CN103242336A

CN103242336A - 藤黄酸类衍生物及其制备和应用

Info

Publication number: CN103242336A
Application number: CN2013102202037A
Authority: CN
Inventors: 邵志宇; 孙中强; 宋云龙
Original assignee: Donghua University
Current assignee: Donghua University
Priority date: 2013-06-04
Filing date: 2013-06-04
Publication date: 2013-08-14

Abstract

本发明涉及一种藤黄酸类衍生物及其制备和应用，该衍生物如式I、II或III所示：

其中，R₁为氢或含氮杂环或-(CH₂)_mR₃，其中m为1-8，R₃为含氮杂环或NR₄R₅；所述的R₄、R₅各自独立的选自氢、C1-8的直链与支链的烷基，或者所述的R₄、R₅成环；R₂为氢、脂环或含氮杂环；X独立地为O或NH，或与R₁一起构成含氮杂环；其制备方法为将藤黄酸在中强质子酸催化下重排后R₁XH或其盐进行反应。本发明的藤黄酸类衍生物具有广谱的抗肿瘤活性，对多种实体瘤有显著的抑制生长的作用，可以成盐进而显著提高水溶性，化学结构稳定，有望开发成为创新抗肿瘤药物。

Description

藤黄酸类衍生物及其制备和应用

技术领域

本发明属于抗肿瘤药物领域，特别涉及一种藤黄酸类衍生物及其制备和应用。

背景技术

藤黄（Gamboge）是藤黄科植物，藤黄（Garcinia hanburyi）所分泌的干燥树脂，代表成分为藤黄酸（Gambogic acid，GA）、别藤黄酸、新藤黄酸等xanthone类化合物。其中，GA是藤黄抗肿瘤最主要的生物活性成分。GA能选择性的杀死肿瘤细胞，且对机体正常的造血***和免疫***没有影响，研究证明，GA及其衍生物是半胱天冬蛋白酶的激动剂和细胞凋亡的诱导剂。GA具有广谱抗癌性，可以抑制胃癌、肺癌、结肠癌、***、乳腺癌等多种肿瘤细胞的增殖并诱导细胞凋亡，具有明显的体外抗肿瘤活性，对骨髓、肝、肾等毒性低。

由于藤黄酸及其衍生物具有显著的抗肿瘤作用，国内外学者们对藤黄酸的相关部位进行了各种化学修饰，美国圣地亚哥Marxim药物研究所（US2003078292、WO0044216）对藤黄酸结构进行了部分修饰，主要集中在C-30、C-8、C-6、C-12、C-9,10位置；辽宁利锋科技开发有限公司的徐利锋（200710157223.9、200910166738.4）对藤黄酸的C-30、C-6、C-9,10进行了各种修饰，合成了很多藤黄酸苷衍生物和类似物；中国药科大学药物化学教研室的尤启冬研究组（20061088251.5、200610088252.X、201110347886.3）对藤黄酸的侧链进行了衍生以及对藤黄酸的xanthone环结构进行了全合成，研究其构效关系。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种藤黄酸类衍生物及其制备和应用，该藤黄酸类衍生物具有广谱的抗肿瘤活性，对多种实体瘤有显著的抑制生长的作用，其制备方法简单。

本发明的藤黄酸类衍生物，该衍生物如通式I、II或III所示：

其中，R₁为氢或含氮杂环或-(CH₂)_mR₃，其中m为1-8，R₃可为饱和或不饱和的含氮杂环或NR₄R₅；所述的R₄、R₅各自独立的选自氢、取代或未取代的C1-8的直链与支链的烷基，所述的R₄、R₅也可以成环；

R₂为氢、脂环或含氮杂环；

X独立地为O或NH，或与R₁一起构成含氮杂环。

所述的C1-8的直链与支链的烷基含有一个或多个取代基，所述的取代基选自氢、C1-5烷基、C2-5烯基、C2-5炔基、C1-5烷氧基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基和氧代。

优选地，R₁的m为2-4。

优选地，R₂选自环戊烷基、环己烷基、吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基。

所述的藤黄酸类衍生物具体为下式中的一种：

本发明的藤黄酸类衍生物的制备方法，包括：

（1）将藤黄酸溶解到醋酸中，然后加入中强质子酸，在中强质子酸催化下，藤黄酸进行重排，得到化合物S-31和S-34；

（2）将S-31与R₁XH或其盐进行反应，从而形成式（I）所示的化合物；或将S-34与R₁XH或其盐进行反应，从而形成式（II）所示的化合物；

（3）将式（I）所示的化合物与含有相应取代基的试剂反应得到式（III）所述的化合物。

步骤（1）中所述的中强质子酸选自硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、盐酸等。

步骤（1）的反应条件为微波条件下60-80℃或常压下60-100℃。

步骤（2）中将S-31或S-34在碱催化下与R₁OH的羟基卤代产物反应得到相应的酯，所述的碱为NaOH、KOH、K₂CO₃、Na₂CO₃、NaHCO₃、Cs₂CO₃中的一种。

步骤（2）中将S-31或S-34通过缩合催化试剂与醇或胺反应制备相应的酯或酰胺。

所述的缩合试剂为N,N’-羰基二咪唑(CDI)、三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙基酯(DIAD)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAT)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷(pyBOP)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)或二环己基碳二亚胺(DCC）、O-苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、氯甲酸乙酯中的一种。

本发明的藤黄酸类衍生物在制备抗肿瘤药、抗真菌药或抗血管生成药物中的应用。

所述的肿瘤为乳腺癌、肺癌、肝癌、结肠癌中的一种。

式中，R₁、R₂、X的定义如前所述，所述的R₁XH的盐可为无机酸盐或有机酸盐；当COXR₁为酯时，S-31也可以与R₁OH的卤代脱水产物反应得到式（Ⅰ）化合物。S-34也同样方法制得式（II）的化合物。

优选地，将S-31在碱催化下与R₁OH的羟基卤代产物反应制备相应的酯，所述的碱选自NaOH、KOH、K₂CO₃、Na₂CO₃、NaHCO₃、Cs₂CO₃或NaH中的任一种。

优选地，将S-31通过缩合催化试剂与醇或胺反应制备相应的酯或酰胺。以上所述缩合试剂可独立地选自：N,N’-羰基二咪唑(CDI)、三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙基酯(DIAD)、1-羟基苯并三氮唑(HOBT)、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑(HOAT)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDCI)、六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷(pyBOP)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)或二环己基碳二亚胺(DCC）、O-苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、丙基磷酸酐(T3P）、氯甲酸乙酯。

本发明提供了一类通式I、II、III所示的藤黄酸衍生物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、前体药物或多晶型物。

本发明提供了一种组合物，含有安全有效量的如上所述的任一化合物及药学上接受的载体。所述的“安全有效量”指的是：化合物的量足以改善病情，而不至于产生严重的副作用。安全有效量根据治疗对象的年龄、病情、疗程等来确定。

本发明的藤黄酸类衍生物可按照常规方法制备为其药学接受的盐的形式。包括其无机酸盐和有机酸盐：无机酸包括（但不限于）盐酸、硫酸、磷酸、二磷酸、氢溴酸、硝酸等；有机酸包括（但不限于）乙酸、马来酸、富马酸、酒石酸、琥珀酸、乳酸、对甲苯磺酸、水杨酸、草酸等。

本发明的化合物具有良好的抗肿瘤活性，它们可以用于***，包括食道、胃、肠、直肠、口腔、咽、喉、肺、结肠、乳腺、子宫、子宫内膜、卵巢、***、睾丸、膀胱、肾、肝、胰腺、骨、***、皮肤、眼、脑和中枢神经***等部位发生的癌症，以及甲状腺癌、白血病、霍杰金式病、淋巴瘤和骨髓瘤等。

此外，本发明化合物还可与其他一种（或多种）抗癌活性成分特别是抗癌化合物联用，例如烷基化试剂，如烷基磺酸酯（白消安）、氮烯咪胺、甲基苄肼、氮芥类化合物（氯甲川、苯丙氨酸氮芥、瘤可宁）、环磷酰胺或异环磷酰胺；亚硝基脲类，如卡莫司汀、洛莫司汀、司莫司汀或链脲菌素；抗肿瘤生物碱，如长春新碱或长春碱；紫杉烷类，如紫杉醇或泰素帝(taxotere)，抗肿瘤抗生素类，如放线菌素；***试剂、抗肿瘤代谢物、叶酸拮抗剂或甲氨蝶呤；嘌呤合成抑制剂；嘌呤类似物，如6-巯鸟嘌呤；嘧啶合成抑制剂、芳香化酶抑制剂、卡培它滨或嘧啶类似物，如氟尿嘧啶、吉西他滨、阿糖胞苷和胞嘧啶***糖苷；布喹那(brequinar)，拓扑异构酶抑制剂，如喜树碱或依托泊甙；抗癌激素激动剂和拮抗剂，包括它莫西芬；激酶抑制剂、甲磺酸伊马替尼(imatinib)、生长因子抑制剂、抗癌金属复合物、蒽环类抗生素等。

本发明通过将藤黄酸在各种酸中重排，合成一类具有新颖骨架的藤黄酸类似物，并对各相关位置进行衍生，改善了化合物水溶性，增强了化合物抗肿瘤活性。

有益效果：

本发明提供了一类基于藤黄酸重排产物为母核的结构新颖的中药天然产物衍生物，该衍生物具有广谱的抗肿瘤活性，对多种实体瘤有显著的抑制生长的作用，可以成盐进而显著提高水溶性，化学结构稳定，有望开发成为创新抗肿瘤药物。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

本发明的化合物可以采用藤黄酸或具有藤黄酸类化合物的母核的衍生物为原料陈葆仁.藤黄酸的分离和结构的鉴定（江西医学院学报，1980,7.和Timothy J.R.Weakley,Sui X.Cai,Han-Zhong Zhang,and John F.W.Keana.Crystal structure of the pyridine salt of gambogicacid.J.Chem Crystallogr,December2001,31:11-12），经过数步反应制备得到，方法简单，收率较高，易于实现工业化。

实施例1：S-31、S-34的合成

在250ml反应瓶中加入1g藤黄酸，100ml冰醋酸，4g对甲苯磺酸，80℃条件下反应3h，将反应液放置冷却到常温，然后倒入200ml冰水中，用CH₂Cl₂和饱和NaCl洗涤5次将酸除掉，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为乙酸乙酯：石油醚：甲酸=1:20:0.05，得到0.40g S-31（收率40%）和0.2gS-34（收率20%）。

S-31：¹H NMR(500MHz,CDCl₃):δ12.77(s,1H),7.52(d,J=6.6Hz,1H),5.99(t,J=7.4Hz,1H,),4.15(s,1H),3.48(t,J=4.1Hz,1H),3.03(t,J=7.2Hz,2H),2.56(m,2H),2.48(d,J=9.4Hz,1H),2.43(dd,J=14.0,3.5Hz,1H),2.31(dd,J=13.3,3.8Hz,1H),1.97(s,3H),1.96(m,1H),1.85(s,3H),1.83(m,2H),1.76(s,3H),1.71(s,3H),1.70(m，2H)，1.69(m,1H),1.62(s,3H),1.53(m,1H),1.50(s,3H),1.48(s,3H),1.37(m,1H),1.30(s,3H),1.29(s,3H).

ESI-MS：711[M+Na]⁺。

化合物S-34：¹H NMR(500MHz,CDCl₃):δ12.60(s,1H),7.52(d,J=7.0Hz,1H),5.91(t,J=7.5Hz,1H),5.04(t,J=7.0Hz,1H),3.48(t,J=4.5Hz,1H),3.32(dd,J=8.0,6.0Hz,1H,),3.16-3.18(m,1H),3.14(m,1H),2.98(d,J=9.5Hz,1H),2.97(m,1H),2.52(d,J=9.0Hz,1H),2.46(m,1H),2.34(m,1H),2.31(m,1H),1.75-1.78(m,1H),1.73(s,3H),1.71(s,3H),1.70(s,3H,),1.63(s,3H),1.59(m,1H),1.51-1.56(m,2H),1.38(1H,m),1.33(s,3H),1.31(s,3H),1.29(s,3H),0.73(s,3H).

¹³C NMR(100MHz,CDCl₃):δ203.61(C12),178.93(C8),171.15(C30),161.59(C18),161.22(C6),155.11(C16),137.80(27),134.65(C10),133.93(C9),130.84(C33),128.19(C28),122.50(C32),108.93(C17),105.32(C5),100.45(C7),90.43(C14),85.22(C2),84.17(C13),83.85(C23),49.03(C22),46.08(C11),46.33(C37),38.87(C38),38.70(C20),37.03(C3),35.10(C4),33.49(C39),29.95(C24),29.33(C26),28.92(C25),27.38(C19),25.72(C35),25.64(C36),25.37(C21),21.88(C31),20.76(C29),18.18(C34),17.72(C40).

IR(KBr):3445,2925,2852,1681,1638,1433,1384,1322,1266,1197,1140cm^-1；ESI-MS:629[M+H]⁺

实施例2：S-31、S-34的合成

在50ml反应瓶中加入1g藤黄酸，10ml冰醋酸，0.4g对甲苯磺酸，在微波反应器中80℃条件下反应5min，将反应液放置冷却到常温，然后倒入20ml冰水中，用CH₂Cl₂和饱和NaCl洗涤5次将酸除掉，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为乙酸乙酯：石油醚：甲酸=1:25:0.05，得到0.25g S-34（收率25%）和0.41g S-31（收率41%）。

化合物数据同实施例1。

实施例3：S-45的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），504mg K₂CO₃（3.63mmol），130mg（0.8mmol）氯丙基吗啉和10ml DMF，40℃条件下搅拌7h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂,用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=97:3，得到506mg S-45（收率82%）。

S-45:¹H NMR(400MHz,CDCl₃):δ12.85(s,1H),7.50(d,J=6.8Hz,1H),5.99(t,J=6.7Hz,1H),4.28(s,1H),3.99-3.86(m,2H),3.74-3.64(m,4H),3.49-3.42(m,1H),2.94(t,J=5.6Hz,2H,),2.71-2.53(m,2H),2.52-2.26(m,9H),1.99(s,3H),1.93(s,3H),1.77(s,3H),1.67(s,3H),1.65(s,3H),1.52(s,3H),1.50(s,3H),1.41(s,3H),1.29(s,3H).

ESI-MS：816[M+H]⁺。

实施例4：S-46的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），153.9mg EDCI（0.8mmol），108.5mgHOBT（0.8mmol），115.4mg（0.8mmol）氨丙基吗啉和10ml无水CH₂Cl₂，常温条件下搅拌4h，用TCL检测表明反应完全，用CH₂Cl₂和饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=96:4，得到472.5mg S-46（收率75%）。

S-46:¹H NMR(400 MHz,CDCl₃):δ12.90(s,1H),7.53(d,J=6.9Hz,1H),6.88(t,J=5.3Hz,1H),5.26(t,J=7.8Hz,1H),4.32(s,1H),3.75-3.66(m,4H),3.50-3.42(m,1H),3.38-3.20(m,2H),2.77-2.58(m,4H),2.54-2.37(m,8H),2.32(dd,J=13.5,4.5Hz,1H),1.99(s,3H),1.94(s,3H),1.78(s,3H),1.77(s,3H),1.67(s,3H),1.52(s,3H),1.51(s,3H),1.44(s,3H),1.29(s,3H)。

ESI-MS：815[M+H]⁺.

实施例5：S-48的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），504mg K₂CO₃（3.63mmol），120mg（0.8mmol）氯乙基吗啉和10ml DMF，40℃条件下搅拌7h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂,用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=97:3，得到468mg S-48（收率80%）。

S-48:¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)δ12.86(s,1H),7.50(d,J=6.9Hz,1H),6.01(t,J=6.7Hz,1H),4.28(s,1H),4.08–3.91(m,2H),3.71–3.61(m,4H),3.48–3.41(m,1H),2.94(d,J=7.1Hz,2H),2.71–2.54(m,2H),2.53–2.39(m,8H),2.30(dd,J=13.4,4.6Hz,2H),1.99(s,3H),1.93(s,3H),1.77(s,3H),1.68(s,3H),1.65(s,3H),1.52(s,3H),1.50(s,3H),1.41(s,3H),1.29(s,3H).

ESI-MS：802[M+H]⁺.

实施例6：S-54的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），154mg EDCI（0.8mmol），108mg HOBT（0.8mmol），94mg（0.8mmol）N,N-二乙基乙醇胺和10ml无水CH₂Cl₂，常温条件下搅拌4h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂，用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=96:4，得到488mg S-54（收率85%）。

S-54:¹H NMR(CDCl₃)δ(ppm):12.85(s,1H),7.50(d,J=6.8Hz,1H),5.99(t,J=6.7Hz,1H),4.29(s,1H),4.02–3.88(m,2H),3.45(s,1H),2.95(d,J=6.9Hz,2H),2.42-2.72(m,10H),2.30(dd,J=13.4,3.8Hz,1H),1.99(s,3H),1.93(s,3H),1.77(s,3H),1.67(s,3H),1.65(s,3H),1.52(s,3H),1.50(s,3H),1.41(s,3H),1.29(s,3H),1.00(t,J=7.0Hz,6H).

ESI-MS：788[M+H]⁺.

实施例7：S-55的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），154mg EDCI（0.8mmol），108mg HOBT（0.8mmol），100mg（0.8mmol）N-(3-氨基丙基)咪唑和10ml无水CH₂Cl₂，常温条件下搅拌4h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH2Cl2，用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH2Cl2：CH3OH=96:4，得到494mg S-55（收率85%）。

S-55:¹H NMR(CDCl₃)δ(ppm):12.89(s,1H),7.56(s,1H),7.53(d,J=6.6Hz,1H),7.08-6.98(m,3H,),5.19(t,J=8.8Hz,1H),4.32(s,1H),4.12-3.98(m,2H),3.48(s,1H),3.43-3.16(m,2H,),2.72-2.36(m,6H),2.32(dd,1H),1.97(s,3H),1.94(s,3H),1.79(s,3H),1.75(s,3H),1.66(s,3H),1.51(s,3H),1.49(s,3H),1.43(s,3H),1.28(s,3H).

ESI-MS：796[M+H]⁺。.

实施例8：S-59的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），154mg EDCI（0.8mmol），108mg HOBT（0.8mmol），104mg（0.8mmol）N-羟乙基哌嗪和10ml无水CH₂Cl₂，常温条件下搅拌4h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂，用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=95:5，得到467mg S-59（收率80%）。

S-59:¹H NMR(CDCl₃)δ(ppm):12.89(s,1H),7.51(d,J=6.8Hz,1H),5.45(s,1H),4.31(s,1H,),3.68(m,1H),3.67-3.58(m,2H),3.41(d,J=4.4Hz,2H),3.35-3.19(m,2H),2.76-2.14(m,13H),1.99(s,3H),1.94(s,3H),1.75(s,6H),1.66(s,3H),1.52(s,3H),1.51(s,3H),1.42(s,3H),1.26(s,3H).

ESI-MS：801[M+H]⁺。

实施例9：S-61的合成

在50ml反应瓶中加入500mg S-31（0.73mmol），154mg EDCI（0.8mmol），108mg HOBT（0.8mmol），80mg（0.8mmol）甲基哌嗪和10ml无水CH₂Cl₂，常温条件下搅拌4h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂，用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，将萃取液蒸干，然后用硅胶柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=96:4，得到477mg S-61（收率85%）。

S-61:¹H NMR(CDCl₃)δ(ppm):12.89(s,1H),7.50(d,J=6.6Hz,1H),5.44(s,1H),4.31(s,1H,),3.7-3.6(m,1H),3.46-3.17(m,4H),2.75-2.25(m,11H),2.29(s,3H),1.98(s,3H),1.93(s,3H),1.84(s,3H),1.74(s,3H),1.65(s,3H),1.52(s,3H),1.51(s,3H),1.41(s,3H),1.25(s,3H).

ESI-MS：771[M+H]⁺。

实施例10：S-63的合成

在50ml反应瓶中加入300mg化合物S-61（0.389mmol），3ml吗啉和10ml无水THF，室温条件下搅拌1h，用TCL检测表明反应完全，倒入30mlCH₂Cl₂，用饱和NaCl溶液洗涤20mL×5次，无水Na₂SO₄干燥，将萃取液蒸干，得到化合物S-63粗品，然后用硅胶(200-300目)柱层析，洗脱液条件为CH₂Cl₂：CH₃OH=96:4，得到化合物S-63 307mg（收率92%）。

S-63:¹H NMR(CDCl₃)δ(ppm):12.07(s,1H),5.92(t,J=6.2Hz,1H),4.33(s,1H),3.61(brs,4H,),3.37-3.55(m,4H),3.27(d,J=13.1Hz,2H),2.80-2.33(m,13H),2.29(s,3H),2.01(s,3H),1.95(s,3H),1.88(s,3H),1.69(s,3H),1.55(s,3H),1.53(s,3H),1.40(s,3H),1.38(s,3H),1.12(s,3H)。

ESI-MS：858[M+H]⁺。

实施例11：体外抗肿瘤活性测试试验

1.实验细胞株：

本实验采用肿瘤细胞株系分别为：A549（人肺癌细胞）、HCT116（人结肠癌细胞）、MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）（由上海医药工业研究院药理实验室冻存和传代）。

2.样品配制：

用DMSO（Merck）溶解后，加入PBS(-)配成1000μg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。阳性对照药为藤黄酸。

3.试验方法

MTT法：96孔板每孔加入浓度为4～5×10⁴个/ml的细胞悬液100μl，置37℃，5%CO₂培养箱内。24h后，加入样品液，10μl/孔，设双复孔，37℃，5%CO₂作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测定570nm OD值。（体外抗肿瘤活性见表2）

表2.部分样品对人体肿瘤细胞的体外增殖抑制作用

从表2可知，本发明的绝大多数藤黄酸重排产物和衍生物对3种人体肿瘤细胞的抑制作用强于藤黄酸，显示了其广谱抗肿瘤活性。文献表明，藤黄酸对胃癌、肝癌、***及胰腺癌也具有较好的抗肿瘤活性，因此，本发明的藤黄酸类衍生物对这些肿瘤也具有较好的活性。尤其值得指出的是，本发明的化合物还可以通过成盐进而显著改善其水溶性，这有助于提高该类化合物的生物利用度。这一切都表明本发明的化合物有着良好的开发前景。

综上，本发明的藤黄酸类衍生物具有广谱抗肿瘤活性，特别是部分化合物对肺癌、结肠癌和乳腺癌具有较强的抗肿瘤活性，具有很好的开发价值。本发明的藤黄酸类衍生物代表着一类作用机制独特、结构全新的化合物，这为深入研究和开发新的抗肿瘤药物开辟了新的途径和方向。

Claims

1.一种藤黄酸类衍生物，该衍生物如式I、II或III所示：

其中，R₁为氢或含氮杂环或-(CH₂)_mR₃，其中m为1-8，R₃为含氮杂环或NR₄R₅；所述的R₄、R₅各自独立的选自氢、C1-8的直链与支链的烷基，或者所述的R₄、R₅成环；

R₂为氢、脂环或含氮杂环；

X独立地为O或NH，或与R₁一起构成含氮杂环。

2.根据权利要求1所述的藤黄酸类衍生物，其特征在于：所述的C1-8的直链与支链的烷基含有一个或多个取代基，所述的取代基选自氢、C1-5烷基、C2-5烯基、C2-5炔基、C1-5烷氧基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基、氧代。

3.根据权利要求1所述的藤黄酸类衍生物，其特征在于：R₁的m为2-4；R₂选自环戊烷基、环己烷基、吗啉基、哌嗪基、N-甲基哌嗪基、哌啶基。

4.根据权利要求1所述的藤黄酸类衍生物，其特征在于：所述的藤黄酸类衍生物具体为下式中的一种：

5.如权利要求1-4所述的藤黄酸类衍生物的制备方法，包括：

（1）将藤黄酸溶解到醋酸中，然后加入中强质子酸，在中强质子酸催化下藤黄酸进行重排，得到化合物S-31和S-34；

（2）将S-31与R₁XH或其盐进行反应，形成式（I）所示的化合物；或将S-34与R₁XH或其盐进行反应，形成式（II）所示的化合物；

6.根据权利要求5所述的藤黄酸类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述的中强质子酸选自硫酸、甲磺酸、对甲苯磺酸、盐酸；步骤（1）的反应条件为微波条件下60-80℃或常压下60-100℃。

7.根据权利要求5所述的藤黄酸类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中将S-31或S-34在碱催化下与R₁OH的羟基卤代产物反应得到相应的酯；所述的碱为NaOH、KOH、K₂CO₃、Na₂CO₃、NaHCO₃、Cs₂CO₃中的一种。

8.根据权利要求5所述的藤黄酸类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中将S-31或S-34通过缩合催化试剂与醇或胺反应制备相应的酯或酰胺；所述的缩合试剂为N,N’-羰基二咪唑、三苯基膦、偶氮二甲酸二异丙基酯、1-羟基苯并三氮唑、N-羟基-7-氮杂苯并三氮唑、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷、4-二甲氨基吡啶或二环己基碳二亚胺、O-苯并三氮唑-N,N,N′,N′-四甲基脲四氟硼酸、氯甲酸乙酯中的一种。

9.根据权利要求5所述的藤黄酸类衍生物的制备方法，其特征在于：步骤（3）中所述的含有相应取代基的试剂为吗啉。

10.如权利要求1-4所述的藤黄酸类衍生物在制备抗肿瘤药、抗真菌药或抗血管生成药物中的应用。