CN103191115A - 吡咯并喹啉醌在治疗和/或改善糖尿病足中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了吡咯并喹啉醌（PQQ）活性物质在制备用于治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足的药物中的应用，还提供了含有吡咯并喹啉醌的保健品组合物或药物组合物。本发明中的活性物质吡咯并喹啉醌通过改善神经传导速度，降低山梨醇含量，增加微血管开放数目，降低全血粘度、增强血液流动，增加神经血流量，促进血液循环，改善血管微循环，减轻足部坏疽溃疡状况，对糖尿病并发症糖尿病足具有显著的治疗和/或改善作用。因此，吡咯并喹啉醌在预防、治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足的发生和发展中具有很好的应用前景。

Description

吡咯并喹啉醌在治疗和/或改善糖尿病足中的应用

技术领域

本发明涉及糖尿病和/或糖尿病并发症治疗领域。更具体的说，本发明涉及吡咯并喹啉醌在治疗、预防和/或改善糖尿病和/或糖尿病并发症糖尿病足中的应用。

背景技术

糖尿病是一种常见的内分泌***疾病，是由于体内胰岛素的绝对缺乏或相对不足，或是该物质本身质量及其他原因造成不能发挥正常生理作用，而引起的以糖代谢为主的糖、脂肪、蛋白质三大物质代谢混乱的一种综合病症。糖尿病的主要临床表现为多饮、多尿、多食和体重下降（“三多一少”），以及血糖高、尿液中含有葡萄糖。糖尿病是一种终身疾病，很难治愈，并且糖尿病可引发多种并发症，包括心、脑、肝、肺、肾、眼、肢体、皮肤、神经等急性或慢性并发症达80多种。临床上常见的，并给患者身心造成巨大痛苦的慢性并发症有以下几种：糖尿病性心脑血管病、糖尿病性肾病、糖尿病性眼病、糖尿病性神经病变、糖尿病性性功能障碍、糖尿病下肢坏疽病变等。

据美国糖尿病协会（ADA）2010年统计数据显示，3年以上的糖尿病患者，出现并发症的几率在46%以上；5年以上的糖尿病患者，出现并发症的几率在61%以上；10年以上的糖尿病患者，出现并发症的几率高达98%。

糖尿病并发症是糖尿病致死致残的主要原因，目前用于糖尿病并发症治疗的药物多从某一具体的发病机理出发研制，如针对醛糖还原酶的抑制剂（如螺旋己内酰脲类的M-16209、SNK-860、melbosorbinil等，羧酸类的托瑞司他、依帕司他、阿司他丁等）、蛋白非酶糖基化阻滞剂（氨基胍类匹马吉定、焦磷酸硫胺素和吡多胺、LR化合物、ALT462和ALT486、OPB-9195、溴化苯酰甲基噻唑、ALT-711、替尼西坦等）、生长因子阻滞剂、血流改善剂（血管紧张素转化酶抑制剂类卡托普利、依那普利、雷米普利、赖诺普利、泉多普利等，血管生长因子抑制剂和抑制因子促进剂、果糖二磷酸钠FDP、***素E₁、山莨菪碱654-2等）、抗氧剂和必需脂肪酸（普罗布考、N-乙酰半胱氨酸、维生素E及维生素C等）、神经营养剂（神经生长因子、甲钴胺、爱维治、神经节苷脂等）、PKC抑制剂、钙阻滞剂（主要是尼莫地平）、生物制品谷胱甘肽等。这些药物可以缓解糖尿病并发症的某一症状，但是治疗效果欠佳，患者依然承受巨大的痛苦。因此，本领域迫切需要开发出针对糖尿病及其并发症安全、综合有效的药物和保健品。

在糖尿病的各种并发症中，糖尿病足是一种常见、且危害严重的并发症。糖尿病足是指糖尿病患者由于合并神经病变及各种不同程度末梢血管病变而导致下肢感染、溃疡形成和（或）深部组织的破坏。在临床上，由于糖尿病患者由于长期受到高血糖的影响，下肢血管硬化、血管壁增厚、弹性下降，血管容易形成血栓，并集结成斑块，而造成下肢血管闭塞、支端神经损伤，从而造成下肢组织病变。而“足”离心脏最远，闭塞现象最严重，从而引发水肿、发黑、腐烂、坏死，形成脱疽。目前，各大医院对糖尿病足患者一般采取截肢、搭桥。糖尿病足的发生严重影响了糖尿病患者的生存质量和预后，这一现状对糖尿病足预防和治疗药物的开发提出了需求。

吡咯并喹啉醌(Pyrroloquinoline Quinone，PQQ)是1979年在细菌中发现的一种小分子化合物，PQQ呈红棕色粉末状，具有很好的水溶性。它存在于我们的日常饮食中，广泛存在于动植物体内，是多种重要酶类的辅基，能影响呼吸链功能和体内自由基的水平。PQQ的分子式如下：

研究证实，PQQ是一种对人体健康非常有利的物质，母乳中也有PQQ的存在。通过动物实验已经观察到PQQ的多种功能，PQQ缺乏的小鼠生长缓慢，生殖能力差，并且容易产生关节炎症，表明PQQ可能是体内必须的维生素之一。纯化的PQQ可以作为一种抗氧化剂保护肝脏免受CCl₄或酒精导致的肝损伤；纯化的PQQ可以减少鸡胚发育过程中糖皮质激素诱导的白内障形成，这可能是通过恢复谷胱甘肽水平从而降低对皮质激素的反应性来发挥作用；PQQ能够直接氧化受体的NMDA氧化还原位点，保护细胞免受NMDA毒性影响，从而防止脑部缺血缺氧，避免动物模型发生严重的休克；同时，PQQ还可以保护心脏防止心肌缺血及心肌梗死；PQQ还具备抗氧化和神经保护的作用。

然而，在本发明之前，本领域从未对PQQ活性物质用于糖尿病和/或糖尿病并发症的预防、治疗和/或改善作出研究。

发明内容

本发明的主要目的正是提供一种可安全、有效地治疗和/或改善糖尿病并发症——糖尿病足的组合物。本发明的另一主要目的在于提供了PQQ活性物质在治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足中的用途。

在本发明的第一方面，提供了吡咯并喹啉醌活性物质在制备用于治疗和/或改善对象糖尿病足或其症状的药物中的应用，其中所述吡咯并喹啉醌活性物质选自：吡咯并喹啉醌、其药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、异构体、代谢物、前体、或它们的混合物。

在本发明的一些实施方式中，所述糖尿病足的症状选自下组：糖尿病足坏疽、糖尿病周围神经病变、糖尿病微循环障碍及其组合。

在本发明的另一些实施方式中，所述组合物为保健品组合物或药物组合物。

在本发明的另一些实施方式中，所述对象是哺乳动物。在一些优选例中，所述哺乳动物是人。

在本发明的另一些实施方式中，所述吡咯并喹啉醌活性物质以组合物的形式应用，所述组合物包含：(a)治疗和/或改善糖尿病足有效量的所述吡咯并喹啉醌活性物质；和(b)药学上可接受的载体。

在本发明的另一些实施方式中，所述组合物还包含一种或多种治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质。

在一些优选例中，所述治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质选自：扩张血管的药物、血流改善剂（例如，血管紧张素转化酶抑制剂类卡托普利、依那普利、雷米普利、赖诺普利、泉多普利等，血管生长因子抑制剂和抑制因子促进剂、果糖二磷酸钠FDP、***素E₁、山莨菪碱654-2等）、神经生长因子、神经节苷（例如康络素）、甲基B12（例如弥可保）、阿米替林、维生素B12类制剂及维生素B1及B6或辅酶Q10。

在一些应用例中，所述吡咯并喹啉醌活性物质占所述组合物总重量的0.001～99.9wt%。

在一些优选例中，所述吡咯并喹啉醌活性物质占组合物总重量的1-95wt%，优选5-90wt%，更优选10-80wt%。

在本发明的另一些实施方式中，所述组合物为选自以下的形式：片剂、粉末剂、注射剂、颗粒剂、糖浆、胶囊、溶液剂、栓剂或药膏。

在一些优选例中，所述组合物为单位剂型或多剂型，其中吡咯并喹啉醌活性物质的含量为1-4000mg/剂，优选100-2000mg/剂。

在另一些优选例中，以0.001-10mg/kg体重，较佳地0.01-5mg/kg体重，优选0.01-1mg/kg体重给予对象所述组合物。

在本发明的第二方面提供了一种组合物，其含有：

(a)有效量的吡咯并喹啉醌活性物质；

(b)药学上可接受的载体；以及

(c)治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质。

在一些优选例中，所述吡咯并喹啉醌活性物质占组合物总重量的0.001-99.9wt%，优选1-95wt%，较优选为5-90wt%，更优选10-80wt%。

在另一些优选例中，所述治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质选自：扩张血管的药物、血流改善剂（血管紧张素转化酶抑制剂类卡托普利、依那普利、雷米普利、赖诺普利、泉多普利等，血管生长因子抑制剂和抑制因子促进剂、果糖二磷酸钠FDP、***素E1、山莨菪碱654-2等）、神经生长因子、神经节苷（康络素）、甲基B12（弥可保）、阿米替林、维生素B12类制剂及维生素B1及B6或辅酶Q10。

在本发明的另一些实施方式中，所述组合物是保健品组合物或药物组合物。

在本发明的另一些实施方式中，组分(a)和组分(c)的重量比为0.01:100～100:0.01.

在一些优选例中，组分(a)和组分(c)的重量比为1:50～50:1，更优选1:10～10:1。

在本发明的第三方面，提供了一种治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的方法，所述方法包括给予所述对象吡咯并喹啉醌活性物质或包含所述活性物质的组合物。

在本发明的一些实施方式中，所述糖尿病并发症糖尿病足的症状选自下组：糖尿病足部坏疽、糖尿病并发周围神经病变、糖尿病并发微循环障碍。

在本发明的另一些实施方式中，所述组合物为保健品组合物或药物组合物。

在本发明的另一些实施方式中，所述对象是哺乳动物。在一些优选例中，所述哺乳动物是人。

在本发明的另一些实施方式中，所述吡咯并喹啉醌活性物质占所述组合总重量的0.001-99.9wt%。优选1-95wt%，更优选5-90wt%，再优选10-80wt%。

在本发明的另一些实施方式中，所述方法还包括给予治疗和/或预防糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。并且，本领域普通技术人员可对本文中所述的各种特征和方面进行有效的组合，这些组合仍然在本申请所要求保护的范围之内。

附图说明

图1：PQQ治疗4周时各组大鼠坐骨神经传导速度。横坐标显示不同分组，纵坐标为大鼠坐骨神经传导速度（m/s）（**：与对照组相比P<0.01；##：与DM模型组相比P<0.01）。

图2：PQQ治疗4周时各组大鼠坐骨神经中山梨醇含量。横坐标显示不同分组，纵坐标为大鼠坐骨神经中山梨醇含量（nmol/g）（**：与对照组相比P<0.01；##：与DM模型组相比P<0.01）。

图3：PQQ治疗4周时各组大鼠红细胞中山梨醇含量。横坐标显示不同分组，纵坐标为大鼠红细胞中山梨醇含量（nmol/g）（**：与对照组相比P<0.01；##：与DM模型组相比P<0.01）。

图4：PQQ治疗4周时各组大鼠坐骨神经血流量。横坐标显示不同分组，纵坐标为大鼠坐骨神经血流量（ml/s）（**：与对照组相比P<0.01；##：与DM模型组相比P<0.01）。

具体实施方式

本领域通过多年研究发现PQQ活性物质在很多方面都发挥了很好的作用，但是在本发明之前尚未有将PQQ活性物质用于糖尿病和/或糖尿病并发症的预防、治疗和/或改善的报道。本发明人通过长期而深入的研究出乎意料地发现：PQQ活性物质对于糖尿病和/或糖尿病并发症具有良好的治疗和/或改善作用。由于PQQ活性物质同时具有性质稳定、水溶性高、使用方便、安全无毒等性质，其非常适于用作糖尿病和/或糖尿病并发症的治疗和/或改善。在此基础上，本发明人完成了本发明。

PQQ活性物质

如本文所用，术语“吡咯并喹啉醌”或“PQQ”可互换使用，是指具有下式的化合物：

如本文所用，术语“吡咯并喹啉醌活性物质”或“PQQ活性物质”可互换使用，是指PQQ、PQQ药学上可接受的盐、酯、水合物、溶剂化物、异构体或其它衍生物形式、或它们的混合物。术语“PQQ衍生物”是指含有吡咯并喹啉醌作为主要结构或通过吡咯并喹啉醌的代谢获得的产物，只要其还具有吡咯并喹啉醌在本发明中的功效。PQQ代表性的盐包括(但并不限于)：钠盐、钾盐、锌盐等；代表性的酯包括(但并不限于)：PQQ与各种氨基酸、甲酰胺等所形成的酯或与有机酸或无机酸，如盐酸、硫酸、柠檬酸、乙酸、苹果酸或磷酸等所成的酯。

PQQ存在于日常饮食中，并广泛分布于人体各组织器官，并在母乳中存在。并且，其还被确认为是氧化还原反应的一种辅酶，具有维生素活性，可能是一种新型的B族维生素。因此，PQQ活性物质对人体而言是一种天然化合物，无毒副作用，甚至具有保健和/或防治疾病的作用，确保了其用药安全性。

本发明中所用的PQQ活性物质可提取自天然产物、通过化学合成、生物发酵或生物工程(如产吡咯并喹啉醌的突变菌株，如保藏号为CCTCCM208013的U-H103突变菌株)等方式获得，只要其符合上述定义。在本发明的一些实施方式中，可采用PQQ活性物质的晶体(如CN201210452297.6中所提及的PQQ二钠盐晶体)。

本发明的组合物

本发明中提供了一种用于治疗和/或改善糖尿病足的组合物，其中包含：(a)有效量的PQQ活性物质；(b)药学上可接受的载体；和(c)任选的治疗和/或改善糖尿病足或其症状的其它活性物质。

如本文所用，术语“包含”或“含有”表示各种成分可一起应用于本发明组合物中。术语“主要由...组成”和“由...组成”包含在术语“含有”中。

如本文所用，术语“有效量”指按本发明的方式使用时足以获得需要的效果而无过度不良副反应(如毒性)，即有合理的效益/风险比的成分的量。显然，具体的“有效量”因各种因素而异，如所需给予的对象的年龄、性别，疾病的状态、严重程度等。本发明提供的组合物中PQQ活性物质的总量百分比含量为0.001～99.9%、1-95wt%，优选5-90wt%，更优选10-80wt%，包括涵盖于这些范围中的任意子范围或数值。

可用于本发明的治疗和/或改善糖尿病并发症糖尿病足或其症状的其它活性物质包括但不限于：扩张血管的药物、血流改善剂（例如，血管紧张素转化酶抑制剂类卡托普利、依那普利、雷米普利、赖诺普利、泉多普利等，血管生长因子抑制剂和抑制因子促进剂、果糖二磷酸钠FDP、***素E₁、山莨菪碱654-2等）、神经生长因子、神经节苷（例如康络素）、甲基B12（例如弥可保）、阿米替林、维生素B12类制剂及维生素B1及B6或辅酶Q10。

本领域普通技术人员可根据具体需要调整PQQ活性物质与所述其它活性物质的比例，例如所述比例可为0.01:100～100:0.01(重量比)。当这些物质与PQQ活性物质组合或联合施用时，优选具有优于分别单独给予这些物质的效果。

本发明的组合物可配制成各种剂型，包括但不限于：片剂、粉末剂、注射剂、颗粒剂、糖浆、胶囊、溶液剂、栓剂或药膏。本领域普通技术人员可根据具体应用需要对其剂型和施用形式进行选择。

本发明示例性的组合物可按以下原料配比制成：

PQQ活性物质            0.001～99.9wt%

其它活性物质           0～99.9wt%

药学上可接受的载体     余量

在本发明的一些实施方式中，所述组合物为单位剂型或多剂型，其中吡咯并喹啉醌活性物质的含量为1-4000mg/剂，优选100-2000mg/剂。

在另一些优选例中，以0.001-10mg/kg体重，较佳地0.01-5mg/kg体重，优选0.01-1mg/kg体重给予对象所述组合物。

本发明中还提供了一种包含本发明的PQQ活性物质或组合物的制品，其中包含适于产品运输、保存、配制和/或施用的其它物质，所述其它物质包括但不限于：包装物、容器、分装用器具、施用器具、使用说明书等。

由于PQQ活性物质具有良好稳定性，本发明的PQQ活性物质、组合物或制品可在常规条件下(如室温、空气湿度等)，优选避光、干燥条件下，生产、保存、运输、配制等。

本发明的优点

本发明的优点包括但不限于：

(i)首次发现了PQQ活性物质可有效治疗和/或改善糖尿病和/或糖尿病并发症，在很大程度上可以改善糖尿病患者的生存状态和生活质量；

(ii)PQQ不仅能够显著改善糖尿病足的肢端坏疽，还能够显著改善糖尿病引起的神经病变(例如神经传导速度降低，神经中山梨醇水平升高等)，并且还能改善微循环状态(例如，增强血液微循环，改善血液流变学，降低全血粘度，增强血液流动并促进血液循环)，有益健康；

(iii)PQQ活性物质在生物体内存在，是天然的化合物，对人体无毒副作用，因此使用PQQ治疗和/或改善糖尿病足更为安全可靠；

(iv)PQQ活性物质性质稳定，水溶性好，为生产、运输、保存和使用提供了便利。

实施例

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范作用。

I.试验设计

实验动物：SD清洁级健康雄性大鼠220g左右40只，适应性观察一周后，随机分为对照组（10只）、造模组（30只）。

试验方法：用链脲霉素（STZ）制成大鼠糖尿病（DM）模型。造模组大鼠于禁食12h后腹腔一次性注射STZ65mg/Kg（溶于0.1mol/L枸橼酸缓冲液中，pH4.5，配成1%的浓度，新鲜配制），1周后由尾静脉采血测血糖，凡血糖值大于12mmol/ml，且出现多饮、多尿现象即为糖尿病模型鼠。

诱导DM模型成功后，将模型组随机分为3组：DM模型组、PQQ低剂量治疗组、PQQ高剂量治疗组，每组各10只。各组处理为：

组1：对照组（10只）：普通SD大鼠饲养饲料；

组2：DM模型组（10只）：普通SD大鼠饲养饲料；

组3：PQQ低剂量治疗组（10只）：普通SD大鼠饲养饲料+口服0.5mg/kg/d；

组4：PQQ高剂量治疗组（10只）：普通SD大鼠饲养饲料+口服1.0mg/kg/d。

给药治疗4周后，进行相应指标的检测。

实施例1：PQQ对糖尿病足症状的改善作用

造模成功两周后，DM模型组和PQQ治疗组均出现不同程度的肢端坏疽现象。分别观察记录PQQ治疗前和治疗4周后各组大鼠的肢端坏疽状况，根据李仕明的肢端坏疽评分标准(李仕明，糖尿病足(肢端坏疽)检查方法及诊断标准，中国糖尿病杂志,1996,4(2):126)进行评分。

肢端坏疽评分标准：1分：皮肤无开放性病灶，颜色发黑；2分：皮肤有轻度开放病灶，可见水泡、血泡，但病灶未涉及深部组织；3分：病灶已侵入深部肌肉组织，可见感染、溃疡及较多的脓性分泌物。用以上三个等级对糖尿病足大鼠的四肢进行评分，然后计算每只大鼠的总积分。

实验结果与分析

对照组和DM模型大鼠各实验组肢端坏疽的比较如表1所示。

结果显示：对对照组相比，DM模型大鼠各实验组均有显著的肢端坏疽现象（**，P<0.01）；与DM模型组相比，给予PQQ（低剂量和高剂量治疗组）显著改善了肢端坏疽的症状（##，P<0.01），且高剂量时该作用更为明显。

表1实验始末各组大鼠肢端坏疽的比较

注：**表示与对照组相比P<0.01，##表示与DM模型组相比P<0.01。

上述结果表明，PQQ能显著改善糖尿病足的肢端坏疽症状。

实施例2：PQQ对链脲霉素大鼠坐骨神经的影响

1、坐骨神经神经传导速度测定：PQQ治疗4周时，各组分别随机取三只大鼠，经3%戊巴比妥钠麻醉后，置于37℃恒温水浴上固定，用电刺测定尾神经传导速度。将刺激电极放在尾部近端、记录电极插在尾部远端，靠近侧面尾静脉处，参考电极放置在鼠尾远端，距记录电极约2cm处，接地电极放置在刺激电极和记录电极之间。用Pclab-UE生物医学信号采集处理***给出刺激并记录电位信号。用单脉冲方波刺激，波宽0.1ms，刺激强度1.5倍阈值，每2个刺激之间间隔5s以上。计录刺激信号到电位信号的传导时间，并准确测定刺激电极到记录电极之间的距离，代入公式：MNCV（m/s）=刺激电极与记录电极间的距离/传导时间，求出坐骨神经传导速度。再插上另一记录电极，量取两记录电极间距离，用刺激信号通过两电极的时间除以电极间距离求出神经传导速度。以两种方式计算取得的均值作为该动物的神经传导速度。

实验结果与分析

经PQQ治疗4周后，各组大鼠的坐骨神经传导速度比较如图1所示。

与对照组相比，DM模型组大鼠的坐骨神经传导速度明显降低（**，P<0.01）；与DM模型组相比，给予PQQ治疗显著升高了大鼠的坐骨神经传导速度，且高剂量时对坐骨神经传导速度的恢复作用更加明显（##，P<0.01）。

上述结果表明：PQQ能够显著改善由糖尿病所引起的糖尿病足中神经传导速度降低，且PQQ高剂量组的治疗效果更加显著，其接近正常水平。

2、大鼠坐骨神经中山梨醇含量的测定：

分离取得大鼠的坐骨神经，称重后置于匀浆管中，加4%预冷过氯酸1.5ml匀浆，3000r/min离心，10s×3次。取上清液测定，测定方法采用化学法测定，具体参照“张均田，现代药理学方法”。结果以nmol/g组织表示。

实验结果与分析

经PQQ治疗4周后，各组大鼠坐骨神经中山梨醇含量比较如图2所示。

与对照组相比，DM模型组大鼠的坐骨神经中山梨醇含量显著升高（**，P<0.01）；对DM模型组相比，给予PQQ治疗显著降低了大鼠坐骨神经中山梨醇含量（##，P<0.01），PQQ高剂量治疗组大鼠的坐骨神经中山梨醇水平趋近于正常对照组。

上述结果表明：PQQ能够显著降低糖尿病足大鼠坐骨神经中山梨醇水平，且PQQ高剂量组的降低效果更加显著。

实施例3：红细胞中山梨醇含量的测定：

红细胞样品处理：肝素抗凝血，3000r/min，离心15min，分离血浆（用于血糖测定），留取红细胞用10倍体积生理盐水洗涤3次，压积红细胞用生理盐水1:3稀释，取0.5ml红细胞稀释液，加等量双蒸水破膜，然后加2.3ml预冷6%过氯酸沉淀蛋白，4000r/min；离心5min，取上清液测定，测定方法同坐骨神经中山梨醇含量测定方法，结果以n mol/g组织表示。

实验结果与分析

经PQQ治疗4周后，各组大鼠坐骨神经中山梨醇含量比较如图3所示。

与对照组相比，DM模型组大鼠的红细胞中山梨醇含量显著升高（**，P<0.01）；对DM模型组相比，给予PQQ治疗显著降低了红细胞坐骨神经中山梨醇水平（##，P<0.01），且PQQ高剂量组大鼠红细胞中山梨醇含量趋近于正常对照组的水平（P>0.05）。

上述结果表明：PQQ能够显著降低糖尿病足大鼠坐骨神经中山梨醇水平，且PQQ高剂量组的降低效果更加显著。

实施例4：大鼠微循环状态检测：

1）大鼠坐骨神经血流量的测定：大鼠用3%戊巴比妥钠麻醉，分离左腿坐骨神经，将神经嵌入塑料凹槽中，在腘窝上1cm处用LDF-激光多普勒微循环血流检测***测定暴露的坐骨神经干内的血流量。连续记录10次血流量的变化，取其平均值作为该大鼠的神经血流量数值。

2）大鼠肠系膜微循环测量：PQQ治疗4周时，各组大鼠用3%戊巴比妥钠麻醉后，拉出上端空肠，将空肠肠系膜第一个袢的中央对准显微镜的镜头，在显微镜下观察你不同组大鼠的肠系膜循环，计数每平方毫米内可见的血管条数。

实验结果与分析

1）PQQ治疗4周时各组大鼠坐骨神经血流量的测定结果如图4所示。

与对照组相比，链脲霉素诱导DM的三组大鼠的坐骨神经平均血流量均显著降低；而与DM模型组相比，PQQ治疗可以显著增加大鼠的坐骨神经血流量（##，P<0.01），且PQQ高剂量组大鼠神经血流量几乎达到正常大鼠的水平（P>0.05）。

2）PQQ治疗4周时，在显微镜下观察不同组大鼠的肠系膜微循环，计数每平方毫米内可见的血管条数，结果如表2所示。

肠系膜表面可见的血管条数可以反映毛细血管开放的频度。结果显示，链脲霉素诱导糖尿病模型大鼠的血管开放的条数明显减少（**，P<0.01），而给予PQQ治疗的两组大鼠可以明显增加糖尿病大鼠的血管开放条数（#，P<0.05），趋近于正常对照组大鼠。

表2PQQ治疗4周时各组大鼠肠系膜微血管数目

注：**表示与对照相比，P<0.01；#表示与DM模型组相比，P<0.05；##表示与DM模型组相比，P<0.01。

上述结果表明：PQQ治疗可以明显改善链脲霉素诱导糖尿病大鼠的微循环状态，增强糖尿病足大鼠的血液微循环功能。

实施例5：血液流变学检测：

PQQ治疗4周时，将大鼠麻醉，腹主动脉取血，肝素抗凝，参照Yang等的方法（Yang Q,Goto H,Shimada Y,Kita T,Shibahara N,Terasawa K.Effects of Choto-san on hemorheological factors and vascular function instroke-prone spontaneously hypertensive rats.Phytomedicine2002;9:93-98），应用全自动血液流变快测仪FASCO-3010测定血液流变学各项指标。

结果与分析

各组大鼠血液流变学变化如表3所示。

表3各组大鼠PQQ治疗4周时血液流变学变化的比较

注：**表示与对照组相比P<0.01，##表示与DM模型组相比P<0.01。

与对照组相比，DM模型组大鼠的全血粘度显著升高（**，P<0.01），红细胞聚集指数和红细胞刚性指数显著增加（**，P<0.01）；与DM模型组相比，PQQ治疗组大鼠的全血粘度明显得到降低（##，P<0.01），红细胞聚集指数和红细胞刚性指数明显减小（##，P<0.01），趋近与正常水平，且PQQ高剂量组改善效果更加明显。

结果表明，PQQ可以显著改善由糖尿病并发的糖尿病足中血液流变学症状，降低糖尿病足大鼠的全血粘度、增强血液流动，促进血液循环。

Claims (10)

1.吡咯并喹啉醌活性物质在制备用于治疗和/或改善对象糖尿病足或其症状的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述糖尿病足的症状选自下组：糖尿病足坏疽、糖尿病周围神经病变、糖尿病微循环障碍及其组合。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述吡咯并喹啉醌活性物质以组合物的形式应用，所述组合物包含：

(a)有效量的吡咯并喹啉醌活性物质；

(b)药学上可接受的载体。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述组合物还含有：

(c)治疗和/或改善糖尿病足或其症状的其它活性物质。

5.如权利要求4所述的应用，所述其它活性成分为选自下组中的一种或多种：血管紧张素转化酶抑制剂类卡托普利、依那普利、雷米普利、赖诺普利、泉多普利，血管生长因子抑制剂和抑制因子促进剂、果糖二磷酸钠FDP、***素E1、山莨菪碱654-2、神经生长因子、神经节苷、甲基B12、阿米替林、维生素B12类制剂及维生素B1及B6或辅酶Q10。

6.如权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述对象是哺乳动物。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述吡咯并喹啉醌活性物质占所述组合物总重量的0.001-99.9wt%。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述组合物为选自以下的形式：片剂、粉末剂、注射剂、颗粒剂、糖浆、胶囊、溶液剂、栓剂或药膏。

9.一种组合物，其包含：

(a)有效量的吡咯并喹啉醌活性物质；

(b)药学上可接受的载体；以及

(c)任选的治疗和/或改善糖尿病足或其症状的其它活性物质。

10.如权利要求9所述的组合物，其特征在于，所述组合物中吡咯并喹啉醌活性物质与所述其他活性物质的重量比为0.01:100～100:0.01。

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