CN103305437A - 一株l-乳酸铵耐受菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一株L-乳酸铵耐受菌株及其在发酵产L-乳酸铵中的应用。本发明采用低能氮离子注入诱变出发菌株，利用高糖平板、琥珀酸平板、乳酸铵平板筛选得到耐高糖、EMP途径强化且不分解利用乳酸的菌株。所得菌株于3L发酵罐中，在加有临界浓度乳酸铵的培养基中培养驯化，将驯化72小时后的菌液作为下一轮诱变和驯化的出发菌液。重复上述过程，直至筛选到目标菌株干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)LC-An226。该菌株具有乳酸铵耐受性好，糖酸转化率高的特点。在5L发酵罐中，发酵液中L-乳酸铵产量达到了206g/L，比原始出发菌株发酵产L-乳酸铵提高了58.46%，具有重大的社会意义及经济价值。
Description
技术领域
本发明涉及一株L-乳酸铵耐受菌株及其在发酵产乳酸铵中的应用，属于微生物发酵技术领域。
背景技术
乳酸铵在制药领域可用于生产治疗皮肤病的药物，还可用于动物饲料的添加剂。乳酸铵溶液可经阳离子交换树脂转型得到纯净的乳酸溶液。用乳酸铵和乙醇直接酯化可以生成“绿色溶剂”乳酸乙酯，乳酸乙酯最具发展前景的用途是利用其无毒、溶解性好、不易挥发等特点，取代目前正在使用的许多对环境有害的溶剂，如：卤代类、醚类以及破坏臭氧层的氟氯碳溶剂等。乳酸乙酯在传统的消费领域中多用于香精、香料、食品及酿酒行业，是良好的食品添加剂；此外，乳酸乙酯在制药工业中可用做压制药片的润滑剂，如药物心得静的中间体等。可见，L-乳酸铵具有很大的研究价值及发展前景。
乳酸可以通过化学合成法、微生物发酵法（同型乳酸发酵、异型乳酸发酵）及酶法几种方法合成得到。由于微生物发酵能够专业得到L-乳酸且无污染，因此发酵法被广泛应用于L-乳酸的生产。目前国内外多以米根霉、德式乳杆菌等进行L-乳酸发酵生产。根霉属于异型乳酸发酵，营养要求简单，但转化率相对较低，且发酵产物光学纯度不高。乳酸细菌属于同型乳酸发酵，转化率高，产物光学纯度也较高，属于光能异养型微生物，必须由外界提供多种营养物质及生长因子，如氨基酸、维生素、核酸碱基等。
自然界中产L-乳酸能力强，并可应用于工业生产的菌种只有霉菌中德根霉属及细菌中的乳杆菌属、芽孢杆菌属、链球菌属。为了提高发酵产L-乳酸的产量，降低生产制备成本，提高生产质量，国内外对其生产过程进行了大量研究，主要包括：生产菌种诱变改良、低价原料的开发利用、发酵工艺的优化等方面。由此可见，提高L-乳酸发酵产物光学纯度、提高发酵糖酸转化率、提高产物耐高糖能力等已经成为发酵产L-乳酸的研究热点。
发酵生产L-乳酸的传统工艺是采用不同的碳酸钙加入量来消除发酵中由于乳酸生成造成的酸抑制，调节发酵液pH值使菌种在适合的pH值下发酵得到较高的乳酸产量。碳酸钙作为中和剂，发酵液主要成分是粗乳酸钙。粗乳酸钙需经浓硫酸酸解得到粗乳酸和副产物硫酸钙，硫酸钙很难得到进一步利用，大量的硫酸钙堆积会造成环境污染。本发明以氨水为中和剂来控制发酵液pH值，直接得到的产物是乳酸铵。但乳酸铵的积累会造成产物抑制，对乳酸铵的产量造成一定程度上的减小。
发明内容
本发明的目的是为了解决发酵过程中乳酸铵的积累会造成产物抑制，使乳酸铵的产量减少，提供一株L-乳酸铵耐受菌株，使其发酵产L-乳酸铵的产量大幅提高。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案如下：
一种L-乳酸铵耐受菌株，其分类命名为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226，已于2013年4月3日保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2013123。
本发明所述的L-乳酸铵耐受菌株——干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226筛选方法是：出发菌株干酪乳杆菌LC-N235经低能氮离子注入诱变后，利用高糖平板、琥珀酸平板、乳酸铵平板筛选得到耐高糖、EMP途径强化且不分解利用乳酸的菌株。所得菌株于3L发酵罐中，在加有临界浓度乳酸铵的种液中培养驯化，用氨水为中和剂来控制发酵液PH值。将驯化72小时后的菌液传代数次作为下一轮诱变和驯化的出发菌液。重复上述过程，直至筛选到耐高浓度L-乳酸铵的目标菌株干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226。
本发明菌株的形态学及生理生化学特征如下：
菌落颜色：淡黄色
菌落大小：3mm±1mm
菌落形态：圆形、菌落表面光滑湿润
革兰氏染色：阳性
镜检形态：粗、直、杆状，成链
需氧方式：兼性厌氧
营养方式：化能异养
适宜生长温度：45～55℃
适宜生长PH：6.0～7.0
接触酶反应：阴性
过氧化氢酶反应：阴性
明胶液化反应：阴性
葡萄糖发酵：不产气
本发明所提供的L-乳酸铵耐受菌的诱变筛选及耐铵驯化方法，具体步骤如下：
（a）菌悬液制备：将出发菌株干酪乳杆菌LC-N235制成菌悬液，调整菌浓度为106个/毫升。
（b）低能氮离子注入诱变：取0.1mL的步骤（a）中的菌悬液均匀涂布于无菌平皿上，以无菌风吹干，在注入能量为20 KeV，注入剂量为2×1015ions/cm2下对其进行氮离子注入。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌环境下用1mL无菌水洗脱，涂布到高糖培养基上，在45～55℃下倒置培养48小时。
（c）琥珀酸平板初筛：将步骤（b）筛选到的生长良好且透明圈大的菌株挑接至琥珀酸平板培养基上，在45～55℃下倒置培养48小时。
（d）乳酸铵平板复筛: 将步骤（c）筛选到的比出发菌株延迟出现菌落的单菌落挑接至乳酸铵平板培养基上，在45～55℃下培养48小时，筛选菌株。
（e）氨水驯化: 将步骤（d）筛选出的干酪乳杆菌接入斜面培养基，在45～55℃下培养24小时，取斜面培养物接入驯化培养基，于3L发酵罐中扩培，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，控制PH值于6.2，驯化96小时。而后以驯化后的菌液为下一轮诱变的出发菌株，重复上述步骤直至筛选到目标菌株。
在上述筛选方法中：步骤（b）所采用的高糖培养基包含如下质量百分数的组分：碳源25%～35%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、中和剂2%～4%，琼脂1.2%～1.5%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为轻质碳酸钙。步骤（c）所采用的琥珀酸平板培养基以25%～35%的琥珀酸代替高糖培养基中的碳源，其他成分不变。步骤（d）所采用的乳酸铵平板培养基以2%～3%的乳酸铵代替高糖培养基中的碳源，其他成分不变。
在上述筛选方法中：步骤（e）所采用的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.3%～0.6%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、中和剂2%～4%，琼脂1.5%～1.8%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为轻质碳酸钙。
在上述筛选方法中：步骤（e）所采用的驯化培养基包含如下质量百分数的组分：碳源15%～25%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、乳酸铵8%～24%，中和剂12%～20%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为质量浓度25%的氨水。
干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用，包括以下步骤：
1）平板培养：将干酪乳杆菌LC-An226 接种至平板培养基上培养，培养温度为45～55℃，培养时间为48小时。
2）斜面培养：将步骤1）平板培养的干酪乳杆菌LC-An226接种至斜面培养基培养，培养温度为45～55℃，培养时间为24小时。
3）发酵产乳酸铵：将步骤2）中的干酪乳杆菌LC-An226的斜面培养物接种至发酵培养基中培养，培养温度为45～55℃，搅拌转速为80 rpm，pH稳定在6~7，发酵时间48～96小时。
步骤1）所采用的平板培养基包含如下质量百分数的组分：碳源1%～3%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、中和剂2%～4%，琼脂1.2%～1.5%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为轻质碳酸钙。
步骤2）所采用的斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.3%～0.6%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、中和剂2%～4%，琼脂1.5%～1.8%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为轻质碳酸钙。
步骤3）所采用的发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源10%～25%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.2%～0.8%、，中和剂20%～50%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；中和剂为质量浓度25%的氨水。
有益效果：
本发明提供的L-乳酸铵耐受菌株具有糖酸转化率高，能够耐受高浓度的L-乳酸铵，解除一般菌株在发酵产L-乳酸铵过程中的产物抑制，所得乳酸铵纯度高；在5L发酵罐中，终产物L-乳酸铵含量达到了206g/L，比原始出发菌株发酵产L-乳酸铵提高了128.9%，具有重大的社会意义及经济价值。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
本实施例说明将干酪乳杆菌出发菌株进行低能氮离子注入诱变及耐铵驯化的方法。
进行第一步低能氮离子注入诱变筛选及耐铵驯化的具体步骤如下：
（a） 菌悬液制备：取45～55℃恒温培养48小时的干酪乳杆菌LC-N235新鲜斜面加无菌水10mL，刮洗下菌落倾斜于带有小玻璃珠的250mL试管中，于快速混匀器上混匀，打散菌落，三层脱脂纱布过滤，滤液简单染色法镜检，调整菌液浓度，直至取0.1ml菌悬液均匀涂布于100cm培养皿无细胞重叠。
（b）低能氮离子注入诱变:取0.1mL步骤（a）中菌悬液均匀涂布于无菌平皿上，镜检无细胞重叠者进行低能氮离子注入。本实验低能氮离子注入机为离子束生物工程中心装置。在20KeV的能量下对干酪乳杆菌进行离子注入。注入剂量为2×1015ions/cm2,靶室真空度为10-3Pa,以20S脉冲式注入，间隔15s，靶室内放置不接受注入的对照样。离子注入完毕后，取出平皿，在无菌环境下用1mL无菌水洗脱，涂布到高糖平板培养基上，在45～55℃下倒置培养48小时。
（c）诱变菌株的筛选：
琥珀酸平板初筛：将步骤（b）筛选到的生长良好且透明圈大的单菌落挑接至琥珀酸平板培养基上，在45～55℃下培养48小时，筛选出比出发菌株延迟出现菌落的菌株。
（d）乳酸铵平板复筛：将琥珀酸平板上筛选到的生长良好且透明圈大的单菌落挑接至乳酸铵平板培养基上，在45～55℃下倒置培养48小时，筛选在乳酸铵平板上不生长的菌株。
（e）乳酸铵临界浓度的确定：将初筛最终筛选到的单菌落接种至斜面培养基，在45～55℃下培养24小时，将斜面培养物接入添加了8%乳酸铵的驯化培养基中，在3L发酵罐中，于50℃，90rpm的恒定搅拌转速下驯化培养。以氨水中和其产酸，使培养液PH值稳定在6.5，驯化72小时。用生物传感分析仪测定驯化培养基中乳酸铵的浓度，将测得的乳酸铵浓度作为下一轮诱变驯化的临界乳酸铵浓度.
（f）氨水梯度驯化：将经过以上步骤最终筛选到的单菌落接种至斜面培养基，在45～55℃下培养24小时，将斜面培养物接入含有临界浓度乳酸铵的驯化培养基中，在3L发酵罐中，于45～55℃，90rpm的恒定搅拌转速下驯化培养。以氨水中和其产酸，使培养液PH值稳定在6.2。驯化72至96小时。而后以驯化后的种液作为下一轮诱变筛选的出发菌液，重复以上诱变、初筛、复筛、和驯化的步骤，直至筛选出目标菌株。
其中，所使用的培养基配方（%为质量百分比）
步骤（b）中所用的高糖平板培养基为：葡萄糖30%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙3%，琼脂1.5%，其余为蒸馏水（其中葡萄糖0.07MPa，单独灭菌20分钟，轻质碳酸钙0.1MPa，单独灭菌40min），PH6.5。
步骤（c）中所用的琥珀酸平板培养基以25%琥珀酸代替高糖培养基中30%的葡萄糖，其他成分不变。步骤（d）中所用的乳酸铵平板培养基以2%的乳酸铵代替高糖培养基中30%的葡萄糖，其它成分不变。
步骤（e）和步骤（f）中所用的斜面培养基为：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
步骤（e）和步骤（f）中所用的驯化培养基为：葡萄糖6%，乳酸铵8%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.2，3L发酵罐搅拌速度稳定在90转每分钟。
实施例2
本实施例说明干酪乳杆菌LC-An226的遗传稳定性。传代发酵试验结果如表2所示
表2 干酪乳杆菌（lactobacillus casei ）LC-An226的遗传稳定性
| 传代次数 | L-乳酸铵产量（g/L） |
| 1 | 205 |
| 2 | 200 |
| 3 | 202 |
| 4 | 195 |
| 5 | 192 |
| 6 | 192 |
从遗传稳定性实验结果可知，经过6次连续传代，突变株干酪乳杆菌LC-An226发酵产L-乳酸铵产量较稳定，具有很好的传代稳定性，可作为进一步研究和开发的生产菌株。
实施例3
本实施例说明突变株干酪乳杆菌LC-An226在5L发酵罐中发酵产L-乳酸铵。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
斜面培养基为：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
发酵培养基为：葡萄糖22%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.5。
将筛选到得突变株干酪乳杆菌LC-An226接种至平板基本培养基上于50℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度50℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到发酵培养基中，培养温度50℃，5L发酵罐搅拌转速为80rpm，以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使PH稳定于6.2。发酵培养48h后以生物传感分析仪检测发酵液中L-乳酸铵含量，达到了206g/L，比同等培养条件下的原始出发菌LC-N235的L-乳酸铵提高了58.46%。
实施例4
本实施例说明突变株干酪乳杆菌LC-An226在5L发酵罐中发酵产L-乳酸铵。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
斜面培养基为：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
发酵培养基为：糖蜜10%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.5。
将筛选到得突变株干酪乳杆菌LC-An226接种至平板基本培养基上于50℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度50℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到发酵培养基中，培养温度50℃，5L发酵罐搅拌转速为80rpm，以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使PH稳定于6.2。发酵培养48h后以生物传感分析仪检测发酵液中L-乳酸铵含量，达到了170g/L，比同等培养条件下的原始出发菌LC-N235的L-乳酸铵产量提高了50%。
实施例5
本实施例说明突变株干酪乳杆菌LC-An226在5L发酵罐中发酵产L-乳酸铵。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
斜面培养基为：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
发酵培养基为：葡萄糖20%，玉米浆1%，酵母膏0.2%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.2。
将筛选到得突变株干酪乳杆菌LC-An226接种至平板基本培养基上于50℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度50℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到发酵培养基中，培养温度50℃，5L发酵罐搅拌转速为80rpm，以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使PH稳定于6.2。发酵培养48h后以生物传感分析仪检测发酵液中L-乳酸铵含量，达到了193g/L，比同等培养条件下的原始出发菌LC-N235的L-乳酸铵产量提高了48.46%。
实施例6
本实施例说明突变株干酪乳杆菌LC-An226在50L发酵罐中发酵产L-乳酸铵。
本实施例所述的培养基配方（%为质量百分比）：
平板基本培养基：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
斜面培养基为：葡萄糖0.5%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，七水合硫酸镁0.05%，轻质碳酸钙0.3%，琼脂1.8%，其余为蒸馏水，PH6.5。
种子培养基为：葡萄糖10%，胰蛋白胨1%，酵母膏0.3%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.5。
发酵培养基为：葡萄糖20%，玉米浆1%，酵母膏0.2%，磷酸二氢钾0.15%，其余为水，并以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使其培养基PH稳定于6.5。
将筛选到得突变株干酪乳杆菌LC-An226接种至平板基本培养基上于50℃条件下倒置培养48h后，将其接种至斜面培养基培养，培养温度50℃，培养时间24h。将斜面培养物接种到5L种子培养基中，培养温度50℃，5L发酵罐搅拌转速为80rpm，以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使PH稳定于6.2。培养12h后以10%的接种量接种于50L发酵培养基中，50L发酵罐的搅拌转速为80rpm，同样以质量浓度25%的氨水中和其产酸，使PH稳定于6.2。以生物传感分析仪检测发酵液中L-乳酸铵含量，达到了189g/L，比同等培养条件下的原始出发菌LC-N235的L-乳酸铵提高了57.35%。
Claims (6)
1.一种干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226，已保藏于中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号：CCTCC M 2013123。
2.权利要求1所述的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用。
3.根据权利要求2所述的干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用，其特征在于包括如下步骤：
平板培养：将干酪乳杆菌LC-An226接种至平板培养基上培养，培养温度为45～55℃，培养时间为48 小时；
斜面培养：将步骤1）平板培养的干酪乳杆菌接种至斜面培养基培养，培养温度为45～55℃，培养时间为24 小时；
发酵产L-乳酸铵：将步骤2）中的干酪乳杆菌的斜面培养物接种于发酵培养基中，培养温度为45～55℃，搅拌转速为80~120 rpm，pH稳定在6~7，培养48~96h。
4.根据权利要求3所述的干酪乳杆菌LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用，其特征在于：所述步骤1）中平板培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.3%～0.6%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.1%～0.5%，中和剂0.2%～0.5%，琼脂1.2%～1.8%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；所述氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；所述中和剂为轻质碳酸钙。
5.根据权利要求3所述的干酪乳杆菌LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用，其特征在于：所述步骤2）中斜面培养基包含如下质量百分数的组分：碳源0.3%～0.6%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.1%～0.5%、中和剂0.1%～0.5%，琼脂1.5%～1.8%，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；所述氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；所述中和剂为轻质碳酸钙。
6.根据权利要求3所述的干酪乳杆菌LC-An226在发酵产L-乳酸铵中的应用，其特征在于：所述步骤3）中发酵培养基包含如下质量百分数的组分：碳源10%～25%、氮源1.0%～3.0%、无机盐0.1%～0.5%、中和剂20%～50%，，其余为水，PH6.0～7.0；其中所述碳源为葡萄糖和淀粉中的一种或两种的混合；所述氮源为胰蛋白胨、牛肉膏、酵母膏中的一种或几种的混合，所述无机盐为钠盐、钾盐、镁盐和磷酸盐中的一种或几种的混合；所述中和剂为质量浓度25%的氨水。
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