CN103278498A

CN103278498A - 一种盐酸***的检测方法及检测试剂盒

Info

Publication number: CN103278498A
Application number: CN2013101862383A
Authority: CN
Inventors: 卞禹卜; 陶艳伟; 卫喜燕; 杨晓慧; 李林
Original assignee: WUXI ZODOLABS BIOTECH CO Ltd
Current assignee: WUXI ZODOLABS BIOTECH CO Ltd
Priority date: 2013-05-17
Filing date: 2013-05-17
Publication date: 2013-09-04

Abstract

本发明公布了一种盐酸***的快速检测方法，依次包括：1）用有机溶剂从样品中提取盐酸***；2）用无机酸溶液萃取提纯；3）加入溴酚蓝作为指示剂，通过显色反应判断结果。本发明还提供了本发明的方法的专用检验试剂盒，所述试剂盒包含：（1）甲醇、乙醇、正丁醇、二氯甲烷、乙腈中的一种或多种的混合液；（2）无机酸溶液；（3）溴酚蓝溶液。同现有技术相比，本发明的方法分析成本低、不需要专门设备、专属性强、灵敏度高，操作简便快速，适用于现场检验。根据本发明的方法制成盐酸***快速检验试剂盒，将能满足广大的农村地区开展相关的食品监督检验的需要。

Description

一种盐酸***的检测方法及检测试剂盒

技术领域

本发明涉及一种盐酸***的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

盐酸***（英文名称为Sibutramine Hydrochloride），其化学式为：(±)1-（4-氯苯基）-N,N-二甲基-2-（2-甲基丙基）-环丁基甲胺盐酸盐单水合物，属叔胺类化合物。分子式：C17H26ClN·HCl·H2O，结构式为：

。

近年来，由于人类物质生活的改善和饮食结构的不合理，肥胖症的人数呈逐年上升趋势。肥胖可诱发或加重糖尿病、脂肪肝、心脑血管***疾病、睡眠呼吸暂停综合征等，已成为影响人类健康长寿的大敌，越来越引起人们的重视。因此，减肥药物已走进人们的生活。减肥药物多为作用于中枢神经***的食欲抑制药，最常见的是盐酸***。主要通过其胺类（仲胺和伯胺类）代谢产物而产生作用，其主要机理为抑制去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的再摄取而增强饱食感，而对去甲肾上腺素、5-羟色胺和多巴胺的释放无明显影响。研究还表明，盐酸***及其胺类活性代谢产物无明显抗胆碱、抗组胺和单胺氧化酶抑制作用。还可用于饮食控制和运动不能减轻和控制体重的肥胖症治疗。

盐酸***适用于饮食控制和运动不能减轻和控制体重的肥胖症治疗，包括减轻体重和维持体重的减轻，治疗应与低热量饮食和运动结合进行。推荐用于治疗体重指数≥30kg/m²或27kg/m² (有其它危险因素如高血压、糖尿病、血脂异常等)的肥胖症患者。

由于***药物价格低廉，且确有一定的抑食减肥功效，屡被一些不法商家巧妙加入减肥食品中牟取暴利。据介绍，***在德国、美国、意大利等地导致数十人死亡而被许多国家禁止使用。

查处在减肥药品和保健食品中擅自添加盐酸***的违法行为，是一项长期的任务。它涉及范围广，需要进行大量的检验，在广大的农村地区和经济欠发达的中小城市开展这项检验活动有较大的难度。

现有的检验药品和保健品中盐酸***掺杂的方法主要有：

1、薄层色谱法

样品中待测成分用混合溶剂[甲醇-水-三乙胺(110:25:0.3)，磷酸调混合液总pH为4.35]提取，所得的供试品溶液和对照品溶液点在同一块薄层色谱板上点样，展开剂展开，晾干后，薄层色谱板在紫外灯下检示，如果供试品溶液薄层色谱图在与盐酸***对照品相应的位置上出现斑点，则提示样品中可能含有盐酸***。

薄层色谱法的优点是不需要使用昂贵的分析仪器。缺点是：（1）色谱分辨率较低，中药制剂成分复杂，干扰因素多，易将某些共存成分误判为盐酸***，某些共存成分如果量较大且色谱迁移值与盐酸***接近则会干扰目标成分的检出。（2）色谱展开和晾干的时间长，不能满足快速测定的要求。（3）薄层色谱板需要自行铺制，烘干并干燥存放（预制的薄层色谱板需要干燥存放），环境温度和湿度对分离效果的影响大。（4）要求实验人员有较好的经验。（5）需要有固定的实验场所，不适合作流动性大的现场检测。

2、高效液相色谱法

高效液相色谱法是常用的现代分析方法。在相同的色谱条件下，不同的物质有不同的色谱保留时间。在相同是色谱条件下盐酸***溶液对照样品溶液和样品提取所得的供试品溶液分别进样，根据色谱保留时间可检测盐酸***的含量。

高效液相色谱法的优点是色谱分离效率高，灵敏度高。其缺点是：（1）仪器价格昂贵，样品前处理时间长，大多数针对单一产品，使用的流动相多为一定比例的甲醇和盐溶液，试验后需要用大量水冲洗色谱柱，色谱柱易受污染，分析成本高；（2）当共存成分的色谱保留时间与盐酸***的色谱保留时间接近时容易作出错误的判断；（3）仪器对使用环境要求高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测。

3、高效液相色谱-质谱联用法

用质谱仪对物质进行定性分析，结果可靠性高。以高效液相色谱仪作为分离器、质谱仪作为分析器的高效液相色谱-质谱联用法适合于成分复杂、背景干扰严重的样品分析，这种分析方法可提高检测结果的可靠性。

高效液相色谱-质谱联用法是一种分析成本比高效液相色谱法更高、操作比高效液相色谱法更复杂的分析方法。仪器对使用环境的要求更高，需要固定摆放，不适合作流动性大的现场检测。

在进行高效液相色谱-质谱联用法分析前，一般用高效液相色谱法作为筛选方法，以达到降低分析成本的目的。这些检验只能在少数实验室中进行，不易推广使用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种克服现有技术存在的缺点，分析成本低、不需要使用贵重分析仪器、专属性强、灵敏度高，适用于现场检验的盐酸***快速检测方法。

本发明的盐酸***的快速检测方法，依次包括以下步骤：

1）用有机溶剂从样品中提取盐酸***；

2）用无机酸溶液萃取提纯；

3）加入溴酚蓝溶液作为指示剂，通过显色反应判断结果。

由盐酸***的分子结构可推断盐酸***易溶于甲醇、乙醇、正丁醇、二氯甲烷、乙腈等有机溶剂，也可溶于无机酸溶液，所述无机酸溶液可为稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸中的一种，浓度为0.05~0.2mmol/L，或各种比例的上述无机酸溶液的混合溶液，优选为0.1mmol/L的稀盐酸。

加入溴酚蓝后，若溶液颜色由黄色变为蓝色，则说明样品中含有盐酸***；若溶液颜色不发生变化，则说明样品中不含有盐酸***。

药品、保健品中成分复杂，有大量有色物质，它们中有些能溶于有机溶剂，而有些则可溶于水溶液，如不进行分离，则会严重干扰快速检测方法的显色反应的观察，难以得出正确的判断结果。

本发明利用盐酸***既可溶于有机溶剂又可溶于无机酸溶液的特点，首先采用有机溶剂作为提取液进行提取，使不溶于有机溶剂的干扰物质得到分离，然后采用无机酸溶液进行萃取，对提取液中溶解于有机溶剂的干扰物质进行分离，从而达到进一步排除干扰的目的。

盐酸***有可接受质子的氮原子，在无机酸性溶液中，接受质子后生成带正电荷、呈游离态的阳离子。较大的酸度可增强盐酸***生成游离态阳离子的能力，使溶液中有较高的游离态阳离子浓度。

盐酸***与溴酚蓝之间，通过静电引力、疏水作用和荷电转移作用，形成离子缔合物，溶液颜色发生明显改变，由黄色变为蓝色，吸收光谱也发生变化。

进一步试验表明：在步骤2）获得的萃取液中加入pH3~4的缓冲液后，再加入溴酚蓝，可以得到更好的检测效果。

进一步地，将步骤3）所得的溶液在436nm最大吸收波长处测紫外吸光度，根据标准曲线得出准确盐酸***的浓度。

特别地，使用pH3.70的缓冲溶液，浓度为0.1mmol/L的盐酸以及浓度为0.1mmol/L的溴酚蓝溶液（该溶液的配制方法：取适量溴酚蓝固体，用无水乙醇配成1mmol/L的储备液，使用时用二次蒸馏水配成0.1mmol/L溶液）时，颜色变化最明显，吸光度最大且稳定，得到的效果是最佳的，可获得高的检测专属性和较短的检测时间。

在pH3.70的缓冲溶液中，以摩尔比法和等摩尔连续变化法测定了离子缔合物的组成，盐酸***与溴酚蓝的物质的量之比为1:2。

本发明的另一目的在于提供本发明的方法的专用检验试剂盒，所述试剂盒包含：（1）甲醇、乙醇、正丁醇、二氯甲烷、乙腈中的一种或多种的混合液；（2）稀盐酸、稀硫酸或稀磷酸中的一种，浓度为0.05~0.2mmol/L，或各种比例的上述无机酸溶液的混合溶液，优选为0.1mmol/L的稀盐酸；（3）溴酚蓝溶液。

所述试剂盒还包含pH3~4的缓冲液，优选pH3.70。

进一步地，优选伯瑞坦-罗比森缓冲溶液（B-R缓冲液）。

同现有技术相比，本发明的方法分析成本低、不需要专门设备、专属性强、灵敏度高，操作简便快速，适用于现场检验。根据本发明的方法制成盐酸***快速检验试剂盒，将能满足广大的农村地区开展相关的食品监督检验的需要。

附图说明

图1为盐酸***浓度-吸光度曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步地说明，但不构成对本发明的限制。

实施例1 胶囊剂的检测

样品：曲美轻美爽瘦身胶囊（胶囊剂，标示服用量为每次2粒，高效液相色谱法测定结果本品每粒含盐酸***5.90mg）。

检测步骤：

取样品1粒，将其内容物（约0.4g）置于10mL样品瓶中，加入乙腈溶剂5mL，振摇混合均匀，静置两分钟，过滤，收集滤液。滤液中加入3mL 0.1mmol/L盐酸溶液，混合均匀，放置分层，取下层萃取液约2mL于10mL比色管中，加入pH3.70的B-R缓冲液0.1mL，溴酚蓝显色剂1.5mL，颜色立即变成蓝色，即判定曲美清美爽瘦身胶囊中含有盐酸***。

实施例2 片剂的检测

样品：自然美莱苹果醋减肥片（片剂，标示服用量为每次2片，高效液相色谱法测定结果本品每片含盐酸***14.79mg）。

取样品1片（约0.4g），将其研磨均匀，置于10mL样品瓶中，加入甲醇溶剂5mL，振摇混合均匀，静置两分钟，过滤，收集滤液。滤液中加入3mL 0.05mmol/L硫酸溶液，混合均匀，放置分层，取下层萃取液约2mL于10mL比色管中，加入pH3.00的B-R缓冲液0.1mL，溴酚蓝显色剂1.5mL，颜色立即变成蓝色，在436nm处检测吸光度，根据标准曲线，测得其准确含量为14.90mg，即判定自然美莱苹果醋减肥片中含有盐酸***。

以上操作，用离心处理代替过滤处理，效果相同，均可判断样品中含有盐酸***。

实施例3 茶剂的检测

样品：美诺牌减肥便携茶（茶剂，标示服用量为每次1包，高效液相色谱法测定结果本品不含盐酸***）。

检测步骤：

取样品约0.5g，置于10mL样品瓶中，加入乙醇溶剂5mL，振摇混合均匀，静置两分钟，过滤，收集滤液。滤液中加入3mL 0.2mmol/L磷酸溶液，混合均匀，放置分层，取下层萃取液约2mL于10mL比色管中，加入pH4.00的B-R缓冲液0.1mL，溴酚蓝显色剂1.5mL，溶液仍为黄色，即判定美诺牌减肥便携茶中不含有盐酸***。

实施例4 颗粒剂的检测

样品：多维膳食素（排油基）（颗粒剂，标示服用量为每次1包，高效液相色谱法测定结果本品每包含盐酸***20.80mg）。

检测步骤：

取样品约0.5g，将其研磨均匀，置于10mL样品瓶中，加入二氯甲烷溶剂5mL，振摇混合均匀，静置两分钟，过滤，收集滤液。滤液中加入3mL盐酸溶液，混合均匀，放置分层，静置两分钟，取下层萃取液约2mL于10mL比色管中，加入pH3.70的B-R缓冲液0.1mL，溴酚蓝显色剂1.5mL，颜色立即变成蓝色，即判定多维膳食素（排油基）中含有盐酸***。

实施例5药品、保健品中是否存在盐酸***的实验

采用实施例1的方法检测10批市售样品（标示为药品、保健品）。并采用LCMS方法与检测结果比对，结果如下：

制品#	说明	取样量	显色结果	鉴别结果	质谱结果
						样品1	片剂	1片，研碎	立即变成蓝色	阳性	含***
样品2	片剂	1片，研碎	30秒内未变色	阴性	不含***，含酚酞
						样品3	片剂	1片，研碎	20秒内变成蓝色	阳性	含***
样品4	胶囊	1粒内容物	30秒未内未变色	阴性	不含***
						样品5	胶囊	1粒内容物	30秒未内未变色	阴性	不含***
样品-6	口服液	1/2支	立即变成蓝色	阳性	含***
						样品7	茶剂	0.5g	20秒内变成蓝色	阳性	含***
样品8	茶剂	0.5g	30秒内未变色	阴性	不含***
						样品9	茶剂	0.5g	30秒内未变色	阴性	不含***，含酚酞
样品10	决明子	0.5g	30秒内未变色	阴性	不含***

上述实验结果与二级质谱验证结果表明，本发明检测方法无一例假阳性报告，同时也未漏检任何含盐酸***的样品，结果准确可靠。

按本发明方法所述的取样量取上述盐酸***药物检测呈阴性反应的6个样品，并分别掺入盐酸***对照品5mg，按本发明方法进行试验，结果均呈阳性反应，表明本方法有良好的抗干扰能力，专属性强，有良好的准确性。

实施例6 合成样的检出限检测

样品：质量分数99.5%以上的盐酸***

在10mL样品瓶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中分别加入1mg、3mg、5mg、10mg盐酸***，分别加入乙腈溶剂5mL，振摇混合均匀，静置两分钟，过滤，收集滤液。滤液中加入3mL盐酸溶液，混合均匀，放置分层，静置两分钟，取下层萃取液约2mL于10mL比色管中，加入pH3.70的B-R缓冲溶液0.1mL，溴酚蓝显色剂1.5mL，在436nm处测其吸光度，根据标准曲线，测得其准确含量分别为0.05mg，0.35mg，4.96mg，9.85mg。

实验结果：

比色管Ⅰ中溶液颜色不发生明显变化，比色管Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中溶液变成蓝色，由此可见该方法的检出限为3mg。

实施例7 合成样的灵敏度检测

样品：质量分数99.5%以上的盐酸***

采用实施例1的检测方法，配制一系列不同浓度的盐酸***溶液，根据吸光度值可得如图1所示曲线。当含量小于0.3g·L^-1时，溶液的吸光度值几乎不变，颜色基本不发生变化，肉眼无法判断；当含量大于0.3g·L^-1时，浓度与吸光度值成良好的线性关系，颜色明显变为蓝色，因此可以初步确定该方法的灵敏度为0.3g·L^-1。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims

1.一种盐酸***的检测方法，依次包括以下步骤：

1）用有机溶剂从样品中提取盐酸***；

2）用无机酸溶液萃取提纯；

3）加入溴酚蓝溶液作为指示剂，通过显色反应判断结果；

其中，所述有机溶剂为甲醇、乙醇、正丁醇、二氯甲烷、乙腈中一种或几种；

所述无机酸溶液为稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸中的一种，浓度为0.05~0.2mmol/L，或各种比例的上述无机酸溶液的混合溶液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述无机酸溶液为浓度为0.1mmol/L的稀盐酸。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：在所述步骤2）获得的萃取液中加入pH3~4的缓冲液后，再加入溴酚蓝溶液。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于：所述缓冲溶液pH值为3.70。

5.如权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：所述方法还包括：将步骤3）所得的溶液在436nm最大吸收波长处测紫外吸光度，根据标准曲线得出准确盐酸***的浓度。

6.如权利要求1-5任一项所述的方法的专用检验试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含：（1）甲醇、乙醇、正丁醇、二氯甲烷、乙腈中的一种或多种的混合液；（2）稀盐酸、稀硫酸、稀磷酸中的一种，浓度为0.05~0.2mmol/L，或各种比例的上述无机酸溶液的混合溶液；（3）溴酚蓝溶液。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：还包括pH3~4的缓冲液。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述缓冲液pH值为3.70。