CN103060412A - 一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括：一、预处理；二、提取；三、除杂；四、盐析脱盐；五、酶水解；六、浓缩。通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白，为透明无色液体，蛋白质浓度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％，可以直接作为化妆品应用，且制备方法简便，利于规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白制备方法，尤其涉及一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
背景技术
弹性蛋白具有网状结构，施加外力时，弹性蛋白变形；当外力消退后，弹性蛋白回复原状，由于此种特性，弹性蛋白被用于护肤化妆品中，但现有的弹性蛋白生产方式存在几种问题：一是有杂色，添加到护肤品中直接影响产品的外观；二是蛋白质浓度和氨基酸含量低，不能直接应用到护肤化妆品中，必须经过再加工，这样直接提高了护肤化妆品的价格。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的是提供一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
为达到上述目的，本发明所采用的技术手段是：
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括：
一、预处理：将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后，于-15℃ 冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片，薄片称重，用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上沥去水分，晾干备用；
二、提取：将晾干的薄片置于容器中，用2～3倍0.5%的乙酸溶液在0～4℃下搅拌提取48-72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；
三、除杂：在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；
四、 盐析脱盐：在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，10min后在4℃下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h，再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1.2％的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；
五、酶水解：将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55℃ ，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2～4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%～2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2～3，温度为40℃；
六、浓缩：将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为60～70℃，真空度为-0.05～-0.04MPa。 进一步的，所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％。
本发明的有益效果在于：通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白，为透明无色液体，蛋白质浓度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％，可以直接作为化妆品应用，且制备方法简便，利于规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以助于理解本发明的内容。
实施例1
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括：
一、预处理：将新鲜骨头15kg去除脂肪、筋膜后，于-15℃ 冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片，薄片称重，用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上沥去水分，晾干备用；
二、提取：将晾干的薄片置于容器中，用2倍0.5%的乙酸溶液在0℃下搅拌提取48h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；
三、除杂：在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；
四、 盐析脱盐：在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，10min后在4℃下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h，再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1.2％的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；
五、酶水解：将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55℃ ，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2，温度为40℃；
六、浓缩：将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为60℃，真空度为-0.05MPa。
所得到的胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度为6.98％，氨基酸含量2.37％。
实施例2
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其步骤包括：
一、预处理：将新鲜骨头20kg去除脂肪、筋膜后，于-15℃ 冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片，薄片称重，用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上沥去水分，晾干备用；
二、提取：将晾干的薄片置于容器中，用3倍0.5%的乙酸溶液在4℃下搅拌提取72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；
三、除杂：在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；
四、 盐析脱盐：在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，10min后在4℃下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h，再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1.2％的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；
五、酶水解：将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55℃ ，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为3，温度为40℃；
六、浓缩：将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为70℃，真空度为-0.04MPa。 所得到的胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度为7.05％，氨基酸含量为2.40％。
本发明的实施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其特征在于，步骤包括：
一、预处理：将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后，于-15℃ 冷冻硬化后取出，用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜，然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片，薄片称重，用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体，薄片用蒸馏水漂洗3次，置于不锈钢丝网上沥去水分，晾干备用；
二、提取：将晾干的薄片置于容器中，用2～3倍0.5%的乙酸溶液在0～4℃下搅拌提取48-72h，然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min，收集上清液，即为胶原蛋白溶胀提取液；
三、除杂：在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水，混合均匀后静置5h，接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5，静置片刻后过滤，弃沉淀物，获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液；
四、 盐析脱盐：在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠，缓慢搅拌，10min后在4℃下静置24h后离心，收集盐析沉淀物，用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h，再次离心，收集沉淀物，装入透析袋中，用质量浓度为1.2％的乙酸溶液透析18h后，再用蒸馏水透析48h，最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液，测定其中蛋白质含量后备用；
五、酶水解：将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水，在搅拌下升温至55℃ ，然后用乙酸调节溶液pH值为5，加入木瓜蛋白酶进行酶水解2～4h，木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%～2%，获得水解胶原蛋白液，也可以用弹性蛋白酶进行水解，弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2～3，温度为40℃；
六、浓缩：将水解液进行真空减压浓缩，制备成胶原蛋白液，真空减压浓缩的温度为60～70℃，真空度为-0.05～-0.04MPa。
2.根据权力要求1所述的保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法，其特征在于: 所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体，蛋白质浓度≥6.95％，氨基酸含量≥2.32％。
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| CN101200497A (zh) * | 2007-12-21 | 2008-06-18 | 张丽丽 | 一种霞水母来源的类ⅱ型胶原及其制备工艺 |
| CN101363040A (zh) * | 2008-09-19 | 2009-02-11 | 无锡贝迪生物工程有限公司 | 胶原蛋白的制备方法 |
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| 汤克勇: "《胶原物理与化学》", 31 January 2012, 科学出版社 * |
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