CN103340880B

CN103340880B - 2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用

Info

Publication number: CN103340880B
Application number: CN201310176569.9A
Authority: CN
Inventors: 向兰; 戚建华
Original assignee: HANGZHOU NAIQIRUI BIO-PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: HANGZHOU NAIQIRUI BIO-PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2013-05-13
Filing date: 2013-05-13
Publication date: 2014-12-24
Anticipated expiration: 2033-05-13
Also published as: CN103340880A

Abstract

本发明公开了一种2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式为：

Description

2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用

技术领域

本发明涉化合物的医药用途领域，尤其涉及一种2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用。

背景技术

糖尿病在全球已成为一种爆发的流行病，据最新的世界糖尿病联盟的统计及我国近年的几项较大范围的调查，目前全球的糖尿病人数已达到了3亿人，而中国首当其冲，已逼近了一亿大关。

随着物质文明的发达和人口老龄化的加剧，糖尿病发病率呈现迅速增长的趋势。糖尿病如果得不到有效的治疗，极易并发心血管疾病，如冠心病，脑血管病，肾病，视网膜病变等并发症，这些并发症成为威胁糖尿病病人生命的主要原因，因此保持接近正常范围的血糖水平对于预防糖尿病并发症十分重要。

糖尿病是一种病因十分复杂的内分泌代谢性疾病，由体内胰岛素绝对或相对不足所致，其标志是慢性升高的血葡萄糖水平。目前，糖尿病主要分为三种：Ⅰ型糖尿病，由于患者身体内不能够产生胰岛素，因此，他们需要规律的注射胰岛素，以使血糖水平维持在正常的范围内，Ⅰ型糖尿病的患者大约占总糖尿病患者的5～10%，而90～95%的糖尿病患者为Ⅱ型糖尿病。Ⅱ型糖尿病的患者胰腺b细胞还有分泌胰岛素的能力，但是Ⅱ型糖尿病患者身体中的细胞对胰岛素作用不敏感，即发生了胰岛素抵抗。

目前大部分治疗糖尿病的口服降糖药物虽然有一定效果，但存在停药后易反弹，副作用多等缺点，因此，寻找具有潜在抗糖尿病活性的化合物，用于开发新的治疗糖尿病的药物仍是糖尿病治疗研究中的热点和难点。

公开号为CN101774922A的中国专利文献公开了一种2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物及其制备方法和应用。该专利通过将中药龙胆粉碎后，用甲醇浸提，抽滤浓缩，得甲醇浸提物粗样，再用80%甲醇水溶液和正己烷萃取分离，得到正己烷层粗样；将粗样经硅胶开口柱分离，再通过ODS开口柱分离，用反向HPLC纯化，得到一类2,3-二羟基苯甲酸酯类天然化合物。作为小分子化合物，天然分离的2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在老年性痴呆的体外筛选模型PC12细胞中表现出显著的类似神经生长因子（nerve growth factor，NGF）活性，可在制备预防老年痴呆症等神经退行性疾病的药物中的应用。

发明内容

本发明提供了2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物具有以下结构通式：

其中，n=4～29。

优选的，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n=4，7，9，11，13，15，17，19，21或29。即所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物为2,3-二羟基苯甲酸戊酯、2,3-二羟基苯甲酸辛酯、2,3-二羟基苯甲酸癸酯、2,3-二羟基苯甲酸十二烷酯、2,3-二羟基苯甲酸十四烷酯、2,3-二羟基苯甲酸十六烷酯、2,3-二羟基苯甲酸十八烷酯、2,3-二羟基苯甲酸二十烷酯、2,3-二羟基苯甲酸二十二烷酯或2,3-二羟基苯甲酸三十烷酯。

优选的，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n=7～21。

优选的，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n=7～17。

优选的，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n=11～13。

更优选的，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n=13，即该2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物为2,3-二羟基苯甲酸十四烷酯。

2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物能够抑制α-葡萄糖苷酶的活性，从而降低葡萄糖的水平，动物学试验也表明2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物能够显著降低小鼠的血糖水平，因此，可以以有效剂量的2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物为活性成分，添加药学上可接受的载体、稀释剂等，制备治疗糖尿病的药物。

糖尿病具体为Ⅱ型糖尿病。

所述药学上可接受的载体包括淀粉、蔗糖、微晶纤维素等填充剂，淀粉浆、羟丙纤维素、明胶、聚乙二醇等粘合剂，硬脂酸镁、微粉硅胶、聚乙二醇类等湿润剂，聚山梨脂、卵磷脂等吸收促进剂，伯洛沙姆、脂肪酸山梨坦、聚山梨脂等表面活性剂，还可以加入香味剂、甜味剂等其它辅剂。

本发明所述的2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物可以以单位剂量形式给药，给药途径为肠内给药或非肠内给药，包括口服、肌肉注射、皮下注射、静脉注射等。

药物的剂型可以是固体制剂、半固体剂、液体制剂等，包括片剂、丸剂、粉剂、分散片、小药囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂，软胶囊、硬胶囊、无菌注射液、搽剂、栓剂等。

上述各种剂型可采用常规方法进行制备。

当然，可以以有效剂量的2，3-二羟基苯甲酸酯类化合物为活性成分，添加食品上可接受的载体、稀释剂等，制备治疗糖尿病的食品。

所述食品上可接受的载体可参见现有技术。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明开拓了2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的一种新用途，为制备治疗糖尿病的食品和药物提供了新的思路和解决方法。

本发明的2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物，能有效的抑制α-葡萄糖苷酶的活性，有效降低血糖。

附图说明

图1a为化合物1～5对α--葡萄糖苷酶的影响；

图1b为化合物6～10对α--葡萄糖苷酶的影响；

图2为STZ对小鼠空腹血糖的影响；

图3为STZ对小鼠体重的影响；

图4为STZ对小鼠摄食量的影响；

其中，图2～图4中，^*P<0.05vs模型对照组，^**P<0.01vs模型对照组，^***P<0.0001vs模型对照组，n=5；

图5为STZ对小鼠胰腺组织的影响；

图6为ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠空腹血糖的影响；

图7为ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠摄食量的影响；

图8为ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠饮水量的影响；

其中，图6～图8中，^*P<0.05vs模型对照组，^**P<0.01vs模型对照组n=10；

图9为ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠体脂肪率的影响；

其中，^**P<0.01vs高脂对照组，^##P<0.01vs模型对照组，n=10。

具体实施方式

下面结合具体实施方式进一步阐释本发明。

实施例1苯甲酸酯类化合物的制备

1、化合物1：2,3-二羟基苯甲酸戊酯

将（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸，10ml戊醇置于25ml圆底烧瓶中，冷至0℃，滴加2～3滴浓硫酸，回流搅拌24h。用薄层色谱（展开剂：正己烷/乙酸乙酯，5/1，V/V）跟踪反应，反应停止后，蒸出戊醇，得粗产品，硅胶柱层析（展开剂：正己烷/乙酸乙酯，5/1，V/V），得白色固体170mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.00(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.12(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.41(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.33～1.38(m,4H),0.90(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.4,148.9,145.1,120.5,119.7,119.1,112.7,65.7,28.2,28.1,22.3,13.9ppm;IR(KBr)ν:3458,2931,2865,1674,1469,1309,1268,1067,754cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₁₂H₁₇O₄ ⁺:225.1121,found:225.1104。

2、化合物2：2,3-二羟基苯甲酸辛酯

合成方法同化合物1，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、10ml辛醇，获得白色固体128mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.64(s,1H),4.35(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26～1.38(m,8H),0.89(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]⁺calcd forC₁₅H₂₃O₄ ⁺:267.1591,found:267.1590。

3、化合物3：2,3-二羟基苯甲酸癸酯

将（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸，（316mg，2mmol）正癸醇，10ml四氢呋喃置于25ml圆底烧瓶中，冷至0℃，加入（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，室温搅拌24h。用薄层色谱（展开剂：正己烷/乙酸乙酯，2/1，V/V）跟踪反应。反应停止后，蒸出溶剂，残余物用乙酸乙酯溶解，过滤，滤液用5%柠檬酸溶液、饱和碳酸氢钠溶液、水洗，酯层经无水硫酸钠干燥，过滤，旋蒸浓缩得初产品440mg，硅胶柱层析（展开剂：正己烷/乙酸乙酯，2/1，V/V），得白色固体132mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.09(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.35(t,2H,J=7.0Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.27～1.35(m,12H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.8,148.9,145.0,120.5,120.0,119.6,119.1,65.7,31.9,29.5,29.3,29.2,28.5,27.6,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3478,2926,2885,1667,1469,1309,1267,1067,753cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₁₇H₂₇O₄ ⁺:295.1904,found:295.1910。

4、化合物4：2,3-二羟基苯甲酸十二烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（372mg，2mmol）十二烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体180mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.38(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.64(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26～1.35(m,16H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]⁺calcd forC₁₉H₃₁O₄ ⁺:323.2217,found:323.2236。

5、化合物5：2,3-二羟基苯甲酸十四烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（428mg，2mmol）十四烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体150mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.5Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.26～1.35(m,20H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.4,148.9,145.0,120.5,119.6,119.1,112.6,65.7,31.9,29.7～29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3485,2917,2849,1669,1467,1310,1267,1157,1067,759cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₂₁H₃₅O₄ ⁺:351.2530,found:351.2536。

6、化合物6：2,3-二羟基苯甲酸十六烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（484mg，2mmol）十六烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体178mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.65(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.25～1.35(m,24H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);HRMS:m/z[M+H]⁺calcd forC₂₃H₃₉O₄ ⁺:379.2843,found:379.2848。

7、化合物7：2,3-二羟基苯甲酸十八烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（540mg，2mmol）十八烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体170mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.35(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.44(m,2H),1.25～1.35(m,28H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.4,148.9,145.1,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7～29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3473,2917,2850,1665,1467,1266,1159,1064,799,762cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₂₅H₄₃O₄ ⁺:407.3156,found:407.3192。

8、化合物8：2,3-二羟基苯甲酸二十烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（896mg，3mmol）二十烷醇，（206mg，1mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体104mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.00(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=0.5,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.43(m,2H),1.25～1.35(m,32H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.4,148.9,145.0,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7～29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3403,2919,2850,1675,1467,1313,1254,1159,1067,752cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₂₇H₄₇O₄ ⁺:435.3469,found:435.3489。

9、化合物9：2,3-二羟基苯甲酸二十二烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（653mg，2mmol）二十二烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，15ml四氢呋喃，获得白色固体102mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.01(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.0Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.78(m,2H),1.43(m,2H),1.25～1.35(m,36H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:170.4,148.9,145.1,120.5,119.6,119.1,112.7,65.7,31.9,29.7～29.6,29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3397,2918,2849,1675,1469,1312,1256,1158,1065,750cm^-1;HRMS:m/z[M+H]⁺calcd for C₂₉H₅₁O₄ ⁺:463.3782,found:463.3790。

10、化合物10：2,3-二羟基苯甲酸三十烷酯

合成方法同化合物3，反应投料为：（154mg，1mmol）2,3-二羟基苯甲酸、（1.32g，3mmol）三十烷醇，（250mg，1.2mmol）二环己基碳二亚胺，20ml四氢呋喃，获得白色固体75mg。

理化性质：白色固体,¹H NMR(500MHz,CDCl₃)δ:11.00(s,1H),7.37(dd,1H,J=1.5,8.5Hz),7.10(dd,1H,J=1.0,8.0Hz),6.80(t,1H,J=8.0Hz),5.63(s,1H),4.34(t,2H,J=6.5Hz),1.77(m,2H),1.45(m,2H),1.25～1.35(m,52H),0.88(t,3H,J=7.0Hz);¹³C NMR(125MHz,CDCl₃)δ:164.5,149.4,145.0,120.5,119.6,119.1,112.6,65.7,34.9,31.9,29.7～29.5,29.4,29.2,28.5,25.9,25.4,24.7,22.7,14.1ppm;IR(KBr)ν:3484,2920,2848,1665,1468,1313,1262,1162,1076,801cm^-1;MS(m/z):575[M]⁺。

实施例2苯甲酸酯类化合物对α-葡萄糖苷酶的活性抑制作用的研究

利用α-葡萄糖苷酶抑制试验对表1的苯甲酸酯类的化合物进行筛选。

表1苯甲酸酯类化合物

将化合物用0.1mol/L、PH7.0的磷酸盐缓冲液稀释成1mg/ml，100μg/ml，10μg/ml，1μg/ml的溶液。取30μl后置于96孔板中，与0.075U的α-葡萄糖苷酶酶液50μl混合，底物为50μl的3mmol/L pNPG（对硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷）；37℃反应30min后加入100μl0.1mol/L Na₂CO₃溶液终止反应，用酶标仪（Bio-Rad，日本）波长为405nm测定其吸光值，计算α-葡萄糖苷酶抑制率和半数抑制浓度（IC50）值。

α-葡萄糖苷酶抑制率的计算公式是：

α-葡萄糖苷酶抑制剂%=（A_阴性组-A_空白组）-（A_{待测样品组}-A_空白组）/(A_阴性组-A_空白组)

其中，A_阴性组为只含磷酸缓冲液及α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值，A_空白组为只含磷酸缓冲液及灭活的α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值，A_{待检样品组}为含有待检化合物，α-葡萄糖苷酶及pNPG底物的吸光值。

参照图1a和图1b可知，化合物1～化合物10对α-葡萄糖苷酶均具有一定的抑制作用，阿卡波糖（商品名为拜唐苹）是一种新型口服降糖药，在肠道内竞争性抑制α-葡萄糖苷酶，与阿卡波糖相比，在十个化合物中对α-葡萄糖苷酶抑制效果最差的化合物1也可达到与阿卡波糖相当的效果，而2，3-二羟基苯甲酸十四酯（ABG-001）对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用最为明显，其中，2，3-二羟基苯甲酸十四酯的IC50为0.17mg/ml，而阳性对照阿卡波糖的IC50为0.68mg/ml，2，3-二羟基苯甲酸十四酯对α-葡萄糖苷酶活性的抑制效果是阿卡波糖4倍。

实施例3实验性2型糖尿病小鼠的制备方法的研究

链脲佐菌素（streptozocin，STZ）是经典的致糖尿病药物，其存在亚硝基基团，可产生胰岛β细胞毒性物质NO。NO参与许多自由基级联式反应，诱导胰岛β细胞凋亡，降低细胞代谢和胰岛素的分泌。

为正确制备实验性2型糖尿病小鼠，本实施例对制备实验性2型糖尿病小鼠的STZ注射剂量进行了研究。

实验小鼠种类为：5周龄的ICR雄性小鼠

（1）实验方法

本实施例将实验动物分为了对照组、STZ高剂量组、STZ中剂量组和STZ低剂量组，每组5只。

各组的饲料均为高脂饲料（由上海斯莱克实验动物有限公司提供）。动物禁食不禁水12h，STZ低剂量组按40mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ，连续注射三天，每天一次，共注射三次；STZ中剂量组按70mg/kg体重的剂量注射STZ，间隔一天注射一次，共注射两次；STZ高剂量组按100mg/kg体重的剂量一次性腹腔注射；高脂对照组注射0.1mol/L pH为7.0的柠檬酸缓冲液，注射体积为100μl，注射次数为每天一次，连续注射三天，共注射三次。

对造模前以及造模后第三天、第十天和第十七天的各组小鼠的空腹血糖值进行测定，并对小鼠的每日摄食量进行了监测，在第十七天对各组小鼠进行了解剖取胰脏，进行石蜡切片，苏木素伊红染色。

（2）实验结果

在注射STZ后，STZ高剂量组、STZ低剂量组均表现出了血糖显著升高的现象（见图2），并且各剂量组在体重上，均发生了显著下降的变化（见图3），同时摄食量也显著增加（见图4）。这一结果表明，STZ的确能致小鼠糖尿病。

通过对各组小鼠的胰腺组织切片结果进行比较，参见图5，发现高剂量组和中剂量组对胰岛细胞造成了严重的炎症细胞浸润，而低剂量组并未造成严重损伤，因此低剂量组为成功的实验性2型糖尿病组。

实施例4化合物ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠的影响

（1）实验方法

1）动物分组：

取健康雄性小鼠40只（由上海斯莱克实验动物有限公司提供），随机分为正常对照组、高脂对照组、模型对照组和ABG-001组，每组10只小鼠，其中，模型对照组和ABG-001剂量组的小鼠事先用STZ诱导糖尿病，构建实验性2型糖尿病小鼠模型。各组的饲料均为高脂饲料（由上海斯莱克实验动物有限公司提供）。

实验性2型糖尿病小鼠模型的构建方法为：

用高脂饲料连续饲养5周后，动物禁食不禁水12h，按40mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ溶液（临用前配制），连续注射三天，每天一次，共注射三次；高脂对照组注射0.1mol/L pH为7.0的柠檬酸缓冲液，注射体积为100μl，注射次数为每天一次，连续注射三天，共注射三次。。

2）处理方法

造模后第四天开始连续给药处理50天。

正常对照组：给与普通饲料，同时灌胃金龙鱼油；剂量为100μl，每天一次；

高脂对照组：给与高脂饲料，灌胃金龙鱼油，剂量为100μl，每天1次；

模型对照组：给与高脂饲料，灌胃金龙鱼油，剂量为100μl，每天1次；

ABG-001组：给与高脂饲料，按照10mg/kg的剂量灌胃，每天一次，化合物ABG-001可先用100μl金龙鱼油溶解。

每日测定各组小鼠的日摄食量和日饮水量，每隔一周禁食12h，尾部取血，测定各组小鼠的血糖变化值。末次给药后，小鼠禁食不禁水12h，取血检测血清中血糖、甘油三酯、胆固醇、肌酐、AST、ALT等指标，并取心、肝、胰、脾、肾、脂肪等组织称重。

（2）实验结果

表2ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠血清指标的影响

注：^*P<0.05vs模型对照组，^**P<0.01vs模型对照组，^#P<0.05vs高脂对照组，^##P<0.01vs高脂对照组，n=10。

表3ABG-001对实验性2型糖尿病小鼠组织重量的影响

如图6，与模型对照组相比，在造模后第11、18、25、32、38和53天，ABG-001组的空腹血糖值均显著性降低，血糖降低率可达59.28%。如表2所示，与模型对照组相比，末次给药后，ABG-001组血清中的血糖值显著性降低。

如图7和图8所示，在给药处理的一到七周，ABG-001组比模型对照组的摄食量和饮水量均显著的降低，说明通过ABG-001的给药处理，能明显减轻了实验性2型糖尿病小鼠临床表现中多饮多食的症状。

如图9所示，ABG-001组与模型对照组的脂肪重量与体重的比值（体脂肪率）相比，也存在显著差异，体脂肪率明显增加，并且对各组别各组织重量进行了比较，发现，ABG-001组与模型对照组的脂肪重量存在显著差异（表3），脂肪重量增加了80%以上。

以上结果表明，ABG-001能够降低实验性2型糖尿病小鼠的血糖，并显著减轻了2型糖尿病小鼠临床表现中多饮多食的症状，改善因糖尿病导致的消瘦。

实施例5ABG-001急性大剂量口服给药未出现毒性反应

实验主要材料：ICR小鼠（体重22g～25g，雄性和雌性各10只，购自浙江大学实验动物中心）。

实验操作：ABG-001较难溶于水。

将ABG-001溶解于99.5%乙醇中，然后添加1%吐温80，用生理盐水稀释到使用浓度（乙醇的最终浓度小于2%）。经口服药5g/kg。

急性中毒试验：将4周龄ICR雄性小鼠20只，雌雄各半，随机分为对照组，5g/kg处理组。将溶于1%Tween-80的化合物ABG-001经口服药5g/kg，连续观察一周，每天观察动物的精神状态，测定体重及摄食量。

化合物投入10分钟后小鼠肢体出现卷缩，运动量减少。1小时后，全部恢复正常。一周内小鼠无死亡情况，摄食量无明显变化，体重变化无明显减少。心，肝，脾，肾及白色脂肪组织重量及眼观无显著性差异。

实验结果：

（1）如表4所示，与生理盐水对照组相比，ABG-001处理组动物没有出现体重增加/减少（包括各脏器重量）。

表4ICR小鼠体重和各脏器系数（每组10只，♂=5，♀=5；ABG-001=5g/kg）

脏器系数=脏器重/体重（%）。

（2）如表5所示，与生理盐水对照组相比，ABG-0015g/kg组没有显示血液生化学指标的异常，提示肝、肾、造血器官等功能没有被损害。

表5ICR小鼠血液生化指标（每组♀=10，♂=10；ABG-001=5g/kg灌胃）

其中，TP：总蛋白；ALB：白蛋白；GLOB：球蛋白；ALT：丙氨酸氨基转移酶；AST：谷草转氨酶；TBIL：总胆红素；DBIL：直接胆红素；CHE：乙酰胆碱酯酶。

Claims

1.2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物在制备治疗糖尿病的食品和药物中的应用，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物具有以下结构通式：

其中，n＝7～21。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n＝7，9，11，13，15，17，19或21。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n＝7～17。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n＝11～13。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述2,3-二羟基苯甲酸酯类化合物的结构通式中，n＝13。

6.如权利要求1所述的应用，其特征在于，糖尿病为Ⅱ型糖尿病。

7.如权利要求1所述的应用，其特征在于，药物的剂型为固体制剂或液体制剂。