CN103074395B - 一种用于生产Safracin B的发酵培养基 - Google Patents

一种用于生产Safracin B的发酵培养基 Download PDF

Info

Publication number
CN103074395B
CN103074395B CN201110330304.0A CN201110330304A CN103074395B CN 103074395 B CN103074395 B CN 103074395B CN 201110330304 A CN201110330304 A CN 201110330304A CN 103074395 B CN103074395 B CN 103074395B
Authority
CN
China
Prior art keywords
safracin
production
fermention medium
soybean
nitrogen source
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201110330304.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN103074395A (zh
Inventor
***
王林婧
朱宝泉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
China State Institute of Pharmaceutical Industry
Original Assignee
Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
China State Institute of Pharmaceutical Industry
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry, China State Institute of Pharmaceutical Industry filed Critical Shanghai Institute of Pharmaceutical Industry
Priority to CN201110330304.0A priority Critical patent/CN103074395B/zh
Publication of CN103074395A publication Critical patent/CN103074395A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN103074395B publication Critical patent/CN103074395B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明涉及生产Safracin B的培养基技术领域。本发明所说的用于生产Safracin B的发酵培养基，包括碳源、有机氮源和无机盐，所说的碳源包括葡萄糖、蔗糖、糊精、玉米淀粉、甘露醇和可溶性淀粉，所说的有机氮源包括大豆蛋白胨、鱼粉蛋白胨、黄豆粉、黄豆饼粉、棉籽蛋白粉、豆粕粉、花生粕和小麦胚芽粉。本发明提供的用于生产Safracin B的发酵培养基，采用合适的氮源和碳源，在用量和组分上都进行优化组合使用，培养基粘稠度合适，Safracin B产生菌及其突变株菌体不会生长过旺，发酵产物Safracin B的产率高，效价较文献报道的培养基提高了200％-300％。

Description

一种用于生产Safracin B的发酵培养基
技术领域
本发明具体涉及一种用于培养Safracin B产生菌以生产Safracin B的发酵培养基及其方法技术领域。
背景技术
Safracin B是1983年从Pseudomonas fluorescens A2-2(IFO14128)的发酵培养液中分离得到的一种非核糖体肽，其分子式为C28H36N4O7，经过结构修饰改造可以得到一种抗肿瘤药物ET-743(Yondelis)。Safracin B结构式如下：
Safracin B体外实验对大部分的革兰氏阳性菌和阴性菌均有作用。Safracin B除抗菌活性外还具有良好的抗肿瘤活性，其可以与DNA形成共价键。而ET-743(Y ondelis)是作用于DNA浅沟、鸟嘌呤特异的DNA烷化剂，它能共价结合于鸟嘌呤的N 2位。它识别Ecolityr T-DNA启动子中325个碱基序列，把该序列中的鸟嘌呤换成次黄嘌呤时则不识别。
US4440752公布了利用细菌Pseudomonas fluorescens A2-2发酵生产Safracin B的过程：从斜面培养基上取一环Safracin B的产生菌接种于种子培养基中，待种子长成后接种于含发酵培养基(含葡萄糖2.0％，甘露醇4.0％，干酵母2.0％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0)的2L发酵罐中，24℃-26℃，180rpm搅拌，培养四天，发酵末期PH在7.5-8.0，经分离纯化得到Safracin B 4mg。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的用于生产Safracin B的发酵培养基，该培养基同样以培养Pseudomonas fluorescens A2-2以生产Safracin B，但发酵产物SafracinB的产率高，效价较文献报道的培养基提高了200％-300％。
为达上述目的，本发明采取的技术方案如下：
用于生产Safracin B的发酵培养基，其包括碳源、有机氮源和无机盐，所说的碳源包括葡萄糖、蔗糖、糊精、玉米淀粉、甘露醇和可溶性淀粉，所说的有机氮源为大豆蛋白胨、鱼粉蛋白胨、黄豆粉、黄豆饼粉、棉籽蛋白粉、豆粕粉、花生粕或小麦胚芽粉中的一种或几种的混合物。
上述的发酵培养基中无机盐可以是无机钾盐、无机镁盐等，发酵培养基中还可加入维生素、氨基酸等微量元素和天然油脂等。
上述的发酵培养基，所说的碳源优选葡萄糖、甘露醇或葡萄糖与甘露醇的混合物，最优选葡萄糖与甘露醇的混合物；碳源含量为1.0％-7.0％；其中葡萄糖的含量优选1-2％；甘露醇的含量优选4-6％，最优选5.0％。
上述的发酵培养基，所说的有机氮源优选黄豆粉和花生粕，可以是其中的一种或其混合物，最优选黄豆粉、黄豆粉与花生粕的混合物。发酵培养基中有机氮源的用量为1.0％-6.0％，最优为2％。
本发明采用的菌株为Pseudomonas fluorescens A2-2。
本发明的有益效果：
本发明提供的用于生产Safracin B的发酵培养基，采用合适的氮源和碳源，在用量和组分上都进行优化组合使用，培养基粘稠度合适，Safracin B产生菌及其突变株菌体不会生长过旺，发酵产物Safracin B的产率高，效价较文献报道的培养基提高了200％-300％。
附图说明
图1显示了不同碳源对Safracin B生成的影响
图2显示了不同有机氮对Safracin B生成的影响
图3显示了不同油脂对Safracin B生成的影响
具体实施方式
参照实验例：发酵培养方法及标准效价的制定：
将Pseudomonas fluorescens A2-2种子取出活化后接种斜面培养基(牛肉膏蛋白胨培养基：，121℃灭菌20min)，将接种菌种的斜面置于28℃恒温培养箱中，培养2天，得到生长期的菌体，然后菌体接种于装有30ml种子培养基(葡萄糖1.5％，蛋白胨0.5％，酵母提取物0.2％，磷酸氢二钾0.05％，七水硫酸镁0.05％，碳酸钙0.4％)的250ml摇瓶中，在28℃、220rpm摇床上培养1天，得到成熟的种子，得到的种子以2％的接种量接入装有40ml发酵培养基(葡萄糖2.0％，甘露醇4.0％，干酵母2.0％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0)的250ml摇瓶中，置于25℃摇床继续培养96小时。HPLC采用的色谱仪是Waters510型高效液相色谱仪，色谱柱是C18柱，4.6×250mm，5μm，检测波长200nm，流动相是乙腈∶1％二乙醇胺(60∶40)，流速是1ml/min，进样量是20μl，柱温是30℃。
相对效价计算公式为：相对效价＝(HPLC测定的改良培养基产物峰面积÷上述的标准的产物的峰面积)×100％。
实施例1
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖2.0％，甘露醇4.0％，黄豆粉2.0％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为180％。
实施例2
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖2.0％，甘露醇6.0％，黄豆粉2.0％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为160％.
实施例3
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖1.0％，甘露醇5.0％，黄豆粉2.0％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为220％。
实施例4
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖1.0％，甘露醇5.0％，黄豆粉2.0％，花生粕1％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为160％。
实施例5
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖1.0％，甘露醇5.0％，黄豆粉1.0％，花生粕1％，硫酸铵1.0％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为280％。
实施例6
斜面培养基和种子培养基及操作方法同实验例1，改变发酵培养基。
发酵培养基：葡萄糖1.0％，甘露醇5.0％，黄豆粉1.0％，花生粕1％，硫酸铵1.0％，玉米油0.5％，氯化钾0.4％，磷酸二氢钾0.02％，碳酸钙0.8％，PH 7.0。相对效价为300％。
另外进行了各种比较实施例，结果如下：
不同碳源对发酵产生Safracin B有较明显的影响，实验考察了葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、甘露醇和麦芽糖等五种碳源，含量为5％，发酵终点用HPLC检测产物效价，结果见图1所示，甘露醇的效果最佳。
不同氮源对Safracin B的发酵产生有很明显的影响，实验考察了鱼粉蛋白胨、棉籽蛋白粉、黄豆饼粉、玉米浆干粉、酵母提取物、花生粕七种常用有机氮源，含量为2％，发酵终点用HPLC检测产物效价，结果见图2所示，黄豆粉和花生粕效果最好。
在培养基中加入少量天然油脂可以促进菌体的生长，同时更好的促进底物在发酵液中的转化，实验选取了豆油、玉米油、葵花籽油、稻米油等多种天然油脂分别加入培养基，加入浓度为0.5％，以没有加入天然油脂的培养基作为对照，结果见图3所示，加入玉米油的效果最好。

Claims (7)

1.用于生产Safracin B的发酵培养基，其包括碳源、有机氮源和无机盐，所说的碳源为葡萄糖与甘露醇的混合物，葡萄糖的含量为1-2％，甘露醇的含量为4-6％；所说的有机氮源为黄豆粉、黄豆饼粉、花生粕中的一种或几种的混合物，有机氮源的含量为1.0％-6.0％。
2.如权利要求1所述的用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：还包括维生素、氨基酸和/或天然油脂。
3.如权利要求2所述的用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：所说的天然油脂为玉米油。
4.如权利要求3所述的用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：所说的天然油脂玉米油含量为0.5％。
5.如权利要求1所述的用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：所说的甘露醇的含量为5％，葡萄糖含量为1％。
6.如权利要求1-5所述的任一用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：所说的有机氮源为黄豆粉与花生粕的混合物。
7.如权利要求6所述的用于生产Safracin B的发酵培养基，其特征在于：黄豆粉和花生粕的含量各为1％。
CN201110330304.0A 2011-10-26 2011-10-26 一种用于生产Safracin B的发酵培养基 Expired - Fee Related CN103074395B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110330304.0A CN103074395B (zh) 2011-10-26 2011-10-26 一种用于生产Safracin B的发酵培养基

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201110330304.0A CN103074395B (zh) 2011-10-26 2011-10-26 一种用于生产Safracin B的发酵培养基

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN103074395A CN103074395A (zh) 2013-05-01
CN103074395B true CN103074395B (zh) 2015-01-07

Family

ID=48151089

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201110330304.0A Expired - Fee Related CN103074395B (zh) 2011-10-26 2011-10-26 一种用于生产Safracin B的发酵培养基

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN103074395B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS58113192A (ja) * 1981-12-26 1983-07-05 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd 抗生物質サフラシンａおよび／またはｂ
US4440752A (en) * 1980-07-07 1984-04-03 Yoshotomi Pharmaceutical Industries Ltd. Antibiotics Y-16482 α and/or Y-16482 β, a process for production thereof, and a pharmaceutical composition containing either or both of them
CN1053446C (zh) * 1992-09-18 2000-06-14 三共株式会社 新的thiomarinol衍生物及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4440752A (en) * 1980-07-07 1984-04-03 Yoshotomi Pharmaceutical Industries Ltd. Antibiotics Y-16482 α and/or Y-16482 β, a process for production thereof, and a pharmaceutical composition containing either or both of them
JPS58113192A (ja) * 1981-12-26 1983-07-05 Yoshitomi Pharmaceut Ind Ltd 抗生物質サフラシンａおよび／またはｂ
CN1053446C (zh) * 1992-09-18 2000-06-14 三共株式会社 新的thiomarinol衍生物及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ikeda Y, Idemoto H, Hirayama F, et al..Safracins, new antitumor antibiotics. I. Producing organism, fermentation and isolation.《J Antibiot (Tokyo)》.1983,第36卷(第10期), *
陈天寿主编.第二节 微生物的营养物质.《微生物培养基的制造与应用》.1995, *

Also Published As

Publication number Publication date
CN103074395A (zh) 2013-05-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104342390B (zh) 一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用
Kota et al. Solid state cultivation of Streptomyces clavuligerus for cephamycin C production
CN103146786A (zh) 一种采用梯度pH顺序控制发酵生产腺苷的方法
CN110157623A (zh) 一种镰刀菌菌株及其发酵生产d-泛解酸内酯水解酶的方法
CN1867664A (zh) 使用新的链霉菌菌种生产他克莫司(fk－506)
US9982314B2 (en) Bacterial strain of Actinoplanes sp. and application thereof
JPS58212787A (ja) Ｗｓ６０４９―ａ物質、その製造法およびそれを有効成分として含有する抗癌剤
CN110343638A (zh) 一株新的产达托霉素的链霉菌及其应用
CN103665108A (zh) Streptomyces parvulus OUCMDZ-2554菌株及其产物放线菌素D制备方法和应用
CN104419657A (zh) 高生长及产酸速率的d-乳酸生产菌及应用
CN103074395B (zh) 一种用于生产Safracin B的发酵培养基
WO2006011156A1 (en) Process for producing tacrolimus (fk - 506) using vegetable oil as sole source of carbon
US11332766B2 (en) Strain of Serratia liquefaciens and a method of producing heliotropin with the same strain
CN104250621A (zh) 一种海洋烬灰红链霉菌及其应用于制备橙酮化合物的方法
CN106086090B (zh) 一种两步微生物转化法制备r-扁桃酸的方法
CN101397540B (zh) 一种生产星形孢菌素的培养基及其方法
JPH0427237B2 (zh)
CN108384819A (zh) 一种用于发酵他克莫司的培养基以及发酵方法
CN102584615A (zh) 一种生物碱化合物及其制备方法和应用
CN107365811A (zh) 利用游动放线菌发酵生产雷帕霉素的工艺
El-Waseif et al. Biosynthesis, optimization and structure elucidation of antimicrobial agent produced by Streptomyces clavuligerus isolated from Egyptian soil.
CN116179400B (zh) 一株产重排甾体化合物的黏细菌及其应用
JP2707267B2 (ja) 新規なアゾキシ化合物、その製法及び生産菌
CN101386874B (zh) 一种提高真菌产紫杉醇产率的双液相发酵方法
JPH06234784A (ja) 新規抗生物質ｓｆ２７６８物質及びその製造法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150107

Termination date: 20201026