CN103030567A - 一种***药物对映体拆分方法 - Google Patents

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童胜强
颜继忠
郑烨
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Zhejiang University of Technology ZJUT
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Abstract

本发明公开了一种***药物对映体拆分方法，包括如下步骤：（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用；（3）采用高速逆流色谱法拆分***，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。本发明采用本方法拆分手性药物***可以达到较高的分离度，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋***和右旋***的单体。

Description

一种***药物对映体拆分方法
技术领域
本发明涉及一种从手性药物***对映体中拆分出左旋***和右旋***的方法。
背景技术
手性药物中不同对映体在体内显示出不同生物活性，这使得寻找高效、便捷的拆分方法显得尤为重要。***属于β-肾上腺阻滞剂类药物，临床上广泛用于治疗高血压，心肌缺血和心律不齐等疾病，其中S型***的药效大约是R型的40倍，且R型***还具有很强的抗生育作用。目前，拆分***对映体的方法主要有高效液相色谱法、毛细管电泳法、离子对色谱法、薄层色谱法等。
近十年来手性药物的开发倾向于发展单一对映体，单一对映体药物的世界市场每年以20%以上速度的增长。美国食品和药物管理局早在1992年就规定，今后凡开发具有不对称中心的药物，必须给出手性拆分的结果。因此，进行手性药物的拆分并获得单一的手性药物，已成为分离科学领域的一个重要分支。
高速逆流色谱技术(high-speed countercurrent chromatography，HSCCC)是20世纪80年代发展起来的一种不用固态支撑体或载体的液液分配技术，在分离过程中完全消除了气、液色谱中常见的不可逆吸附现象，不会破坏分子，适用于分离极性大的手性化合物以及生物大分子；由于它独特的分离机制，使其可用于制备分离，因此很适用于制备性分离手性化合物。近年来有关逆流色谱手性分离方面的研究有所加快。
发明内容
本发明的目的是提供一种采用高速逆流色谱技术拆分***药物对映体的方法。
为实现上述发明目的，本发明以盐酸***为拆分对象，先将***盐酸盐转化为***游离体，用L-酒石酸酯类和硼酸作为拆分试剂，L-酒石酸酯类添加到有机相中，硼酸添加到水相中，采用高速逆流色谱法得到左旋***和右旋***。
本发明采用的具体技术方案如下：
一种***药物对映体拆分方法，包括如下步骤：
（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为C1~C8的卤代烷烃、取代芳烃、C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或C1~C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.02~0.5mol/L；所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在3.0~5.0，其中硼酸的浓度为0.02~0.30mol/L；
（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用，样品浓度为0.1~15.0mg/ml；
（3）采用高速逆流色谱法拆分***：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~30℃，开启速度控制器，转速为500~2000rpm，以0.2~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（当流动相从色谱柱出口处流出时就认为达到平衡），由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。
本发明所述的有机溶剂为C1~C8的卤代烷烃、取代芳烃、C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述的C1~C8的卤代烷烃可以是氯仿、二氯甲烷等，所述的取代芳烃优选取代苯，例如甲苯、氯苯等，所述的C1~C8的烷烃可以是正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、石油醚等，所述的C2~C8的醚可以是***、甲基叔丁基醚等。优选的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷，最优选的有机溶剂为氯仿。
本发明所述的L-酒石酸酯可以是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸异丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。
本发明优选所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH=4.0~4.4，其中硼酸浓度优选为0.05~0.1mol/L；最优选所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH=4.4，其中硼酸浓度为0.1mol/L。
本发明优选所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.1~0.2mol/L，最优选为0.1mol/L。
本发明所述的步骤（2）中，可通过现有方法将***盐酸盐转化为***游离体，例如可采用如下方法：取***盐酸盐加入到1~2mol/L氢氧化钠溶液中，加热至40~50℃搅拌2～3min，然后用二氯甲烷萃取，所得有机相用超纯水洗涤至中性、用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液蒸除溶剂即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入几滴正己烷重结晶，得到***游离体。
本发明步骤（3）中，经高速逆流色谱法拆分之后，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均可大于95%。在拆分过程中，优选逆流色谱分离柱的柱温为5~15℃；优选以0.5~2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内。
本发明步骤（4）中，可通过现有方法分别从前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收左旋***和右旋***的单体，例如可采用如下方法：将前峰洗脱液或后峰洗脱液碱化至pH为9~14，析出大量白色粉末后直接用二氯甲烷萃取，二氯甲烷层用饱和食盐水洗涤至中性、无水硫酸钠干燥、过滤、滤液蒸除溶剂即得粗品，粗品用二氯甲烷溶解并加入几滴正己烷重结晶即可获得纯化的左旋***单体或右旋***单体。其中前峰洗脱液或后峰洗脱液可用氢氧化钠溶液碱化，氢氧化钠溶液浓度可以是1~2mol/L。
本发明具体推荐所述拆分方法按照如下步骤进行：
（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为C1~C8的卤代烷烃、取代芳烃、C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或C1~C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.02~0.5mol/L；所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在3.0~5.0，其中硼酸的浓度为0.02~0.30mol/L；
（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用，样品中***游离体浓度为0.1~15.0mg/ml；
（3）采用高速逆流色谱法拆分***：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~30℃，开启速度控制器，转速为500~2000rpm，以0.2~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后（当流动相从色谱柱出口处流出时就认为达到平衡），由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。
进一步优选本发明所述拆分方法按照如下步骤进行：
（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.1~0.2mol/L；所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在4.0~4.4，其中硼酸的浓度为0.05~0.1mol/L；
（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用，样品中***游离体浓度为0.1~15.0mg/ml；
（3）采用高速逆流色谱法拆分***：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~15℃，开启速度控制器，转速为500~2000rpm，以0.5~2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。
本发明可采用分析型和半制备型逆流色谱仪（分析型分离柱柱体积为20ml，半制备型分离柱柱体积为300ml），逆流色谱仪由恒流泵、主机（分离柱）、紫外检测器、记录仪等组成。
与现有技术相比，本发明的优势在于：采用本方法拆分手性药物***可以达到较高的分离度，并且该方法适用于各种型号的制备型逆流色谱仪，可以分离得到左旋***和右旋***的单体。
附图说明
图1：实施例1实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
图2：实施例2实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
图3：实施例5实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
图4：实施例7实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
图5：实施例10实验条件下的分析型高速逆流色谱图；
图6：实施例11实验条件下的半制备型高速逆流色谱图；
图7：图6中A部分（110min~200min）洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即R型***；
图8：图6中B部分（235min~540min）洗脱液的高效液相色谱检测谱图，即S型***。
具体实施方式
下面以具体实施例来对本发明做进一步说明，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1
***盐酸盐转化为***游离体：取610mg***盐酸盐，加入到5mL1mol/L的氢氧化钠溶液中，加热至50℃搅拌2～3min，然后转移至分液漏斗中用二氯甲烷少量分批多次萃取，合并有机相并用超纯水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，过滤后蒸除溶剂即得***游离体，粗品用二氯甲烷溶解加入几滴正己烷重结晶，得到无色针状晶体488mg，即为游离***。
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.08。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件为：Chiralcel OD-R column(4.6×250mm)；柱温：20℃；流动相：0.1mol/L KPF6:乙腈（60:40，v/v）等度洗脱；流速0.5ml/min；检测波长215nm；进样量：10μl。
实施例2
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸异丁酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.10。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例3
将环己烷:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为0.34。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例4
将二氯甲烷:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.10。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例5
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.13。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例6
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.80ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.01。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例7
将氯仿:水（有机相含0.2mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.21。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例8
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1500，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.01。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例9
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.05mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.02。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例10
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH＝4.0并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的10mg***对映体用5ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用分析型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为20ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为1800rpm，以0.50ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，计算分离度为1.07。分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液，将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
实施例11
将氯仿:水（有机相含0.1mol/L L-酒石酸正己酯，水相为0.05mol/L的醋酸/三乙胺缓冲溶液pH=4.4并含有0.1mol/L硼酸）按照1:1的体积比配置于分液漏斗中，摇匀后静置分层。待平衡一段时间后，将上下相分开，有机相作为固定相，水相作为流动相。称取实施例1中得到的108mg***对映体用20ml流动相溶解，溶解后制成样品溶液待用。
采用半制备型高速逆流色谱仪拆分***对映体，分离柱体积为300ml。进样前，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为15℃，开启速度控制器，转速为800rpm，以2.00ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样。然后以波长280nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，接收前峰洗脱液和后峰洗脱液，计算分离度为1.05。将收集得到的洗脱液进行高效液相检测，两个单体洗脱液的纯度均大于95%。高效液相色谱的检测条件同实施例1。
从洗脱液中回收样品：将前峰和后峰洗脱液分别用1mol/L氢氧化钠溶液碱化至pH11左右，析出大量白色粉末后直接用二氯甲烷少量多次萃取合并二氯甲烷层，用饱和食盐水洗涤二氯甲烷层至中性，无水硫酸钠干燥，过滤后蒸除溶剂即得左旋***和右旋***，最后用二氯甲烷溶解加入几滴正己烷重结晶，获得纯化的22.9mg左旋***和30.1mg右旋***，对映体纯度大于95%。

Claims (9)

1.一种***药物对映体拆分方法，包括如下步骤：
（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为C1~C8的卤代烷烃、取代芳烃、C1~C8的烷烃或C2~C8的醚，所述的取代芳烃的取代基为一个或多个，所述取代基各自独立选自卤素或C1~C4的烷基，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.02~0.5mol/L；所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在3.0~5.0，其中硼酸的浓度为0.02~0.30mol/L；
（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用，样品中***游离体浓度为0.1~15.0mg/ml；
（3）采用高速逆流色谱法拆分***：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~30℃，开启速度控制器，转速为500~2000rpm，以0.2~3.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。
2.如权利要求1所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的有机溶剂选自下列之一：氯仿、二氯甲烷、甲苯、氯苯、正己烷、正庚烷、正戊烷、环己烷、***、石油醚或甲基叔丁基醚。
3.如权利要求1所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷。
4.如权利要求1所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的有机溶剂为氯仿。
5.如权利要求1~4之一所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的L-酒石酸酯是L-酒石酸正己酯、L-酒石酸正丁酯、L-酒石酸正辛酯、L-酒石酸正戊酯、L-酒石酸异丁酯或L-酒石酸-2-乙基己酯。
6.如权利要求5所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH＝4.0~4.4，其中硼酸浓度为0.05~0.1mol/L；所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.1~0.2mol/L。
7.如权利要求5所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：所述的含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH=4.4，其中硼酸浓度为0.1mol/L；所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.1mol/L。
8.如权利要求5所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于：控制逆流色谱分离柱的柱温为5~15℃，以0.5~2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内。
9.如权利要求1所述的***药物对映体拆分方法，其特征在于所述方法按照如下步骤进行：
（1）将含有L-酒石酸酯的有机溶剂和含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液按照体积比1:1混合均匀，静置分层，分离得到有机相和水相；所述的有机溶剂为氯仿或二氯甲烷，所述的有机溶剂中L-酒石酸酯的浓度为0.1~0.2mol/L；所述含有硼酸的醋酸/三乙胺缓冲液的pH在4.0~4.4，其中硼酸的浓度为0.05~0.1mol/L；
（2）将***盐酸盐转化为***游离体，并用步骤（1）所得水相溶解，制成样品待用；
（3）采用高速逆流色谱法拆分***：分别以步骤（1）得到的有机相和水相为固定相和流动相，将逆流色谱分离柱填满固定相，柱温为5~15℃，开启速度控制器，转速为500~2000rpm，以0.5~2.0ml/min的流速将流动相泵入柱内，待两相溶剂体系达到流体动力学平衡后，由进样阀进样，以波长190~400nm的紫外检测器检测，根据紫外检测谱图，分别收集前峰洗脱液和后峰洗脱液；
（4）分别从步骤（3）中收集得到的前峰洗脱液和后峰洗脱液中回收得到左旋***和右旋***的单体。
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