CN103203043A - 用于分离原代脂肪干细胞的储脂桶及其使用方法 - Google Patents

用于分离原代脂肪干细胞的储脂桶及其使用方法 Download PDF

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刘云松
赵彦
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Abstract

本发明公开了用于从脂肪组织分离出原代脂肪干细胞的储脂桶及其使用方法以及吸脂机。储脂桶包括用于接收并容纳脂肪组织的本体，该本体具有顶部、侧壁和底部，其中，顶部具有顶部开口，脂肪组织和用于分离原代脂肪干细胞的试剂从该顶部开口注入到本体中，并且，底部具有至少一个底部开口，该至少一个底部开口是可闭合的，用于排出本体内的容纳物。使用该储脂桶分离原代脂肪干细胞，无需二次更换容器，既方便了操作，又避免了中间环节可能造成的污染，提高了科学研究的准确性，还节省了科研成本，减少了实验垃圾的产生，利于环保。

Description

用于分离原代脂肪干细胞的储脂桶及其使用方法
技术领域
本发明涉及一种储脂桶及其使用方法，特别是涉及一种用于从脂肪组织分离原代脂肪干细胞的储脂桶及其使用方法，本发明还涉及一种包括储脂桶的吸脂机。
背景技术
在整形外科医学领域，吸脂术的出现为广大患者和爱美人士带来了健康和美丽。负压吸脂机是该项手术的必备设备，术中脂肪被吸入到该设备的储脂桶中，这些被吸出的脂肪中含有大量的原代脂肪干细胞，是研究原代脂肪干细胞的绝好细胞来源。目前常规的储脂桶仅是一个普通的桶状物，提取原代脂肪干细胞要经过多个洗涤、消化和分离步骤，转移数个容器后才能实现，这导致原代脂肪干细胞的提取费时费力，而且可能存在潜在的污染。
发明内容
本发明正是基于上面的考虑而做出。
根据本发明的一方面，用于从脂肪组织分离出原代脂肪干细胞的储脂桶包括用于接收并容纳脂肪组织的本体，该本体具有顶部、侧壁和底部，其中，顶部具有顶部开口，脂肪组织和用于分离原代脂肪干细胞的试剂从该顶部开口注入到本体中，并且，底部具有至少一个底部开口，该至少一个底部开口是可闭合的，用于排出本体内的容纳物。
根据本发明的另一方面，提出一种包括上述储脂桶的吸脂机。
根据本发明的又一方面，提出一种上述储脂桶的使用方法，包括如下步骤：将脂肪组织通过储脂桶的顶部开口收集到储脂桶的本体中；通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲液，充分荡洗，之后静置；打开储脂桶的至少一个底部开口，放出下层的磷酸盐缓冲液；重复上述步骤，直到磷酸盐缓冲液无明显变色为止；通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的I型胶原酶消化液，将储脂桶置于恒温摇床，进行消化，之后静置；打开储脂桶的至少一个底部开口，放出下层含细胞的I型胶原酶消化液至离心管中，然后离心分离人脂肪干细胞。
根据本发明，利用脂肪组织密度小，总是浮在水溶液上层的特点，在储脂桶的底部设置至少一个底部开口，就可以实现只使用一个容器，便捷地完成洗涤、消化和提取原代脂肪干细胞的操作。由于无需二次更换容器，这样既方便了操作，又避免了更换容器可能造成的污染，提高了科学研究的准确性，同时还节省了科研成本，减少了医疗垃圾的产生，利于环保。
附图说明
图1是本发明的储脂桶的第一实施例的示意图。
图2是本发明的储脂桶的第二实施例的示意图。
图3是本发明的储脂桶的第三实施例的示意图。
图4是本发明的储脂桶的第四实施例的示意图。
具体实施方式
下面参照附图详细描述本发明的用于从脂肪组织分离原代脂肪干细胞的储脂桶。
图1是本发明的储脂桶的第一实施例的示意图。根据该实施例的储脂桶10包括本体11，本体11用于接收并容纳脂肪组织，例如在吸脂术中用负压吸脂机吸出的脂肪组织。本体11可以是任何形状，例如圆筒形、方形等。该本体11具有顶部、侧壁和底部。本体11的顶部可以是开放的，也可以具有盖12，用于覆盖本体11的空腔，盖12上设置有开口13，脂肪组织和用于分离原代脂肪干细胞的试剂通过开放的顶部或盖12上的开口13注入到本体中。在该实施例中，本体11的侧壁基本上平行于本体的纵向轴线，即，本体11具有恒定的横向尺寸。本体11的底表面上设置有用于排出本体内的容纳物的可闭合的底部开口14。虽然该实施例示出了一个底部开口14，但是也可以根据具体情况在适当的位置设置多个底部开口14，以便顺利且有效地排出位于本体11底部的容纳物。
图2是本发明的储脂桶的第二实施例的示意图。根据该实施例的储脂桶20包括本体21，与第一实施例的储脂桶10不同的是，至少一个可闭合的底部开口24设置在本体21的侧壁与底表面接合的位置。
图3是本发明的储脂桶的第三实施例的示意图。根据该实施例的储脂桶30包括本体31与第一实施例的储脂桶10不同的是本体31的横向尺寸(宽度)从顶部到底部逐渐减小。根据该实施例，储脂桶30中的容纳物能够通过底部开口可控地、精确地排出。
图4是本发明的储脂桶的第四实施例的示意图。根据该实施例的储脂桶40包括本体41，与第一实施例的储脂桶10不同的是，本体41的横向尺寸在顶部附近是恒定的，而在底部附近逐渐减小。根据该实施例，能够在本体不占用过大空间的情况下，使储脂桶40中的容纳物通过底部开口可控地、精确地排出。
在上述各实施例中，可闭合的底部开口可通过各种方式实现，例如，操作旋转开关或拨动开关使一挡片遮蔽/打开底部开口，又例如，将一阀门装置连接于底部开口，通过阀门的操作实现底部开口的打开/闭合。在储脂桶的底部设置有向下突出的开关或阀门的情况下，可以有选择地用托架将储脂桶支起或者使本体的侧壁和底部围成一凹部以容置所述开关或阀门。
在上述各实施例中，本体可以由树脂或金属制成，可选择的盖也可以由树脂或金属制成。优选地，本体由透明/半透明的树脂制成；优选地，在本体的侧壁上设置有刻度布置。在本体由金属制成时，可以在本体的侧壁上设置观察窗口和刻度布置。
下面描述使用上述的储脂桶分离出脂肪干细胞的方法。
首先，将脂肪组织通过储脂桶的顶部开口收集到储脂桶的本体中。
然后，通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲液(PBS)，并充分荡洗。之后，静置1分钟，这时桶中溶液将分为两层，下层为磷酸盐缓冲液，上层为黄色脂肪组织，由于脂肪组织中含有红细胞，磷酸盐缓冲液洗涤后颜色变为淡红色。然后，打开储脂桶的底部开口，放出下层的磷酸盐缓冲液。
重复以上步骤，例如3-5次，直到磷酸盐缓冲液无明显变色为止。
然后，通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的I型胶原酶消化液，将储脂桶置于37℃恒温摇床，消化一段时间，例如30分钟。之后，静置1分钟，这时桶中溶液将分为两层，下层为I型胶原酶消化液，消化出的人脂肪干细胞即沉淀于其中，上层为黄色脂肪组织，可以看到部分脂肪组织被消化，脂肪层体积减小。随后，打开储脂桶的底部开口，放出下层含细胞的I型胶原酶消化液至离心管中，然后离心分离人脂肪干细胞。此后，再通过储脂桶的顶部开口向储脂桶中加入与脂肪组织等体积的I型胶原酶消化液，并重复以上消化步骤3-5次，直到脂肪组织消化殆尽。
最后，收集离心得到的人脂肪干细胞，置于培养皿中培养、扩增，常规方法纯化、鉴定后用于后续实验等。
磷酸盐缓冲液(PBS)是由适量氯化钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钾配置成的平衡缓冲液，PH值为7.4，具体配方为NaCl：8克，KCl：0.20克，Na2HPO4：3.49克，KH2PO4：0.20克，加入蒸馏水中，定容为1升，0.22微米滤膜过滤除菌。
市售I型胶原酶(粉状)以质量分数0.1％溶解于磷酸盐缓冲液中，0.22微米滤膜过滤除菌，即成为I型胶原酶消化液，用于消化脂肪组织。
常规酶消化法分离人脂肪干细胞的步骤复杂，每一次冲洗、消化脂肪组织后都要更换一次容器，既增加了操作步骤和污染的风险，还造成了不必要的浪费。采用本发明的储脂桶可以极大地简化分离原代人脂肪干细胞的步骤，并且节约实验容器的用量，减少了实验废弃物的产生，有利于环保。
虽然已经结合具体实施例详细地描述了本发明，但是显然地，在不偏离本发明的精神和范围的条件下，本领域技术人员可以做各种改变和变型。

Claims (11)

1.一种储脂桶，用于从脂肪组织分离出原代脂肪干细胞，包括用于接收并容纳脂肪组织的本体，该本体具有顶部、侧壁和底部，其中，顶部具有顶部开口，脂肪组织和用于分离原代脂肪干细胞的试剂从该顶部开口注入到本体中，并且，底部具有至少一个底部开口，该至少一个底部开口是可闭合的，用于排出本体内的容纳物。
2.根据权利要求1的储脂桶，其中，储脂桶还包括盖，所述顶部开口设置在盖上。
3.根据权利要求1的储脂桶，其中，所述至少一个底部开口设置在本体的底表面上或者设置在本体的侧壁与底表面接合的位置。
4.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，本体的侧壁具有恒定的横向尺寸或者具有从顶部到底部逐渐减小的横向尺寸。
5.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，本体的侧壁在顶部附近具有恒定的横向尺寸，而在底部附近具有逐渐减小的横向尺寸。
6.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，储脂桶的本体由透明/半透明树脂制成，并且其上设置有刻度布置。
7.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，储脂桶的本体由金属制成，并且其上设置有观察窗口和刻度布置。
8.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，所述至少一个底部开口通过可操纵的挡片打开/闭合。
9.根据权利要求1-3中任一项的储脂桶，其中，所述至少一个底部开口连接到阀门。
10.一种吸脂机，包括根据权利要求1-9中任一项的储脂桶。
11.权利要求1-10中任一项的储脂桶的使用方法，包括如下步骤：
将脂肪组织通过储脂桶的顶部开口收集到储脂桶的本体中；
通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的磷酸盐缓冲液，充分荡洗，之后静置；
打开储脂桶的至少一个底部开口，放出下层的磷酸盐缓冲液；
重复上述步骤，直到磷酸盐缓冲液无明显变色为止；
通过储脂桶的顶部开口向储脂桶的本体中加入与脂肪组织等体积的I型胶原酶消化液，将储脂桶置于37℃恒温摇床，进行消化，之后静置；
打开储脂桶的至少一个底部开口，放出下层含细胞的I型胶原酶消化液至离心管中，然后离心分离人脂肪干细胞。
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