如图9所示。由该图可见,即使为经腺苷处理的外毛根鞘细胞,也观察到与毛***细胞同样的FGF-7表达的显著增加。
工业可利用性
本发明使得提供有效维持和促进毛发增粗的方法和用于此目的的组合物成为可能。
序列表
<110>株式会社资生堂
<120>用于毛发增粗的方法和组合物
<130>P907
<150>JP2003-381470
<151>2003-11-11
<160>6
<210>1
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<223>正向引物
<400>1
catgaacacc cggagcacta c 21
<210>2
<211>25
<212>DNA
<213>人工序列
<223>反向引物
<400>2
cactgtgttc gacagaagag tcttc 25
<210>3
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<223>正向引物
<400>3
cacaaatgga tactgacatg ga 22
<210>4
<211>22
<212>DNA
<213>人工序列
<223>反向引物
<400>4
tcactcttat atcccctcct tc 22
<210>5
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<223>正向引物
<400>5
ctttgctcta cagatcatgc tttc 24
<210>6
<211>24
<212>DNA
<213>人工序列
<223>反向引物
<400>6
ttgccatagg aagaaagtgg gctg 24
Claims (10)
1.维持和促进毛发增粗的方法,其特征在于,促进毛囊细胞中的角质形成细胞生长因子(FGF-7)的表达增加。
2.如权利要求1所述的方法,其中,通过在头皮上涂抹含有以下记载的一种或多种促进毛囊细胞中的FGF-7的表达增加的药剂的皮肤外用剂,从而使所述FGF-7的表达增加,上述促进毛囊细胞中的FGF-7的表达增加的药剂选自腺苷、腺苷-5’-磷酸、腺苷-5’-磷酸盐、CCPA(2-氯-N6-环戊基腺苷)、Cl-IB-MECA(2-氯-N6-(3-碘苄基)-9-[5-(甲基氨甲酰基)-β-D-呋喃核糖基]腺嘌呤)和NECA(N-乙基羧基酰胺腺苷)之中。
3.如权利要求2所述的方法,其中,所述促进毛囊细胞中的FGF-7的表达增加的药剂中至少一种为腺苷。
4.如权利要求1-3中任意一项所述的方法,其中,所述毛囊细胞为毛***细胞或外毛根鞘细胞。
5.促进FGF-7的表达增加的组合物,其特征在于,所述组合物中包含作为活性成分的、选自腺苷、腺苷-5’-磷酸、腺苷-5’-磷酸盐、CCPA、Cl-IB-MECA和NECA之中的药剂。
6.如权利要求5所述的组合物,其中,所述药剂中至少一种药剂为腺苷。
7.如权利要求5或6所述的组合物,其为涂抹在头皮上而维持和促进毛发增粗的皮肤外用剂。
8.筛选维持和促进毛发增粗的药剂的方法,其特征在于,将候选药剂应用于细胞,选择促进所述细胞的FGF-7的表达增加的药剂。
9.如权利要求8所述的方法,其中,通过测定由细胞提取的编码FGF-7的mRNA的量来确定所述细胞的FGF-7的表达增加。
10.如权利要求8或9所述的方法,其中,所述细胞为毛***细胞、永生化毛***细胞或外毛根鞘细胞。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003381470 | 2003-11-11 | ||
JP381470/2003 | 2003-11-11 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN1878530A true CN1878530A (zh) | 2006-12-13 |
Family
ID=34567280
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CNA200480033275XA Pending CN1878530A (zh) | 2003-11-11 | 2004-11-10 | 用于毛发增粗的方法和组合物 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20070299032A1 (zh) |
EP (1) | EP1683509A4 (zh) |
JP (1) | JPWO2005044205A1 (zh) |
KR (1) | KR20060123256A (zh) |
CN (1) | CN1878530A (zh) |
TW (1) | TW200529877A (zh) |
WO (1) | WO2005044205A1 (zh) |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN102475633A (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-30 | 陈翰民 | 毛发生长促进剂 |
WO2012068714A1 (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-31 | Chen Han-Min | 毛发生长促进剂 |
CN103445971A (zh) * | 2012-05-31 | 2013-12-18 | 祥茂生活科技股份有限公司 | 促进毛发生长的组成物及方法 |
CN108938445A (zh) * | 2017-05-27 | 2018-12-07 | 完美(中国)有限公司 | 一种防脱发组合物和应用以及包括其的防脱发产品和制备方法 |
CN109674681A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-04-26 | 上海中翊日化有限公司 | 一种可以稳定高浓度腺苷的清洁制剂及其制备方法 |
CN111050785A (zh) * | 2017-07-31 | 2020-04-21 | 阿卡尼斯生物技术F&E有限责任两合公司 | 局部皮肤营养不良状况的治疗 |
CN112043624A (zh) * | 2019-06-07 | 2020-12-08 | 德玛中心有限公司 | 用于防止脱发并使头发增粗的组合物及其制备方法 |
CN112451409A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-03-09 | 卡莱丽化妆品有限公司 | 防脱发组合物及其制备方法 |
Families Citing this family (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2010056759A1 (en) | 2008-11-12 | 2010-05-20 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Fibroblast growth factor-9 promotes hair follicle regeneration after wounding |
US20080059313A1 (en) * | 2006-08-30 | 2008-03-06 | Oblong John E | Hair care compositions, methods, and articles of commerce that can increase the appearance of thicker and fuller hair |
ES2646787T3 (es) * | 2008-02-29 | 2017-12-18 | The Procter & Gamble Company | Composiciones para el cuidado del cabello y métodos para aumentar el diámetro del cabello |
WO2011010306A1 (en) | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | A3 adenosine receptor ligands for modulation of pigmentation |
JP5711879B2 (ja) * | 2009-10-16 | 2015-05-07 | 日華化学株式会社 | 線維芽細胞増殖因子−7産生促進剤、及びそれを含有する頭皮・頭髪用化粧料、並びに飲食物 |
KR101967615B1 (ko) | 2011-02-01 | 2019-04-10 | 가부시기가이샤하야시바라 | 피부 외용제 |
MX2015015676A (es) | 2013-05-16 | 2016-03-04 | Procter & Gamble | Composiciones de espesamiento para el cabello y metodos de uso. |
JP5932948B2 (ja) * | 2014-11-21 | 2016-06-08 | 日華化学株式会社 | 線維芽細胞増殖因子−7産生促進剤、及びそれを含有する頭皮・頭髪用化粧料、並びに飲食物 |
KR20230125097A (ko) | 2014-12-04 | 2023-08-28 | 마리 케이 인코포레이티드 | 트리플루오로아세틸 트리펩타이드-2를 포함하는 국소피부 케어 조성물 |
TW202302137A (zh) | 2021-02-26 | 2023-01-16 | 日商安佳榜控股股份公司 | 育毛劑 |
JP7323143B2 (ja) | 2021-12-24 | 2023-08-08 | 日華化学株式会社 | 頭皮頭髪用化粧料 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US2960442A (en) * | 1958-04-24 | 1960-11-15 | Schwartz Bio Res Inc | Hair dressing method |
JPS63101307A (ja) * | 1986-10-15 | 1988-05-06 | Lion Corp | 細胞賦活剤組成物 |
JPS6442416A (en) * | 1987-08-07 | 1989-02-14 | Hoou Kk | Hair cosmetic |
JPH02204406A (ja) * | 1988-12-15 | 1990-08-14 | Mirubon:Kk | 養毛剤 |
IT1229479B (it) * | 1989-03-13 | 1991-09-03 | Bioresearch Spa | Impiego di 5' deossi 5' metiltioadenosina, di s adenosilmetionina e dei loro sali per la preparazione di composizioni farmaceutiche atte a favorire la crescita dei capelli in soggetti affetti da calvizie e composizioni farmaceutiche relative. |
JP2709513B2 (ja) * | 1989-05-29 | 1998-02-04 | 株式会社コーセー | 養毛料 |
DE4323616A1 (de) * | 1993-07-12 | 1995-01-19 | Edelgard Schreiner | Mittel zur Regenerierung des Haares |
JP3798927B2 (ja) * | 1998-10-26 | 2006-07-19 | 株式会社資生堂 | 血行促進皮膚外用剤 |
EP0998907B1 (en) * | 1998-10-26 | 2004-01-14 | Shiseido Company, Ltd. | Hair tonic composition comprising adenosine |
US7182939B2 (en) * | 1998-10-26 | 2007-02-27 | Shiseido Company, Ltd. | Hair tonic composition |
WO2000047172A1 (fr) * | 1999-02-10 | 2000-08-17 | Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. | Agent de stimulation de la croissance capillaire et recherche systematique de substances ayant cet effet |
JP2001288042A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2001288048A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2001288046A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2001288043A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2001288047A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2001288045A (ja) * | 2000-03-31 | 2001-10-16 | Shiseido Co Ltd | 頭皮頭髪用組成物 |
JP2003155218A (ja) * | 2001-09-10 | 2003-05-27 | Lion Corp | 養育毛組成物 |
CA2678135C (en) * | 2003-02-28 | 2012-12-04 | Elc Management Llc | Method for increasing hair growth using a creatine compound |
-
2004
- 2004-11-10 EP EP04799714A patent/EP1683509A4/en not_active Withdrawn
- 2004-11-10 JP JP2005515384A patent/JPWO2005044205A1/ja active Pending
- 2004-11-10 KR KR1020067011001A patent/KR20060123256A/ko not_active Application Discontinuation
- 2004-11-10 CN CNA200480033275XA patent/CN1878530A/zh active Pending
- 2004-11-10 US US10/578,507 patent/US20070299032A1/en not_active Abandoned
- 2004-11-10 WO PCT/JP2004/017037 patent/WO2005044205A1/ja active Application Filing
- 2004-11-11 TW TW093134541A patent/TW200529877A/zh unknown
Cited By (13)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2012068714A1 (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-31 | Chen Han-Min | 毛发生长促进剂 |
CN105106027A (zh) * | 2010-11-22 | 2015-12-02 | 华安医学股份有限公司 | 毛发生长促进剂 |
CN105106027B (zh) * | 2010-11-22 | 2018-08-17 | 华安医学股份有限公司 | 毛发生长促进剂 |
CN102475633A (zh) * | 2010-11-22 | 2012-05-30 | 陈翰民 | 毛发生长促进剂 |
CN103445971A (zh) * | 2012-05-31 | 2013-12-18 | 祥茂生活科技股份有限公司 | 促进毛发生长的组成物及方法 |
CN108938445B (zh) * | 2017-05-27 | 2021-07-20 | 完美(广东)日用品有限公司 | 一种防脱发组合物和应用以及包括其的防脱发产品和制备方法 |
CN108938445A (zh) * | 2017-05-27 | 2018-12-07 | 完美(中国)有限公司 | 一种防脱发组合物和应用以及包括其的防脱发产品和制备方法 |
CN111050785A (zh) * | 2017-07-31 | 2020-04-21 | 阿卡尼斯生物技术F&E有限责任两合公司 | 局部皮肤营养不良状况的治疗 |
CN109674681A (zh) * | 2019-02-20 | 2019-04-26 | 上海中翊日化有限公司 | 一种可以稳定高浓度腺苷的清洁制剂及其制备方法 |
CN109674681B (zh) * | 2019-02-20 | 2022-01-07 | 上海中翊日化有限公司 | 一种可以稳定高浓度腺苷的清洁制剂及其制备方法 |
CN112043624A (zh) * | 2019-06-07 | 2020-12-08 | 德玛中心有限公司 | 用于防止脱发并使头发增粗的组合物及其制备方法 |
CN112043624B (zh) * | 2019-06-07 | 2022-11-15 | 德玛中心有限公司 | 用于防止脱发并使头发增粗的组合物及其制备方法 |
CN112451409A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-03-09 | 卡莱丽化妆品有限公司 | 防脱发组合物及其制备方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPWO2005044205A1 (ja) | 2007-05-17 |
WO2005044205A1 (ja) | 2005-05-19 |
TW200529877A (en) | 2005-09-16 |
KR20060123256A (ko) | 2006-12-01 |
EP1683509A4 (en) | 2011-06-22 |
EP1683509A1 (en) | 2006-07-26 |
US20070299032A1 (en) | 2007-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1878530A (zh) | 用于毛发增粗的方法和组合物 | |
Milner et al. | Exogen, shedding phase of the hair growth cycle: characterization of a mouse model | |
CN110540958B (zh) | 脐带间充质干细胞分泌因子的制备及其在生发中的应用 | |
EP2949328B1 (en) | Minoxidil for generating new hair follicles and treating baldness | |
CN1646078A (zh) | 细胞增殖用组合物 | |
KR20220087486A (ko) | 육모제 | |
Vaezi et al. | Effects of different levels of lysine on small intestinal villous morphology in starter diet of broiler chickens | |
US20220152118A1 (en) | Differentiation method from human adipose-derived mesenchymal stem cells to dermal papilla cells | |
TW202237080A (zh) | 育毛劑 | |
KR101749218B1 (ko) | 양모 효과를 가지는 인간 지방유래 줄기세포의 조건 배지 및 이의 용도 | |
CN1867316A (zh) | 促进胶原蛋白生成的组合物 | |
CN104152401B (zh) | 一种适于中国人表皮黑素细胞体外培养的chmm1培养基 | |
CN1297320C (zh) | 毛囊重建*** | |
Park et al. | Comparison of Saccharina japonica–Undaria pinnatifida mixture and minoxidil on hair growth promoting effect in mice | |
GB2321852A (en) | Effect of Fibroblast Growth Factor 10 (FGF-10) on Hair Cells. | |
CN1946372A (zh) | 使用热休克蛋白抑制剂来减少毛发生长 | |
KR101032271B1 (ko) | 피부세포 재생용 조성물, 그 제조 방법, 피부세포 재생 방법 및 화장료 조성물 | |
Aoki et al. | μ-Crystallin, thyroid hormone-binding protein, is expressed abundantly in the murine inner root sheath cells | |
Mottier et al. | The 20-hydroxyecdysone-induced cellular arrest in G2 phase is preceded by an inhibition of cyclin expression | |
Choi et al. | Effects of hair tonic and food including Korean medicinal herbs on hair growth in an alopecia model of C57BL/6 mice | |
JP2018027920A (ja) | 色素幹細胞の分化抑制剤、白髪予防剤、及び白髪評価方法 | |
Kang et al. | Effectiveness of a medaka whole testis organ culture system using an agarose gel stand for germ cell proliferation and differentiation | |
CN1215587A (zh) | 化妆品组合物 | |
Lee et al. | Hair growth effects of Laminaria japonica extract and growth factor mixture on a C57BL/6 mouse model | |
US11752151B2 (en) | Method for enhancing hair growth |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: DE Ref document number: 1100482 Country of ref document: HK |
|
C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20061213 |
|
REG | Reference to a national code |
Ref country code: HK Ref legal event code: WD Ref document number: 1100482 Country of ref document: HK |