CN103060412A - 一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其步骤包括:一、预处理;二、提取;三、除杂;四、盐析脱盐;五、酶水解;六、浓缩。通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白,为透明无色液体,蛋白质浓度≥6.95%,氨基酸含量≥2.32%,可以直接作为化妆品应用,且制备方法简便,利于规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种胶原蛋白制备方法,尤其涉及一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
背景技术
弹性蛋白具有网状结构,施加外力时,弹性蛋白变形;当外力消退后,弹性蛋白回复原状,由于此种特性,弹性蛋白被用于护肤化妆品中,但现有的弹性蛋白生产方式存在几种问题:一是有杂色,添加到护肤品中直接影响产品的外观;二是蛋白质浓度和氨基酸含量低,不能直接应用到护肤化妆品中,必须经过再加工,这样直接提高了护肤化妆品的价格。
发明内容
为了解决现有技术中的问题,本发明的目的是提供一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法。
为达到上述目的,本发明所采用的技术手段是:
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其步骤包括:
一、预处理:将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后,于-15℃ 冷冻硬化后取出,用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜,然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片,薄片称重,用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体,薄片用蒸馏水漂洗3次,置于不锈钢丝网上沥去水分,晾干备用;
二、提取:将晾干的薄片置于容器中,用2~3倍0.5%的乙酸溶液在0~4℃下搅拌提取48-72h,然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min,收集上清液,即为胶原蛋白溶胀提取液;
三、除杂:在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水,混合均匀后静置5h,接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5,静置片刻后过滤,弃沉淀物,获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液;
四、 盐析脱盐:在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠,缓慢搅拌,10min后在4℃下静置24h后离心,收集盐析沉淀物,用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h,再次离心,收集沉淀物,装入透析袋中,用质量浓度为1.2%的乙酸溶液透析18h后,再用蒸馏水透析48h,最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液,测定其中蛋白质含量后备用;
五、酶水解:将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水,在搅拌下升温至55℃ ,然后用乙酸调节溶液pH值为5,加入木瓜蛋白酶进行酶水解2~4h,木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%~2%,获得水解胶原蛋白液,也可以用弹性蛋白酶进行水解,弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2~3,温度为40℃;
六、浓缩:将水解液进行真空减压浓缩,制备成胶原蛋白液,真空减压浓缩的温度为60~70℃,真空度为-0.05~-0.04MPa。 进一步的,所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体,蛋白质浓度≥6.95%,氨基酸含量≥2.32%。
本发明的有益效果在于:通过本方法制备的高纯度、能用于保持肌肤弹性的胶原蛋白,为透明无色液体,蛋白质浓度≥6.95%,氨基酸含量≥2.32%,可以直接作为化妆品应用,且制备方法简便,利于规模生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明,以助于理解本发明的内容。
实施例1
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其步骤包括:
一、预处理:将新鲜骨头15kg去除脂肪、筋膜后,于-15℃ 冷冻硬化后取出,用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜,然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片,薄片称重,用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体,薄片用蒸馏水漂洗3次,置于不锈钢丝网上沥去水分,晾干备用;
二、提取:将晾干的薄片置于容器中,用2倍0.5%的乙酸溶液在0℃下搅拌提取48h,然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min,收集上清液,即为胶原蛋白溶胀提取液;
三、除杂:在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水,混合均匀后静置5h,接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5,静置片刻后过滤,弃沉淀物,获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液;
四、 盐析脱盐:在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠,缓慢搅拌,10min后在4℃下静置24h后离心,收集盐析沉淀物,用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h,再次离心,收集沉淀物,装入透析袋中,用质量浓度为1.2%的乙酸溶液透析18h后,再用蒸馏水透析48h,最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液,测定其中蛋白质含量后备用;
五、酶水解:将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水,在搅拌下升温至55℃ ,然后用乙酸调节溶液pH值为5,加入木瓜蛋白酶进行酶水解2h,木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%,获得水解胶原蛋白液,也可以用弹性蛋白酶进行水解,弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2,温度为40℃;
六、浓缩:将水解液进行真空减压浓缩,制备成胶原蛋白液,真空减压浓缩的温度为60℃,真空度为-0.05MPa。
所得到的胶原蛋白液为透明无色液体,蛋白质浓度为6.98%,氨基酸含量2.37%。
实施例2
一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其步骤包括:
一、预处理:将新鲜骨头20kg去除脂肪、筋膜后,于-15℃ 冷冻硬化后取出,用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜,然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片,薄片称重,用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体,薄片用蒸馏水漂洗3次,置于不锈钢丝网上沥去水分,晾干备用;
二、提取:将晾干的薄片置于容器中,用3倍0.5%的乙酸溶液在4℃下搅拌提取72h,然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min,收集上清液,即为胶原蛋白溶胀提取液;
三、除杂:在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水,混合均匀后静置5h,接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5,静置片刻后过滤,弃沉淀物,获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液;
四、 盐析脱盐:在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠,缓慢搅拌,10min后在4℃下静置24h后离心,收集盐析沉淀物,用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h,再次离心,收集沉淀物,装入透析袋中,用质量浓度为1.2%的乙酸溶液透析18h后,再用蒸馏水透析48h,最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液,测定其中蛋白质含量后备用;
五、酶水解:将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水,在搅拌下升温至55℃ ,然后用乙酸调节溶液pH值为5,加入木瓜蛋白酶进行酶水解4h,木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的2%,获得水解胶原蛋白液,也可以用弹性蛋白酶进行水解,弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为3,温度为40℃;
六、浓缩:将水解液进行真空减压浓缩,制备成胶原蛋白液,真空减压浓缩的温度为70℃,真空度为-0.04MPa。 所得到的胶原蛋白液为透明无色液体,蛋白质浓度为7.05%,氨基酸含量为2.40%。
本发明的实施例所表述的,并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,可轻易想到变化或替换,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其特征在于,步骤包括:
一、预处理:将新鲜骨头去除脂肪、筋膜后,于-15℃ 冷冻硬化后取出,用手术刀刮去骨头表面的残余筋膜,然后沿着纤维方向切成0.5mm ×0.5mm的薄片,薄片称重,用0.5g/L碳酸钠溶液浸泡1h后弃液体,薄片用蒸馏水漂洗3次,置于不锈钢丝网上沥去水分,晾干备用;
二、提取:将晾干的薄片置于容器中,用2~3倍0.5%的乙酸溶液在0~4℃下搅拌提取48-72h,然后用冷冻离心机以3000r/min的速度离心8min,收集上清液,即为胶原蛋白溶胀提取液;
三、除杂:在胶原蛋白溶胀提取液中加入其体积0.5%的双氧水,混合均匀后静置5h,接下来用80g/L柠檬酸三钠溶液调节pH值等于5,静置片刻后过滤,弃沉淀物,获得除去部分杂蛋白的溶胀提取液;
四、 盐析脱盐:在搅拌下向该溶胀提取液中加入适量氯化钠,缓慢搅拌,10min后在4℃下静置24h后离心,收集盐析沉淀物,用pH值为7.0的Tris缓冲液在4℃下浸泡24h,再次离心,收集沉淀物,装入透析袋中,用质量浓度为1.2%的乙酸溶液透析18h后,再用蒸馏水透析48h,最后得到的是纯度较高的胶原蛋白水溶胀液,测定其中蛋白质含量后备用;
五、酶水解:将获得的高纯度胶原蛋白水溶胀液中加入4倍体积的软水,在搅拌下升温至55℃ ,然后用乙酸调节溶液pH值为5,加入木瓜蛋白酶进行酶水解2~4h,木瓜蛋白酶用量为胶原蛋白水溶胀液蛋白质质量的1%~2%,获得水解胶原蛋白液,也可以用弹性蛋白酶进行水解,弹性蛋白酶用量为0.05 % , pH值为2~3,温度为40℃;
六、浓缩:将水解液进行真空减压浓缩,制备成胶原蛋白液,真空减压浓缩的温度为60~70℃,真空度为-0.05~-0.04MPa。
2.根据权力要求1所述的保持肌肤弹性的胶原蛋白制备方法,其特征在于: 所述步骤六中所得胶原蛋白液为透明无色液体,蛋白质浓度≥6.95%,氨基酸含量≥2.32%。
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