CN103300177A - 一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法及应用 - Google Patents

一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法及应用 Download PDF

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彭呈悦
凌霄
李征
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Abstract

本发明针对目前黑茶中低聚木糖含量偏低、功效不够显著的缺点,提供一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法。通过接种产木聚糖酶菌株——嗜热棉毛菌Thermomyces lanuginosus,在黑茶发酵过程中产生耐高温的木聚糖酶,从而降解黑茶中的木聚糖产生低聚木糖。检测结果表明,通过以上途径制备的黑茶,低聚木糖的含量比传统黑茶提高了20~40倍。动物试验结果表明,喂饲该黑茶,大鼠肠道中的双歧杆菌增殖显著,比喂饲传统黑茶提高8%左右,而肠杆菌和肠球菌等都有不同程度的生长抑制。

Description

一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法及应用
技术领域
本发明属于微生物发酵领域,具体涉及黑茶加工技术。
背景技术
黑茶是一种发酵茶,可制成散茶或压制成茯砖等,主销中国西北边疆少数民族地区,耐贮藏,便于长途运输,含有丰富的营养物质,被誉为“中国古丝绸之路上神秘之茶”、“西北少数民族生命之茶”。黑茶传统的加工过程,实际是利用茶叶本身及空气中的微生物,在湿热环境下发生一系列酶促反应,催化茶叶中的各种成分,产生新的氧化、聚合、降解、转化反应,黑茶的品质就是在这种物理、化学的动力交错推动下,完成了特殊品质的变化,形成一种汤色橙黄(或橙红)、香味醇和带有特殊菌花香的特定品质。
黑茶中最主要的有效成分之一是低聚木糖。低聚木糖主要由木聚糖酶降解木聚糖产生。低聚木糖是优良的双歧杆菌增殖因子,增殖双歧杆菌的功能是其它聚合糖的20倍,使双歧杆菌在肠道内形成菌落优势,产生短链脂肪酸及抗菌素,抑制外源致病菌和肠内固有腐败细菌的生长繁殖,改善肠道微生态环境,调整人体生理功能,增强机体免疫力。另外,低聚木糖还可促进人体对钙的吸收,预防龋齿发生,由于其代谢不受胰岛素控制,可作为糖尿病和肥胖病患者的矫味剂。
低聚木糖对双歧杆菌增殖作用而言,它的有效摄入量为0.7g/(人·日)。现有技术生产的黑茶中低聚木糖含量偏低,检测结果表明,传统黑茶中低聚木糖含量一般低于0.1%。要想达到有效摄入量,人们每天需饮用的茶叶量高达700g,这在日常生活中很难实现。我们尝试添加产木聚糖酶的微生物嗜热棉毛菌Thermomyces lanuginosus,利用该微生物及产生的木聚糖酶耐高温的特点,在黑茶发酵过程中产生木聚糖酶,持续降解木聚糖产生低聚木糖,从而提高黑茶中低聚木糖的含量。嗜热棉毛菌购于荷兰菌种保藏中心(编号CBS288.54),所产的耐热木聚糖酶,产量大且比活力高,具有较宽范围的pH值适应性和较好的温度稳定性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法,通过接种产木聚糖酶菌株嗜热棉毛菌,在黑茶发酵过程中产生耐高温的木聚糖酶,从而降解黑茶中的木聚糖产生低聚木糖,由此提高黑茶中低聚木糖的含量。
本发明的另一个目的是提供上述方法生产的高低聚木糖含量的黑茶在改善胃肠功能中的应用。
本发明提出的一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法,具体方案如下。
在黑茶的制备过程中接种嗜热棉毛菌,通过固体发酵的方法产生木聚糖酶,将茶叶中的木聚糖降解为低聚木糖,从而提高黑茶中低聚木糖的含量。
(1)将毛茶均匀喷水至含水量达18%~24%;
(2)将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5~15min;
(3)取出毛茶后,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子液;
(4)控制茶叶含水量24%~28%,放置于温度45~50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养2~7d;
(5)将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5~15min;
(6)取出毛茶,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液;
(7)控制茶叶含水量24%~28%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d;
(8)培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤(3)中孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×103~1×106个。
上述步骤(6)中孢子喷洒量每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
本发明有如下的优点和效果:
1.本发明在黑茶生产过程中用人工接菌代替自然环境接种,易于操作及控制。
2.本发明在黑茶的生产过程中引入了嗜热棉毛菌,并采用分阶段接菌方式,分别接种嗜热棉毛菌和黑茶中的优势菌种冠突散囊菌(Eurotium cristatum,购于中国普通微生物菌种保藏管理中心,菌株编号为3.6089),不仅解决了黑茶生产工艺中发花期长、发花不均等难题,克服了不同微生物之间相互抑制所造成的品质不稳定性,提升了黑茶的品质,有效缩短了发酵时间,且使发酵后的茶叶品质稳定,有助于获得更高的经济效益,促进黑茶的产业发展。
3.利用嗜热棉毛菌及产生的木聚糖酶耐高温的特点,在黑茶发酵过程中产生木聚糖酶,持续降解木聚糖产生低聚木糖,低聚木糖被人体摄取后,具有调节肠道菌群,提高免疫力的功效,增强了黑茶的保健功能。
4.通过本发明工艺生产的黑茶,从感官及理化指标各方面均优于传统工艺制作的黑茶,低聚木糖的含量得到了显著提高,正常人每天喝10~20g左右本发明所制的黑茶即可达到改善胃肠的功效。
具体实施方式
实施例1
嗜热棉毛菌孢子液制备
将嗜热棉毛菌涂布在PDA琼脂培养基平板上,50℃恒温培养6~8d,加无菌水适量于平板中,用无菌刮刀将孢子刮下,悬浮于无菌水中,再将悬浮液倒入含有玻璃珠的三角瓶中,200r/min摇床振荡1h,制成孢子悬液,细胞计数板计数,控制孢子浓度1×106~5×106个/mL。
冠突散囊菌孢子液制备
将冠突散囊菌涂布在PDA琼脂培养基平板上,30℃恒温培养6~8d,加无菌水适量于平板中,用无菌刮刀将孢子刮下,悬浮于无菌水中,再将悬浮液倒入含有玻璃珠的三角瓶中,200r/min摇床振荡1h,制成孢子悬液,细胞计数板计数,控制孢子浓度1×108~5×108个/mL。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达18%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为25%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养2d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为24%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×103个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
实施例2
嗜热棉毛菌孢子液和冠突散囊菌孢子液的制备同实施例1。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达20%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸10min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为26%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养2d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为27%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×103个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
实施例3
嗜热棉毛菌孢子液和冠突散囊菌孢子液的制备同实施例1。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达20%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸10min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为28%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养3d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为26%,压制茶砖,放置于温度为28~30℃、相对湿度为75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×104个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
实施例4
嗜热棉毛菌孢子液和冠突散囊菌孢子液的制备同实施例1。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达18%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸15min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为26%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养3d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为26%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×106个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
实施例5
嗜热棉毛菌孢子液和冠突散囊菌孢子液的制备同实施例1。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达22%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸8min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为26%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为26%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×104个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
实施例6
嗜热棉毛菌孢子液和冠突散囊菌孢子液的制备同实施例1。
具体实施步骤:将300g毛茶均匀喷水至含水量达到22%,将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸8min,将毛茶取出,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子稀释液,控制茶叶含水量为26%,放置于温度50℃、相对湿度75%的培养箱内,培养3d。将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5min,将毛茶取出,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液,控制茶叶含水量为26%,压制茶砖,放置于温度28~30℃、相对湿度75%的培养箱内,培养5~7d,培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
上述步骤中嗜热棉毛菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×105个;冠突散囊菌孢子喷洒量为每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
通过上述实施例,制备黑茶成品时间共约14d,而通过传统工艺黑茶成品时间约为1个月。本发明生产黑茶感官指标和理化指标与通过传统工艺制作黑茶对比见表1。
表1本发明方法及传统工艺制作的黑茶感官指标和理化指标对比
Figure BSA00000910290000061
实施例7
将实施例1和实施例2中制备的黑茶分别命名为1号、2号,传统工艺制备的黑茶命名为3号。以上3种黑茶经超微粉碎,得到粒度低于10μm的黑茶茶粉。32只雄性SD大鼠,体重(100±10)g,随机分为4组,每组8只,编号为0号组、1号组、2号组、3号组。0号组为对照组,饲喂正常大鼠饲料,其它3组分别饲喂添加50mg对应编号茶粉的饲料,分别在实验开始后的0、7、14、21、28、35、42d收集大鼠早晨时的粪便,放入已称重并装有生理盐水和玻璃珠的无菌试管中,装样后的试管再次称重,求得样本重量,盖好管塞后放在液体快速振荡器上混合,以制成均匀悬液,然后用生理盐水以10倍的比例倍比稀释成系列。取上述处理的样本系列稀释液10μL涂布选择性培养基,肠球菌采用结晶紫-七叶苷琼脂培养基培养48h,肠杆菌采用EMB培养基培养24h,双歧杆菌采用BBL琼脂培养基培养48h,取出后根据菌落形态、颜色进行鉴别,采用平板菌落计数法统计菌落数。实验结果见表2~4。
表2各组大鼠粪便标本双歧杆菌群检测结果〔
Figure BSA00000910290000062
x=log(cfu/g),n=8〕
Figure BSA00000910290000063
a:P<0.01vs对照组
表3各组大鼠粪便标本肠杆菌群检测结果〔
Figure BSA00000910290000072
x=log(cfu/g),n=8〕
Figure BSA00000910290000073
b:P<0.01vs对照组
表4各组大鼠粪便标本肠球菌群检测结果〔
Figure BSA00000910290000074
x=log(cfu/g),n=8〕
Figure BSA00000910290000075
c:P<0.01vs对照组
实验结果表明,对照组0号组大鼠粪便中双歧杆菌的数目随着实验时间的延长无明显变化,1号组和2号组大鼠粪便中双歧杆菌的数量随着实验时间的延长逐渐增加,平均值均大于对照组,且差异有统计学意义(P<0.01),第42天双歧杆菌的数量均比对照组提高8%。3号组(喂饲传统黑茶)与对照组相比,粪便中双歧杆菌的数量也有增加的趋势,但效果不如1号组和2号组明显。1号组和2号组大鼠粪便中肠杆菌、肠球菌的数量随着实验时间的延长逐渐降低,平均值均小于对照组,且差异有统计学意义(P<0.01),3号组(喂饲传统黑茶)与对照组相比,也有减少的趋势,但效果不如1组和2组明显。
以上结果表明,本发明制备的黑茶对双歧杆菌的增殖功能要明显优于传统黑茶,并能在一定程度上抑制了肠道有害菌的繁殖,调节了肠道的微生态环境。

Claims (5)

1.一种提高黑茶中低聚木糖含量的方法,其特征在于通过接种产木聚糖酶菌株——嗜热棉毛菌Thermomyces lanuginosus,在黑茶发酵过程中产生耐高温的木聚糖酶,从而降解黑茶中的木聚糖产生低聚木糖。
2.权利要求1所述的方法,其特征在于所述接种嗜热棉毛菌的具体步骤是:
(1)将毛茶均匀喷水至含水量达到18%~24%;
(2)将茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5~15min;
(3)取出毛茶后,均匀喷洒嗜热棉毛菌孢子液;
(4)控制茶叶含水量为24%~28%,放置于温度为45~50℃、相对湿度为75%的培养箱内,培养2~7d;
(5)将培养结束后的茶叶置于耐压灭菌锅内,升温至100℃,汽蒸5~15min;
(6)取出毛茶,均匀喷洒冠突散囊菌孢子液;
(7)控制茶叶含水量为24%~28%,压制茶砖,放置于温度为28~30℃、相对湿度为75%的培养箱内,培养5~7d;
(8)培养结束后关闭湿度调节开关,将温度每天升高2~3℃直至50℃,烘干后取出。
3.权利要求2所述的方法,其特征在于每100g毛茶喷洒适量嗜热棉毛菌孢子稀释液,其中含嗜热棉毛菌孢子1×103~1×106个。
4.权利要求2所述的方法,其特征在于每100g毛茶喷洒适量冠突散囊菌孢子稀释液,其中含冠突散囊菌孢子1×106~5×106个。
5.权利要求1~2任一所述的方法制备的黑茶在改善胃肠功能中的应用。
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