CN103214596A

CN103214596A - 由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法

Info

Publication number: CN103214596A
Application number: CN2013101751751A
Authority: CN
Inventors: 郑会武; 石滨; 丛义国; 刘清凉
Original assignee: ZAOZHUANG SAINUOKANG BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZAOZHUANG SAINUOKANG BIOCHEMICAL PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2013-05-14
Filing date: 2013-05-14
Publication date: 2013-07-24

Abstract

一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，步骤为：（1）将肝素钠粗品用氯化钠溶液溶解成肝素钠粗品溶液，使用盐酸或氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为5.0—10.0；使用高速离心机进行离心除去不溶物，离心得到的液体用乙醇进行沉淀，沉淀液低温静置，收集沉淀物A；再用纯化水稀释沉淀物A，待沉淀物全部溶解后，加入过氧化氢进行氧化，过滤，加入乙醇沉淀，静置，得到沉淀物B；（2）取出沉淀物B，作为肝素钠粗品中间体，加入纯化水溶解，搅拌下加入亚硝酸钠降解肝素钠；加入硼氢化钠对肝素钠进行还原；还原结束后使用超滤器进行大分子截留，超滤液中加入乙醇沉淀，用乙醇脱水干燥后即得低分子量肝素钠。

Description

由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法

技术领域

本发明涉及一种低分子量肝素钠的制备方法，尤其涉及一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法。

背景技术

肝素是广泛存在于动物器官和组织（如小肠粘膜、肺等）中提取的硫酸化的葡糖胺聚糖化合物，具有抗凝、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌、降血脂等多种生物学功能。而低分子肝素是由普通肝素经物理、化学或酶解聚方法而得，分子量范围为3000～8000，具有较肝素更优的抗血栓活性，且与肝素相比，出血副作用少、生物利用度高、半衰期长、抗凝效果可以预测且无需实验室监测，目前临床适应症不断扩大。历经几十年的发展，低分子量肝素的研究已取得较大的进展。

目前，低分子量肝素（包括低分子量肝素钠和低分子量肝素钙）的生产均是使用肝素钠精品作为起始原料，然而，现有低分子量肝素的生产工艺要求起始原料肝素钠精品中大分子物质（如硫酸皮肤素）的含量很低才能保证低分子量肝素的分子量符合标准要求，由于肝素钠精品的生产过程中需要去除硫酸皮肤素等大分子物质，而这一过程往往损失3——5%甚至更多的效价，致使原料成本增加。

发明内容

本发明的目的是提供一种生产成本低的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，包括如下步骤：

（1）、将肝素钠粗品用氯化钠溶液溶解成肝素钠粗品溶液，使用盐酸或氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为5.0——10.0；使用高速离心机进行离心除去不溶物，离心得到的液体用乙醇进行沉淀，沉淀液低温静置，收集沉淀物A；再用纯化水稀释沉淀物A，使之成为肝素钠粗品沉淀物A溶液，待沉淀物全部溶解后，加入过氧化氢进行氧化，过滤，加入乙醇沉淀，静置，得到沉淀物B；

（2）、取出沉淀物B，作为肝素钠粗品中间体，加入纯化水，溶解均匀，调节溶液的pH，搅拌下加入亚硝酸钠降解肝素钠，直至降解反应结束；加入用氢氧化钠，再加入硼氢化钠对肝素钠进行还原；还原结束后使用超滤器进行大分子截留，超滤液中加入乙醇沉淀，用乙醇脱水干燥后即得低分子量肝素钠。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中将肝素钠粗品用1——5wt%的氯化钠溶液溶解成5wt%——15wt%的肝素钠粗品溶液；使用浓度为6mol/L的盐酸或40wt%的氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为5. 0——7.0。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中离心得到的液体用0.3——1倍溶液体积的药用乙醇进行沉淀，沉淀液温度保持在10℃以下，静置3——24小时后收集沉淀物。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中用纯化水稀释沉淀物A使之成为5%——15wt%的肝素钠溶液，待沉淀物全部溶解后，加入0.3——3.5%的过氧化氢氧化3——24小时，再用滤纸过滤，然后加入溶液体积为1.5倍量的乙醇进行沉淀，静置5——24小时后得到沉淀物B做为肝素钠粗品中间体。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中在肝素钠粗品中间体中加入纯化水控制浓度为5——10wt%，溶解均匀后，调节溶液温度为14——20℃，搅拌，用6mol/L盐酸调节溶液pH值为2.4——3.0，然后加入重量为无蛋白肝素钠重量1.5——3.0wt%的亚硝酸钠降解肝素钠，降解反应一直持续到用淀粉指示剂检测溶液不变蓝色为止。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中降解结束后用40wt%的氢氧化钠调节溶液的pH至8.5——11.5，然后加入与所述亚硝酸钠等量的硼氢化钠对肝素钠进行还原2——4小时。

根据所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中还原结束后采用1万分子量的超滤器对大分子进行截留，调节超滤液的pH到5.5——7.0，再加入超滤液体积1.5倍的乙醇沉淀3——24小时，最后用乙醇脱水干燥，即得低分子量肝素钠。

本发明所述方法使用肝素钠粗品直接生产低分子量肝素，不需要事先去除硫酸皮肤素等大分子物质，而是使用未经去除硫酸皮肤素等大分子物质的肝素钠粗品直接制成低分子量肝素，然后再用大分子去除的手段——即超滤截留的方法截留掉大分子物质，其原理为：低分子量肝素制作过程中，由于硫酸皮肤素等大分子物质不能被亚硝酸钠氧化法降低分子量，因此使硫酸皮肤素分子量与降解后的肝素即低分子量肝素的分子量的差距变大，从而使得用超滤器进行大分子量截留变得容易。

由于本发明采用了超滤器进行大分子量的截留，因此可以省去去除皮肤素的工艺步骤，而使得收率增加。同时，使用超滤法也使得生产出的低分子量肝素中的残留蛋白质等大分子物质一同被截留掉，提高了低分子量肝素的安全性。

本发明所述方法能够明显降低生产成本，生产易于实现，同时可提高产品的安全性。

附图说明

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步描述：

实施例一：

一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，如图1所示，包括如下步骤：

（1）、将肝素钠粗品用4wt%的氯化钠溶液溶解成10wt%的肝素钠粗品溶液；使用浓度6mol/L的盐酸或40wt%的氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为8.5。

（2）、用高速离心机进行离心除去不溶物。离心得到的液体用0.5倍溶液体积的乙醇沉淀，沉淀液保持温度10℃以下，静置12小时，收集沉淀物A。

（3）、用纯化水稀释沉淀物A使成10wt%的肝素钠溶液，待全部溶解后加入溶液体积1.0v/v%的过氧化氢氧化12小时，同时调节pH到10.5。用滤纸过滤，加入溶液体积1.0倍量乙醇沉淀，静置8小时，得到沉淀物B。

（4）、取出沉淀物B，作为肝素钠粗品中间体。用纯化水稀释肝素钠粗品中间体使成10wt%的浓度，溶解均匀后，调节溶液温度为14——20℃，然后搅拌下用6mol/L盐酸调节pH值2.8，加入肝素钠粗品中间体重量2.5wt%的亚硝酸钠降解肝素钠，降解反应一直到用淀粉指示剂检测不变蓝色为止。

（5）、降解反应结束后用40wt%的氢氧化钠调节pH至10.5，加入亚硝酸钠等量的硼氢化钠进行肝素钠进行还原4小时，然后用6mol/L盐酸调整pH到4.0保持30分钟后再用40wt%氢氧化钠溶液回调pH到6.5。

（6）、用1万分子量的超滤器进行截留大分子，超滤后调节pH到6.5，加入超滤得到的药液体积1.5倍的乙醇（v/v）沉淀6小时，用乙醇脱水干燥即得低分子量肝素。

实施例二：

（1）、将肝素钠粗品用2wt%的氯化钠溶液溶解成5wt%的肝素钠粗品溶液；使用浓度6mol/L的盐酸或40wt%的氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为6.5.

（2）、用高速离心机进行离心除去不溶物。离心得到的液体用1倍溶液体积的乙醇沉淀，沉淀液保持温度10℃以下，静置6小时，收集沉淀物A。

（3）、用纯化水稀释沉淀物A使成5wt%的肝素钠溶液，待全部溶解后加入0.5%的过氧化氢氧化24小时，用滤纸过滤，加入溶液体积2.0倍量乙醇沉淀，静置12小时，得到沉淀物B。

（4）、取出沉淀物B，作为肝素钠粗品中间体，用入纯化水稀释肝素钠粗品中间体使成5wt%的浓度，溶解均匀后，调节溶液温度为14——20℃，然后搅拌下用6mol/L盐酸调节pH值2.8，加入肝素钠粗品中间体重量2.7wt%的亚硝酸钠降解肝素钠，降解反应一直到用淀粉指示剂检测不变蓝色为止。

（5）、降解反应结束后用40wt%的氢氧化钠调节pH至11，加入亚硝酸钠等量的硼氢化钠进行肝素钠进行还原4小时，然后用6mol/L盐酸调整pH到4.0保持20分钟后用40wt%的氢氧化钠回调pH到6.5。

（6）、用1万分子量的超滤器进行截留大分子，超滤后调节pH到6.5，加入超滤得到的药液体积2倍的乙醇（v/v）沉淀12小时，用乙醇脱水干燥即得低分子量肝素。

实施例三：

（1）、将肝素钠粗品用3wt%的氯化钠溶液溶解成15wt%的肝素钠粗品溶液；使用浓度6mol/L的盐酸或40wt%的氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为7.5.

（2）、用高速离心机进行离心除去不溶物。离心得到的液体用0.8倍溶液体积的乙醇沉淀，沉淀液保持温度10℃以下，静置16小时，收集沉淀物A。

（3）、用纯化水稀释沉淀物A使成15wt%的肝素钠溶液，待全部溶解后加入1.5%的过氧化氢氧化24小时，用滤纸过滤，加入溶液体积2.0倍量乙醇沉淀，静置16小时，得到沉淀物B。

（4）、取出沉淀物B，作为肝素钠粗品中间体，用入纯化水稀释肝素钠粗品中间体使成15wt%的浓度，溶解均匀后，调节溶液温度为14——20℃，然后搅拌下用6mol/L盐酸调节pH值2.9，加入肝素钠粗品中间体重量2.8wt%的亚硝酸钠降解肝素钠，降解反应一直到用淀粉指示剂检测不变蓝色为止。

（5）、降解反应结束后用40wt%的氢氧化钠调节pH至10，加入亚硝酸钠等量的硼氢化钠进行肝素钠进行还原4小时，然后用6mol/L盐酸调整pH到4.0保持30分钟后用40wt%的氢氧化钠回调pH到6.5。

上面所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的构思和范围进行限定，在不脱离本发明设计构思的前提下，本领域中普通工程技术人员对本发明的技术方案作出的各种变型和改进，均应落入本发明的保护范围，本发明请求保护的技术内容，已经全部记载在权利要求书中。

本发明以肝素钠粗品为原料，通过离心方法去除大部分蛋白质，再用过氧化氢氧化，去除部分残留杂质和色素，然后通过乙醇沉淀，继续去除杂质和色素，但不去除硫酸皮肤素等类肝素物质，此为肝素钠粗品中间体。再向肝素钠粗品中间体中加入亚硝酸钠进行降解、硼氢化钠还原，用超滤器通过分子量截留的方式去除亚硝酸钠不能降解的硫酸皮肤素等大分子物质，由于肝素钠在此过程中降解成了低分子量肝素，而硫酸皮肤素等不能被亚硝酸钠降解，这使得低分子量肝素钠的分子量与硫酸皮肤素的分子量差异变大，从而很容易的便能去掉硫酸皮肤素等杂质，使得去除硫酸皮肤素的过程变得容易，并使其效价收率得到提高。并使低分子量肝素钠中的大分子物质（如硫酸皮肤素、硫酸软骨素、蛋白质、核酸等）脱除的彻底，降低临床的不良反应。

本发明所述方法还可以用来制备低分子量肝素钙。

Claims

1.一种由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中将肝素钠粗品用1——5wt%的氯化钠溶液溶解成5wt%——15wt%的肝素钠粗品溶液；使用浓度为6mol/L的盐酸或40wt%的氢氧化钠溶液调节肝素钠粗品溶液的pH值为5. 0——7.0。

3.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中离心得到的液体用0.3——1倍溶液体积的药用乙醇进行沉淀，沉淀液温度保持在10℃以下，静置3——24小时后收集沉淀物。

4.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（1）中用纯化水稀释沉淀物A使之成为5%——15wt%的肝素钠溶液，待沉淀物全部溶解后，加入0.3——3.5%的过氧化氢氧化3——24小时，再用滤纸过滤，然后加入溶液体积为1.5倍量的乙醇进行沉淀，静置5——24小时后得到沉淀物B做为肝素钠粗品中间体。

5.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中在肝素钠粗品中间体中加入纯化水控制浓度为5——10wt%，溶解均匀后，调节溶液温度为14——20℃，搅拌，用6mol/L盐酸调节溶液pH值为2.4——3.0，然后加入重量为无蛋白肝素钠重量1.5——3.0wt%的亚硝酸钠降解肝素钠，降解反应一直持续到用淀粉指示剂检测溶液不变蓝色为止。

6.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中降解结束后用40wt%的氢氧化钠调节溶液的pH至8.5——11.5，然后加入与所述亚硝酸钠等量的硼氢化钠对肝素钠进行还原2——4小时。

7.根据权利要求1所述的由肝素钠粗品直接生产低分子量肝素钠的方法，其特征是，所述步骤（2）中还原结束后采用1万分子量的超滤器对大分子进行截留，调节超滤液的pH到5.5——7.0，再加入超滤液体积1.5倍的乙醇沉淀3——24小时，最后用乙醇脱水干燥，即得低分子量肝素钠。