CN103283480B - 一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物学技术领域，具体涉及到一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法。本发明是通过调整液体培养基的配方，使培养基的粘稠度高于普通液体菌种培养基，通过接种后继续培养使菌种增值越来越多，以致液体培养基变得越来越稠并变成接近固体状的半流体，菌丝直接在半流体液体培养基萌发、转色并长成子实体，减少了传统虫草培植工艺中培养基是需要单独制备、灭菌后再接种、培养出草的流程；通过与传统的虫草培植工艺相比较，本发明不但体现出生产工艺易实施、减少了流程缩短，而且产量明显提升，值得大力推广。
Description
技术领域
本发明属于生物学技术领域，具体涉及到一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法。
背景技术
冬虫夏草一般简称为虫草，是一种传统的名贵滋补中药材，与天然人参、鹿茸并列为三大滋补品。它药性温和，一年四季均可食用，老、少、病、弱、虚者皆宜，比其他种类的滋补品有更广泛的药用价值。自古以来，人们都把其作为滋补品和药用品。
虫草包含有多种对于人体医疗和保健方面有重要价值的生理活性物质。这些生理活性物质极其丰富多彩，可抗菌、抗癌、抗血小板凝结、抗辐射，改善和提高记忆力、调节机体免疫能力、防治钙离子拮抗、对脑和心脏在常压缺氧下有保护作用，并具有镇静和镇痛等功能。迄今，人们已从冬虫夏草中检测或分离到其特有的活性物质---虫草素、虫草酸、虫草多糖和超氧化物歧化酶(SOD)。医学报告指出，虫草素具有抑制肿瘤、抗病毒、抗氧化以及保护心、脑、肾、肝细胞等作用；虫草酸具有降低颅内压等作用；虫草多糖具有提高机体免疫功能等作用；SOD具有消除自由基防衰老等作用；冬虫夏草还含有人体必要的氨基酸、微量元素等成分。
因此，冬虫夏草不但可以作为人体疾病的治疗药物，也可以制成功能性食品和饮料等保健佳品。
天然的野生冬虫夏草主要生长在高海拔、高寒地区，生长环境的构成十分苛刻和复杂，加之人们对虫草的需求量不断增加及不合理的采挖，致使天然的冬虫夏草自然资源逐步减少。因此，为了解决药源，科技人员不得不通过人工培植虫草来满足市场需求。目前，人工培植的虫草可分为三类：一类是采用小米培养基培育出虫草子实体；一类是采用小麦培养基培育出虫草子实体；第三类是用干、鲜蚕、蛹培植出的蚕与草、蛹与草一体的“虫体虫草”。不论是哪一种方法，除了在生产过程中的培养基制备方法、菌种选用、虫草栽培容器选用、出草管理等有所改变外，其生产工艺程序都是：先分别制备好培养基和菌种，然后在无菌环境下将菌种转接到培养基中，再进行管理、培养至出草。
发明内容
本发明的目的就是克服以上技术的不足而提供全新的一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
1、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中液体培养基的制备方法如下：
(1)原料的组成与配比：马铃薯650克、大米粉500克、玉米粉100克、糖140克、酵母膏120克、蛋白胨80克、磷酸二氢钾14克、硫酸镁7克、水6公斤；
(2)制备：将650克马铃薯切成片后对3公斤水打成浆液、用2公斤水稀释500克大米粉、用1公斤水稀释100克玉米粉，将马铃薯浆液加热至70～80℃后依次加入140克糖、120克酵母膏、80克蛋白胨、14克磷酸二氢钾、7克硫酸镁并搅拌至固体物全溶解，接着加入大米粉稀释液和玉米粉稀释液，继续加热至溶液沸腾并维持3～5分钟既得液体培养基；
(3)装瓶：将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3；
(4)消毒：把装有液体培养基的培养容器放置到高压容器里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121℃的条件下进行灭菌40分钟。
2、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中液体培养基接入虫草菌种及培养方法如下：
(1)接种：在无菌环境下往已经消好毒的液体培养基接入菌球大小均匀、活力强、质量好的虫草液体菌种，接种量按培养容器内液体培养基实际重量的3％接入；
(2)培养方式：把接好种的液体培养基放置到旋转式摇床进行摇动培养，培养时摇床旋转速度为250～300转/分钟；
(3)培养时间：在温度是20～25℃、相对湿度为65～70％的环境下，摇动培养4～5天，培养容器内的虫草菌丝(球)增殖的数量越来越多，以致液体培养基变得越来越稠，当液体培养基变成半流体后既停止培养。
3、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中培养虫草子实体的方法步骤如下：
(1)在无菌环境下将培养好的半流体液体培养基分装到经过消毒的虫草培养容器内，装入量是半流体液体培养基在培养容器内的厚度为1.5～2cm；
(2)在温度是18～22℃、相对湿度为55～60％的环境下避光培养2～3天，半流体液体培养基面上长满菌丝；当菌丝体成熟后进入了它的生殖生长时期时把培养容器移到800～1000勒克斯的光度环境下曝光2～3天，菌丝转为桔红色；
(3)当培养料面上桔红色的菌丝里出现小米粒原基时，说明虫草长出来了，这时按常规进行出草管理。
与现有的技术相比，本发明既有如下优点：
1、本发明所提出的方法工艺简单、易实施。
2、本发明的创新点是通过调整液体培养基的配方，使培养基的粘稠度高于普通液体菌种培养基，通过接种后继续培养使菌种增值越来越多，以致液体培养基变得越来越稠并变成接近固体状的半流体，菌丝直接在半流体液体培养基萌发、转色并长成子实体，减少了传统虫草培植工艺中培养基是需要单独制备、灭菌后再接种、培养出草的流程，缩短了工艺程序、大幅度提高了效率。
3、通过本发明培植出来的虫草子实体比传统技术要高得多，因为虫草子实体的产量与加水量是成正比的，所以在以往的虫草生产过程中应该是往培养基里添水量应越多越好，但是水分一旦控制不当，加少了影响产量，而加多了，蒸熟后的培养基会粘连成块，接种时菌丝很难蔓延到料里，后期的菌丝转化过程营养跟不上反而影响产量；而本发明在实施的过程中菌丝本来就和培养基溶合在一起，半流体液体培养基的水分含量远高于传统固体培养基，为后期提高出草产量提供了保障。
4、通过实施本发明，虫草采摘过后，培养基不需补充添加新的营养液亦能获得第二次产量稳定、品质好的子实体。
5、实施本发明所使用的原料简单、易购；就比较与传统的虫草培植工艺而言，本发明不但体现出生产工艺易实施、减少了流程缩短，而且产量明显提升，值得大力推广。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的方法进一步说明。
一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，具体实施方式如下：
1、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中液体培养基的制备方法如下：
(1)原料的组成与配比：马铃薯650克、大米粉500克、玉米粉100克、糖140克、酵母膏120克、蛋白胨80克、磷酸二氢钾14克、硫酸镁7克、水6公斤；
(2)制备：将650克马铃薯切成片后对3公斤水打成浆液、用2公斤水稀释500克大米粉、用1公斤水稀释100克玉米粉，将马铃薯浆液加热至70～80℃后依次加入140克糖、120克酵母膏、80克蛋白胨、14克磷酸二氢钾、7克硫酸镁并搅拌至固体物全溶解，接着加入大米粉稀释液和玉米粉稀释液，继续加热至溶液沸腾并维持3～5分钟既得液体培养基；
(3)装瓶：将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3；
(4)消毒：把装有液体培养基的培养容器放置到高压容器里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121℃的条件下进行灭菌40分钟。
2、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中液体培养基接入虫草菌种及培养方法如下：
(1)接种：在无菌环境下往已经消好毒的液体培养基接入菌球大小均匀、活力强、质量好的虫草液体菌种，接种量按培养容器内液体培养基实际重量的3％接入；
(2)培养方式：把接好种的液体培养基放置到旋转式摇床进行摇动培养，培养时摇床旋转速度为250～300转/分钟；
(3)培养时间：在温度是20～25℃、相对湿度为65～70％的环境下，摇动培养4～5天，培养容器内的虫草菌丝(球)增殖的数量越来越多，以致液体培养基变得越来越稠，当液体培养基变成半流体后既停止培养。
3、一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，技术方案中培养虫草子实体的方法步骤如下：
(1)在无菌环境下将培养好的半流体液体培养基分装到经过消毒的虫草培养容器内，装入量是半流体液体培养基在培养容器内的厚度为1.5～2cm；
(2)在温度是18～22℃、相对湿度为55～60％的环境下避光培养2～3天，半流体液体培养基面上长满菌丝；当菌丝体成熟后进入了它的生殖生长时期时把培养容器移到800～1000勒克斯的光度环境下曝光2～3天，菌丝转为桔红色；
(3)当培养料面上桔红色的菌丝里出现小米粒原基时，说明虫草长出来了，这时按常规进行出草管理。
Claims (1)
1.一种可以在液体培养基直接长虫草子实体的方法，其特征在于包括如下步骤：
液体培养基的制备方法如下：
(1)原料的组成与配比：马铃薯650克、大米粉500克、玉米粉100克、糖140克、酵母膏120克、蛋白胨80克、磷酸二氢钾14克、硫酸镁7克、水6公斤；
(2)制备：将650克马铃薯切成片后对3公斤水打成浆液、用2公斤水稀释500克大米粉、用1公斤水稀释100克玉米粉，将马铃薯浆液加热至70～80℃后依次加入140克糖、120克酵母膏、80克蛋白胨、14克磷酸二氢钾、7克硫酸镁并搅拌至固体物全溶解，接着加入大米粉稀释液和玉米粉稀释液，继续加热至溶液沸腾并维持3～5分钟既得液体培养基；
(3)装瓶：将液体培养基分装至各培养容器，装入量为培养容器实际容量的2/3；
(4)消毒：把装有液体培养基的培养容器放置到高压容器里，经过1.5公斤/cm2压力、温度为121℃的条件下进行灭菌40分钟；
液体培养基接入虫草菌种及培养方法如下：
(1)接种：在无菌环境下往已经消好毒的液体培养基接入菌球大小均匀、活力强、质量好的虫草液体菌种，接种量按培养容器内液体培养基实际重量的3％接入；
(2)培养方式：把接好种的液体培养基放置到旋转式摇床进行摇动培养，培养时摇床旋转速度为250～300转/分钟；
(3)培养时间：在温度是20～25℃、相对湿度为65～70％的环境下，摇动培养4～5天，培养容器内的虫草菌丝增殖的数量越来越多，以致液体培养基变得越来越稠，当液体培养基变成半流体后即停止培养；
培养虫草子实体的方法步骤如下：
(1)在无菌环境下将培养好的半流体液体培养基分装到经过消毒的虫草培养容器内，装入量是半流体液体培养基在培养容器内的厚度为1.5～2cm；
(2)在温度是18～22℃、相对湿度为55～60％的环境下避光培养2～3天，半流体液体培养基面上长满菌丝；当菌丝体成熟后进入了它的生殖生长时期时把培养容器移到800～1000勒克斯的光度环境下曝光2～3天，菌丝转为桔红色；
(3)当培养料面上桔红色的菌丝里出现小米粒原基时，说明虫草长出来了，这时按常规进行出草管理。
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