CN103159710B - 用于抗病毒的十氢萘衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于抗病毒的十氢萘衍生物。具体地说，本发明涉及一种原料药物，其中包括作为活性成分的以下式I化合物：其中R1和R2各自独立地选自氢、钾、或钠。本发明还涉及所述原料药物制备成的药物组合物，制备所述原料药物的方法，以及所述原料药物的制药用途。本发明原料药物具有良好的药学性质。

Description

用于抗病毒的十氢萘衍生物

技术领域

本发明属医药技术领域，涉及一种可用于用于抗病毒的十氢萘衍生物。

背景技术

穿心莲为爵床科植物穿心莲(Andrographispaniculata(Burm.F.)Nees)的干燥地上部分，秋初茎叶茂盛时采割，晒干。穿心莲又名春莲秋柳，一见喜，榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。有清热解毒、消炎、消肿止痛作用。主治细菌性痢疾、***、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。该品种己收载于中华人民共和国2010版药典一部。

已知穿心莲中包含以下化学组成：具有典型十氢萘结构的穿心莲内酯(又名穿心莲乙素，Andrographolide)、脱氧穿心莲内酯(又名穿心莲甲素，deoxyandrographolide)、新穿心莲内酯(又名穿心莲丙素，Neoandrographolide)、脱水穿心莲内酯(又名穿心莲丁素，deoxydidehydroandrographolide)。此外人们还将这些化合物经结构改造制备成它们的衍生物，例如：

穿心莲内酯—(脱羟、脱氢)—>脱水穿心莲内酯—(双琥珀酸酯化)—>脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯—(进一步形成碱金属盐)—>穿琥宁(半K盐)或炎琥宁(K-Na盐)等，它们的化学结构区别如下：

以穿心莲内酯(Andrographolide)及其衍生物例如穿琥宁或炎琥宁为代表药物具有清热解毒、凉血消肿等功能。是治疗上呼吸道感染、急性菌痢、病毒性感冒等常用穿心莲制剂的主要有效成分。20世纪70年代初，国内开始将穿心莲的茎叶或全草提取后，制成了穿心莲片等普通口服制剂。普通制剂对细菌、病毒虽然县有一定的抑制作用，但因其主要有效成分不溶于水而威力不足。

由于穿心莲内酯是从穿心莲中提取的有效成分，单体纯度高，产品质量和药理作用较穿心莲更具有优势。目前SFDA己批准生产穿心莲内酯片剂、胶囊、软胶囊、滴丸等口服剂型。其缺点是穿心莲内酯为二萜类内酯化合物，难溶于水，通常仅能口服给药。针对临床上病毒感染急症的需求，将其结构中引入不同的亲水基团，增强其水溶性制备成注射剂，提高疗效。在我国，自七十年代开始对穿心莲内酯水溶性衍生物进行研究，开发了一系列注射剂，其中最主要产品为穿琥宁和炎琥宁。

穿琥宁是穿心莲内酯经酯化、脱水、成盐而制成的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐；炎琥宁则是由穿琥宁与氢氧化钠或碳酸（氢）钠的反应而得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钠钾盐，或者由脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯与碳酸（氢）钾和碳酸（氢）钠共同反应而得；临床上广泛用于治疗高热、呼吸道感染、儿童秋季腹泻、流行性腮腺炎等病毒性疾病，为中医院急诊科（室）必备纯中药制剂之一，打破了中药只能用来治疗慢性病的传统说法。

目前炎琥宁己广泛应用于临床，与此同时其不良反应时有发生。据国家药品不良反应监测中心近几年通报，有关穿琥宁或炎琥宁注射剂的主要不良反应为过敏性反应和血小板减少。具体分析不良反应产生的主原因有(1)个体差异（过敏性体质）造成；(2)穿心莲内酯稳定性差，容易发生内酯的水解、开环、异构化以及不饱和键的氧化。(3)初始原料（穿心莲内酯）的纯度不高，主要杂质为高分子植物蛋白、穿心莲内酯水解、氧化产物以及色素等，文献报道用活性炭脱色、用分子截流量5000的超滤膜进行超滤后可将小鼠单次静脉给药的LD50从757mg/kg提高到910mg/kg；(4)穿心莲内酯在酯化、脱水的过程中因生产工艺不稳定而造成产品质量不稳定。综上所述，虽然中药注射剂这一特性决定了穿琥宁或炎琥宁等品种或多或少的不良反应是不可避免，但提高产品质量纯度即可大幅度提高产品临床安全性也是一个不争的事实。

因此，本领域技术人员期待有新的方法为临床提供良好性能的具有典型十氢萘结构的穿心莲内酯衍生物例如穿琥宁、炎琥宁等。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的具有典型十氢萘结构的穿心莲内酯衍生物例如穿琥宁、炎琥宁等，其特别是可以作为配制药物制剂的原料药物使用。本发明是通过以下方式实现的。

本发明第一方面提供了一种原料药物，其中包括作为活性成分的以下式I化合物：

其中R1和R2各自独立地选自氢、钾、或钠。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述式I化合物选自下列式Ia至式If的化合物：

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照以下【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约为0.83～0.93处显示一杂质峰(在本发明中，该杂质称为RRT0.88杂质)；

【HPLC法A】：

照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH2.5±0.05)为流动相A，乙腈为流动相B，流速为1.0ml/min，柱温35°C，检测波长为251nm，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(分钟)	流动相A(%)	流动相B(%)
			0	65	35
10	65	35
			40	50	50
52	23	77
			53	65	35
62	65	35

供试品溶液的配制：取供试品(例如本发明的原料药物或者包含该原料药物的药物组合物例如药物制剂)适量，精密称定，加混合溶剂(流动相A:流动相B=60:40)溶解并稀释制成每1ml中含式I化合物0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用稀释剂制成每1ml中含式I化合物4μg的溶液，作为对照溶液；

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20%；

再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图；

读取对照溶液色谱图中主成分峰的峰面积和保留时间，以及供试品溶液色谱图中主成分峰和各杂质峰的峰面积和保留时间；

针对供试品溶液色谱图，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，计算各杂质色谱峰的相对保留时间；

针对供试品溶液色谱图，对于每一杂质色谱峰，计算主成分色谱峰与该杂质色谱峰的峰面积比(该峰面积比越大则表示相对于主成份而言该杂质的相对含量越低)；

任选地，针对供试品溶液色谱图，用面积归一化法计算供试品的色谱纯度；

任选地，针对供试品溶液色谱图，计算单一杂质相对于主成分的含量(可简称为单一杂质含量或单一杂质的含量)以及总杂质相对于主成分的含量(可简称为总杂质含量)，各单一杂质含量之和为总杂质含量，其中用下式计算某一杂质相对于主成分的含量：

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】中，选择适宜的色谱柱长度使主成分在25～31min之间出峰。选择适宜的色谱柱长度以使主成分在25～31min之间出峰是本领域技术人员容易实现的，例如可以选择15～30cm的色谱柱，例如可以选择15cm、20cm、25cm、30cm的色谱柱。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。本发明人已经出人意料地发现，控制本发明原料药物或者由其制备成的药物组合物中RRT0.88杂质的含量在一定限量以下，该原料药物或者由其制备成的药物组合物具有更好的稳定性，特别是其中的杂质例如RRT1.74杂质或者总杂质在高温加速试验中增加缓慢。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约为1.64～1.84处显示一杂质(在本发明中，该杂质称为RRT1.74杂质)峰。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约1.40～1.60为处显示有一个或多个杂质峰。在本发明中，此一个或多个杂质可称为RRT1.40～1.60杂质。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间约为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，扣除溶剂峰和/或在测试药物组合物时其中的辅料峰。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，除了上文所述RRT0.88杂质和RRT1.74杂质以及RRT1.40～1.60杂质外，还任选地含有其它杂质。所述其它杂质相对于主成分的含量可以小于或者大于上文所述的RRT0.88杂质、RRT1.74杂质、RRT1.40～1.60杂质。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，单一杂质含量低于0.01%的任何杂质忽略不计。即，在计算总杂质含量时，仅计算单一杂质含量高于0.01%的那些杂质。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，所述单一杂质含量不超过1.0%。即，最大的单一杂质含量不超过1.0%。

根据本发明第一方面任一实施方案所述的原料药物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，所述总杂质含量不超过2.0%。即，全部杂质含量之和不超过2.0%。

本发明所述术语“原料药物”，其是可用于制剂配制的原料药，例如，中国药典2010年版二部第619页收载的“穿琥宁”品种(其为本发明式Ib化合物)即是一种原料药物，其可用于配制2010年版二部第619页收载的药物制剂“注射用穿琥宁”品种。当然，在本发明中，作为一种原料药物，其通常还应当符合作为原料药物的其它质量指标，例如作为本发明原料药物之一的式Ib化合物，其还应符合中国药典2010年版二部第619页收载的“穿琥宁”品种中关于“性状”、“鉴别”、“检查”、“含量测定”项下规定的指标。而这些指标可通过本领域技术人员在制备原料药物时根据他们的经验而容易实现的，例如在制备本发明原料药物时可通过最终的干燥工艺而容易实现“检查”项下的“干燥失重”的指标的。

本发明第一方面提供了可用于制剂配制的原料药物，因此，本发明可进一步地使用此类原料药物来配制包含它们的药物组合物即药物制剂。

因此，本发明第二方面提供了一种药物组合物，其中包含本发明第一方面任一项所述的原料药物，以及药学可接受的辅料或载体。

具体地说，本发明第二方面提供了一种药物组合物，其由原料药物和药学可接受的辅料或载体制备得到；所述原料药物中包括作为活性成分的以下式I化合物：

其中R1和R2各自独立地选自氢、钾、或钠。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述式I化合物选自下列式Ia至式If的化合物：

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照以下【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约为0.83～0.93处显示一杂质峰(在本发明中，该杂质称为RRT0.88杂质)；

【HPLC法A】：

照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.1%磷酸二氢钾溶液(磷酸调pH2.5±0.05)为流动相A，乙腈为流动相B，流速为1.0ml/min，柱温35°C，检测波长为251nm，按下表进行线性梯度洗脱：

时间(分钟)	流动相A(%)	流动相B(%)
			0	65	35
10	65	35
			40	50	50
52	23	77
			53	65	35
62	65	35

供试品溶液的配制：取供试品(例如本发明的原料药物或者包含该原料药物的药物组合物例如药物制剂)适量，精密称定，加混合溶剂(流动相A:流动相B=60:40)溶解并稀释制成每1ml中含式I化合物0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用稀释剂制成每1ml中含式I化合物4μg的溶液，作为对照溶液；

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高约为满量程的20%；

再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图；

读取对照溶液色谱图中主成分峰的峰面积和保留时间，以及供试品溶液色谱图中主成分峰和各杂质峰的峰面积和保留时间；

针对供试品溶液色谱图，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，计算各杂质色谱峰的相对保留时间；

针对供试品溶液色谱图，对于每一杂质色谱峰，计算主成分色谱峰与该杂质色谱峰的峰面积比(该峰面积比越大则表示相对于主成份而言该杂质的相对含量越低)；

任选地，针对供试品溶液色谱图，用面积归一化法计算供试品的色谱纯度；

任选地，针对供试品溶液色谱图，计算单一杂质相对于主成分的含量(可简称为单一杂质含量或单一杂质的含量)以及总杂质相对于主成分的含量(可简称为总杂质含量)，各单一杂质含量之和为总杂质含量，其中用下式计算某一杂质相对于主成分的含量：

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】中，选择适宜的色谱柱长度使主成分在25～31min之间出峰。选择适宜的色谱柱长度以使主成分在25～31min之间出峰是本领域技术人员容易实现的，例如可以选择15～30cm的色谱柱，例如可以选择15cm、20cm、25cm、30cm的色谱柱。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。例如该峰面积比为200～4000，

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约为1.64～1.84处显示一杂质(在本发明中，该杂质称为RRT1.74杂质)峰。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间约为1.40～1.60处显示有一个或多个杂质峰。在本发明中，此一个或多个杂质可称为RRT1.40～1.60杂质。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间约为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为100～10000，例如该峰面积比为150～7500，例如该峰面积比为200～5000，例如该峰面积比为250～2500。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，扣除溶剂峰和/或在测试药物组合物时其中的辅料峰。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，除了上文所述RRT0.88杂质和RRT1.74杂质以及RRT1.40～1.60杂质外，还任选地含有其它杂质。所述其它杂质相对于主成分的含量可以小于或者大于上文所述的RRT0.88杂质、RRT1.74杂质、RRT1.40～1.60杂质。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，单一杂质含量低于0.01%的任何杂质忽略不计。即，在计算总杂质含量时，仅计算单一杂质含量高于0.01%的那些杂质。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，所述单一杂质含量不超过1.5%。即，最大的单一杂质含量不超过1.5%。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其中所述【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，所述总杂质含量不超过3.0%。即，全部杂质含量之和不超过3.0%。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是口服制剂或者注射制剂。

根据本发明第二方面任一实施方案所述的药物组合物，其是片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂(包括注射液和冷冻干燥粉针剂)、混悬剂、丸剂。

进一步地，本发明第三方面提供了制备本发明第一方面任一项所述原料药物的方法，其包括以下步骤：

(a)提供脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯；

(b)使所述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯溶解于35～40°C的8倍量(即，例如每投料溶质1kg所用溶剂为8L)乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液中，按溶液体积0.5%(w/v)的量加入活性碳，搅拌30min，保温过滤脱碳；

(c)使滤液在2～8°C的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯为式If化合物；任选地

(d)将步骤(c)所得式If化合物在含水乙醇溶液中与碱金属化合物反应，得到以下式I化合物：

其中R1和R2各自独立地选自钾和钠。

本发明人已经发现，比之于其它方法处理，使用上述步骤(b)和步骤(c)结晶处理后，所得脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯在本发明所述【HPLC法A】条件下测定，其该脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯中显示具有更低的RRT0.88杂质。此外，必要时，重复步骤(b)和步骤(c)操作可以继续降低脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯中的RRT0.88杂质。因此，根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其还任选地重复步骤(b)和步骤(c)操作以再次进行结晶。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(b)中所述乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液中包括40～50%(v/v)的乙醇、10～20%(v/v)的丙酮、1～3%(v/v)乙酸和余量的水。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述含水乙醇溶液是40～60%乙醇水溶液。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述碱金属化合物自选：氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾、或其组合。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述碱金属化合物的摩尔量以碱金属离子计为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯摩尔量的1.0～1.1倍(此投料比可得到单碱金属离子盐)或者2.0～2.2倍(此投料比可得到双碱金属离子盐)。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述碱金属化合物自选：氢氧化钾、碳酸钾、或碳酸氢钾，得到呈单钾盐或者二钾盐的式Ib化合物或者式Ie化合物。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述碱金属化合物自选：氢氧化钠、碳酸钠、或碳酸氢钠，得到呈单钠盐或者二钠盐的式Ic化合物或者式Id化合物。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中所述碱金属化合物是氢氧化钠、碳酸钠、或碳酸氢钠与氢氧化钾、碳酸钾、或碳酸氢钾组合，得到呈钾钠盐的式Ia化合物。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中，使式If化合物在含水乙醇溶液中与1.0～1.1摩尔倍量氢氧化钾、碳酸钾、或碳酸氢钾反应，得到呈单钾盐的式Ib化合物；接着使该式Ib化合物在含水乙醇溶液中与1.0～1.1摩尔倍量氢氧化钠、碳酸钠、或碳酸氢钠反应，得到呈钾钠盐的式Ia化合物。

根据本发明第三方面任一实施方案所述的方法，其中步骤(d)中，使式If化合物在含水乙醇溶液中与1.0～1.1摩尔倍量氢氧化钠、碳酸钠、或碳酸氢钠反应，得到呈单钠盐的式Ic化合物；接着使该式Ic化合物在含水乙醇溶液中与1.0～1.1摩尔倍量氢氧化钾、碳酸钾、或碳酸氢钾反应，得到呈钾钠盐的式Ia化合物。

已经发现，通过步骤(b)和步骤(c)结晶处理可有效地除去脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯中的RRT0.88杂质，而该RRT0.88杂质在后续的步骤(d)中未见明显地增加。因此本发明方法中步骤(b)和步骤(c)结晶处理可有效地除去式Ia化合物至式If化合物中的RRT0.88杂质。需要说明的是，本领域技术人员公知，在相同色谱条件下，式If化合物以及它们的碱金属盐例如式Ia化合物至式Ie化合物它们的保留时间相同。

在本发明中提及乙醇时，如未特别说明其浓度，是指98%的乙醇。

本发明第四方面提供了本发明第一方面任一实施方案所述以式I化合物为活性成分的原料药物在制备用于治疗或预防病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的药物中的用途。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。

下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

在本发明中，“%”的含义可根据具体使用环境而定，特别是其具有如2010年版中国药典二部凡例中“计量”项下第二十八条(4)款所述含义。

在本发明中，如未另外说明，确定各种物料例如原料药物或者药物组合物中的式I化合物例如穿琥宁或者炎琥宁的含量时，采用以下【HPLC法B】进行测定。

【HPLC法B】：

取供试品(原料药物或者药物组合物)适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含式I化合物0.1mg的溶液，摇匀，照【HPLC法A】的方法，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另取脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯对照品(在本发明中，术语“对照品”具有本领域技术人员通常已知的含义，特别是可用于测定待测试样中主成分的含量，其通常可通过商业途径获得，例如可通过向中国食品药品检定研究院等政府机构或者其它商业机构购买，亦可通过纯化至例如含量达99.9%以上而获得，在本发明中，如未另外说明，提及的对照品均是所涉及的物质的含量/纯度在99.9%以上的对照品)，同时测定；按外标法以峰面积计算供试品中脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(C₂₈H₃₆O₁₀)的含量，与式I化合物与脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯分子量的比值相乘，即得供试品中式I化合物的含量。上述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯分子量的比值，例如当式I化合物为式Ib化合物即穿琥宁时，该比值为1.072；当式I化合物为式Ia化合物即炎琥宁时，该比值为1.1128；而当式I化合物为式If化合物即脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯时，该比值为1。

在本发明中，所用的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，可以容易地从市场上获得各种品牌的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，其柱长可以根据需要选择，通常而言可以是10～30cm的柱长，色谱柱内径通常可以是4.6mm，流动相流速以及柱温亦可根据需要调整，通常而言流速为0.8～1.5min，柱温选择20～40°C之间的恒定温度；特别地，在本发明中，可适当选择色谱柱柱长、流动相流速、柱温等，以使脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯峰的保留时间控制在25～31min的范围内，例如控制在28～31min的范围内。然而，上述调整脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯至25～31min范围内只是为了便于测定，例如在保证各色谱峰分离符合要求的情况下不至使色谱图的记录时间过长，在合理的时间内完成测试。另外，众所周知，上述例如色谱柱品牌、柱长、流速、柱温等作适当调整后，通常而言各杂质峰相对于主成分峰的相对保留时间不会有大的变化，这是液相色谱法中的基本知识。

一般而言，作为制药原料用的本发明原料药物，其中作为活性成分的式I化合物的含量通常应在98%以上，而其中单个杂质的含量应小于1.0%，总杂质的含量应小于2.0%。

一般而言，作为一种临床使用的药品，由本发明原料药物制成的药物组合物例如其冷冻干燥粉针剂，其中作为活性成分的式I化合物的含量通常应在标示量的90～110%范围内，而其中单个杂质的含量应小于1.5%，总杂质的含量应小于3.0%(均相对于其中的式I化合物的含量而言)。

本发明药物组合物中使用的“药学可接受的载体”可以是药物制剂领域中任何常规的载体。特定载体的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。用于特定给药模式的合适药物组合物的制备方法完全在药物领域技术人员的知识范围内。例如，可以作为药学可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、载体、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体和润滑剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。

本发明的药物组合物可以制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂、注射乳剂(注射用无菌粉针)等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

现已上市销售的穿心莲内酯衍生物的药剂(例如，水针剂、粉针剂等)，其具有抗病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染的效果，可用于治疗或预防病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。本发明提供一种新的原料药物，其中杂质含量低，而且出人意料的是其中的杂质在样品长期保存过程中增加缓慢，显示该原料药物具有良好的稳定性。

附图说明

图1：本发明实施例制备的原料药物经【HPLC法A】测定得到的典型的供试品溶液HPLC图。图中显示本发明原料药物主成分峰(标示为峰0)的保留时间约30min，在图中出现了RRT约为0.88的杂质峰(即本发明的RRT0.88杂质，标示为峰1)；此外，图中还显示在RRT约为1.74处有杂质峰(即本发明的RRT1.74杂质，标示为峰2)；此外，图中还显示在RRT约为1.40～1.60处有两个明显的杂质峰(即本发明的RRT1.40～1.60杂质，标示为峰3、峰4)。图中54min以后基线波动系测试一个样品完毕后流动相切换形成的，不计为色谱峰。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

在下面的试验中，使用本发明【HPLC法A】，其中所用的具体测定条件为：

色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(购自安捷伦公司，250mm*4.6mm*5μm)，流速1ml/min，式I化合物保留时间约30min，溶剂峰以及添加药用辅料的药物制剂显示的辅料峰均在2.1min之前洗脱出，以式I化合物的相对保留时间为1计，RRT0.88杂质的相对保留时间在0.83～0.93范围内，RRT1.74杂质的相对保留时间在1.64～1.84范围内，在相对保留时间1.40～1.60之间显示可能显示有一个或两个杂质峰，因含量不同而异。术语“相对保留时间”是指以式I化合物峰为基准，以各色谱峰的保留时间除以该式I化合物峰的保留时间所得的值，该定义是本领域技术人员公知的。

制备例部分：脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的制备

制备本发明原料药物所用的原料为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯，其可通过现有技术方法制备得到，例如：

制备例1：参照CN102584752A(中国专利申请号201210033663.4，开封制药)说明书第2页第[0014]段即第2页最后4行描述的方法制备得到。

制备例2：参照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0048]至[0049]段的方法制备得到。

制备例3：参照CN1450059A(中国专利申请号02113587.8，成都三康)说明书第3页倒数第16行至倒数第11行描述的方法制备得到的式(III)化合物，为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯。

实施例部分：制备以式I化合物为活性成分的本发明原料药物

以下制备本发明式I化合物的原料药物的实例中，每批次以脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯计投料量为1mol。

实施例1：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：(a)提供脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(制备例1所得)；

(b)使所述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯溶解于37°C的8倍量乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液(含45%乙醇、15%丙酮、2%乙酸和余量的水)中，按溶液体积0.5%(w/v)的量加入活性碳，搅拌30min，保温过滤脱碳(0.22μm微孔滤膜)；

(c)使滤液在8°C的温度下静置11小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物。

实施例2：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：(a)提供脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(制备例1所得)；

(b)使所述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯溶解于35°C的8倍量乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液(含40%乙醇、20%丙酮、3%乙酸和余量的水)中，按溶液体积0.5%(w/v)的量加入活性碳，搅拌30min，保温过滤脱碳(0.22μm微孔滤膜)；

(c)使滤液在8°C的温度下静置10小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物。

实施例3：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：(a)提供脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(制备例1所得)；

(b)使所述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯溶解于40°C的8倍量乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液(含50%乙醇、10%丙酮、1%乙酸和余量的水)中，按溶液体积0.5%(w/v)的量加入活性碳，搅拌30min，保温过滤脱碳(0.22μm微孔滤膜)；

(c)使滤液在2°C的温度下静置12小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物。

实施例4：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：用制备例2所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1的方法，制得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物。

实施例5：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：用制备例3所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1的方法，制得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物(从步骤(a)起计的收率为95%)。

实施例51：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：用实施例5所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1步骤(b)和步骤(c)方法再次重结晶，制得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物(从步骤(a)起计的收率为89%)。

实施例52：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：用实施例51所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1步骤(b)和步骤(c)方法再次重结晶，制得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物(从步骤(a)起计的收率为83%)。

实施例53：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯

制法：用实施例52所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1步骤(b)和步骤(c)方法再次重结晶，制得本发明原料药物，其活性成分为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯即式If化合物(从步骤(a)起计的收率为56%；尽管所得脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯的杂质含量较低，但是其收率大大降价低，因此作为工业生产讲并不可取)。

实施例6：制备式Ib的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐(即穿琥宁)

取实施例1所得式If化合物用5倍量的40%乙醇溶解；(b)加入用40%乙醇为溶剂配制的含有5%氢氧化钾的溶液，搅拌使反应，式If化合物-钾二者的摩尔比为1：1.1，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例61：制备式Ib的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐(即穿琥宁)

取实施例2所得式If化合物，照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0050]段的方法制备得到。

实施例7：制备式Ie的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯二钾盐

取实施例2所得式If化合物用5倍量的60%乙醇溶解；(b)加入用60%乙醇为溶剂配制的含有8%碳酸钾的溶液，搅拌使反应，式If化合物-钾二者的摩尔比为1：2.2，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例8：制备式Ic的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钠盐

取实施例3所得式If化合物用5倍量的40%乙醇溶解；(b)加入用40%乙醇为溶剂配制的含有8%碳酸氢钠的溶液，搅拌使反应，式If化合物-钠二者的摩尔比为1：1.0，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例9：制备式Id的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯二钠盐

取实施例4所得式If化合物用8倍量的50%乙醇溶解；(b)加入用50%乙醇为溶剂配制的含有5%氢氧化钠的溶液，搅拌使反应，式If化合物-钠二者的摩尔比为1：2.0，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例10：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例5所得式If化合物用5倍量的40%乙醇溶解；(b)加入用40%乙醇为溶剂配制的含有5%碳酸氢钠和碳酸氢钾的溶液，搅拌使反应，式If化合物-碳酸氢钠-碳酸氢钾三者的摩尔比为1：1.0：1.0，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得，该试样用于本发明相关的测试。并且其照【HPLC法A】测定所得供试品溶液的色谱图如图1所示。

另外，在补充试验中，改用60%乙醇或者改用式If化合物-碳酸氢钠-碳酸氢钾三者的摩尔比为1：1.1：1.1时，得到的两个试样与上面方法得到的式Ia的钾钠盐在主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比、主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比、最大单杂、总杂质方面完全相同，表明上述步骤的微小调整不会影响产品性质。

实施例101：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例51所得式If化合物，照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0050]至[0051]段的方法制备得到。

实施例102：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例52所得式If化合物，实施例10的方法制备得到。

实施例103：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例53所得式If化合物，实施例10的方法制备得到。

实施例11：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例6所得式Ib的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐，用5倍量的50%乙醇溶解；(b)加入用50%乙醇为溶剂配制的含有10%碳酸氢钠的溶液，搅拌使反应，式Ib化合物-碳酸氢钠二者的摩尔比为1：1.1，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例12：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例8所得式Ic的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钠盐，用5倍量的50%乙醇溶解；(b)加入用50%乙醇为溶剂配制的含有10%碳酸钾的溶液，搅拌使反应，式Ic化合物-钾二者的摩尔比为1：1.0，搅拌使反应完全，补加乙醇至醇浓度在80%以上使结晶，滤出结晶，用乙醇洗涤，真空干燥，即得。

实施例13：制备式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)

取实施例1所得式If化合物，照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0050]至[0051]段的方法制备得到。

对照例1：制备脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐(其为式Ib化合物)

照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0048]至[0050]段的方法，制备得到脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯单钾盐(其为式Ib化合物，即穿琥宁)。

对照例2：制备脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物)

照CN102617527A(中国专利申请号201210051312.6，湖北荷普)说明书[0048]至[0051]段的方法，制备得到脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物，即炎琥宁)。

对照例3：制备脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物)

参照CN102584752A(中国专利申请号201210033663.4，开封制药)说明书第[0014]至[0015]段即实施例一描述的方法，制备得到脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物，即炎琥宁)。

对照例4：制备脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物)

参照CN102382082A(中国专利申请号201110264481.3，周晓东)说明书第[0044]至[0046]段描述的方法，制备得到脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(其为式Ia化合物，即炎琥宁)。

对照例5：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(其为式If化合物)

参照实施例1的方法，不同的是步骤(b)中使用的水溶液无丙酮。

对照例6：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(其为式If化合物)

参照实施例1的方法，不同的是步骤(b)中使用的水溶液含5%丙酮。

对照例7：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(其为式If化合物)

参照实施例1的方法，不同的是步骤(b)中使用的水溶液含30%丙酮。

对照例8：制备式If的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(其为式If化合物)

参照实施例1的方法，不同的是步骤(b)中使用的水溶液无乙酸。

试验例部分

试验例1：测定各试样的化学组成

照本发明【HPLC法A】和/或【HPLC法B】法测定以上各制备例、实施例、对照例所得试样，计算各试样的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比(以“峰面积比主/RRT0.88”表示)，主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比(以“峰面积比主/RRT1.74”表示)，最大单一杂质的含量(%)(以“最大单杂”表示)，以及全部杂质含量之和(%)(以“总杂质”表示)，结果如表1。在本发明中，最大单杂可能是RRT0.88、RRT1.74或RRT1.40-1.60，也可能不是，因此在本发明计算供试品化学组成时，不必对该最大单杂的保留时间作一一说明。

表1：

从上表结果可知，制备例1、2、3所得半酯-粗具有较低的主/RRT0.88值和主/RRT1.74值，表明这些试样RRT0.88和RRT1.74含量比本发明实施例样品的高，最大单一杂质和总杂质亦显示制备例1、2、3试样比本发明实施例样品的高。此外，对照例1-4使用现有技术获得的式I化合物，它们的RRT0.88和RRT1.74含量比本发明实施例样品的高，最大单一杂质和总杂质亦显示比本发明实施例样品的高；出人意料的是，对照例5-7在步骤(b)中不使用丙酮或者使用较低的丙酮或者使用过高的丙酮，或者对照例8中不使用乙酸，这些对照例所得的式I化合物，它们的RRT0.88和RRT1.74含量比本发明实施例样品的高，最大单一杂质和总杂质亦显示比本发明实施例样品的高。可见在本发明第三方面方法的步骤(b)中使用的水溶液中含有适量的丙酮和乙酸对于制备本发明原料药物是有利的。

此外，还计算了供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间约为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比，结果显示本发明各实施例试样的供试品溶液色谱图中，该峰面积比均在200～5000范围内，例如实施例1的该峰面积比为545，实施例5的该峰面积比为225，实施例103的该峰面积比为4250。

试验例2：制备基本不含RRT0.88的式I化合物原料药以及基本纯净的RRT0.88杂 质

试验例21、制备基本纯净的式I化合物(式If化合物)

用实施例53所得的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯投料，照实施例1步骤(b)和步骤(c)方法重结晶4次，得干燥产物为脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(式If化合物)。

试验例22、制备基本纯净的式I化合物(式Ia化合物)

使用试验例21所得式If化合物为原料，照实施例10方法，制备得到式Ia的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即炎琥宁)。

试验例23、制备基本纯净的式I化合物(式Ib化合物)

使用试验例21所得式If化合物为原料，照实施例6方法，制备得到式Ib的脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯钾钠盐(即穿琥宁)。

以上试验例21、22、23所得的式I化合物，它们分别经【HPLC法A】测定，结果显示，对于这三个产物，式I化合物和RRT0.88杂质二者的峰面积比均大于40000，完全可以认为其不含RRT0.88杂质；式I化合物和RRT1.74杂质二者的峰面积比均大于10000，最大单一杂质均小于0.005%，总杂质均小于0.05%，式I化合物的含量在99.94%～99.97%之间。这些产物可认为是基本纯净的本发明式I化合物。

试验例24、制备基本纯净的RRT0.88杂质

以制备例3所得脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯作为原料，使用【HPLC法A】的色谱条件，使用制备型的ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(购自，安捷伦公司，300mm*10mm*7μm)，截取与RRT0.88杂质相应保留时间色谱峰的洗脱液，将所得洗脱液除溶剂，再在乙醇-丙酮(4：1)中进行重结晶，得到基本纯净的RRT0.88杂质，其用【HPLC法A】测定色谱纯度均大于99.3%，并且未检测到式I化合物以及其它杂质。

试验例3：含有不同含量RRT0.88杂质的式I化合物原料药及其性能考察

试验例31：配制含有不同含量RRT0.88杂质的式I化合物原料药

取1重量份的试验例24所得RRT0.88杂质，与若干重量分的试验例21所得式I化合物(式I化合物与RRT0.88杂质二者，以“混合比”表示，例如1g试验例24所得RRT0.88杂质与100g式I化合物混合，则该“混合比”为100)，在少许(可使二者充分混合)的色谱纯甲醇中混合，真空除去溶剂，干燥，得到含有一定量RRT0.88杂质的式I化合物(此方法可使含量相差较大的两种物质混合均匀)。依照此法配制含有不同含量RRT0.88杂质的式I化合物原料药，它们的RRT0.88杂质与式I化合物的混合比见表2。

试验例32：具有不同含量RRT0.88杂质的式I化合物原料药的稳定性考察

将试验例31所得含有不同含量RRT0.88杂质的式I化合物原料药用铝塑复合膜袋密封包装，置于45°C温度下放置3月(在本发明中可称为“45°C3月处置”或者“45°C3月”)。然后照【HPLC法A】测定这些试样中的式I化合物和RRT1.74杂质二者的峰面积比(在未经此均45°C3月处置时它们大于15000)，并计算各试样中除了RRT0.88杂质以外的其它总杂质的增量(即，45°C3月处置后除RRT0.88杂质外的其它总杂质含量减去45°C3月处置前除RRT0.88杂质外的其它总杂质含量所得的差值)。结果见表2。

表2

No.	混合比(式If/RRT0.88)	峰面积比(主/RRT1.74)	总杂质增量/%
				1	50	87	2.931
2	100	135	1.837
				3	150	205	1.011
4	200	320	0.423
				5	225	460	0.284
6	250	1980	0.093
				7	300	2135	0.084
8	350	2370	0.065
				9	500	2835	<0.05
10	750	3190	<0.05
				11	1000	3480	<0.02
12	1500	>5000	<0.02
				13	2500	>5000	<0.01
14	5000	>5000	<0.01
				15	10000	>5000	<0.01

根据以上结果可见，RRT0.88的存在量较大，例如式If/RRT0.88在小于250特别是小于225时，其中的RRT1.74杂质以及总杂质会大大增加，例如RRT1.74杂质约0.22%；而If/RRT0.88在大于250时RRT1.74杂质约0.05%，总杂质增加量亦同样非常低。

发明人在补充试验中，重复以上试验例31和试验例32，不同的是将其中的式I化合物改用试验例22所得式Ia化合物。结果显示与表2中的结果基本相同，数据变化趋势与表2结果完全相同，例如式Ia/RRT0.88为225的混合物峰面积比(主/RRT1.74)为452，总杂质增量为0.291%。Ia/RRT0.88为250的混合物峰面积比(主/RRT1.74)为2010，总杂质增量为0.095%。

发明人在补充试验中，重复以上试验例31和试验例32，不同的是将其中的式I化合物改用试验例23所得式Ib化合物。结果显示与表2中的结果基本相同，数据变化趋势与表2结果完全相同，例如式Ib/RRT0.88为225的混合物峰面积比(主/RRT1.74)为465，总杂质增量为0.288%。Ib/RRT0.88为250的混合物峰面积比(主/RRT1.74)为2075，总杂质增量为0.092%。

试验例33：上文制备的各试样的稳定性考察

照试验例32中的稳定性考察方法在45°C3月处置上文全部制备例(制备例1-3)、全部实施例(实施例1-5、实施例51-53、实施例6、实施例61、实施例7-10、实施例101-103、实施例11-13)、全部对照例(对照例1-8)所得到的各种形式的式I化合物。计算各试样在45°C3月处置前后RRT0.88杂质的增加量(增加量=3月该杂质含量-0月该杂质含量，此增加量越大则表示该杂质增加越大，下同)，计算各试样在45°C3月处置前后RRT1.74杂质的增加量，计算各试样在45°C3月处置前后的总杂质增量(%)(总杂质增量=3月总杂质量-0月总杂质量，此总杂质增量越大则表示该全部杂质增加越快)。

结果表明，(1)就RRT0.88杂质的增加量而言，全部制备例、全部实施例、全部对照例的RRT0.88杂质增加量均在0.15～0.3%范围内，例如制备例1试样RRT0.88杂质增加量为0.27%，例如实施例1试样RRT0.88杂质增加量为0.21%，例如对照例1试样RRT0.88杂质增加量为0.23%。(2)就RRT1.74杂质增加量而言，全部实施例试样的RRT1.74杂质增加量均在0.10～0.25%范围内，例如实施例2试样RRT1.74杂质增加量为0.16%，实施例5试样RRT1.74杂质增加量为0.21%；全部制备例试样的RRT1.74杂质增加量均在0.75～1.5%范围内，例如制备例2试样RRT1.74杂质增加量为1.13%；全部对照例试样的RRT1.74杂质增加量均在0.6～1.2%范围内，例如对照例5试样RRT1.74杂质增加量为0.95%。(3)就总杂质增量而言，全部实施例试样的总杂质增量均在0.25～0.50%范围内，例如实施例6试样总杂质增量为0.36%，实施例7试样总杂质增量为0.29%；全部制备例试样的总杂质增量均在2.5～3.5%范围内，例如制备例3试样总杂质增量为3.05%；全部对照例试样的总杂质增量均在1.6～2.3%范围内，例如对照例6试样总杂质增量为1.87%。

由以上结果可见，在上述45°C3月处置的稳定性试验中，尽管在不同RRT0.88杂质含量的试样中，RRT0.88杂质含量增加均比较一致并且较低。然而出人意料的是，对于RRT0.88杂质含量较低的试样，例如本发明各个实施例的试样，其中RRT1.74杂质增加量以及总杂质增加量均较小；而对于

RRT0.88杂质含量较高的试样，例如上文所述各个制备例和对照例的试样，其中RRT1.74杂质增加量以及总杂质增加量均较大，这些结果显示，RRT0.88杂质含量控制在一定限度内对于本发明原料药物的质量控制是有益的，例如其对于其中的RRT1.74杂质和/或总杂质的控制是有益的。

制剂例部分

制剂例1：制备包含穿琥宁的药物制剂

配方：

实施例6所得穿琥宁	100g，
		甘露醇	100g，
注射用水(冻干后除去)	至2000ml。

制备方法：

(1)称取处方量的主药和甘露醇，置于不锈钢桶中，加入处方量约90%的注射用水，使溶解，再按溶液体积加入0.2%(w/v)的活性炭，搅拌30分钟，过滤脱炭，补加注射用水至接近处方全量。

(2)滤液取样，测定pH值(7.0)，必要时用pH调节剂(1M盐酸或者1M氢氧化钠)调节至规定值，再补加注射用水至处方全量。

(3)药液先用0.45um微孔滤膜过滤，再用0.22um微孔滤膜过滤2次。

(4)以每瓶灌装药液2ml灌装于7ml西林瓶中，半加胶塞。

(5)冷冻干燥至水分低于3%；冻干结束后，进行液压加塞；扎铝盖，得到呈粉针剂形式的药物组合物。

制剂例2：制备包含穿琥宁的药物制剂

参照制剂例1的方法，不同的是使用实施例61所得穿琥宁原料药物为原料。

制剂例3：制备包含炎琥宁的药物制剂

参照制剂例1的方法，不同的是使用实施例10所得炎琥宁原料药物为原料。

制剂例4：制备包含炎琥宁的药物制剂

参照制剂例1的方法，不同的是使用对照例2所得炎琥宁原料药物为原料。

测试以上各制剂例所得粉针剂的含量和杂质，结果显示含量均在标示量的98～102%范围内，总杂质相对于主成分量而言在0.45～0.60%范围内；此外，这些制剂例所得粉针剂的峰面积比(主/RRT0.88)与其所使用的相应原料药相比稍有小量的降低，但差值均在30个单位以内，例如使用实施例6原料所得制剂例1，其峰面积比(主/RRT0.88)为524，比其使用的实施例6原料的峰面积比(主/RRT0.88)值542降低18个单位，又例如使用实施例10原料所得制剂例3，其峰面积比(主/RRT0.88)为224，比其使用的实施例6原料的峰面积比(主/RRT0.88)值248降低24个单位；此外，这些制剂例所得粉针剂的峰面积比(主/RRT1.74)与其所使用的相应原料药相比稍有小量的降低，但差值均在40个单位以内，例如使用实施例10原料所得制剂例3，其峰面积比(主/RRT1.74)为452，比其使用的实施例6原料的峰面积比(主/RRT0.88)值476降低24个单位。

照上文试验例32的稳定性试验方法，考察4个制剂例的粉针剂在经40°C3月处置后样品中活性成分的含量变化以及有关物质的变化。结果显示，在经40°C3月处置后，制剂例1～3的含量仍然在标示量的95%以上，而制剂例4的含量为标示量的88%，已低于一般标准规定的水平。另外，在经40°C3月处置后，制剂例1～3的最大单一杂质在0.2～0.4%范围内，总杂质在0.7～0.9%范围内；而制剂例4的最大单一杂质为1.14%，总杂质为2.24%，已经超出了制药行业一般可接受的水平。

Claims (11)

1.制备原料药物的方法，其包括以下步骤：

(a)提供脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯；

(b)使所述脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯溶解于35～40℃的8倍量乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液中，按溶液体积0.5％(w/v)的量加入活性碳，搅拌30min，保温过滤脱碳；所述乙醇-丙酮-乙酸-水混合溶液中包括40～50％(v/v)的乙醇、10～20％(v/v)的丙酮、1～3％(v/v)乙酸和余量的水；

(c)使滤液在2～8℃的温度下静置10～12小时以进行重结晶，滤出结晶，干燥，得到包括作为活性成分的以下式If化合物的原料药物：

任选地

(d)将步骤(c)所得包括作为活性成分的式If化合物的原料药物在含水乙醇溶液中与碱金属化合物反应，得到包括作为活性成分的以下式I化合物的原料药物：

其中R1和R2各自独立地选自钾和钠；

该原料药物照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比为200～5000；

其中，在所述供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间为0.83～0.93处显示一杂质峰，该杂质称为RRT0.88杂质；

所述【HPLC法A】如下：

照中国药典2010年版二部附录VD高效液相色谱法测定；

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以用磷酸调pH2.5±0.05的0.1％磷酸二氢钾溶液为流动相A，乙腈为流动相B，流速为1.0ml/min，柱温35℃，检测波长为251nm，按下表进行线性梯度洗脱：

供试品溶液的配制：取所述原料药物的供试品适量，精密称定，加以流动相A:流动相B＝60:40配制成的混合溶剂溶解并稀释制成每1ml中含式I化合物0.4mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，用稀释剂制成每1ml中含式I化合物4μg的溶液，作为对照溶液；

取对照溶液10μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰的峰高为满量程的20％；

再精密量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，分别记录供试品溶液色谱图和对照溶液色谱图；

读取对照溶液色谱图中主成分峰的峰面积和保留时间，以及供试品溶液色谱图中主成分峰和各杂质峰的峰面积和保留时间；

针对供试品溶液色谱图，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，计算各杂质色谱峰的相对保留时间；

针对供试品溶液色谱图，对于每一杂质色谱峰，计算主成分色谱峰与该杂质色谱峰的峰面积比；

任选地，针对供试品溶液色谱图，用面积归一化法计算供试品的色谱纯度；

任选地，针对供试品溶液色谱图，计算单一杂质相对于主成分的含量以及总杂质相对于主成分的含量，各单一杂质含量之和为总杂质含量，其中用下式计算某一杂质相对于主成分的含量：

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述式I化合物是选自下列式Ia至式Ie的化合物：

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述原料药物照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，主成分色谱峰与所述RRT0.88杂质色谱峰的峰面积比为250～2500。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述原料药物照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间为1.64～1.84处显示一杂质峰，该杂质称为RRT1.74杂质；所述主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为100～10000。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为150～7500。

6.根据权利要求4所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为200～5000。

7.根据权利要求4所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰与所述RRT1.74杂质色谱峰的峰面积比为250～2500。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述原料药物照【HPLC法A】测定得到的供试品溶液色谱图中，以主成分色谱峰的相对保留时间为1，在相对保留时间为1.40～1.60处显示有一个或多个杂质峰，此一个或多个杂质称为RRT1.40～1.60杂质；所述主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为100～10000。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为150～7500。

10.根据权利要求8所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为200～5000。

11.根据权利要求8所述的方法，其中所述原料药物中所述主成分色谱峰的峰面积与所述相对保留时间为1.40～1.60处显示的全部杂质峰的峰面积之和的比为250～2500。