CN103076294A - 一种测定石斛生物碱含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种测定石斛生物碱含量的方法，石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，使溴甲酚绿-氯仿萃取效率提高，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，操作简便，重现性好，测定结果稳定。
Description
技术领域
本发明涉及分光光度比色法定量测定物质含量领域，具体涉及一种测定石斛生物碱含量的方法。
背景技术
生物碱是一类存在于生物体内具有生理活性的含氮碱性有机物。植物生物碱是植物在长期的生态环境适应过程中为抵御动物、微生物、病毒及其它植物的攻击而形成的一大类次生代谢产物。生物碱在医药、植物的生长、发育、共生和繁殖过程中具有重要意义。我国早在二三千年前就使用含生物碱的中草药进行治疗，在《神农本草经》 就记载有多种含生物碱的中草药，如上品的黄连、石斛。石斛生物碱是石斛药材中最重要的活性成分之一，也是最早分离并进行结构确认的化合物。石斛生物碱的含量多以溴甲酚绿酸性染料比色法测定，这是一种间接萃取比色测定法。由于石斛属植物生物碱含量一般比较低，目前常用的溴甲酚绿酸性染料比色法测定得出率较低，且测定耗时较长。
发明内容
针对目前常用的溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱得出率低，且测定耗时长的问题，本发明的目的是提供一种测定石斛生物碱含量的改良方法，以提高石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，缩短测定时间。
本发明实现发明目的采用如下技术方案：
一种测定石斛生物碱含量的方法，以石斛干品为原料，包括以下步骤：
（1）将石斛干品磨成粉末得物质A；
（2）取物质A0.2g，用10～15重量倍体积浓度为25-28%的浓氨水润湿后于圆底烧瓶中密塞40 min，加氯仿10 mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴中加热回流2 h，冷却后补充氯仿至原重，定性滤纸过滤，得续滤液B；
（3）将步骤（2）获得的续滤液B加氯仿定容至10 mL，加入pH4.5的2M邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液5 mL和体积浓度0.04%溴甲酚绿溶液1 mL，并添加体积比1:60的吐温-80水溶液0.4 mL，在振荡器上振摇3 min，静置10 min，定性滤纸过滤氯仿层，得续滤液C；
（4）将步骤（3）获得的续滤液C加0.01mol/L氢氧化钠-无水乙醇溶液1 mL，摇匀，于620nm波长处测定吸光度；生物碱含量计算公式如下：
本发明与已有技术相比，其有益效果体现在：
本发明将待测石斛干品粉碎后，用碱性氯仿水浴回流提取生物碱，测定液中添加非离子表面活性剂吐温-80，溴甲酚绿酸性染料比色法测定石斛生物碱含量。本发明在石斛生物碱测定体系中，添加适量的吐温-80，主要是利用它对提取溶剂有促进渗透的作用以及对提取的有效成分产生增溶作用。在适宜pH条件下，石斛碱盐的阳离子RH+与溴甲酚绿阴离子In- 结合成的离子缔合物RH+ ·In- 定量被氯仿萃取，加入非离子表面活性剂吐温-80，阴离子染料In- 被增溶，改变了体系中各物质在两相的分配，增加了溴甲酚绿-氯仿萃取率，提高了石斛生物碱测定的灵敏度，并能快速分层，缩短测定时间。该方法操作简便，重现性好，测定结果稳定。
附图说明
图1是本发明测定方法流程示意图。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明做进一步的说明。
实施例1 取0.2g的石斛干品，磨成粉末，用10～15重量倍体积的浓氨水润湿后于圆底烧瓶内密塞40 min，加氯仿10 mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴锅中加热回流2 h，圆底烧瓶回流液冷却至室温后补充氯仿至原重（因加热回流氯仿蒸发），定性滤纸过滤，续滤液加氯仿定容至10 mL。滤液中加入pH4.5的0.2M邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液（即苯二甲酸氢钾和氢氧化钠浓度匀为0.2M）5 mL和体积浓度0.04%溴甲酚氯溶液1 mL，并添加0.4 mL 体积比1:60的吐温-80水溶液（1体积的吐温-80：60体积水），在振荡器上振摇3min，静置10 min，定性滤纸过滤氯仿层，续滤液加质量分数0.01mol/L氢氧化钠-无水乙醇溶液1 mL，摇匀，以氯仿10 mL同样操作做空白对照，于620nm波长处测定吸光度。整个测定方法步骤如图1所示。试验结果如表1所示。
表1吐温对石斛类原球茎生物碱含量测定的影响
由表1可知，生物碱含量测定体系中添加吐温-80的吸光度值明显增高。
实施例2，操作方法同实施例1，不同之处为通过加入不同体积的吐温-80测定吐温添加量对石斛类原球茎生物碱含量测定的影响，结果如表2所示。
表2 吐温添加量对石斛类原球茎生物碱含量测定的影响
由表2可知，不同添加量的1:60吐温-80水溶液对吐温生物碱含量测定体系
有明显影响，其中0.4 mL的添加量对石斛生物碱含量测定体系的增敏效果最强。
以生物碱提取液体积为横坐标，620nm波长处测定的吸光度为纵坐标，得回归方程如下：
y1 = 0.0685x + 0.0063 R2 = 0.9996
y2 = 0.0813x + 0.024 R2 = 0.9905
y1、y2分别表示未加吐温测定体系和添加吐温测定体系的回归方程，上式中x代表生物碱提取液体积，y代表测定的吸光度，R2代表相关系数。y2回归方程斜率较y1增大近1/5。
生物碱含量计算公式如下：
其中生物碱标品为石斛碱，生物碱标品重20μg,生物碱标品吸光度为0.174，样品重0.2g。
Claims (1)
1.一种测定石斛生物碱含量的方法，其特征在于，以石斛干品为原料，包括以下步骤：
（1）将石斛干品磨成粉末得物质A；
（2）取物质A0.2g，用10～15重量倍体积浓度为25-28%的浓氨水润湿后于圆底烧瓶中密塞40 min，加氯仿10 mL，称重，圆底烧瓶接入冷凝管，置80℃水浴中加热回流2 h，冷却后补充氯仿至原重，定性滤纸过滤，得续滤液B；
（3）将步骤（2）获得的续滤液B加氯仿定容至10 mL，加入pH4.5的2M邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钠缓冲液5 mL和体积浓度0.04%溴甲酚绿溶液1 mL，并添加体积比1:60的吐温-80水溶液0.4 mL，在振荡器上振摇3 min，静置10 min，过滤氯仿层，得续滤液C；
（4）将步骤（3）获得的续滤液C加0.01mol/L氢氧化钠-无水乙醇溶液1 mL，摇匀，于620nm波长处测定吸光度；生物碱含量计算公式如下：
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103604877A (zh) * | 2013-10-29 | 2014-02-26 | 安徽农业大学 | 一种石斛生物碱类成分的高效液相色谱指纹图谱构建方法及应用 |
| CN106501437A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-03-15 | 安徽农业大学 | 基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法 |
| CN107764756A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-03-06 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种分散液液微萃取结合光度法测定烟碱的方法 |
| CN108645802A (zh) * | 2018-05-16 | 2018-10-12 | 安徽农业大学 | 一种铁皮石斛总生物碱含量的检测方法 |
| CN109991213A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-07-09 | 贵州大学 | 一种基于组织化学定位与化学成分分析的钩藤生物碱检测方法 |
| CN113332383A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-09-03 | 杭州蚕宝生物技术有限公司 | 一种高效提取铁皮石斛中生物碱的方法 |
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Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 李亚芳等: "石斛中总生物碱和多糖的含量测定", 《中国药事》, vol. 16, no. 7, 31 December 2002 (2002-12-31), pages 426 - 428 * |
| 杨立昌等: "金钗石斛生物碱和水溶性多糖的累积规律", 《时珍国医国药》, vol. 21, no. 11, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 2864 - 2865 * |
| 洪萨丽等: "60Coγ辐照对霍山石斛悬浮培养原球茎生长和生物碱积累的影响", 《核农学报》, vol. 23, no. 4, 31 December 2009 (2009-12-31), pages 592 - 596 * |
| 金蓉鸾等: "11种石斛的总生物碱的测定", 《南京药学院学报》, no. 1, 31 May 1981 (1981-05-31), pages 9 - 13 * |
| 金青等: "NO 对石斛类原球茎内源激素水平及生物碱积累的影响", 《核农学报》, vol. 24, no. 6, 31 December 2010 (2010-12-31), pages 1291 - 1296 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103604877A (zh) * | 2013-10-29 | 2014-02-26 | 安徽农业大学 | 一种石斛生物碱类成分的高效液相色谱指纹图谱构建方法及应用 |
| CN103604877B (zh) * | 2013-10-29 | 2015-09-30 | 安徽农业大学 | 一种石斛生物碱类成分的高效液相色谱指纹图谱构建方法及应用 |
| CN106501437A (zh) * | 2016-12-27 | 2017-03-15 | 安徽农业大学 | 基于UPLC/LTQ‑Orbitrap Velos MS检测石斛生物碱成分的方法 |
| CN107764756A (zh) * | 2017-09-11 | 2018-03-06 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种分散液液微萃取结合光度法测定烟碱的方法 |
| CN108645802A (zh) * | 2018-05-16 | 2018-10-12 | 安徽农业大学 | 一种铁皮石斛总生物碱含量的检测方法 |
| CN109991213A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-07-09 | 贵州大学 | 一种基于组织化学定位与化学成分分析的钩藤生物碱检测方法 |
| CN113332383A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-09-03 | 杭州蚕宝生物技术有限公司 | 一种高效提取铁皮石斛中生物碱的方法 |
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