CN103168686B - 一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法 - Google Patents
一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法 Download PDFInfo
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Abstract
一种小花蜘蛛抱蛋的组织培养快速繁殖方法,包括如下步骤:(1)取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体进行消毒;(2)将消毒后的外植体置于MS基本培养基中诱导得到丛生芽;(3)将所述丛生芽置于MS壮苗培养基中进行壮苗培养得到健壮植株;(4)将所述健壮植株置于MS生根培养基中培养得到完整的带根苗;(5)取完整的带根苗进行炼苗后移植于沙土壤生长一个半月,再移栽至大田。采用本发明所述方法得到的种苗健壮、成活率高,可在短期内提供大量小花蜘蛛抱蛋的优质种苗,有效解决了蜘蛛抱蛋的规模化育苗问题。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物繁殖方法,特别是一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法。
背景技术
小花蜘蛛抱蛋,为百合科植物小花蜘蛛抱蛋(Aspidistra minutiflora Stapf in Journ.Linn.)。多年生常绿草本,根状茎直径约6毫米,具密节和鳞片。分布于我国亚热带地区广西、广东和贵州三省,以广西分布最多。生于路旁或山腰之花岗岩或石灰岩上。辛、苦,寒。肺、肝二经。有清热止咳,续伤接骨的功效。可用于痰热咳嗽,用于跌扑闪挫,金疮,损伤溺骨等证。
小花蜘蛛抱蛋花色褐紫色或淡绿色,具有较高的园林观赏和一定的药用价值,近年来其资源遭到了严重破坏,且对生长环境要求十分苛刻,一般仅正常出现在保存较好的原生林内,对群落植物、光线、湿度、土壤和地被层均有不同程度的特殊要求。随着市场需求量的不断增加,野生小花蜘蛛抱蛋资源濒临枯竭了,生产上难以实现大面积栽培。采用生物技术组织培养技术,可以有效快速地提高小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖速度和质量,实现小花蜘蛛抱蛋优质种苗的工厂化育苗,以满足生产上的需要。
发明内容
本发明的目的是提供一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法,它能够快速繁殖出大量适合移栽的优良小花蜘蛛抱蛋种苗。
本发明通过以下技术方案达到上述目的:一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体,依次用2%洗洁***溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下 培养30天,侧芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(3)丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(4)健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25°C的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中,在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时的温度条件为20-28°C,相对湿度75-80%,遮阳率为70%。
本发明的突出优点在于:
(1)本发明通过生物技术对小花蜘蛛抱蛋进行组织培养快速繁殖,在短时间内培育出大量可供大田栽培的小花蜘蛛抱蛋幼苗,显著提高了小花蜘蛛抱蛋种苗的繁殖系数和种苗质量,实现规模化生产,满足生产上的需要。
(2)在MS繁殖培养基中添加1.0-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA和0.1-0.4mg/L的激动素KT可促进丛生芽的分化;添加浓度为0.5-1.5mg/L的生长激素萘乙酸NAA可促进丛生芽的生长;
在MS壮苗培养基中添加浓度为1.5mg/L的6-BA和0.2-0.6mg/L的吲哚乙酸IAA可促进丛生芽叶片的展开;
在MS生根培养基上组合使用浓度为2.0mg/L的吲哚丁酸IBA和1.0mg/L的生长素IAA,可获得带根的完整植株,这些植株经炼苗后可直接移栽沙床。
(3)采用本发明所述的培养方法,得到的单芽增殖系数达到5-8倍,获得的组培苗生根率在95%以上,每株平均带3-4个根,根长为3-5厘米,移栽沙床成活率在98%以上;快速、便捷、高效地进行小花蜘蛛抱蛋组织培养,实现小花蜘蛛抱蛋组培种苗的规模化生产。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进一步说明。
一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法,包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体,依次用2%洗洁***溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12h/d的条件下培养30天,侧芽分化后获得大量丛生芽,其中MS培养基中添加不同浓度的KT、6-BA和IAA,详见表1,30g/L蔗糖和4.0g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,数据分析发现,KT和IAA对小花蜘蛛抱蛋丛生芽增殖倍率具有显著影响,根据生长率指标确定的最适培养基激素浓度为0.2mg/L的KT2.0mg/L的6-BA和1.5mg/L的NAA。
表1不同激素对小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖效果的影响
芽增殖倍率
注:芽增殖倍数=(30天后芽数-接种时芽数)/接种时芽数
(4)丛生芽壮苗培养:将步骤(3)中得到的丛生芽置于MS壮苗培养基中培养30天得到健壮植株,培养温度23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为12-14小时/天;其 中MS壮苗培养基中分别含0.5mg/L和1.5mg/L的6-BA和不同浓度的IAA,详见表2、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8。观察发现,壮苗培养基中IAA浓度增加,小花蜘蛛抱蛋植株的高度增加长势趋好,培养基中添加1.5mg/L的6-BA和0.6mg/L的IAA壮苗效果最好,而且经过壮苗后得到的植株叶片舒展,适合进行生根培养;
表2不同激素水平对小花蜘蛛抱蛋丛生芽壮苗效果的影响
(5)试管苗生根培养:将步骤(4)中得到的丛生芽置于MS生根培养基中培养20天得到带根的完整植株,培养温度23-26°C,光照强度1400-2000lux,光照时间为12-14小时/天;其中MS生根培养基中分别含1.0mg/L、2.0mg/L的IBA和不同浓度的IAA,详见表3、30g/L蔗糖和3.4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;观察发现,培养基中IAA浓度增加,组培苗的生根率也增加;培养基中添加2.0mg/L的IBA和1.0mg/L的IAA生根效果最好,生根率达95.4%,平均根长达到4.45cm;
表3不同激素水平对小花蜘蛛抱蛋组培苗生根效果的影响
(6)炼苗与移栽:获得带根的完整植株后,在室温为25°C的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光的沙土壤中,在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。移栽后一个星期内,每天早8点到晚6点喷雾3-5次,每次8-10min,此后每天早8点、晚6点各喷雾1次,每次10min;移栽时温度条件为18-28°C,相对湿度75-80%,遮阳率70%。
Claims (1)
1.一种小花蜘蛛抱蛋组织培养快速繁殖方法,其特征在于:该方法包括以下步骤:
(1)外植体的选择与消毒:取小花蜘蛛抱蛋侧芽作为外植体,依次用2%洗洁***溶液浸泡5-15min、线状自来水冲洗10-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升0.1%升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸吸去表面水分,得到外植体,其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水,
(2)侧芽分化获得丛生芽快速繁殖培养:将步骤(1)得到的外植体接种到MS培养基中,在培养温度为23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养30天,侧芽分化后获得丛生芽,其中MS培养基中含0.1-0.4mg/L的KT、1.0-2.0mg/L的6-BA、1.0-2.0mg/L的NAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(3)丛生芽壮苗培养:将步骤(2)中得到的试管苗丛生芽置于MS壮苗培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到健壮植株,其中MS壮苗培养基中含0.5-1.5mg/L的6-BA、0.2-0.6mg/L的IAA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(4)健壮植株生根培养:将步骤(3)中得到的健壮植株置于MS生根培养基中,在培养温度23-26℃,光照强度1400-2000lux,光照时间为10-12小时/天的条件下培养40天得到带根的完整植株,其中MS生根培养基中含0.5-1.5mg/L的IAA、1.0-2.0mg/L的IBA、25-30g/L蔗糖和3.8-4.8g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8,
(5)炼苗与移栽:步骤(4)获得带根的完整植株后,在室温为25℃的室内打开瓶盖,在瓶中加入少量自来水,炼苗2-4天,表面角质形成后将苗取出,洗净根部培养基,立即移栽到通风良好且弱光沙土壤中,在沙土壤中生长一个半月后移栽大田。
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