CN103314856A - 白芨的侧芽组培繁殖方法 - Google Patents
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Abstract
白芨的侧芽组培繁殖方法,属于中药材种植技术领域,包括引种灭菌、芽体萌发培养、丛生芽诱导培养、增殖培养和生根培养五大步骤,其采用侧芽进行组培,所得到的幼苗污染率低,分化率高,遗传性状稳定,有效物质含量高;同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期,从剪切侧芽到生根苗的组培周期不到4个月,大大缩短了生产时间,降低了生产成本。
Description
技术领域
本发明属于中药材种植技术领域,特别是一种白芨的侧芽组培繁殖方法。
背景技术
白芨为兰科白芨属多年生草本植物,别名白根、地螺丝、白鸡娃、羊角七、紫兰、刀口药、连及草等。以块茎供药用,能收敛止血,消肿生肌;治肺结核咳血,支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手足皲裂等症。在生物医药、保健食品、纺织印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。随着白芨食品的开发利用和印染业、美容业的需求,白芨用量日趋增多。
白芨的种子自然萌发率极低,繁殖困难,野生资源稀少,由于需求量大,野生资源已经频临枯竭,现已列入《濒危动植物种国际贸易公约》予以保护,因此只有采取人工繁育,目前的常规方法大多以分株为主,即将块茎切成小块种植,繁殖系数低,已经无法满足市场需要。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是:针对现有技术的不足,提供一种利用白芨的侧芽进行组织培养,以便快速繁殖白芨幼苗,满足市场需要。
为解决上述技术问题,本发明所采用的技术方案是白芨的侧芽组培繁殖方法,包括引种灭菌、芽体萌发培养、丛生芽诱导培养、增殖培养和生根培养五大步骤,其特征在于具体方法如下。
⑴引种灭菌:选取健壮的野生白芨,将侧芽切下,在流水下冲洗,放入1%洗洁***溶液中浸泡20分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将侧芽放置在75%的酒精中消毒30秒钟后,再用0.2%的HgCl2水溶液浸泡7~9min,然后用无菌水冲洗5~6次,然后切掉侧芽底端形成新的伤口。
⑵芽体萌发培养:将消毒处理后的侧芽作为外植体接种在萌发培养基上,每瓶接种5~7株侧芽,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度60%~65%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行芽体萌发培养,15天后芽体萌发,15~30天后每瓶有4~6株萌发出带叶小苗,成活率达90%。
⑶丛生芽诱导培养:将小苗切下转接到诱导培养基上,每瓶接种5~7株,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度60%~65%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养,在16~22天之后均生成大量丛生芽,诱导率达100%。
⑷增殖培养:当丛生芽茎长到1~2cm时,将其切分成单芽,转入到增殖培养基中,每瓶接种5~7株,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度63%~67%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养,13~17天之内可观察到节间处出现很多凸起,接下来13~17天之内可观察到平均每瓶有增殖丛生芽25~30株,增殖系数达4.5。
⑸生根壮苗培养:当增殖丛生芽长到3~4cm时,将其切分成单芽,转入生根培养基上进行生根诱导培养,每瓶接种5~7株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度65%~70%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养。
38~40天后,可观察到平均每瓶有根须5~7根,茎长3~4cm且粗壮的白芨苗4~7株;此后,即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
上述组培繁殖方法中,所提到的各阶段培养基的配方是。
萌发培养基:LS+6~BA1.2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30 g/L +琼脂5g/L;pH5.8。
诱导培养基:B001 BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
增殖培养基:B002 BM+ IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
生根壮苗培养基:B003 BM+ IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
本发明的有益效果是采用侧芽进行组培,所得到的幼苗污染率低,分化率高,遗传性状稳定,有效物质含量高;同时本发明方法还大大缩短了白芨的组培繁殖周期,从剪切侧芽到生根苗的组培周期不到4个月,大大缩短了生产时间,降低了生产成本。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明,以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定,不应以此限制本发明的保护范围。
实施例1。
首先配制培养基。
萌发培养基:LS+6~BA1.2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30 g/L +琼脂5g/L;pH5.8。
诱导培养基:B001 BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
增殖培养基:B002 BM+ IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
生根壮苗培养基:B003 BM+ IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
然后选取健壮的野生白芨,将侧芽切下,在流水下冲洗,放入1%洗洁***溶液中浸泡20分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将侧芽放置在75%的酒精中消毒30秒钟后,再用0.2%的HgCl2水溶液浸泡7min,然后用无菌水冲洗5~6次,再切掉侧芽底端形成新的伤口;将消毒处理后的侧芽作为外植体接种在萌发培养基上,每瓶接种5株侧芽,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度60%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行芽体萌发培养,15天后芽体萌发,15~30天后每瓶有4~6株萌发出带叶小苗,成活率达90%;将小苗切下转接到诱导培养基上,每瓶接种5株,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度60%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养,在16~22天之后均生成大量丛生芽,诱导率达100%;当丛生芽茎长到1~2cm时,将其切分成单芽,转入到增殖培养基中,每瓶接种5株,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度63%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养,13~17天之内可观察到节间处出现很多凸起,接下来13~17天之内可观察到平均每瓶有增殖丛生芽25~30株,增殖系数达4.5;当增殖丛生芽长到3~4cm时,将其切分成单芽,转入生根培养基上进行生根诱导培养,每瓶接种5株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度65%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养;38天后,可观察到平均每瓶有根须5~7根,茎长3~4cm且粗壮的白芨苗4~7株;此时,即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
实施例2。
选取健壮的野生白芨,将侧芽切下,在流水下冲洗,放入1%洗洁***溶液中浸泡20分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将侧芽放置在75%的酒精中消毒30秒钟后,再用0.2%的HgCl2水溶液浸泡8min,然后用无菌水冲洗5~6次,再切掉侧芽底端形成新的伤口;将消毒处理后的侧芽作为外植体接种在萌发培养基上,每瓶接种6株侧芽,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度63%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行芽体萌发培养,15天后芽体萌发,15~30天每瓶有4~6株萌发出带叶小苗,成活率达90%;将小苗切下转接到诱导培养基上,每瓶接种6株,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度63%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养,在16~22天之后均生成大量丛生芽,诱导率达100%;当丛生芽茎长到1~2cm时,将其切分成单芽,转入到增殖培养基中,每瓶接种6株,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度65%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养,13~17天之内可观察到节间处出现很多凸起,接下来13~17天之内可观察到平均每瓶有增殖丛生芽25~30株,增殖系数达4.5;当增殖丛生芽长到3~4cm时,将其切分成单芽,转入生根培养基上进行生根诱导培养,每瓶接种6株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度68%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养;38天后,可观察到平均每瓶有根须5~7根,茎长3~4cm且粗壮的白芨苗4~7株;此时,即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
实施例3。
选取健壮的野生白芨,将侧芽切下,在流水下冲洗,放入1%洗洁***溶液中浸泡20分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将侧芽放置在75%的酒精中消毒30秒钟后,再用0.2%的HgCl2水溶液浸泡9min,然后用无菌水冲洗5~6次,再切掉侧芽底端形成新的伤口;将消毒处理后的侧芽作为外植体接种在萌发培养基上,每瓶接种7株侧芽,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度65%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行芽体萌发培养,15天后芽体萌发,15~30天每瓶有4~6株萌发出带叶小苗,成活率达90%;将小苗切下转接到诱导培养基上,每瓶接种7株,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度65%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养,在16~22天之后均生成大量丛生芽,诱导率达100%;当丛生芽茎长到1~2cm时,将其切分成单芽,转入到增殖培养基中,每瓶接种7株,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度67%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养,13~17天之内可观察到节间处出现很多凸起,接下来13~17天之内可观察到平均每瓶有增殖丛生芽25~30株,增殖系数达4.5;当增殖丛生芽长到3~4cm时,将其切分成单芽,转入生根培养基上进行生根诱导培养,每瓶接种7株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度70%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养;38天后,可观察到平均每瓶有根须5~7根,茎长3~4cm且粗壮的白芨苗4~7株;此时,即可将白芨组培苗进行炼苗移栽。
Claims (1)
1.白芨的侧芽组培繁殖方法,包括引种灭菌、芽体萌发培养、丛生芽诱导培养、增殖培养和生根培养五大步骤,其特征在于具体方法如下:
⑴引种灭菌:选取健壮的野生白芨,将侧芽切下,在流水下冲洗,放入1%洗洁***溶液中浸泡20分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将侧芽放置在75%的酒精中消毒30秒钟后,再用0.2%的HgCl2水溶液浸泡7~9min,然后用无菌水冲洗5~6次,然后切掉侧芽底端形成新的伤口;
⑵芽体萌发培养:将消毒处理后的侧芽作为外植体接种在萌发培养基上,每瓶接种5~7株侧芽,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度60%~65%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行芽体萌发培养,15天后芽体萌发,15~30天后每瓶有4~6株萌发出带叶小苗,成活率达90%;
⑶丛生芽诱导培养:将小苗切下转接到诱导培养基上,每瓶接种5~7株,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度60%~65%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽诱导培养,在16~22天之后均生成大量丛生芽,诱导率达100%;
⑷增殖培养:当丛生芽茎长到1~2cm时,将其切分成单芽,转入到增殖培养基中,每瓶接种5~7株,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度63%~67%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行丛生芽增殖培养,13~17天之内可观察到节间处出现很多凸起,接下来13~17天之内可观察到平均每瓶有增殖丛生芽25~30株,增殖系数达4.5;
⑸生根壮苗培养:当增殖丛生芽长到3~4cm时,将其切分成单芽,转入生根培养基上进行生根诱导培养,每瓶接种5~7株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度65%~70%,光照强度3000lx,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养;
上述组培繁殖方法中,所提到的各阶段培养基的配方是:
萌发培养基:LS+6~BA1.2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖30 g/L +琼脂5g/L;pH5.8;
诱导培养基:B001 BM+BA4+IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0;
增殖培养基:B002 BM+ IAA0.3+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0;
生根壮苗培养基:B003 BM+ IAA1+卡拉胶5g/L+蔗糖30 g/L;PH6.0。
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PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
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