CN103202920A - 具有抗菌作用的中药组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有抗菌作用的中药组合物。具体地说，本发明涉及一种中药组合物，其中包括苦参提取物和绿茶提取物，以及任选的药学可接受的辅料。本发明中药组合物具有良好的抗菌效果。

Description

具有抗菌作用的中药组合物

技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及一种具有抗菌作用的组合物，特别是涉及一种包括苦参提取物和绿茶提取物的中药组合物。

背景技术

微生物对人类进步带来巨大贡献的同时，还时刻威协着人类健康。例如，公知的肠埃希氏菌(E. coli)通常称为大肠杆菌，是Escherich在1885年发现的，在相当长的一段时间内，一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌。直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的大肠杆菌对人和动物有病原性，尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症，它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类：致病性大肠杆菌(EPEC)、肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、肠出血性大肠杆菌(EHEC)、肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。

大肠杆菌是人和动物肠道中最著名的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动、无芽孢的革兰氏阴性短杆菌。大肠杆菌能合成维生素B和K，正常栖居条件下不致病；若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在水和食品中检出，可认为是被粪便污染的指标。大肠菌群数常作为饮水、食物或药物的卫生学标准。

大肠杆菌O157：H7血清型属肠出血性大肠杆菌，自1982年在美国首先发现以来，包括中国等许多国家都有报道，且日见增加。日本近年来因食物污染该菌导致的数起大暴发，格外引人注目。在美国和加拿大通常分离的肠道致病菌中，目前它已排在第二或第三位。大肠杆菌O 157：H7引起肠出血性腹泻，约2%～7%的病人会发展成溶血性尿毒综合征，儿童与老人最容易出现后一种情况。致病性大肠杆菌通过污染饮水、食品、娱乐水体引起疾病暴发流行，病情严重者，可危及生命。

大肠杆菌为革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1～3微米。周身鞭毛，能运动，无芽孢。能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，其代谢活动能抑制肠道内分解蛋白质的微生物生长，减少蛋白质分解产物对人体的危害，还能合成维生素B和K，以及有杀菌作用的大肠杆菌素。正常栖居条件下不致病。但若进入胆囊、膀胱等处可引起炎症。在肠道中大量繁殖，几占粪便干重的1/3。在环境卫生不良的情况下，常随粪便散布在周围环境中。若在水和食品中检出此菌，可认为是被粪便污染的指标，从而可能有肠道病原菌的存在。因此，大肠菌群数（或大肠菌值）常作为饮水和食物（或药物）的卫生学标准。国家规定，每升饮用水中大肠杆菌数不应超过3个）大肠杆菌的抗原成分复杂，可分为菌体抗原（O）、鞭毛抗原（H）和表面抗原（K），后者有抗机体吞噬和抗补体的能力。根据菌体抗原的不同，可将大肠杆菌分为150多型，其中有16个血清型为致病性大肠杆菌，常引起流行性婴儿腹泄和成人肋膜炎。

一些化学药物的抗菌作用是有目共睹的，然而大量的抗生素应用，无论是应用于临床还是用于其它行业例如禽畜养殖、水产养殖，均可能引发一系列的社会问题例如耐药性问题。因此人们期待从天然产物中寻找有效的抗菌活性物质。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗菌活性的天然中药组合物。本发明人发现苦参提取物与其它植物提取物组合后可以有效地发挥抗菌活性。

为此，本发明第一个方面提供了一种具有抗菌活性的中药组合物，其中包括苦参提取物和绿茶提取物，以及任选的药学可接受的辅料。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：将苦参粉碎后用60%乙醇为提取液浸泡，然后加热回流提取1-3次；将合并的提取液浓缩至无醇味后用稀盐酸，直至溶液pH值为1-2，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取，将合并的水相用氨水调节pH值到9-11，然后用三氯甲烷萃取，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：苦参打粉，过筛，以60%乙醇为提取液浸泡2 h后，加热回流提取1.5 h，提取2次后，合并提取液；提取液浓缩至无醇味后，加0.5%盐酸稀释直至溶液pH值为1-2，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取3次后，水相用氨水调节pH值到9.5-10.5(例如调节pH值到10)，三氯甲烷萃取3次，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用水浸泡，然后加热提取，合并提取液，浓缩、干燥，即得。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用5-10倍(例如8倍)量的水浸泡10-15小时(例如约12小时)，然后在70~90℃(例如约80℃)加热提取1-3次(例如2次)，每次1-3小时(例如约1.5小时)，合并提取液，过滤，浓缩、干燥，即得。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述苦参提取物与绿茶提取物的重量比为1：1-5，优选1：2-3，例如1：2.5。

根据本发明第一方面的中药组合物，其中所述药学可接受的辅料包括选自下列的一种或多种：稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。这些辅料可以使用常规的药用辅料，例如稀释剂可以使用淀粉、微晶纤维素等；粘合剂可以使用羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂以使用羧甲基淀粉钠、交联聚维酮等；润滑剂以使用硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶等。这些辅料在本发明组合物中的比例可以不作特别限制，例如可以占组合物总重量的0~99%。本发明的实质在于发现本发明所述中药提取物的组合具有出人意料的抗菌效果，因此在本发明组合物中对于其中的辅料种类及其用量可以不作特别的限定。

根据本发明第一方面的中药组合物，其呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、丸剂等形式。本发明中药组合物的具体形态不应受特别的限制。

本发明第二方面提供了制备本发明第一方面任一项所述中药组合物的方法，其包括以下步骤：

(1)提供苦参提取物；

(2)提供绿茶提取物；

(3)将所述苦参提取物与所述绿茶提取物混合，其中任选地加入药学可接受的辅料，将所得混合物制备成适当的形式，即得。

根据本发明第二方面的方法，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：将苦参粉碎后用60%乙醇为提取液浸泡，然后加热回流提取1-3次；将合并的提取液浓缩至无醇味后用稀盐酸，直至溶液pH值为1-2，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取，将合并的水相用氨水调节pH值到9-11，然后用三氯甲烷萃取，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

根据本发明第二方面的方法，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：苦参打粉，过筛，以60%乙醇为提取液浸泡2 h后，加热回流提取1.5 h，提取2次后，合并提取液；提取液浓缩至无醇味后，加0.5%盐酸稀释直至溶液pH值为1-2(例如1.5)，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取3次后，水相用氨水调节pH值到9.5-10.5(例如10)，三氯甲烷萃取3次，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

根据本发明第二方面的方法，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用水浸泡，然后加热提取，合并提取液，浓缩、干燥，即得。

根据本发明第二方面的方法，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用5-10倍(例如8倍)量的水浸泡10-15小时(例如约12小时)，然后在70~90℃(例如约80℃)加热提取1-3次(例如2次)，每次1-3小时(例如约1.5小时)，合并提取液，过滤，浓缩、干燥，即得。

根据本发明第二方面的方法，其中所述苦参提取物与绿茶提取物的重量比为1：1-5，优选1：2-3，例如1：2.5。

根据本发明第二方面的方法，其中步骤(3)中所述适当的形式是选自下列的形式：片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、丸剂等。

根据本发明的任一方面，其中所述的组合物可用于抗大肠杆菌感染。根据本发明，本发明的组合物本身可以用于诸多微生物感染。因此，在本发明的第三个方面，提供了本发明第一方面所述中药组合物的用途，其用于抗微生物感染，特别是可用于抗大肠杆菌感染。进一步，在本发明的第四个方面，提供了本发明第一方面所述中药组合物在制备用于抗微生物(例如抗大肠杆菌)的产品中的用途；在一个实施方案中，提供了本发明第一方面所述中药组合物在制备用于抗微生物(例如抗大肠杆菌)感染的产品中的用途。

本发明任一方面或该任一方面的任一实施方案所具有的任一技术特征同样适用其它任一实施方案或其它任一方面的任一实施方案，只要它们不会相互矛盾，当然在相互之间适用时，必要的话可对相应特征作适当修饰。下面对本发明的各个方面和特点作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

本发明人出人意料地发现，本发明中药组合物具有出人意料的抗菌效果。

具体实施方式

通过以下实例对本发明做进一步具体说明，进一步描述本发明的各个方面，但应该理解，以下实例并不用于限制本发明的范围。

一、提取物制备例部分

制备例1：制备苦参提取物

将苦参打粉(20-40目)，过筛，以60%乙醇为提取液浸泡2 h后，加热回流提取1.5 h，提取2次后，合并提取液；提取液浓缩至无醇味后，加0.5%盐酸稀释直至溶液pH值为1.5，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取3次后，水相用氨水调节pH值到10，三氯甲烷萃取3次，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥，得到苦参提取物。如未另外说明，该提取物用于下面的实验。

制备例2：制备绿茶提取物

将绿茶用8倍量的水浸泡12小时，然后在80℃下加热提取2次，每次1.5小时，合并提取液，过滤，浓缩、干燥，即得绿茶提取物，收率(以投料药材计)34.44%。如未另外说明，该提取物用于下面的实验。

二、生物学试验例部分

本试验例部分综合利用琼脂稀释法及肉汤稀释法抑菌活性检测方法测定中药提取物或组合物的抗菌活性。试药为制备例部分获得的提取物(单一的提取物或者是它们的按一定比例的混合物)。在本发明中，提取物组合使用测定其MIC时，为按规定比例混合所得组合物测定得到的MIC值；提取物单独使用测定其MIC时，为该单一提取物测定得到的MIC值。

1、单一提取物样品的抗菌实验方法：琼脂稀释法

选择适宜的实验微生物作为抑菌活性的代表微生物，分别测定苦参提取物对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 6538及大肠杆菌(Escherichia  coli) 8099的抑菌效果，确定最小抑菌浓度(MIC)。

营养肉汤培养基的配制：取营养肉汤培养基按照18g培养基加1L水的比例进行配制。水浴加热直至培养基完全溶解。将完全溶解后的培养基，用移液管取9ml至于试管中。103.3Pa高压蒸汽灭菌20-25min。灭菌后的培养基恒温保存48-72h后，无浑浊产生则可使用。

液体培养基接种：按2005版《药典》附录XIII C 细菌、霉菌及酵母菌计数菌液制备：接种待测菌至营养肉汤培养基中，培养18~24 h。

制作细菌悬液：将浓度相当于0.5麦氏比浊管的菌液(大约108 cfu/ml)，用0.9%无菌氯化钠溶液配制成浓度相当于10 ⁷  cfu/ml的菌液的悬浊液。

含药平板的制作营养琼脂培养基的制备：称取所需量的营养琼脂培养基，按照每32 g营养琼脂培养基加入1 L水的比例加入蒸馏水，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装于试管中，每只试管19 mL。121 ℃高压灭菌30 min，置于48~50 ℃水浴中备用。将预先用二倍稀释法制备的所需浓度药液按标号依次加入营养琼脂培养基中，配制成含药营养琼脂培养基，注入平皿中，凝固后备用。

细菌接种：使用微量接种器吸取0.001~0.002 mL配置好的细菌悬液接种至制备好的含药营养琼脂培养基表面。

2、组合提取物样品的联合抗菌实验方法：微量肉汤稀释法

利用联合药敏实验，使用微量棋盘稀释法，研究苦参提取物与茶叶提取物的联合抑菌实验效果，确立其FIC，明确其相互作用的模式及配伍的合理比例。

营养肉汤培养基的配制：取营养肉汤培养基按照18g培养基加1L水的比例进行配制。水浴加热直至培养基完全溶解。将完全溶解后的培养基，用移液管取9ml至于试管中。103.3Pa高压蒸汽灭菌20-25min。灭菌后的培养基恒温保存48-72h后，无浑浊产生则可使用。

液体培养基接种：按2005版《药典》附录XIII C 细菌、霉菌及酵母菌计数菌液制备：接种待测菌至营养肉汤培养基中，培养18~24 h。

制作细菌悬液：将浓度相当于0.5麦氏比浊管的菌液，用0.9%无菌氯化钠溶液配制成浓度相当于5×10 ⁵ cfu/ml～5×10 ⁶ cfu/ml的菌液的悬浊液。

联合抑菌试验：首先分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌的MIC。以药物最高浓度为MIC的2倍为最高浓度，对倍稀释。两种药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管(孔)中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。接种细菌悬液，35℃孵育18h后观察结果。计算部分抑菌浓度(FIC)指数。

3、试验结果

药学领域技术人员公知，通常而言，最低抑菌浓度(MIC)在1mg/mL以下时，认为物质的抑菌效果是肯定的，而当MIC大于10mg/mL时，物质的抑菌效果不能接受，或者是通常认为没有抑菌效果。

针对金黄色葡萄球菌，苦参提取物与绿茶提取物两者组合使用显示出明显的增效作用，各物质的MIC分别如下：苦参提取物MIC=0.025 mg/mL；绿茶提取物MIC=0.25 mg/mL；苦参提取物+绿茶提取物(1:2.5)=0.01mg/mL；苦参提取物+绿茶提取物(1:2)=0.0125mg/mL；苦参提取物+绿茶提取物(1:3)=0.0125 mg/mL。

针对大肠杆菌，苦参提取物与绿茶提取物两者组合使用显示出明显的抑菌作用，各物质的MIC分别如下：苦参提取物在>10mg/mL浓度下仍未见明显的抑菌效果；绿茶提取物在>20mg/mL浓度下仍未见明显的抑菌效果；苦参提取物+绿茶提取物(1:2.5)=0.0125mg/mL，显示出明显的抑菌效果；苦参提取物+绿茶提取物(1:2)=0.025mg/mL，显示出明显的抑菌效果；苦参提取物+绿茶提取物(1:3)=0.025 mg/mL，显示出明显的抑菌效果。

上述针对大肠杆菌的抑菌效果既非经典的协同作用，亦非经典的增效作用，出人意料地发现苦参提取物与绿茶提取物组合比单独提取物使用具有显著更强的效果。

发明人在补充的试验中，参考制备例1的方法，但是分别使用30%、40%、50%、70%、80%、或90%乙醇作为提取溶剂，得到6批苦参提取物分别照上文抑菌试验方法进行抑菌效果测试，结果各苦参提取物与绿茶提取物以1:2.5比例组合时，在10~40mg/mL范围内仍未见抑菌作用；各苦参提取物与绿茶提取物以1:1比例组合时，在10~25mg/mL范围内仍未见抑菌作用；各苦参提取物与绿茶提取物以1:4比例组合时，在10~20mg/mL范围内仍未见抑菌作用。

发明人在补充的试验中，参考制备例1的方法，但是分别在碱化过程中使pH值调节到8、9、11、12，得到4批苦参提取物分别照上文抑菌试验方法进行抑菌效果测试，结果各苦参提取物与绿茶提取物以1:2.5比例组合时，在10~20mg/mL范围内仍未见抑菌作用；各苦参提取物与绿茶提取物以1:1比例组合时，在10~25mg/mL范围内仍未见抑菌作用；各苦参提取物与绿茶提取物以1:4比例组合时，在10~50mg/mL范围内仍未见抑菌作用。

 

三、中药组合物例部分

组合物例1：

将苦参提取物与绿茶提取物以1:2.5的重量配比混合均匀，研成细粉，用铝塑袋包装制成散剂，每袋内容物重5g。

组合物例2：

将苦参提取物与绿茶提取物以1:2的重量配比混合均匀，研成细粉，加入1倍重量的玉米淀粉，混合均匀，用3%PVP K30水溶液为粘合剂制湿颗粒，干燥，用铝塑袋包装制成颗粒剂，每袋内容物重10g。

组合物例3：

将苦参提取物与绿茶提取物以1:3的重量配比混合均匀，研成细粉，加入1倍重量的玉米淀粉，混合均匀，用水为润湿剂制湿颗粒，干燥加入玉米淀粉0.1倍重量的羧甲基淀粉钠，混合均匀，再加入玉米淀粉0.01倍重量的硬脂酸镁，混合均匀，压制成片剂，每片片重1.5g，制成片剂。

Claims (10)

1. 一种中药组合物，其中包括苦参提取物和绿茶提取物，以及任选的药学可接受的辅料。

2. 根据权利要求1的中药组合物，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：将苦参粉碎后用60%乙醇为提取液浸泡，然后加热回流提取1-3次；将合并的提取液浓缩至无醇味后用稀盐酸，直至溶液pH值为1-2，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取，将合并的水相用氨水调节pH值到9-11，然后用三氯甲烷萃取，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

3.根据权利要求1的中药组合物，其中所述苦参提取物是以如下方式制备得到的：苦参打粉，过筛，以60%乙醇为提取液浸泡2 h后，加热回流提取1.5 h，提取2次后，合并提取液；提取液浓缩至无醇味后，加0.5%盐酸稀释直至溶液pH值为1-2，滤去不溶物后，滤液用三氯甲烷萃取3次后，水相用氨水调节pH值到9.5-10.5，三氯甲烷萃取3次，合并有机层，蒸发除去溶剂，干燥得到苦参提取物。

4.根据权利要求1的中药组合物，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用水浸泡，然后加热提取，合并提取液，浓缩、干燥，即得。

5.根据权利要求1的中药组合物，其中所述绿茶提取物是以如下方式制备得到的：将绿茶用5-10倍量的水浸泡10-15小时，然后在70~90℃加热提取1-3次，每次1-3小时，合并提取液，过滤，浓缩、干燥，即得。

6.根据权利要求1的中药组合物，其中所述苦参提取物与绿茶提取物的重量比为1：1-5。

7.根据权利要求1的中药组合物，其中所述药学可接受的辅料包括选自下列的一种或多种：稀释剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂。

8.根据权利要求1的中药组合物，其呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、丸剂等形式。

9.制备权利要求1-8任一项所述中药组合物的方法，其包括以下步骤：

(1)提供苦参提取物；

(2)提供绿茶提取物；

(3)将所述苦参提取物与所述绿茶提取物混合，其中任选地加入药学可接受的辅料，将所得混合物制备成适当的形式，即得。

10.权利要求1-8任一项所述中药组合物在制备用于抗微生物的产品中的用途。