CN103058927B

CN103058927B - 一种喹啉衍生物及其应用

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Publication number: CN103058927B
Application number: CN201110323765.5A
Authority: CN
Inventors: 华国媛; 李玉梅; 陈义龙; 曾诚齐; 卓心媛
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2011-10-21
Filing date: 2011-10-21
Publication date: 2015-04-22
Anticipated expiration: 2031-10-21
Also published as: HK1184455A1; CN103058927A

Abstract

一种式(I)喹啉衍生物：其中，R₁为经取代或未经取代的苯基；R₂为卤素；以及R₃为经取代或未经取代的苯基，或苯环上含有一个N杂原子的经取代或未经取代的苯基。该喹啉衍生物可有效抑制癌细胞增生，可用于治疗癌症，尤其可用于治疗与Janus激酶-转录信息转换子及活化子(JAK-STAT)途径及/或有丝***原活化蛋白激酶(MAPK)途径有关的癌症。

Description

一种喹啉衍生物及其应用

技术领域

本发明关于一种喹啉衍生物及其应用，尤其关于一种可使用于癌症治疗的喹啉衍生物及其应用。

背景技术

癌症可于任何年龄在各种器官及组织中发生，且每年造成全世界约六百万人死亡。所有癌症类型均始于细胞异常且不受控制地生长，其病程包括异常或赘生性细胞形成肿瘤且数目增多，该肿瘤接着侵入邻近组织，并经由血液或淋巴***散布至区域性***，最终经由转移过程散布至体内远处。癌症的病因迄今仍不明确，但已知诸如遗传、染色体断裂、病毒、环境及免疫疾病等因素，均与肿瘤细胞生长及转移有关。

关于癌症治疗，业已开发出各种治疗手段，包括外科手术、放射线治疗与化学药物治疗等。使用外科手术以移除癌变组织为一种激烈的手段，除可能造成严重后果外，亦可能无法根除癌细胞。举例言之，子***及膀胱癌的手术治疗可能导致***症或性功能障碍；胰腺癌的手术程序需部分或全部移除胰腺，对患者代谢功能造成严重破坏；***癌的手术具有造成尿失禁的风险；肺癌手术治疗则因为需切开患者的肋骨以移除癌性肺组织，故通常会有显著的术后疼痛等问题。

放射线治疗利用具有穿透力的高能波光束或粒子光束作用于肿瘤部位，以杀死癌细胞或阻止其成长及增殖。然而，正常细胞在放射线治疗同时亦会受到影响、甚至死亡，进而产生如疲倦、落发、免疫***异常、及食欲不振等副作用。

目前已开发出许多抗癌药物(例如5-氟尿嘧啶、贺癌平和泰嘉锭等)以用于进行化学药物治疗，这些药物经由口服、肌肉注射、或静脉点滴注射等方式投药而达到治疗目的。但是，目前临床上的抗癌药物仍无法达到令人满意的专一性程度，患者于进行化疗时，体内的正常细胞往往一并被毒杀，因而严重影响生理机能，并产生许多副作用。

鉴于目前现有的癌症疗法仍具有如上述的诸多限制与缺点，因此，仍需要研发更有效的癌症治疗方法或药物。本发明即针对上述需求所作的研究。本发明人开发出一种可有效抑制癌细胞增生的喹啉衍生物，其可应用于治疗癌症。

发明内容

本发明的目的在于提供一种式(I)喹啉衍生物：

其中，

R₁为视需要经取代或未经取代的苯基；

R₂为卤素；以及

R₃为视需要经取代或未经取代的苯基，或苯环上含或不含有一个N杂原子的经取代或未经取代的苯基。

本发明的另一目的在于提供一种医药组合物，其包含一医药可接受载剂及治疗有效量的式(I)喹啉衍生物或其医药可接受的盐类及酯类。

本发明的又一目的在于提供一种使用式(I)喹啉衍生物或其医药可接受的盐类与酯类于制造治疗癌症的药剂的用途。

本发明的详细技术及较佳实施方式，将描述于以下内容中，以供本发明所属领域具通常知识者据以明了本发明的特征。

附图说明

图1示为本发明化合物与雷帕霉素抑制癌细胞活性的统计直条图；

图2示为本发明化合物与雷帕霉素抑制癌细胞活性的曲线图；

图3示为用于分析本发明化合物的作用机制的DNA微阵列分析图；

图4示为用于分析本发明化合物的作用机制的DNA微阵列分析图；以及

图5示为CASP3基因及GADD153基因的cDNA电泳图。

具体实施方式

于本文中，除非另外说明，所使用的“一、该”及类似用语应理解为包含单数及复数形式。

本发明提供一种式(I)喹啉衍生物：

其中，

R₁为视需要经取代或未经取代的苯基；

R₂为卤素；以及

于本发明式(I)喹啉衍生物中，较佳地，R₁为视需要经取代或未经取代的

R₃为视需要经取代或未经取代的或且R₄为氢、烷氧基或卤素。该烷氧基可为例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、或芳氧基等。

本发明喹啉衍生物的具体形式，包括选自以下群组：

以及

本发明喹啉衍生物，可由6，7-二氟-1-(4-硝基苯基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸或6，7-二氟-1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸作为起始物，并经由氢化、联胺化、以及与对应的芳基醛类反应而制得本发明化合物。举例言之，可将上述起始物溶于二氯甲烷中，再于常温常压下的氢气氛围中以钯/碳作为催化剂而进行氢化。氢化反应完成并进行纯化后，将所得产物与溶于吡啶中的联胺单水合物混合，并加热混合物以进行联胺化。联胺化反应完成并进行纯化后，将产物溶于乙醇中并添加对应的芳基醛类，再将所得混合物进行加热一段时间后进行纯化，即可制得本发明喹啉衍生物。

本发明喹啉衍生物可有效抑制癌细胞增生，故可用于治疗癌症。如后附实施例所示，本发明喹啉衍生物具有与临床上使用的抗癌药物雷帕霉素(Rapamycin)相近、甚至更为优异的抑制人类癌细胞的活性，且本发明喹啉衍生物的分子量较小，有助于生物体吸收并到达癌细胞部位，故可开发为新一代的抗癌药物或标靶药物。

因此，本发明也提供一种医药组合物，其包含一医药可接受载剂及治疗有效量的式(I)喹啉衍生物及其医药可接受的盐类及酯类。所谓治疗有效量的式(I)喹啉衍生物及其医药可接受的盐类及酯类，是指式(I)喹啉衍生物及其医药可接受的盐类及酯类的总量达可提供所欲治疗效果，包括由式(I)喹啉衍生物及其医药可接受的盐类及酯类的一种或多种所提供的态样。该式(I)喹啉衍生物如上文所述。

式(I)喹啉衍生物具有至少一可解离质子(例如羧酸基的质子)，使其可与一合适的有机或无机碱形成一医药可接受的碱加成盐类。该无机碱的例子包括：铵、碱金属或碱土金属的氢氧化物(如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵)、碳酸化物(如碳酸钾)、重碳酸化物或其他类似物等；该有机碱的例子包括：烷氧化物、烷酰胺、烷基与芳香基胺及其他类似物等。

式(I)喹啉衍生物的医药可接受酯类，是指式(I)喹啉衍生物在官能基(例如羧酸基)上酯化而提供可在体内转化回原化合物的酯类衍生物，包括任何生理可接受或易代谢的酯类衍生物。

本发明医药组合物可使用于兽医与人类医药上，且可呈任何形式，并以任何合宜的方式施用。举例言之，但不以此为限，该医药组合物可以口服、皮下、或静脉内注射等投药方式施用之。视使用形式及用途而定，可于本发明医药组合物中包含一医药可接受载剂。

以制备适于口服投药的药剂形式为例，可于本发明医药组合物中含有不会对所使用的式(I)喹啉衍生物或其盐类或酯类产生不利影响的医药可接受载剂，例如：溶剂、油性溶剂、稀释剂、安定剂、吸收延迟剂、崩散剂、乳化剂、抗氧化剂、黏合剂、润滑剂、吸湿剂等。可利用任何合宜的方法，将该组合物制成适于口服投药的形式，例如：锭剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、流浸膏剂、溶液剂、糖浆剂、悬液剂、乳剂、及酊剂等等。

至于适于皮下或静脉内注射的药剂形式，则可于本发明医药组合物中含有一或多种例如pH值调整剂、等渗透压剂或安定剂等添加剂，以及如等张溶液、注射用水、生理食盐水或盐类缓冲液(如磷酸盐缓冲液或柠檬酸盐缓冲液)等溶剂，以制成如静脉输注液、乳剂静脉输注液、干粉注射剂、悬液注射剂、或干粉悬液注射剂等。

本发明医药组合物可视需要另含有调味剂、调色剂、着色剂等添加剂，以提高所得药剂服用时的口适感及视觉感受；另可添加适当的保存剂、防腐剂、抗菌剂、抗真菌剂等，以改善所得药剂的储存性。

视需要地，可于本发明医药组合物中并含一或多种其他活性成分，以进一步加强组合物的功效或增加制剂配方的运用灵活性与调配度。举例言之，可于本发明医药组合物中含有一或多种抗癌成分，只要该抗癌成分对所使用的式(I)喹啉衍生物或其盐类或酯类的效益没有不利的影响即可。

基于式(I)喹啉衍生物的抗癌活性，本发明医药组合物可用于治疗癌症，例如用于治疗大肠癌与乳癌。可以一日一次、一日多次、或数日一次等不同投药频率施用本发明医药组合物，根据投予标的的需求而异。

有丝***原活化蛋白激酶(MAPK)途径是引导细胞回应的重要细胞信息传递***，其参与细胞生长、发育、***、死亡、以及细胞间的功能同步等多种生理反应，并在细胞发生恶性转化(例如癌细胞的产生)的病理过程中扮演重要角色。有丝***原活化蛋白激酶是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，包括细胞外信息调节蛋白激酶(ERK)、C-Jun N端激酶(JNK)与p38。另一种与细胞生理反应及病理机制有关的信息传递***为杰纳斯激酶-转录信息转换子及活化子(JAK-STAT)途径，其主要是由各种细胞因子与受体结合而二聚体化，杰纳斯激酶接着靠近二聚体并磷酸化，使受体上的酪氨酸残基磷酸化，再通过转录信息转换子及活化子形成二聚体后与受体分离，并转移到细胞核内结合至DNA序列，从而调控基因表达。

于不受任何理论的限制下，本发明组合物可通过杰纳斯(Janus)激酶-转录信息转换子及活化子途径及/或有丝***原活化蛋白激酶途径达成抑制癌细胞的效果。因此，本发明医药组合物可用于治疗与杰纳斯激酶-转录信息转换子及活化子途径及有丝***原活化蛋白激酶途径的至少其中之一有关的癌症。

本发明亦关于一种使用式(I)喹啉衍生物及其医药可接受的盐类与酯类于制造治疗癌症的药剂的用途。其中，式(I)喹啉衍生物如上文所述。于一实施方式中，该药剂用于治疗大肠癌与乳癌。于另一实方式中，该药剂系用于治疗与杰纳斯激酶-转录信息转换子及活化子途径及有丝***原活化蛋白激酶途径是至少其中之一有关的癌症。

以下列具体实施例以进一步例示说明本发明。其中该些实施例仅提供作为说明，而非用以限制本发明的范畴。

实施例

[化合物分析方法]

以Electrothermal IA9100熔点分析仪(购自ClarksonLaboratory公司)测定化合物熔点。核磁共振(NMR)光谱(¹H及¹³C)以Varian Gemini 200光谱仪或Varian-Unity-400光谱仪(购自Varian公司)测量与记录。化学位移以“δ”表示，并以四甲基硅烷(TMS)作为内标准。薄层色层分析于硅胶60F-254板(购自E.Merck and Co.公司)上进行。使用台湾成功大学内的行政院国家科学委员会仪器中心及台湾中兴大学的Heraeus CHN-O Rapid元素分析仪(购自Heraeus公司)进行元素分析，所有数值皆于±0.4％的理论组成(theoretical composition)内。

[制备例]

本发明化合物以如下流程图所示的方法而制备，下文将详细说明化合物的制备方法：

A.制备1-(4-胺基苯基)-6，7-二氟-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物3)或1-(4-胺基-2-氟苯基)-6，7-二氟-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物4)

将0.69克(2毫莫耳)的6，7-二氟-1-(4-硝基苯基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物1)或6，7-二氟-1-(2-氟-4-硝基苯基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物2)溶于二氯甲烷(100毫升)(化合物1及2的制备方法可参见Chen et al.，J.Med.Chem.，2001，44，2374-2377，该文献引用于此处以供参考)中，于常温常压下，在氢气氛围中以钯/碳(0.23克)进行氢化历时4小时(以薄层色层分析监控)。过滤反应混合物，并于真空中浓缩过滤物，得到一残余固体，再以骤沸管柱色层分析(FC，硅胶，甲醇∶二氯甲烷＝1∶50)进行纯化，并自乙醇中再结晶，制得1-(4-胺基苯基)-6，7-二氟-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物3，0.53克，产率84％)或1-(4-胺基-2-氟苯基)-6，7-二氟-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物4，产率79％)。

化合物3：

熔点：228-230℃；R_f＝0.48(甲醇∶二氯甲烷＝1∶20)；UVλ_max纳米(logε)：262(3.12)，248(3.04)，241(2.95)，228(2.91)；IR(KBr)：3341，1726，1616，1493cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ5.72(br s，NH₂)，6.74(m，2H，3’，5’-H)，7.19(dd，1H，J＝6.6，11.6Hz，8-H)，7.27(m，2H，2’，6’-H)，8.32(dd，1H，J＝10.4Hz，5-H)，8.62(s，1H，2-H)；分析计算：C₁₆H₁₀F₂N₂O₃·0.1 H₂O：C 60.41，H 3.24，N8.81；实际值：C 60.26，H 3.19，N 8.43。

化合物4：

熔点：224-226℃；R_f＝0.42(甲醇∶二氯甲烷＝1∶20)；UVλ_max纳米(logε)：258(3.14)，246(3.12)，239(3.01)，230(2.91)；IR(KBr)：3334，1723，1614，1498cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ6.08(br s，NH₂)，6.58(m，2H，3’，5’-H)，7.27(m，2H，6’，8-H)，8.33(dd，1H，J＝8.6，10.0Hz，5-H)，8.76(s，1H，2-H)，14.53(br s，COOH)；分析计算：C₁₆H₉F₃N₂O₃：C 57.49，H 2.71，N 8.38；实际值：C 57.26，H3.02，N 8.32。

B.制备1-(4-胺基苯基)-6-氟-7-联苯基-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物5)或1-(4-胺基-2-氟苯基)-6-氟-7-联苯基-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物6)

将溶于吡啶(8毫升)中的联胺单水合物(2.2毫升，45毫莫耳)与化合物3(0.89克，2.81毫莫耳)或化合物4(0.94克，2.84毫莫耳)混合，获得一混合物，再于70至80℃下加热混合物达6小时(以薄层色层分析监控)。冷却反应物并添加醋酸，直至达到pH值为5，接着过滤收集沉淀物，以水清洗，再自乙醇中再结晶，以制得黄色固体的1-(4-胺基苯基)-6-氟-7-联胺基-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物5，0.67克，73％)或1-(4-胺基-2-氟苯基)-6-氟-7-联胺基-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸(化合物6，产率76％)。

化合物5：

熔点：258-260℃；R_f＝0.42(甲醇∶二氯甲烷＝1∶20)；UVλ_max纳米(logε)：282(3.07)，258(2.92)，254(2.77)，232(2.73)；IR(KBr)3326，1713，1624，1466cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ4.31(br s，联胺-NH₂)，5.64(br s，4’-NH₂)，6.75(m，3H，3’，5’，8-H)，7.21(m，2H，2’，6’-H)，7.78(d，1H，J＝12.2Hz，5-H)，8.21(br s，7-NH)，8.38(s，1H，2-H)，15.70(br s，1H，COOH)；分析计算：C₁₆H₁₃FN₄O₃*0.2H₂O：C 57.89，H 4.08，N 16.88；实际值：C 57.98，H4.19，N 16.58。

化合物6：

熔点：283-285℃；R_f＝0.39(甲醇∶二氯甲烷＝1∶20)；UVλ_max纳米(logε)：286(3.12)，278(3.07)，252(2.85)，238(2.76)；IR(KBr)：3350，1705，1629，1464cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ4.35(br s，联胺-NH₂)，5.99(br s，4’-NH₂)，6.52-6.61(m，2H，3’，5’-H)，6.71(d，2H，J＝6.2Hz，8-H)，7.327-7.36(m，2H，2’，6’-H)，7.78(d，1H，J＝12.4Hz，5-H)，8.28(br s，7-NH)，8.47(s，1H，2-H)，15.38(brs，1H，COOH)；分析计算：C₁₆H₁₂F₂N₄O₃*0.2H₂O：C 54.09，H 3.69，N15.77；实际值：C 54.07，H 3.75，N 15.69。

C.制备本发明化合物7至11(7-(2-芳亚甲基联胺基)氟喹诺酮羧酸的衍生物)

将化合物5或6(2毫莫耳)溶于乙醇中(30毫升)，并依以上流程图中所示的醛类结构添加适当的芳基醛类(4毫莫耳)，再将所得混合物进行加热及回流8至48小时(以薄层色层分析监控)。于真空下移除溶剂，将残余物悬浮于水(20毫升)中，再以骤沸管柱色层分析(FC)(甲醇∶二氯甲烷＝1∶50)纯化所得沉淀物，并自乙醇中再结晶，以制得终产物7至11(即，7-(2-芳亚甲基联胺基)氟喹诺酮羧酸的衍生物)。本发明化合物7至11的详细资料如下。

化合物7：1-(4-胺基苯基)-7-(2-苯亚甲基联胺基)-6-氟-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸

黄色固体(产率88％)；熔点：314-316℃；R_f＝0.46(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)；UVλ_max纳米(logε)：378(3.34)，358(3.27)，310(3.39)，296(3.32)，272(3.24)，242(3.33)；IR(KBr)：3381，1708，1628，1462cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ：5.77(br s，NH₂)，6.80-6.82(m，2H，3’，5’-H)，7.15(d，1H，J＝7.2Hz，8-H)，7.27-7.48(m，7H，2’，6’，Ar-H)，7.95(d，1H，J＝11.6Hz，5-H)，8.18(s，1H，HC＝N)，8.54(s，1H，2-H)，11.22(br s，NH)，15.47(br s，COOH)；分析计算：C₂₃H₁₇FN₄O₃*0.3H₂O：C 65.49，H 4.20，N 13.28；实际值：C 65.38，H 4.35，N 13.11。

化合物8：1-(4-胺基苯基)-6-氟-7-(2-(4-氟苯亚甲基)联胺基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸

黄色固体(产率85％)；熔点：308-310℃；R_f＝0.50(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)；UVλ_max纳米(logε)：374(3.28)，312(3.32)，298(3.30)，286(3.26)，254(3.22)，234(3.24)；IR(KBr)：3214，1633，1505，1470cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ5.72(br s，NH₂)，6.78-6.80(m，2H，3’，5’-H)，7.03(d，2H，J＝6.4Hz，8-H)，7.14-7.24(m，4H，2’，6’-H，Ar-H)，7.46-7.49(m，2H，Ar-H)，7.75(d，1H，J＝11.2Hz，5-H)，8.13(s，1H，HC＝N)，8.54(s，1H，2-H)，11.03(br s，NH)，15.42(br s，COOH)；分析计算：C₂₃H₁₆F₂N₄O₃：C 63.59，H 3.71，N 12.90；实际值：C 63.31，H 3.99，N 12.81。

化合物9：1-(4-胺基苯基)-6-氟-7-(2-(4-甲氧基苯亚甲基)联胺基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸

黄色固体(产率85％)；熔点：307-309℃；R_f＝0.45(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)；UVλ_max纳米(logε)：380(2.82)，328(2.90)，310(2.96)，294(2.84)，252(2.75)，232(2.72)；IR(KBr)：3247，1702，1626，1465cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ3.81(s，3H，OCH₃)，5.78(br s，NH₂)，6.79-6.83(m，2H，3’，5’-H)，6.97-7.01(m，2H，Ar-H)，7.12(d，1H，J＝6.2Hz，8-H)，7.25-7.30(m，2H，2’，6’-H)，7.39-7.44(m，2H，Ar-H)，7.93(d，1H，J＝12.0Hz，5-H)，8.14(s，1H，HC＝N)，8.54(s，1H，2-H)，11.08(br s，NH)15.39(br s，COOH)；分析计算：C₂₄H₁₉FN₄O₄*0.2H₂O：C 64.05，H 4.34，N 12.45；实际值：C 63.96，H 4.42，N 12.31。

化合物10：1-(4-胺基-2-氟苯基)-6-氟-7-(2-(4-甲氧基苯亚甲基)联胺基)-4-侧氧基-1，4-二氢喹啉-3-羧酸

黄色固体(产率86％)；熔点：321-322C；R_f＝0.48(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)；UVλ_max纳米(logε)：376(3.32)，332(3.16)，318(3.31)，305(3.38)，252(3.34)，228(3.22)；IR(KBr)：3363，1796，1627，1461cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ：3.80(s，3H，OCH₃)，6.16(br s，2H，NH₂)，6.63-6.65(m，2H，3’，5’-H)，6.98-7.01(m，3H，8-，Ar-H)，7.37-7.43(m，3H，6’-，Ar-H)，7.94(d，2H，J＝11.6Hz，5-H)，8.14(s，1H，HC＝N)，8.66(s，1H，2-H)，11.15(br s，NH)，15.35(br s，COOH)；分析计算：C₂₄H₁₈F₂N₄O₄*0.2H₂O：C 61.59，H3.96，N 11.97；实际值：C 61.60，H 4.27，N 11.81。

化合物11：1-(4-胺基-2-氟苯基)-6-氟-4-侧氧基-7-(2-(吡啶-4-基亚甲基)联胺基)-1，4-二氢喹啉-3-羧酸

黄色固体(产率71％)；熔点：176-178℃；R_f＝0.43(甲醇∶二氯甲烷＝1∶10)；UVλ_max纳米(logε)：374(3.37)，367(3.34)，3.16(3.41)，302(3.45)，281(3.58)，256(3.55)，238(3.47)；IR(KBr)：3356，1721，1631，1467cm^-1；¹H-NMR(200MHz，DMSO-d₆)δ：6.18(br s，NH₂)，6.66-6.72(m，2H，3’，5’-H)，7.06(dd，1H，J＝6.8，1.2Hz，8-H)，7.34-7.50(m，2H，6’-，吡啶基-H)，7.64-7.67(m，2H，吡啶基-H)，7.95(d，1H，J＝12.0Hz，5-H)，8.09(s，1H，HC＝N)，8.41(s，1H，2-H)，8.59-8.64(m，1H，吡啶基-H)，11.49(br s，NH)，15.26(br s，COOH)；分析计算：C₂₂H₁₅F₂N₅O₃*1.0H₂O：C 58.28，H 3.78，N15.45；实际值：C 58.19，H 4.03，N 15.40。

[化合物活性试验1]

利用MTT(3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基四唑溴盐)分析法测试由上述制备例所制得的本发明化合物7至11的抑制癌细胞活性。

首先，于37℃的含5％二氧化碳的培养箱中，分别以Dulbecco’s改良培养基(DMEM培养基)培养人类大肠癌细胞DLD-1(BCRC：60132)与SW620(BCRC：60343)、以及人类乳癌细胞MCF-7(BCRC：60436)(购自台湾生物资源保存及研究中心(BCRC))。2至3天后，观察各类癌细胞的生长状况，当细胞占满生长帄面空间(confluence)时，便可用来进行细胞毒性测试。

将10⁵个细胞/孔种植(seeding)于24孔细胞培养皿中，并培养12至16小时。接着，将本发明化合物7至11(1微莫耳浓度)、现有抗癌药物雷帕霉素(Rapamycin，作为比较组，1微莫耳浓度)、或二甲基亚砜(DMSO，作为对照组)加入培养皿中。于24小时后，运用倒立式显微镜观察细胞型态的变化，并以MTT分析及计算细胞存活率。

MTT分析法是常用的细胞毒性试验方法，其原理为MTT黄色水溶性化学物可被细胞内粒腺体中的去氢酶(dehydrogenase)代谢，产生紫色不溶于水的产物3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基-甲臜(formazan)，并沉淀堆积在细胞中。添加二甲基亚砜以溶解3-[4，5-二甲基噻唑-2-基]-2，5-二苯基-甲臜，并以589纳米波长测量吸光值，其中，由于只有活细胞才会有具活性的去氢酶，故所测得的吸光值会与活细胞数量成正比关系，可藉此评估细胞的存活率。

以上实验结果显示于图1中。图1结果显示，本发明化合物7至11具有优异的抑制人类癌细胞的活性，故可用于治疗癌症。此外，本发明化合物7至11具有较雷帕霉素优异的抗癌活性，且本发明化合物的分子量较小，有助于生物体吸收并到达癌细胞部位，故可有效治疗癌症。

[化合物活性试验2]

进行与化合物活性试验1相同的试验，以现有抗癌药物雷帕霉素作为比较组，并以人类乳癌细胞MCF-7进行测试，观察本发明化合物于不同时间点下的抑制癌细胞活性，试验结果显示于图2。

如图2所示，本发明化合物7至11具有与雷帕霉素相近、甚至更为优异的抗癌活性，故可有效治疗癌症。

[化合物抑癌机制试验1]

使用DNA微阵列及生物信息工具分析本发明化合物7至11的作用机制。首先，将10⁷个人类乳癌细胞MCF-7细胞种植于培养皿中，并培养12小时。接着，将本发明化合物7至11(实验组)与二甲基亚砜(对照组)分别加入培养皿中。于6小时后，使用Trizol试剂(购自Invitrogen公司)抽取总RNA，并确认RNA的纯度260/280大于1.8以上。

将抽出的mRNA反转录成cDNA，并分别染上绿色萤光剂(Cyanine 3，Cy3)，从实验组和对照组取等量的cDNA，并依据碱基配对原理和生物晶片(微阵列，Agilent Human G3 Whole GenomeOligo 8×60K生物晶片)上的cDNA进行杂交反应。

最后，将激光扫描影像分析与资料进行正规化。接着，将资料以倍数改变值(Fold change)值为2为标准，选出显著上调和下调的基因，再利用生物资讯网站DAVID(Functional AnnotationBioinformatics Microarray Analysis)与KEGG(Kyoto Encyclopediaof Genes and Genomes)分析显著上调和下调的基因途径。标准化后的微阵列分析结果显示于图3及图4，生物资讯工具的分析结果显示于表1。

表1

如图3、4及表1所示，DNA微阵列及生物资讯工具的分析结果显示，经本发明化合物处理后的样本中，具有明显差异化表达的基因为涉及杰纳斯激酶-转录信息转换子及活化子(JAK-STAT)途径及/或有丝***原活化蛋白激酶(MAPK)途径，此结果说明本发明化合物的抑癌作用机制涉及杰纳斯激酶-转录信息转换子及活化子途径及/或有丝***原活化蛋白激酶)途径。

[化合物抑癌机制试验2]

半胱胺酸蛋白分解酶3(caspase 3，CASP3)基因与生长停滞及DNA破坏诱导转录3(growth arrest and DNA damage inducibletranscript 3，GADD153)基因为细胞凋亡过程中的重要基因，当其表达提升时，可促进细胞凋亡。以上DNA微阵列试验结果显示该二基因可受到本发明化合物的增进调控(up-regulation)，说明本发明化合物可促进细胞凋亡。为进一步确认本发明化合物经由JAK-STAT途径与MAPK途径达成抑癌效果，本试验借助反转录聚合酶连锁反应(RT-PCR)分析人类乳癌细胞MCF-7的JAK-STAT途径中CASP3基因及MAPK途径中GADD153基因的表达。

首先，使经或未经本发明化合物处理的人类乳癌细胞MCF-7生长80％的帄面空间。以TRIzol试剂(购自Invitrogen公司)单离细胞的总量RNA。于各样本中，依据制造商的使用指示，以寡-dT引子(oligo-dT primers)使用SuperscriptII套组(购自Invitrogen公司)，将5微克总量RNA反转录为第一股cDNA。依照以下条件使用Applied biosystems 2720热循环仪进行PCR：(1)升温：94℃(2分钟)；(2)94℃(变性分离，30秒)、55℃(接合，1分钟)、以及72℃(延伸，1分钟)，共30循环。该PCR使用如下引子：

(a)生长停滞及DNA破坏诱导转录3(GADD153)基因：

正义(sense)：5’-GGGAAG TAGAGG CGACTC G-3’(SEQ ID NO：1)

反义(antisense)：5’-CTT CCC CCT GCG TAT GTG-3’(SEQ ID NO：2)

(b)细胞凋亡相关的半胱胺酸蛋白分解酶3(CASP3)基因：

正义：5’-AGA ACT GGA CTG TGG CAT TGA G-3’(SEQ ID NO：3)

反义：5’-GCT TGT CGG CAT ACT GTT TCA G-3’(SEQ ID NO：4)

(c)肌动蛋白引子(内在控制组)基因：

正义：5’-GCT CGT CGT CGA CAA CGG CTC-3’(SEQ ID NO：5)

反义：5’-CAA ACA TGA TCT GGG TCA TCT TCT C-3’(SEQ IDNO：6)

之后，以1重量/体积％洋菜糖的TBE胶体(购自Invitrogen公司)电泳分析所有PCR产物。试验结果显示于图5。如图5所示，经本发明化合物处理的MCF-7癌细胞的CASP3基因与GADD153基因的表达增加，证实本发明化合物是由JAK-STAT途径与MAPK途径达成抑癌效果。

以上试验结果说明，本发明化合物可用于治疗与JAK-STAT途径及/或MAPK途径有关的癌症。

上述实施例仅用以例示说明本发明的原理及功效，而非用于限制本发明。任何熟于此项技艺的人士均可在不违背本发明的技术原理及精神的情况下，对上述实施例进行修改及变化。

序列表

<110> 台北科技大学

<120> 口奎口林衍生物及其应用

<130> 无

<160> 6

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中GADD153 基因的正义引子

<400> 1

gggaagtaga ggcgactcg 19

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中GADD153 基因的反义引子

<400> 2

cttccccctg cgtatgtg 18

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中CASP3 基因的正义引子

<400> 3

agaactggac tgtggcattg ag 22

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中CASP3 基因的反义引子

<400> 4

gcttgtcggc atactgtttc ag 22

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中肌动蛋白基因的正义引子

<400> 5

gctcgtcgtc gacaacggct c 21

<210> 6

<211> 25

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> RT-PCR中肌动蛋白基因的反义引子

<400> 6

caaacatgat ctgggtcatc ttctc 25

Claims

1.一种式(I)喹啉衍生物：

所述喹啉衍生物是选自以下群组：

以及

2.一种医药组合物，其特征包含医药可接受载剂及如权利要求1所述的喹啉衍生物或其医药可接受的盐类。

3.如权利要求2所述的医药组合物，其特征在于，该医药组合物用于治疗癌症。

4.如权利要求3所述的医药组合物，其特征在于，该医药组合物用于治疗大肠癌与乳癌。

5.如权利要求3所述的医药组合物，其特征在于，该医药组合物用于治疗与Janus激酶-转录信息转换子及活化子途径及有丝***原活化蛋白激酶途径的至少其中之一有关的癌症。

6.如权利要求1所述的喹啉衍生物及其医药可接受的盐类于制造治疗癌症的药剂的用途。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的喹啉衍生物及其医药可接受的盐类在制造治疗大肠癌与乳癌的药物中的用途。

8.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的喹啉衍生物及其医药可接受的盐类在制造治疗与Janus激酶-转录信息转换子及活化子途径及有丝***原活化蛋白激酶途径的至少其中之一有关的癌症的药物中的用途。