CN103087031A

CN103087031A - 双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物在抗癌药物中的应用

Info

Publication number: CN103087031A
Application number: CN2011103326606A
Authority: CN
Inventors: 裴月湖; 白皎; 陈刚; 胡小兰
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2011-10-28
Filing date: 2011-10-28
Publication date: 2013-05-08

Abstract

本发明属于医药技术领域，涉及来自特境微生物中具有肿瘤生长抑制活性的两个化合物1及化合物2的在抗肿瘤药物当中的应用。本发明所涉及的化合物1和化合物2的结构式如下图（Ⅰ）所示。该类化合物结构稳定，配以适当药用辅料可制成临床上可以接受的各种剂型。化合物1及化合物2体外人体肿瘤细胞生长抑制活性表明化合物1及化合物2与阳性对照药阿霉素有相近的肿瘤生长抑制活性，体内肿瘤生长抑制活性测试结果表明化合物2具有毒性低、肿瘤生长抑制率高的特点，是一种高效低毒的新型肿瘤生长抑制剂。其优点在于活性强，用药剂量小等。本发明所述的来源于特境微生物次级代谢产物的化合物1及化合物2可用于抗癌药物的制备。

Description

双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物在抗癌药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及两个来自于特境微生物青霉属真菌Penicillium sp.的次此生代谢产物双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物的应用，具体涉及双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物化合物1及化合物2在抗癌方面的应用。

背景技术

WHO 最近发布的数据显示，中国已经成为世界第二大癌症高发国，中国每年新增220 万名癌症患者，约占全球癌症病人总数的20%。其中尤其是肝癌、胃癌和肺癌成为主要的健康杀手。目前全球几大跨国制药企业都在争相将最新的抗肿瘤药物在中国上市，根据美国制药商协会的数据，现有178 家公司的约400 种癌症药物处于临床试验阶段，因此全新结构类型的抗癌药物在经济效益上合社会效益上都会有着巨大的前景。

发明内容

本发明的目的在于提供两种具有肿瘤生长抑制作用的双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物化合物1和化合物2及其在抗肿瘤药物中的应用，体内外肿瘤抑制活性显示化合物1及化合物2为高效低毒的新型肿瘤生长抑制剂。

化合物1和化合物2的结构如下：

试验方法：

1、菌株的大量发酵（请保证此方法不需要其它试验参数即可制备本发明的化合物）

按培养微生物的常规方法，取Penicillium sp.适量，接种到PDA琼脂固体斜面培养基上，在28℃进行活化培养。然后用接种针挑取适量孢子和菌体，接种到含150mL种子培养液(真菌4号培养基)的500mL三角烧瓶中，置于摇床中，在28℃、180r/m条件下进行种子培养48小时，获得的Penicillium sp.种子培养液。取该种子培养液适量，按5%的接种量接种到内装150mL发酵培养液(真菌4号培养基)的500毫升三角烧瓶中，置于28℃、180r/m的摇床上进行生产发酵7天，获得Penicillium sp.的发酵培养液约68升。

真菌4号培养基：甘露醇（mannitol）2%,葡萄糖（glucose）2%，酵母膏（yeast extract）0.5%, 蛋白胨（poly peptone）1%, KH₂P0₄0.05%；MgSO₄7H₂O 0.03%，玉米浆0.1%，pH 6.0，陈自来水配制。

2、发酵液的分离

将发酵培养液过滤，分为上清液和菌丝体。菌丝体用80%（体积分数）的丙酮水溶液超声提取4次,减压浓缩后，用等体积氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分别萃取3次，得菌丝体丙酮提取物的氯仿提取物（67.5g）、乙酸乙酯提取物（3.4g）和正丁醇提取物（22.8g）将菌丝体丙酮提取物的氯仿提取物（67.5g）与乙酸乙酯提取物（3.4g）合并后的粗提物（70.9g），经硅胶柱色谱分离，一次用石油醚-丙酮梯度洗脱，洗脱至石油醚：丙酮（100:50）时得黄色针状结晶（1.2g，化合物1）。石油醚：丙酮（100:50）流份用氯仿-甲醇梯度洗脱，氯仿：甲醇（100:1）得黄色针状结晶（100.3mg，化合物2）。

3、波谱数据

化合物1：黄色针状结晶（丙酮）, [a] _D ²⁵=+85 (c 1.2,CHCl₃), ESI-MS:m/z 638[M]+。¹H-NMR ( 300 MHz ,CDCl₃) δ : 13.78 (2H,s,OH-8,OH-8’)、11.75(2H,s,OH-1, OH-1’)、7.46 (2H,d,J=8.4Hz,H-3,H-3’)、6.63 (2H,d,J=8.4Hz,H-4,H-4’)、3.93 (2H,dd,J=10.8,2.7Hz,H-5,H-5’)、3.73(6H,s,H-13,H-13’)、2.81(2H,d,J=2.7Hz, OH-5,OH-5’)、2.74(2H,dd,J=5.3,18.3Hz,H-7,H-7’)、2.41(2H,t,J=6.3,5.3Hz,H-6, H-6’)、2.31 (2H,dd,J=10.5,10.8Hz,H-7,H-7’)、1.17 (6H,d,J=6.3Hz,H-11,H-11’); ¹³C-NMR ( 300 MHz ,CDCl₃)

:187.16 (C-9,C-9’)、177.55 (C-8,C-8’)、170.28 (C-12,C-12’)、159.38 (C-1,C-1’)、158.27 (C-4a,C-4a’)、140.18 (C-3,C-3’)、118.23 (C-2,C-2’)、107.56 (C-4,C-4’)、106.86 (C-9a,C-9a’)、101.53 (C-8a,C-8a’)、84.73 (C-10a,C-10a’)、76.58 (C-5,C-5’)、53.28 (C-13,C-13’)、36.26 (C-7,C-7’)、29.71 (C-6,C-6’)、17.99 (C-11,C-11’)

化合物2：黄色针状结晶（丙酮）,[a] _D ²⁵=+16 (c 2.25,丙酮) , [a] _D ²⁵=-2.201( c 0.25, Me₂CO)；¹H-NMR ( 300 MHz ,CDCl₃)δ : 13.77 (1H,s,OH-8)、13.71 (1H,s,OH-8’)、11.65 (1H,s,OH-1)、11.39 (1H,s,OH-1’)、7.78 (1H,d,J=8.7Hz,H-3)、7.49 (1H,d, J=8.7Hz,H-3’)、6.63 (1H,d,J=8.7Hz,H-4)、6.61 (1H,d,J=8.7Hz,H-2’)、3.94 (1H,d,J=9.8Hz,H-5)、3.83 (1H,d,J=9.8Hz,H-5’)、3.73 (3H,s,H-13)、3.68 (3H,s,H-13’)、2.78 (2H,m ,OH-5,OH-5’)、2.71 (2H,m ,H-7b,H-7b’)、2.43 (2H,m ,H-6,H-6’)、2.33 (2H,m ,H-7a,H-7a’)、1.20 (3H,d,J=6.3Hz,H-11)、1.18 (3H,d,J=6.3Hz,H-11’)；¹³C-NMR (75MHz ,CDCl₃)δ : 187.12 (C-9,C-9’)、177.64(C-8)、177.26(C-8’)、170.26 (C-12,C-12’)、161.73 (C-1’)、159.33 (C-1)、158.25 (C-4a,C-4a’)、140.65 (C-3)、140.39 (C-3’)、118.01 (C-2)、115.47 (C-4’)、110.41 (C-2’)、107.33 (C-4)、106.94 (C-9a,C-9a’)、101.65 (C-8a)、101.49 (C-8a’)、84.81 (C-10a,C-10a’)、76.51 (C-5,C-5’)、53.22 (C-13,C-13’)、36.26 (C-7,C-7’)、29.28 (C-6)、29.04 (C-6’)、18.00 (C-11)、17.89 (C-11’)。

本发明所述的化合物1或2或其混合物可以和药学上可接受的载体混合制备临床上可接受的药物组合物。

本发明的化合物1及化合物2为高效低毒的新型肿瘤生长抑制剂。

附图说明

图1为实例2中HXL-2对H22荷瘤小鼠瘤重的影响；

图2为实例2中HXL-2对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制率的影响；

图3为实例2中H22荷瘤小鼠起始体重；

图4为实例2中HXL-2对H22荷瘤小鼠最终体重的影响；

最终体重=最后体重-肿瘤重量。

具体实施方式

[0011]下面的实施例可以帮助本领域的技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明

应用实例1：

MTT法：96孔板每孔加入浓度为4～5×10⁴个/ml的细胞悬液100l，置37℃，5% CO₂培养箱内。24h后，加入样品液，10

l/孔，设双复孔，37℃，5% CO₂作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20

l，作用4h后加入溶解液，100

l/孔，置培养箱内，溶解后用MK-2全自动酶标仪测570nm OD值。

结论：化合物1和2于对照药阿霉素相比，对人体肿瘤细胞A549及Colo205均有较好的增殖抑制作用

应用实例2：

试验药物：市售5-氟尿嘧啶注射液；化合物1（HXL-2）

动物和瘤株：SPF级健康雄性昆明种小白鼠91只，体重18～22g，由北京华阜康生物科技有限公司提供，许可证编号：SCXK-（京）-2009-004。

小鼠肝癌细胞株H22，由沈阳药科大学药理教研室贮藏。

小鼠自由饮水进食，12h循环光照，适应环境四天。抽取生长状态良好的昆明种小鼠体内传代（第8天）的H22肿瘤细胞(腹水) ,用无菌生理盐水稀释，调整细胞密度约为3.03×10⁷ ml^-1，混匀后于每只小鼠右前肢腋下注射0.2ml。

小鼠于接瘤24h后，按体重均衡随机分为8组，每组11-12只。分组如下：受试样品HXL-2分为20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg组；市售5-氟尿嘧啶注射液20mg/kg组；模型对照组。所有给药组均每天灌胃给药一次，模型对照组每天灌胃等体积的蒸馏水。

观察记录各组小鼠的体重及生存状态（小鼠的一般活动情况，皮毛，尿液颜色及粪便等）。动物于第一次给药后12天处死，剥离瘤组织，称重，计算肿瘤生长抑制率（TIR），计算公式如下：TIR =100%×（模型组平均瘤重-给药组平均瘤重）/模型组平均瘤重。模型对照组平均瘤重1g以上，且至少20%瘤重在400 mg以上方可进行结果分析。

H22荷瘤小鼠体重变化，结果显示，起始体重各组间无显著差异；最终体重与模型组相比，阳性药物5-氟尿嘧啶组体重显著降低，而给药组体重无明显变化：见图3、图4。

由此可见，化合物1（HXL-2）对小鼠的体重影响很小，与阳性对照药相比显示出很低的毒性，且体内肿瘤抑制率与阳性对照药相近，是一种低毒高效的肿瘤生长抑制剂。

Claims

1.如1和2所示的双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物：

。

2.一种药物组合物，包含权利要求1所述的双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物1或2或其混合物与药学上可接受的载体。

3.权利要求1所述的双四氢苯并吡喃酮二聚体类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。