CN103316102A - 治疗痔疮外用中药制剂的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种治疗痔疮外用中药制剂的检测方法。治疗痔疮外用中药制剂是由如下重量份数的原料制成：荆芥105～135份、防风105～135份、透骨草270～330份、川乌80～100份、蛤蟆草270～330份、草乌80～100份、苦参105～135份。治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，包括内容物的鉴别是薄层色谱法鉴别荆芥、防风、川乌、草乌成分，含有成分的含量测定是高效液相色谱法测定苦参碱、乌头类生物碱的含量。本发明简便、快捷、准确，灵敏度好、稳定性高，提高了对药品质量的有效控制，保证了质量。

Description

治疗痔疮外用中药制剂的检测方法

技术领域

本发明属于药物技术领域，具体涉及一种治疗痔疮外用中药制剂的检测方法。

背景技术

复方荆芥熏洗制剂作为一种已经上市的治疗痔疮外用中药制剂，具有祛风燥湿，消肿止痛的作用。临床上主要用于外痔、混合痔、内痔脱垂嵌顿、肛裂、肛周脓肿或肛瘘急性发作等疾病；但现有复方荆芥熏洗制剂标准落后，检测指标较少，仅有一般药材的简单鉴别项，因处方中含有毒性药材草乌、川乌，也没有含量测定的指标限制，现有技术的质量检测方法不能有效控制复方荆芥熏洗制剂的质量，从而将影响产品的生产检测和用药安全。

发明内容

本发明提供了一种治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，能很好地控制产品质量的均一稳定性，保证产品质量。

本发明所述的治疗痔疮外用中药制剂是由如下重量份数的原料制成：

荆芥       105～135份           防风     105～135份      透骨草   270～330份

川乌       80～100份            蛤蟆草   270～330份      草乌     80～100份

苦参       105～135份。

最佳原料组成为：

荆芥       120份           防风      120份      透骨草   300份

川乌       90份            蛤蟆草    300份      草乌     90份

苦参       120份。

具体制备步骤如下：

先将荆芥、川乌、草乌粉碎成细粉，再将其余原料加水煎煮3次，煎煮时间分别为2、2、1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，粉碎成细粉，最后将两种细粉合并混匀，制粒，干燥即得。

本发明所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，包括内容物的鉴别和含有成分的含量测定，内容物的鉴别是薄层色谱法鉴别荆芥、防风、川乌、草乌成分，含有成分的含量测定是高效液相色谱法测定苦参碱、乌头类生物碱的含量。

所述的荆芥的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取荆芥对照品1.0g，加丙酮20ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7:3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色荧光斑点。

所述的防风的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取防风对照品1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的乙酸乙酯-乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

所述的川乌、草乌的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取5g，加无水乙醇30ml超声处理30分钟，过滤，滤渣用无水乙醇5ml洗涤2次，与滤液合并，蒸干，残渣用10%盐酸溶液20ml全部溶解，过滤，滤液用氨水调PH值9～10，用***振摇提取2次，每次20ml，提取液低温蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取乌头碱对照品，用无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5：5：1的***-乙酸乙酯-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

所述的苦参碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为5：95：0.8：0.8的乙腈-0.05mol/L KH₂PO₄-磷酸-三乙胺为流动相；检测波长205nm；

（2）对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱130μg的溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml及***30ml，密塞，静置过夜，功率为250W、频率为33kHz的超声处理30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用***15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

所述的乌头类生物碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为55：33：312的乙腈-四氢呋喃-0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相；检测波长为230nm；理论板数按乌头碱峰计算应不低于4000；

（2）对照品溶液的制备：取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱对照品，精密称定，加体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液制成每1ml含乌头碱、次乌头碱、新乌头碱各30μg的混合溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，水温控制在20℃，功率为250W、频率为50kHz的超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

本发明检测方法简便、快捷、准确，灵敏度好、稳定性高，提高了对药品质量的有效控制，保证了质量。

附图说明

图1是苦参碱标准曲线。

图2是苦参碱对照品的高效液相色谱图。

图3是苦参阴性样品的高效液相色谱图。

图4是苦参药材的高效液相色谱图。

图5是复方荆芥熏洗剂样品的高效液相色谱图。

图6是乌头碱、次乌头碱、新乌头碱混合对照的高效液相色谱图。

图7是川乌、草乌阴性对照溶液的高效液相色谱图。

图8是复方荆芥熏洗剂样品的高效液相色谱图。

图9是川乌、草乌药材的高效液相色谱图。

图10是新乌头碱标准曲线。

图11是次乌头碱标准曲线。

图12是乌头碱标准曲线。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

本发明所述的治疗痔疮外用中药制剂是由如下重量份数的原料制成：

荆芥       120g           防风      120g      透骨草   300g

川乌       90g            蛤蟆草    300g      草乌     90g

苦参       120g。

制备方法如下：

先将荆芥、川乌、草乌粉碎成细粉，再将其余原料加水煎煮3次，煎煮时间分别为2、2、1小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩，干燥，粉碎成细粉，最后将两种细粉合并混匀，制粒，干燥即得。

内容物的鉴别：

荆芥的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取荆芥对照品1.0g，加丙酮20ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7:3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色荧光斑点。

防风的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取防风对照品1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的乙酸乙酯-乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

川乌、草乌的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取5g，加无水乙醇30ml超声处理30分钟，过滤，滤渣用无水乙醇5ml洗涤2次，与滤液合并，蒸干，残渣用10%盐酸溶液20ml全部溶解，过滤，滤液用氨水调PH值9～10，用***振摇提取2次，每次20ml，提取液低温蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取乌头碱对照品，用无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5：5：1的***-乙酸乙酯-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

苦参碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为5：95：0.8：0.8的乙腈-0.05mol/L KH₂PO₄-磷酸-三乙胺为流动相；检测波长205nm；

（2）对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱130μg的溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml及***30ml，密塞，静置过夜，功率为250W、频率为33kHz的超声处理30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用***15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

苦参碱含量检测的研究

（1）仪器与试药

仪器：美国戴安高效液相色谱仪，Scienhome Kromasil-C₁₈-5μ250×4.6mm色谱柱，P680泵，UVD170紫外检测器，CHROMELEON数据处理软件，startorius BP211D电子分析天平（d=0.01mg）。

试剂：乙腈为色谱纯，水为重蒸水，其余试剂均为分析纯。

苦参碱对照品（0805-200005，约20mg，中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。

（2）色谱条件的选择

流动相的选择：采用美国戴安高效液相色谱仪，P680泵UVD170紫外检测器，CHROMELEON数据处理软件，流速1ml/分钟。流动相曾试用以下***：

流动相一：乙腈-无水乙醇-3％磷酸（80：10：10）

结果：在30分钟内未检测出对照品相应色谱峰。

流动相二：乙腈-磷酸盐缓冲液-磷酸-三乙胺（5：95：0.3：0.3）

结果：苦参碱保留时间为9.2分钟，对照品品和样品均有拖尾，峰形评价一般。

流动相三：乙腈-0.05mol/L KH₂PO₄-磷酸-三乙胺（5：95：0.8：0.8）

结果：苦参碱保留时间为8.9分钟，对照品和样品峰形较前流动相好，样品峰分离彻底。

根据试验结果，确定流动相三为本方法的流动相。

检测波长的确定：根据《中国药典》及有关参考文献，苦参碱主要有205nm、210nm、220nm三个吸收波长。为确定最佳吸收波长，本试验对同一对照品和样品在三个波长下同时进行了测定，结果见表1。

表1检测波长选择结果表

根据试验结果，苦参碱在205nm处峰面积最大，故确定检测波长为：205nm。

（3）样品提取条件的选择

提取溶剂的选择：取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g，精密称定，一式三份，分别置具塞锥形瓶中，分别用以下溶剂进行提取：

方法一、加浓氨试液1ml及氯仿30ml，密塞，静置过夜，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用氯仿15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

方法二、加浓氨试液1ml及***30ml，密塞，静置过夜，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用***15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

方法三、加浓氨试液1ml及流动相30ml，密塞，静置过夜，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用流动相15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸至适量，转移至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法：精密吸取对照品溶液与以上各供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测定峰面积，结果见表2。

表2提取溶剂选择结果表

结果表明：以***为提取溶剂时，样品含量最高，故选择提取溶剂为***。

提取方法的选择：取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g，精密称定，一式四份，置具塞锥形瓶中，分别加浓氨试液1ml，***30ml，分别用以下方式提取制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪，测定结果见表3。

表3提取方法选择结果表

结果表明：样品以过夜后超声提取时，苦参碱含量最高，故选择提取方法为过夜后超声提取。

提取溶剂用量的选择：取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g，精密称定，一式三份，置具塞锥形瓶中，分别加浓氨试液1ml，***20ml、30ml、40ml，同上法制备供试品溶液，分别注入液相液相色谱仪，测定结果见表4。

表4溶剂用量选择结果表

结果表明：样品用***30ml与40ml提取时，苦参碱含量相当，为节省试剂，确定提取溶剂的用量为30ml。

提取时间的选择：取装量差异项下的本品，研细，取约0.25g，精密称定，一式三份，分别置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml及***30ml，密塞，静置过夜，分别超声处理（功率250W，频率33kHz）20分钟、30分钟、40分钟，同上法制备供试品溶液，分别注入液相色谱仪测其含量，测定结果见表5。

表5提取时间选择结果表

结果表明：超声30分钟时有效成分已提取完全，超声40分钟时样品含量无明显变化，故确定样品超声时间为30分钟。

（4）线性范围考察：取苦参碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱130μg的对照溶液，分别精密吸取20μl、15μl、10μl、5μl、2μl进样，测定其峰面积。结果见表6。以峰面积（Y）对进样量（X）进行回归，得标准曲线方程。得苦参碱标准曲线方程为：Y=29.969X-0.6211（r=0.9998），苦参碱标准曲线见图1。以上结果表明苦参碱在0.26μｇ～2.60μｇ范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。

表6苦参碱对照品测定结果表

（5）阴性对照试验：取不含苦参的阴性试制样品0.25g，苦参药材细粉0.04g，同前法处理后，分别制得阴性对照液和苦参药材溶液，分别取对照品溶液、阴性对照液、苦参药材溶液、复方荆芥熏洗剂供试品溶液各进20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，结果如图2、图3、图4、图5。

结果表明：在阴性对照图谱中苦参碱峰无干扰。

（6）精密度试验：吸取苦参碱对照品溶液（26μg/ml）和050501批复方荆芥熏洗剂同一样品供试液分别重复进样6次，每次各20μl，分别记录两者峰面积并计算RSD，结果见表7。

表7精密度试验结果

结果表明：苦参碱对照品峰面积RSD为0.19%，供试品峰面积RSD为1.83%，对照品及供试品的精密度良好。

（7）稳定性试验：取050501批同一份供试品溶液，分别于0小时、2小时、4小时、6小时、8小时，进样。结果见表8。

表8样品稳定性试验结果

结果表明：供试品苦参碱在8小时内峰面积RSD为0.44%，供试品溶液在8小时内稳定性良好。

（8）重现性试验：取050501批样品5份，分别按供试品制备方法制备，测定峰面积，结果见表9。

表9重现性试验结果

结果表明：5份供试品的平均含量为2.72mg/g，RSD为1.01%，试验方法的重现性良好。

（9）回收率试验：（采用加样回收法）精密称取050501批（已知苦参碱含量为2.72mg/g）样品0.12g，共取5份，分别加入相同的苦参碱对照品，测定总含量，计算回收率。回收率=（总量-样品中量）/加入纯品量×100％。结果见表10。

表10盐酸苦参碱回收率试验结果

结果表明：苦参碱平均回收率为98.8%，RSD为0.14%，加样回收率良好。

（10）样品测定：取复方荆芥熏洗剂样品，按本发明方法测定，苦参碱含量见表11。

表11复方荆芥熏洗剂苦参碱含量测定结果

结果表明：含量均稳定在为1.8mg/g以上，证明该含量测定方法是稳定的，可很好的控制产品的质量。

乌头类生物碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010版附录ⅥD高效液相色谱法测定

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为55：33：312的乙腈-四氢呋喃-0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相；检测波长为230nm；理论板数按乌头碱峰计算应不低于4000；

（2）对照品溶液的制备：取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱对照品，精密称定，加体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液制成每1ml含乌头碱、次乌头碱、新乌头碱各30μg的混合溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，水温控制在20℃，功率为250W、频率为50kHz的超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

乌头类生物碱含量检测的研究

（1）仪器与试药

仪器：美国戴安高效液相色谱仪（P680泵，UVD170U紫外检测器，C18柱，CHROMELEON数据处理软件）；startorius BP211D电子分析天平（d=0.01mg），startorius BS124S电子分析天平（d=0.1mg）；BENCHTOP CLFANERS HS3120超声振荡器。

试剂：乙腈（HPLC），甲醇（HPLC），甲醇（AR），冰醋酸（AR），四氢呋喃（AR），醋酸铵（AR），盐酸（AR），水为重蒸水。

乌头碱（批号：110720-200410，中国药品生物制品鉴定所）

次乌头碱（批号：798-9202，中国药品生物制品鉴定所）

新乌头碱（批号：110799-200404，中国药品生物制品鉴定所）

（2）方法的选择

按照本发明中的方法测定，试验结果为乌头碱、次乌头碱、新乌头碱峰分离度良好，塔板数均大于4000，方法可行。

（3）阴性对照试验：分别取复方荆芥熏洗剂100401批样品，不含川乌、草乌的阴性试制样品1g，精密称定，同供试品溶液制备，同法处理后，制得复方荆芥熏洗剂供试品溶液、阴性对照溶液；取川乌药材0.221g，草乌药材0.221g，同供试品溶液制备，同法处理后，得川乌、草乌药材溶液；分别取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱混合对照品溶液、川乌、草乌双阴性对照溶液、复方荆芥熏洗剂供试品溶液、川乌、草乌药材溶液各20μl进样，记录色谱图。试验结果见图6、图7、图8、图9。

结果表明：在阴性对照图谱中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱均无干扰。

（4）重复性试验：取装量差异项下的100401批样品，研细，取6份，每份约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率50kHz；水温控制在20℃）40分钟，放冷，再称定重量，用体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。试验结果见表12。

表12重复性试验结果

结果表明：样品中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱总含量RSD为0.20%，方法重复性良好。

（5）中间精密度试验：取装量差异项下的100401批样品，照供试品溶液的制备方法处理样品，在不同日期、由不同分析人员、在不同仪器分别进行试验，其中样品1、2为不同日期，样品3、4为不同操作人员，样品5、6为不同仪器测定。试验结果见表13。

表13 中间精密度试验结果

结果表明：样品中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱总含量中间精密度RSD为0.30%，中间精密度良好。

（6）线性范围考察：取新乌头碱、次乌头碱、乌头碱对照品适量，精密称定，加体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液制成每1ml含新乌头碱36.8μg、次乌头碱39.6μg、乌头碱36μg的溶液，得对照一，精密吸取5ml对照一移至10ml容量瓶中，用流动相定容至10ml，得对照二，依次做梯度稀释，得对照三、对照四、对照五，分别精密吸取上述对照品溶液各20μl进样，测定其峰面积。结果见表14、表15、表16。以峰面积（y）对进样量（x）进行回归，得新乌头碱标准曲线方程：y=17.0240x+0.0157（r=0.99995），次乌头碱标准方程为：y=16.3203x-0.0113（r=0.99993），乌头碱标准方程为y=16.5254x-0.0232（r=0.99991）以上结果表明新乌头碱在0.046μg～0.736μg范围内，次乌头碱在0.0495μg～0.792μg范围内，乌头碱在0.045μg～0.72μg范围内，峰面积值与进样量有良好的线性关系。试验结果见图10、图11、图12。

表14新乌头碱对照品测定结果

表15次乌头碱对照品测定结果

表16乌头碱对照品测定结果

（7）回收率试验：（采用加样回收法）精密称取100401批（已知含量新乌头碱2.61mg/袋，即0.261mg/g，次乌头碱3.09mg/袋，即0.309mg/g，乌头碱2.40mg/袋，即0.240mg/g）样品0.5g，共称取5份，分别加入相同的新乌头碱、次乌头碱、乌头碱混合对照品，测定总含量，计算回收率。回收率=（总量-样品中量）/加入纯品量。结果见表17。

表17加样回收试验结果

结果表明：新乌头碱的平均回收率为100.14%，RSD为0.61%，次乌头碱的平均回收率为99.67%，RSD为0.52%，乌头碱的平均回收率为99.46%，RSD为0.81%，加样回收率良好。

（8）样品测定：取十批样品，按拟订方法测定，含量见表18。

表1810批样品含量测定结果

由以上10批复方荆芥熏洗剂样品测定中可以看出，新乌头碱+次乌头碱+新乌头碱总含量最低的是090501批，含量为4.81mg/袋，含量最高的是110101批，为12.22mg/袋。最终确定双酯型生物碱以乌头碱（C₃₄H₄₇NO₁₁）、次乌头碱（C₃₄H₄₅NO₁₀）、新乌头碱（C₃₃H₄₅NO₁₁）的总量和每袋为3.0mg～14.5mg，即每次使用量为一袋或者为每次使用量的含药范围。

Claims (7)

1.一种治疗痔疮外用中药制剂，其特征在于由如下重量份数的原料制成：

荆芥       105～135份           防风     105～135份      透骨草   270～330份

川乌       80～100份            蛤蟆草   270～330份      草乌     80～100份

苦参       105～135份。

2.一种治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，包括内容物的鉴别和含有成分的含量测定，其特征在于：内容物的鉴别是薄层色谱法鉴别荆芥、防风、川乌、草乌成分，含有成分的含量测定是高效液相色谱法测定苦参碱、乌头类生物碱的含量。

3.根据权利要求2所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，其特征在于所述的荆芥的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取荆芥对照品1.0g，加丙酮20ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为7:3的环己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的红色荧光斑点。

4.根据权利要求2所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，其特征在于所述的防风的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取6g，加丙酮30ml超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取防风对照品1g，加丙酮20ml，超声处理30分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液10μl和对照品溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为4:1的乙酸乙酯-乙醇为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

5.根据权利要求2所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，其特征在于所述的川乌、草乌的鉴别方法具体步骤如下：

取样品研细，称取5g，加无水乙醇30ml超声处理30分钟，过滤，滤渣用无水乙醇5ml洗涤2次，与滤液合并，蒸干，残渣用10%盐酸溶液20ml全部溶解，过滤，滤液用氨水调PH值9～10，用***振摇提取2次，每次20ml，提取液低温蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；取乌头碱对照品，用无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；

参照《中国药典》2010年版附录ⅥB薄层色谱法进行检测，吸取供试品溶液和对照品溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比为5：5：1的***-乙酸乙酯-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

6.根据权利要求2所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，其特征在于所述的苦参碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为5：95：0.8：0.8的乙腈-0.05mol/L KH₂PO₄-磷酸-三乙胺为流动相；检测波长205nm；

（2）对照品溶液的制备：取苦参碱对照品，精密称定，加流动相制成每1ml含苦参碱130μg的溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨试液1ml及***30ml，密塞，静置过夜，功率为250W、频率为33kHz的超声处理30分钟，放冷，滤过，容器及残渣用***15ml分2次洗涤，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至25ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

7.根据权利要求2所述的治疗痔疮外用中药制剂的检测方法，其特征在于所述的乌头类生物碱的含量测定方法具体步骤如下：

参照《中国药典》2010附录ⅥD高效液相色谱法测定：

（1）色谱条件与***适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；体积比为55：33：312的乙腈-四氢呋喃-0.1mol/L醋酸铵溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）为流动相；检测波长为230nm；理论板数按乌头碱峰计算应不低于4000；

（2）对照品溶液的制备：取乌头碱、次乌头碱、新乌头碱对照品，精密称定，加体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液制成每1ml含乌头碱、次乌头碱、新乌头碱各30μg的混合溶液，即得；

（3）供试品溶液的制备：取样品研细，取1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液50ml，称定重量，水温控制在20℃，功率为250W、频率为50kHz的超声处理40分钟，放冷，再称定重量，用体积比为1：100的盐酸-甲醇的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

（4）测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

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