CN101987115A - 玉屏风口服制剂及其制备和检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种玉屏风口服制剂及其制备和检测方法。本发明所提供的玉屏风口服制剂,优选为颗粒剂,由黄芪、白术和防风制成,上述三种原料药材的重量份数配比为3∶1∶1,该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。本发明通过薄层色谱法来鉴别玉屏风口服制剂中的三种组方黄芪、白术和防风,本发明还使用液相色谱法来测定制剂中的有效成分黄芪甲苷含量。本发明所提供的检测方法,可应用于玉屏风相关制剂的质量控制,可有效控制相关产品的产品质量,保证产品的有效性。
Description
技术领域
本发明涉及中药制剂领域,具体地,本发明涉及玉屏风口服制剂及其制备和检测方法。
背景技术
现代玉屏风制剂均是源自于元代名医朱震亨所著《丹溪心法》的玉屏风散,由黄芪、白术、防风三味药组成,有益气、固表、止汗之功效,为虚人易感冒者的常用方。研究表明,玉屏风散具有调节人体免疫功能,增加抵抗力的作用。常用于表虚自汗,易感风邪的病症,是中医用于扶正的经典名方之一。玉屏风上市品种有丸剂、茶剂、口服液、颗粒剂和胶囊剂等,其中玉屏风口服液为传统的中国药典收载品种,记载于《中国药典》2005年版一部中。
玉屏风各组分成分黄芪、白术和防风的检测方法,以及有效成份黄芪甲苷的含量,一般都是按照薄层色谱法(《中国药典》2005年版一部附录ⅥB)进行测定,对黄芪甲苷含量的检测标准一般为不低于0.12mg/g。
发明内容
因此,本发明的目的是提供一种玉屏风口服制剂。
本发明的另一个目的在于,提供上述玉屏风口服制剂的制备方法。
本发明的又一个目的在于,提供上述玉屏风口服制剂的检测方法,包括鉴别玉屏风口服制剂中的三种组方黄芪、白术和防风以及测定制剂中的有效成分黄芪甲苷含量。
本发明的目的是采用以下技术方案来实现的。一方面,本发明提供一种玉屏风口服制剂,该制剂优选为颗粒剂,其由黄芪、白术和防风制成,上述三种原料药材的重量份数配比为3∶1∶1,该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。
另一方面,本发明提供制备上述述玉屏风口服制剂的方法,该方法包括以下步骤:取提取挥发油后的防风药渣,与黄芪、白术加水提取两次,所得煎液浓缩至适量,加乙醇使含醇量为70%,搅拌,静置;滤过,滤液减压回收乙醇,加提取挥发油时的水蒸馏液,搅匀,静置,取上清液滤过,滤液浓缩至相对密度1.30~1.33(70℃),加甘露醇、糊精和矫味剂适量,制成颗粒,干燥,放冷,喷加防风挥发油,混匀,即得。优选地,其中所述矫味剂选自蔗糖、阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中的一种或几种。
又一方面,本发明提供上述玉屏风口服制剂的检测方法,该方法采用薄层色谱分别检测制剂中的黄芪、白术和防风,该方法包括以下制备对照样品的步骤:
(1)制备黄芪的对照样品:取黄芪对照药材3~10g,加水煎煮二次(每次100~500ml),每次30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量使沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取2次(每次5~50ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解;(2)制备白术的对照样品:取白术对照药材1~5g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取2次(每次10~50ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解;和/或(3)制备防风的对照样品:取防风对照药材1~5g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取2次(每次10~50ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解。
优选地,所述方法包括以下步骤:(1)鉴别黄芪的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为黄芪供试品溶液;取黄芪对照药材6g,加水煎煮二次(第一次250ml,第二次150ml),每次30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量使沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为黄芪对照药材溶液;吸取所述黄芪供试品溶液8μl、黄芪对照药材溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%铁***-2%三氯化铁试液(1∶1)的混合溶液,日光下检视;(2)鉴别白术的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)振摇提取2次(25ml,20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为白术供试品溶液;取白术对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,制成白术对照药材溶液;吸取所述白术供试品溶液10μl、白术对照药材溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液,于105℃加热约7~10分钟,置紫外光灯(365nm)下检视;和/或(3)鉴别防风的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为防风供试品溶液;取防风对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,制成防风对照药材溶液;吸取所述防风供试品溶液10μl、防风对照药材溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。
还一方面,本发明提供上述玉屏风口服制剂中黄芪甲苷的检测方法,该方法采用高效液相色谱法检测黄芪甲苷的含量。
优选地,所述方法中供试品溶液制备首先采用甲醇索氏提取,其次采用饱和正丁醇萃取,最后采用氨液进行洗涤。
优选地,所述供试品溶液制备包括以下步骤:
取制剂研细,取约1~10g优选2.5g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇10~300ml优选100ml,加热回流至提取液无色,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水20ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次10~100ml优选40ml,合并正丁醇液,用氨液充分洗涤2次,每次10~100ml优选40ml,合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次5~50ml优选20ml,弃去氨液,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
优选地,所述甲醇索氏提取的时间为3小时以上,优选为6小时。
优选地,所述方法的色谱条件为:
填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为乙腈-水(20~50∶50~80,优选32∶68);检测器为蒸发光散射检测器;漂移管温度为103℃;载气流量为2.8L/min;和/或柱温为35℃。
优选地,所述方法测定的黄芪甲苷含量范围为每克颗粒含黄芪甲苷0.35mg~2.75mg。
再一方面,本发明提供上述方法在玉屏风口服制剂生产中质量控制方面的应用,所述口服制剂优选为颗粒制剂。
由此可见,本发明所提供的玉屏风颗粒制剂,其性状为浅黄色至棕红色的颗粒,味涩而后甘。本发明改善了玉屏风颗粒制剂的组方成份的检测方法,具体如下:
(1)取本品5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取2次(第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干。残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪对照药材6g,加水煎煮二次(第一次250ml,第二次150ml),每次30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量使沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,自“滤过,滤器用5ml水分次洗涤......”起同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述供试品溶液8μl、对照药材溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%铁***-2%三氯化铁试液(1∶1)的混合溶液。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
(2)取本品5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)振摇提取2次(25ml,20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取白术对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,自“用石油醚(30~60℃)振摇提取2次......”同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液,于105℃加热约7~10分钟,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
(3)取上述(2)项下供试品溶液作为供试品溶液。另取防风对照药材2g,照上述(2)项下同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验,吸取上述供试品溶液10μl、对照药材溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。
此外,本发明还确定产品有效成份的检测方法及控制指标,具体如下:
照高效液相色谱法(附录ⅥD)测定。
色谱条件与***适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-水(32∶68)为流动相;蒸发光散射检测器。理论板数以黄芪甲苷峰计算应不低于4000。
对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含黄芪甲苷0.12mg的溶液,即得。
供试品溶液的制备:取装量差异项下的本品,研细,取约2.5g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇100ml,加热回流至提取液无色(约64、时),提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水20ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次20ml,弃去氨液,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl,供试品溶液10μl,注入液相色谱仪,测定,以外标两点法对数方程计算,即得。
本品每袋5克,含黄芪以黄芪甲苷(C41H68O14)计,不得少于3.5mg。
经实验验证,本检测方法重复性良好、中间精密度良好、专属性强、对数线性关系良好,在0.35mg/g~2.75mg/g的范围内样品的回收率较好,适合含量测定的要求。由此可见,本发明所提供的方法,可应用于玉屏风相关制剂的质量控制,可有效控制相关产品的产品质量,保证产品的有效性。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,其中:
图1为黄芪的薄层色谱鉴别图,其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒,4为黄芪对照药材液,5为黄芪阴性对照。
图2为白术的薄层色谱鉴别图,其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒,4为白术对照药材液,5为白术阴性对照。
图3为改进方法得到的白术薄层色谱鉴别图,其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒,4为白术对照药材液,5为白术阴性对照。
图4为防风的薄层色谱鉴别图,其中1、2及3分别为不同批次的玉屏风颗粒,4为防风对照药材液,5为防风阴性对照。
图5A至图5C分别为黄芪甲苷不同试样的色谱图:对照品(图5A)、样品(图5B)及阴性样品(图5C)。
图6为黄芪甲苷含量测定的校正曲线图。
图7A至7C为黄芪甲苷在不同C18色谱柱下的色谱图:依利特ODS-2Hypersil(图7A)、Thermo ODS-2Hypersil(图7B)、Agilent ZORBAX SB(图7C)。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解,这些实施例仅用于说明本发明,其不以任何方式限制本发明的范围。
实施例1玉屏风颗粒制剂的制备方法
本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法,具体如下:取黄芪、白术(炒)、防风按重量份数3∶1∶1配方,将防风酌予碎断,提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集;药渣与黄芪、白术加水提取两次,每一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量,加乙醇至含醇量为70%,搅拌,静置,滤过,滤液减压回收乙醇,加上述蒸馏后的水溶液搅匀,静置,取上清液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.30~1.33(70℃),加甘露醇、糊精和矫味剂适量,槽型混合机混合,摇摆式颗粒机摇摆制粒,干燥,放冷,选粒,喷加上述防风挥发油,混匀,即得。
实施例2玉屏风颗粒制剂的制备方法
本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法,具体如下:
取黄芪、白术(炒)、防风按重量份数3∶1∶1配方,将防风酌予碎断,提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集;药渣与黄芪、白术加水提取两次,每一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量,加乙醇至含醇量为70%,搅拌,静置,滤过,滤液减压回收乙醇,加上述蒸馏后的水溶液搅匀,静置,取上清液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.30~1.33(70℃),加甘露醇、糊精、矫味剂适量,湿法混合制粒机制粒,干燥,放冷,选粒,喷加上述防风挥发油,混匀,即得。
实施例3玉屏风颗粒制剂的制备方法
本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂的制备方法,具体如下:取黄芪、白术(炒)、防风按重量份数3∶1∶1配方,将防风酌予碎断,提取挥发油,蒸馏后的水溶液另器收集;药渣与黄芪、白术加水提取两次,每一次1.5小时,第二次1小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至适量,加乙醇至含醇量为70%,搅拌,静置,滤过,滤液减压回收乙醇,加上述蒸馏后的水溶液搅匀,静置,取上清液,滤过,滤液浓缩至相对密度1.30~1.33(70℃),加甘露醇、糊精、矫味剂适量,沸腾制粒机喷雾制粒,干燥,放冷,选粒,喷加上述防风挥发油,混匀,即得。
以上实施例1、2和3中矫味剂选自蔗糖、阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中的一种或几种。
以上实施例1、2和3中所制得的成品为每袋5克,每袋含黄芪按黄芪甲苷计算不得少于3.5mg。
实施例4玉屏风颗粒制剂各组分成分的薄层色谱鉴别方法
本实施例为本发明所提供的玉屏风颗粒制剂各组分成分的薄层色谱鉴别方法。
(1)黄芪的薄层色谱鉴别
本方法细化了黄芪对照药材加水量及煎煮时间。经验证与复核,该方法基本可行,阴性对照无干扰。黄芪的薄层色谱鉴别图见图1。
供试品溶液制备:取本品5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取2次(25ml,15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解。
黄芪对照药材溶液的制备:取黄芪对照药材(中检所提供,批号为:120974-200407)6g,加水煎煮二次(250ml,150ml),每次煎煮30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加入乙醇3倍量,静置使沉淀,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,自“滤过,滤器用5ml水分次洗涤......”起,同法制成对照药材溶液。
黄芪阴性对照溶液制备:取黄芪阴性样品(不含黄芪,其余处方与制备方法同成品)5g,同供试品溶液制备方法制备。
薄层板:自制硅胶G薄层板
点样量:供试品溶液、阴性对照液各8μl,黄芪对照药材液4μl
点样方式:点状
展开剂:石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(2∶1)
展距:8.7cm
显色及检视:喷以1%铁***-2%三氯化铁试液(1∶1)的混合液,日光下检视(T=27℃RH=76%)。
(2)白术的薄层色谱鉴别
本方法细化了白术对照药材加入水量和煎煮时间。经验证,阴性对照无干扰,方法基本可行。白术的薄层色谱鉴别图见图2。
供试品溶液制备:取本品5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)提取2次(25ml,20ml),合并石油醚提取液,蒸干,加甲醇0.5ml使溶解。
白术对照药材溶液的制备:取白术对照药材(中检所提供,批号为:120925-200407)2g,加水250ml煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加10ml水使溶解,自“滤过,滤器用5ml水分次洗涤......”同法制成对照药材溶液。
白术阴性对照溶液制备:取白术阴性样品(不含白术,其余处方与制备方法同成品)5g,按供试品溶液的制备方法制成白术阴性对照溶液。
薄层板:自制硅胶G薄层板
点样量:供试品溶液、阴性对照各12μl,白术对照药材液3μl
点样方式:点状
展开剂:环己烷-乙酸乙酯(7∶3)
展距:8.8cm
显色及检视:晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液,于130℃烘约10分钟,置紫外光灯(365nm)下检视(T=27℃,RH=76%)。
对该鉴别项目进行了验证和复核,将上述方法改进为:取本品5g,加水20ml使溶解,用石油醚(30~60℃)振摇提取2次(25ml,20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解。另取白术对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,自“石油醚(30~60℃)振摇提取2次......”起,同法制成对照药材溶液。该改进方法得到的斑点有所改善,结果见图3(其中点样量为供试品溶液、阴性对照各10μl,白术对照药材液3μl,检视T=24℃,RH=70%)。
(3)防风的薄层色谱鉴别
本方法细化了防风对照药材加水量和煎煮时间。经复核,阴性对照无干扰,方法基本可行。防风的薄层色谱鉴别图见图4。
供试品溶液制备:具体方法同上述(2)白术的薄层色谱鉴别中的供试品溶液制备。
防风对照药材溶液的制备:取防风对照药材(中检所提供,批号为:947-9302)2g,按供试品溶液的制备方法制备。
防风阴性对照溶液制备:取防风阴性样品(不含防风,其余处方与制备方法同成品)5g,按供试品溶液的制备方法制成防风阴性对照溶液。
薄层板:自制硅胶G薄层板
点样量:供试品溶液、阴性对照各10μl,防风对照药材液3μl
点样方式:点状
展开剂:石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(1∶1)
展距:8.8cm
显色及检视:晾干,置紫外光灯(365nm)下检视(T=27℃,RH=76%)
实施例5玉屏风颗粒制剂主要成分黄芪甲苷的含量测定方法
本发明采用高效液相色谱法测定黄芪甲苷的含量。根据十批的测定数据,限度由原标准(薄层扫描法)的每1g不得少于0.12mg修订为每袋不得少于3.5mg(高效液相色谱法)。经验证与复核,该方法可行。
(1)仪器与试药
仪器:高效液相色谱仪:Agilent 1100系列;检测器:Allteach ELSD 2000ES;Chemstation 10.02色谱工作站。色谱柱(1)Thermo ODS-2Hypersil(150mm×4.6mm,5μm),(2)依利特ODS-2Hypersil(150mm×4.6mm,5μm),(3)Agilent ZORBAX SB(150mm×4.6mm,5μm)及Millipore纯水器:milli-Q
试剂:乙腈为色谱纯;水为Millipore去离子水;正丁醇、甲醇均为分析纯。
样品:批号060204;黄芪阴性对照:按玉屏风颗粒处方制备;
对照品:黄芪甲苷(批号:110781-200512,中国药品生物制品检定所)
(2)方法学验证:
1)准确度试验
取已知含量(批号060204)的玉屏风颗粒(含量为0.7369mg/g)6份,每份约1.25g,精密称定,依次分别每组添加取黄芪甲苷对照品溶液(0.1247mg/ml)8ml,依法制成供试样品溶液,按色谱条件测定,计算回收率,结果见表1。
表1回收率试验结果(n=6)
在表1中,回收率=(所测值-样品含量)/加入量×100%
实验结果表明:本方法的回收率良好,适合含量测定的要求。
2)精密度试验
①重复性试验取同批样品6份,每份约2.5g,精密称定,按“供试样品溶液的制备”方法制备样品溶液,依法测定,结果见表2。
表2重复性试验结果(n=6)
实验结果表明:本方法的重复性良好,适合含量测定的要求。
②中间精密度选取同一样品(批号060107),由三位试验者分别依法制备供试样品溶液,用同一设备照含量测定项下方法操作,测定黄芪甲苷的含量,结果见表3。
表3不同操作人员的测定结果比较
实验结果表明:本方法的中间精密度良好。
3)专属性
供试样品溶液的制备方法同上述重复性试验。
黄芪阴性对照样品溶液的制备,取黄芪阴性样品,同法制得。
对照品溶液的制备:取黄芪甲苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml中含黄芪甲苷0.12mg的溶液,即得。
结果表明:黄芪甲苷对照品保留时间为11.542,玉屏风颗粒供试品中黄芪甲苷峰保留时间为11.644,不含黄芪的阴性样品在相应保留时间处无色谱峰,无干扰,符合要求。结果见图5A至图5C。
4)线性关系
取黄芪甲苷对照品(浓度为0.1247mg/ml),分别精密吸取2、10、20、30、35μl注入液相色谱仪中,记录峰面积,取峰面积及浓度值的对数进行线性回归。结果见表4及图6。
表4黄芪甲苷校正曲线计算结果
结果表明:本方法测定的黄芪甲苷在0.25~5.0μg范围内对数线性关系良好。
5)范围
分别配制浓度为0.1247mg/ml的对照品溶液,备用。
低浓度范围溶液的制备:取样品(批号060204)约0.23g,精密称定,加0.1247mg/ml的对照品溶液1.4ml,同供试品溶液的制备方法操作,即得低浓度范围供试品溶液,平行操作6份,依法分别进样,计算回收率,结果见表6。
高浓度范围溶液的制备:取样品(批号060204)约1.66g,精密称定,加0.1247mg/ml的对照品溶液10ml,同供试品溶液的制备方法操作,即得高浓度范围供试品溶液,平行操作6份,依法分别进样,计算回收率,结果见表5和表6。
表5低范围试验结果
表6高范围试验结果
结果表明:在0.35mg/g~2.75mg/g的浓度范围内,样品的回收率较好,符合含量测定的要求。
6)耐用性考察
A、色谱条件的选择:采用(《中国药典》2005版一部)黄芪项下黄芪甲苷的含量测定方法,结果表明:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈-水(32∶68)为流动相;蒸发光散射检测器:漂移管温度103℃,载气流量:2.8L/min;柱温:35℃,为分离条件,样品基线平稳,分离度良好且阴性无干扰,见图5A至5C。故选择以上色谱条件作为玉屏风颗粒中黄芪甲苷的分析方法。
B、提取方法考察:
①甲醇超声-饱和正丁醇萃取-氨试液洗涤
取装量差异项下的本品,研细,取约10g,精密称定,置锥形瓶中,加甲醇150ml,超声处理40分钟(220W,50HKz),提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水20ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
②甲醇索氏提取-饱和正丁醇萃取-氨试液洗涤法
取装量差异项下的本品,研细,取约10g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇100ml,加热回流2小时,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水20ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次40ml,合并正丁醇液,用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
③饱和正丁醇回流提取-氨试液洗涤法
取装量差异项下的本品,研细,取约10g,精密称定,置锥形瓶中,加水饱和正丁醇100ml,加热回流6小时,提取液用氨试液充分洗涤2次,每次40ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液10ul、20ul,与供试品溶液5ul,注入液相色谱仪,测定,即得。
表7不同提取方法试验结果
实验结果表明:①甲醇超声-饱和正丁醇萃取-氨试液洗涤法和③饱和正丁醇回流提取-氨试液洗涤法的提取效率远低于②甲醇索氏提取-饱和正丁醇萃取-氨试液洗涤法,故选择了②甲醇索氏提取-饱和正丁醇萃取-氨试液洗涤法作为玉屏风颗粒中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液制备方法。
C、不同提取时间的比较
比较了在取样量2.5g,甲醇索氏提取三个不同时间的差异,结果(见表8)表明:考虑到提取操作过程的误差和蒸发光散射检测器的仪器误差,认为提取5小时已经基本提取完全,考虑不同样品之间会有一定程度的差异,故将提取时间设为6小时,结果见表8。
表8不同甲醇回流提取时间的比较
D、不同色谱柱比较
分别选取三种不同型号的C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm)测定同一样品(批号060107)溶液,结果见表9及图7A至7C。
表9不同色谱柱比较
结果表明:不同型号的色谱柱影响较小,符合含量测定的要求。
E、稳定性
取批号为060204的样品约2.5g,精密称定,依法制备供试品溶液,分别在0、5、8、10、13、16小时依次进样,比较峰面积值,结果见表10。
表10溶液稳定性测定结果
7)样品测定
取玉屏风颗粒10批,分别称样各2.5g,精密称定,依法制备供试品溶液,分别进样,结果见表11。
表1110批玉屏风颗粒的黄芪甲苷含量测定结果
所测10批样品,黄芪甲苷的含量在3.70~7.05mg/袋之间。考虑到玉屏风颗粒中不同来源的黄芪含量变化较大以及生产过程带来的影响,拟定每袋玉屏风颗粒(5克)中黄芪甲苷的含量不得少于3.5mg。
Claims (11)
1.一种玉屏风口服制剂,该制剂优选为颗粒剂,由黄芪、白术和防风制成,上述三种原料药材的重量份数配比为3∶1∶1,该制剂中黄芪甲苷的含量为0.7mg/g以上。
2.制备权利要求1所述玉屏风口服制剂的方法,其特征在于,该方法包括以下步骤:取提取挥发油后的防风药渣,与黄芪、白术加水提取两次,所得煎液浓缩至适量,加乙醇使含醇量为70%,搅拌,静置;滤过,滤液减压回收乙醇,加提取防风挥发油时的水蒸馏液,搅匀,静置,取上清液滤过,滤液浓缩至相对密度1.30~1.33(70℃),加甘露醇、糊精和矫味剂适量,制成颗粒,干燥,放冷,选粒,喷加防风挥发油,混匀,即得;优选地,其中所述矫味剂选自蔗糖、阿司帕坦、甜菊素、甜蜜素和食用香精中的一种或几种。
3.权利要求1所述玉屏风口服制剂的检测方法,该方法采用薄层色谱分别鉴别制剂中的黄芪、白术和防风,其特征在于,该方法包括以下制备对照样品的步骤:
(1)制备黄芪的对照样品:取黄芪对照药材3~10g优选6g,加水煎煮二次(每次100~500ml,优选第一次250ml,第二次150ml),每次30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量使沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取二次(每次5~50ml,优选第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解;
(2)制备白术的对照样品:取白术对照药材1~5g优选2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(每次10~50ml,优选第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解;和/或
(3)制备防风的对照样品:取防风对照药材1~5g优选2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(每次10~50ml,优选第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解。
4.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:
(1)鉴别黄芪的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为黄芪供试品溶液;取黄芪对照药材6g,加水煎煮二次(第一次250ml,第二次150ml),每次30分钟,合并煎液,滤过,滤液浓缩至约5ml,加乙醇3倍量使沉淀,静置,滤过,滤液蒸干,残渣加水10ml溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,滤液与洗液合并,用三氯甲烷振摇提取二次(第一次25ml,第二次15ml),合并三氯甲烷提取液,蒸干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为黄芪对照药材溶液;吸取所述黄芪供试品溶液8μl、黄芪对照药材溶液4μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(2∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%铁***-2%三氯化铁试液(1∶1)的混合溶液,日光下检视;
(2)鉴别白术的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为白术供试品溶液;取白术对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,制成白术对照药材溶液;吸取所述白术供试品溶液10μl、白术对照药材溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以环己烷-乙酸乙酯(7∶3)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸溶液,于105℃加热约7~10分钟,置紫外光灯365nm下检视;和/或
(3)鉴别防风的薄层色谱方法:取制剂5g,加水20ml使溶解,滤过,滤器用5ml水分次洗涤,洗液与滤液合并,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为防风供试品溶液;取防风对照药材2g,加水250ml,煎煮30分钟,滤过,滤液浓缩至约10ml,加乙醇30ml振摇,静置,滤过,滤液蒸至无醇味,用石油醚(30~60℃)振摇提取二次(第一次25ml,第二次20ml),离心,合并石油醚提取液,挥干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,制成防风对照药材溶液;吸取所述防风供试品溶液10μl、防风对照药材溶液2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(1∶1)为展开剂,展开,取出,晾干,置紫外光灯365nm下检视。
5.权利要求1所述玉屏风口服制剂的检测方法,其特征在于,该方法采用高效液相色谱法测定制剂中黄芪甲苷的含量。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法中供试品溶液制备首先采用甲醇索氏提取,其次采用饱和正丁醇萃取,最后采用氨液进行洗涤。
7.根据权利要求5或6所述的方法,其特征在于,所述供试品溶液是通过以下步骤制备的:
取制剂研细,取约1~10g优选2.5g,精密称定,置索氏提取器中,加甲醇10~300ml优选100ml,加热回流至提取液无色,提取液回收溶剂并浓缩至干,残渣加水20ml,微热使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取4次,每次10~100ml优选40ml,合并正丁醇液,用氨液充分洗涤2次,每次10~100ml优选40ml,合并氨液并用水饱和正丁醇振摇提取2次,每次5~50ml优选20ml,弃去氨液,合并正丁醇液,蒸干,残渣加甲醇使溶解并转移至10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,取续滤液。
8.根据权利要求7所述的方法,其特征在于,所述甲醇索氏提取时间为3小时以上,优选为6小时。
9.根据权利要求5至8中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法中的色谱条件为:填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶;流动相为乙腈-水(20~50∶50~80,优选32∶68);检测器为蒸发光散射检测器;漂移管温度为103℃;载气流量为2.8L/min;和/或柱温为35℃。
10.根据权利要求5至9中任一项所述的方法,其特征在于,所述方法测定的黄芪甲苷含量范围为每克颗粒含黄芪甲苷0.35mg~2.75mg。
11.权利要求1至10中任一项所述方法在玉屏风口服制剂生产中质量控制方面的应用,所述口服制剂优选为颗粒制剂。
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