CN102961395B - 一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物及其应用。所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物可作为抗氧化剂或用于制备抗氧化剂。所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-900万道尔顿。本发明亨氏马尾藻多糖的抗氧化活性显著，亨氏马尾藻多糖低浓度时就可达到很高的清除率，且清除率与亨氏马尾藻多糖浓度呈一定的量效关系。在亨氏马尾藻多糖浓度为0.07mg/mL时，亨氏马尾藻多糖对羟基自由基的清除率可达到65%以上；在亨氏马尾藻多糖浓度为0.07mg/mL时，亨氏马尾藻多糖对超氧阴离子自由基的清除率可达到40%以上。

Description

一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物及其应用

技术领域

本发明涉及功能性保健食品或生物医药领域，具体涉及一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物及其应用。 

背景技术

现代病理学研究表明，自由基与许多疾病有关，如动脉粥样硬化、肝病、糖尿病、机体老化、癌症等。抗氧化剂不仅能清除自由基，而且能抑制自由基的产生。目前由于一些合成抗氧化剂，如二丁基羟基甲苯（BHT）、丁基羟基茴香醚（BHA）被发现有不同程度的致癌等毒副作用，因而在美国日本已经停止使用。随着人们绿色环保消费意识的增强，天然植物氧化剂日益成为研究的热点，因此最近几年，海洋生物活性多糖的抗氧化作用受到广泛重视，研究表明海洋生物活性多糖具有较高抗氧化能力，鼠尾藻多糖能有效地清除活性氧自由基。浒苔多糖能超氧化物岐化酶（SOD）活力降低肝、脾中脂褐质（LPO）的含量。因此海洋生物活性多糖广泛应用于食品、医药保健等行业。 

随着现代分析和分离技术应用于海洋生物资源的开发，海藻被认为是含有新型活性次生产物最丰富的来源之一。研究表明，海藻多糖能促进小鼠T细胞增殖反应，对细胞具有免疫调节作用、抗氧化作用、抗肿瘤作用、抗突变作用、诱导细胞分化、抗病毒等多种功效。随着海藻的广泛应用和人们对海藻多糖这一类重要生命物质认识的深入，对海藻多糖生物活性的研究越来越受到重视，同时，海藻多糖在功能食品、新药开发、食品天然防腐添加剂和化妆品原料方面有着巨大的市场前景。 

亨氏马尾藻(C.Agardh)隶属褐藻门，墨角藻目，马尾藻科，马尾藻属，藻体黑褐色，较粗糙，高约1m，固着器盘状，直径约1cm-1.5cm，其上长出一个或两个主干，主干较短，圆柱状。亨氏马尾藻生长在低潮带岩石上，在香港、汕头、上川岛、硇洲岛、福建省的浦田和平谭等均有分布， 资源相当丰富，易获得。马尾藻民间不能直接食用，为非食用海藻，只有小部分被用作饲料、藻胶、饮料和医药工业的原料，大部分马尾藻还没得到全面的开发利用。为了进一步开发海洋资源，扩大马尾藻这一大型经济藻类的应用范围和提高其开发价值，有必要对其进行生物活性评价，以便为马尾藻的综合利用提供一定的科学理论参考。 

径向流色谱（Radial Flow Chromatography，RFC）作为一种新型的色谱分离分析技术，可用于多糖和蛋白质的分离纯化，径向色谱柱由两个多孔渗透树脂玻璃同心圆筒及介于两者之间的色谱分离介质构成，其独特的径向流动设计，流动相携带样品沿径向迁移，不同于传统轴向色谱柱的流体从一端到另一端，从而克服了传统色谱技术操作压力高、流速低、在大规模处理时不易放大等缺点，使其具有无可比拟的优势。申请号为CN201010268285.9的中国发明专利申请中公开了一种香菇菌丝体多糖的径向流色谱分离方法，整个径向色谱纯化只用了52min，多糖回收率达87.1%。申请号为CN2001063568.X的中国发明专利申请中公开了一种径向流色谱脱除粗多糖中蛋白质的方法，利用径向流色谱柱对灵芝多糖进行纯化，多糖回收率和蛋白脱除率分别可以达到81.4%、99.7%。 

申请号为CN 201110333024.5的中国发明专利申请中公开了一种藻类植物多糖及其制备方法和在卷烟中的应用，藻类植物多糖的制备方法包括：将海洋藻类洗净后干燥，粉碎后在水中提取，得到提取液，其中，海洋藻类与水的重量比为1：50-60；提取液冷却后经离心和真空抽滤得到滤液；将滤液醇沉；收集沉淀；冷冻干燥后即得海洋藻类多糖；或者；将滤液用径向流色谱法分离提纯后冷冻干燥得到海洋藻类多糖；所述的海洋藻类为多肋藻、亨氏马尾藻或铜藻；该藻类植物多糖应用到卷烟中，卷烟的烟气香气质和香气量增加，烟气的形态好，烟气的干燥感降低，圆润感、生沣感和回甜感增强，烟香有特色。但其对于藻类植物多糖其它的生物活性及应用并未做研究。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗氧化活性的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物。 

本发明还提供了一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物在作为或制备抗氧化剂中的应用。 

一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，所述的应用为：亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物在作为或制备抗氧化剂中的应用。 

本发明中，由于起抗氧化性能的活性物质为亨氏马尾藻多糖，因此亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物均具有抗氧化性能。 

所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-900万道尔顿（Da）。具体可选用分子量分布在150万-700万道尔顿的亨氏马尾藻多糖、分子量分布在160万-900万道尔顿的亨氏马尾藻多糖或者分子量分布在150万-200万道尔顿的亨氏马尾藻多糖。综合对羟基自由基有显著的清除活性、对超氧阴离子自由基的清除作用等抗氧化性能来看，分子量分布在160万-900万道尔顿的亨氏马尾藻多糖的抗氧化性能最好。经清除超氧阴离子自由基能力的测定法测定，亨氏马尾藻多糖的IC₅₀值可达0.0424mg/mL-0.0886mg/mL；经清除羟基自由基能力的测定法测定，亨氏马尾藻多糖的IC₅₀值可达0.0075mg/mL-0.0180mg/mL。 

所述的含有亨氏马尾藻多糖的提取物可以是任意形式的提取物，既可以是含有亨氏马尾藻多糖的提取液，也可以是含有亨氏马尾藻多糖的粗提物或纯化物等等。所述的含有亨氏马尾藻多糖的提取物中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量一般可达19%-28%，如可为19.47%-27.52%。所述的含有亨氏马尾藻多糖的提取物中还可以含有蛋白质等物质，蛋白质的质量百分含量一般为0.1%-1.5%，如可为0.1%-0.53%。 

所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的制备方法较简单，一般采用水提法制备，包括： 

（1）以亨氏马尾藻为原料，以水为提取剂进行提取，得到亨氏马尾藻多糖提取液； 

（2）将亨氏马尾藻多糖提取液浓缩和醇沉后得到沉淀，即亨氏马尾藻粗多糖； 

（3）将亨氏马尾藻粗多糖或亨氏马尾藻多糖提取液纯化后得到亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物。 

所述的含有亨氏马尾藻多糖的提取物可选用所述亨氏马尾藻多糖提取液、亨氏马尾藻粗多糖等在制备过程中以任意形态存在的含有亨氏马尾藻多糖的物质中的一种或两种以上。 

步骤（1）中，所述的提取的条件优选为：超声波辅助提取。所述的超声波辅助提取的最佳条件为：超声功率480w、占空比1:1、提取时间30min。 

所述的亨氏马尾藻优选亨氏马尾藻粉末，因此亨氏马尾藻在提取之前最好进行粉碎处理，优选在40℃-50℃干燥后粉碎，过80目-100目筛，得到80目-100目亨氏马尾藻粉末。 

所述的亨氏马尾藻的克数与水的毫升数之比优选为1:50-70，进一步优选为1:60。 

所述的提取完成后最好冷却静置1h-1.5h，离心、取上清液，上清液即为亨氏马尾藻多糖提取液。 

步骤（2）中，所述的浓缩包括：将亨氏马尾藻多糖提取液旋转蒸发浓缩至体积为原体积的1/10-1/8。 

所述的醇沉包括：在浓缩后的亨氏马尾藻多糖提取液中加入醇溶液使溶液中醇的最终体积百分浓度为30%-80%，静置过夜，离心，得到沉淀。所述的醇沉优选为分步醇沉，具体包括：在浓缩后的亨氏马尾藻多糖提取液中分步加入醇溶液使溶液中醇的最终体积百分浓度从30%-80%依次升高，每步均需静置过夜，离心，分别得到不同醇沉浓度对应的沉淀；进一步优选为：在浓缩后的亨氏马尾藻多糖提取液中分步加入醇溶液，依次使溶液中醇的最终体积百分浓度为30%、60%、80%，每步均需静置过夜，离心，分别得到不同醇沉浓度对应的沉淀，所述沉淀中的亨氏马尾藻多糖的分子量分布依次分别为150万-700万Da、160-900万Da、150-200万Da。 

所述的醇沉优选采用体积百分浓度为95%-100%的乙醇溶液。 

步骤（3）中，所述的纯化优选采用径向流色谱进行纯化。径向流色谱进行纯化的步骤包括：将亨氏马尾藻粗多糖溶解于水中配成浓度为10mg-20mg/mL的样品，或直接用亨氏马尾藻多糖提取液，离心，除去部分杂质，用微孔滤膜除去小颗粒物质，过弱碱性阴离子径向柱，以纯水进行 洗脱，收集洗脱液，直至流出液中无糖检测出为止，洗脱液旋转蒸发浓缩，冷冻干燥得纯化后的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物。所述制备方法最终的产物视纯化程度不同可分为亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物，理论上亨氏马尾藻多糖为不含杂质的多糖。 

所述的径向流色谱进行纯化时，上样量优选为50mL，上样流速优选为5mL/min，洗脱流速优选为40mL/min。 

所述的径向流色谱可采用SUPE RFL0-250A103S弱碱性阴离子径向柱。 

本发明各步骤中，所述的离心的条件优选为转速10000rpm（转/分钟）、温度4℃，冷冻离心10min。 

本发明各步骤中，所述的旋转蒸发的条件优选为转速20-40rpm、温度40-50℃和真空度为0.1MPa。 

本发明各步骤中，所述的沉淀均可进行冷冻干燥，所述的冷冻干燥的条件优选为-40℃、0.10mbar下真空冷冻干燥48h。 

抗氧化实验：将提取得到的含有亨氏马尾藻多糖的提取物及亨氏马尾藻多糖进行体外抗氧化试验，结果表明，提取得到的含有亨氏马尾藻多糖的提取物及亨氏马尾藻多糖具有很高的清除超氧阴离子自由基、羟基自由基的活性。 

本发明中所用的计算公式如下： 

亨氏马尾藻粗多糖得率=亨氏马尾藻粗多糖质量÷亨氏马尾藻原料质量×100%； 

总得率=各步得率之和； 

多糖回收率=纯化后产物中多糖的质量÷纯化前产物中多糖的质量×100%； 

蛋白质脱除率=（纯化前产物中蛋白质的质量－纯化后产物中蛋白质的质量）÷纯化前产物中蛋白质的质量×100%。 

本发明的优点和产生的有益效果： 

1、本发明亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物均可作为有效的天然抗氧化剂，也可用于制备抗氧化剂，且对人体无毒副作用。由于亨氏马尾藻是一种分布较广的大型褐藻，来源广泛，可降低抗氧化剂的 成本。 

2、本发明首创性地从亨氏马尾藻中提取出抗氧化活性多糖，开创了亨氏马尾藻利用的新途径，解决了亨氏马尾藻利用不充分的问题，提高了亨氏马尾藻的利用率，增加了经济效益，为亨氏马尾藻的开发利用奠定了基础。 

3、本发明亨氏马尾藻多糖的抗氧化活性显著，亨氏马尾藻多糖低浓度时就可达到很高的清除率，且清除率与亨氏马尾藻多糖浓度呈一定的量效关系。在亨氏马尾藻多糖浓度为0.07mg/mL时，亨氏马尾藻多糖对羟基自由基的清除率可达到65%以上；在亨氏马尾藻多糖浓度为0.07mg/mL时，亨氏马尾藻多糖对超氧阴离子自由基的清除率可达到40%以上。 

4、本发明优选条件中采用超声波辅助提取方法对亨氏马尾藻多糖进行提取，提取时间只需30min，与传统的热水浸提法（2-3h）相比，可缩短时间4-6倍，显著增加提取效率，降低制备成本。 

5、本发明利用径向流色谱来初步纯化马尾藻多糖，多糖回收率可达92.06%-97.79%，蛋白脱除率了达到55.08%-92.86%，获得多糖的纯度显著增加。 

6、本发明采用的径向流色谱与传统的轴向流色谱相比，具有上样流速快、操作压力低（不超过0.1MPa），洗脱剂（纯水）用量少且无污染、线性放大容易、样品处理量大等优势，从而显著降低生产成本，提高产品质量。 

7、本发明在不影响分离效率的前提下，色谱分离操作时间短（一般只需40min-60min），有利于提高亨氏马尾藻多糖的生物活性，增加回收率和多糖含量，符合功能性保健食品或生物医药行业的要求。 

附图说明

图1为径向流前后亨氏马尾藻多糖含量的变化； 

图2为径向流前后蛋白含量的变化； 

图3为亨氏马尾藻多糖对羟基自由基的清除作用； 

图4为亨氏马尾藻多糖对超氧阴离子自由基的清除作用。 

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述，但本发明的保护范围并不仅限于此： 

占空比指一个周期内方波为高值的时间与方波为低值的时间之比。 

多糖分子量分布的测试方法包括：高效液相色谱法，用不同分子量的葡聚糖做标准品，测定其出峰时间和分子量之间的关系，绘制标准曲线，根据多糖样品的出峰时间得出多糖分子量分布。 

本发明亨氏马尾藻多糖为多种多糖的混合物。 

实施例1： 

（1）亨氏马尾藻提取物的获得 

取亨氏马尾藻适量，用清水进行漂洗，自然阴干，置于烘箱内45℃烘干，用粉碎机粉碎，过90目筛。准确称取90目亨氏马尾藻粉末30g，置于2L的烧杯中，加入1800mL、pH7.0的蒸馏水，以超声功率480w、占空比1:1进行超声波辅助提取30min。超声完成后冷却静置1h，然后以转速为10000rpm、温度4℃冷冻离心10min，得1600mL一次上清液和沉淀。 

（2）不同分子量组分的获得 

取上述所得1600mL一次上清液，旋转蒸发浓缩至体积为200mL（即上清液体积的1/8），加入体积百分浓度为95%的乙醇水溶液使样品溶液中乙醇的终体积百分浓度为30%，静置过夜。经静置过夜后的样品在1000rpm，4℃离心10min，分离得到二次上清液和沉淀，所得沉淀即为30%乙醇浓度下醇沉下来的亨氏马尾藻粗多糖，沉淀进行冷冻干燥，记作：亨氏马尾藻粗多糖F₁，备用。二次上清液中逐步加体积百分浓度为95%的乙醇水溶液，使乙醇终浓度依次达到60%（体积百分浓度），静置过夜后在1000rpm，4℃离心10min，分离得到三次上清液和沉淀，所得沉淀即为60%醇沉浓度下的亨氏马尾藻粗多糖，沉淀进行冷冻干燥，记作：亨氏马尾藻粗多糖F₂，备用。三次上清液中继续加入体积百分浓度为95%的乙醇水溶液，使乙醇终浓度达到80%（体积百分浓度），静置过夜后在1000rpm，4℃离心10min，分离得到四次上清液和沉淀，所得沉淀即为80%醇沉浓度下的亨氏马尾藻粗多糖，沉淀进行冷冻干燥，记作：亨氏马尾藻粗多糖 F3，备用。三种亨氏马尾藻粗多糖均为灰褐色棉絮状固体，得率分别为1.2667%、1.2477%、1.7420%，总得率为4.2564%。 

上述冷冻干燥的条件均为-40℃、0.10mbar下真空冷冻干燥48h。 

亨氏马尾藻粗多糖F₁中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为21%，蛋白质的质量百分含量为1.18%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-700万道尔顿。 

亨氏马尾藻粗多糖F₂中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为27%，蛋白质的质量百分含量为1.4%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在160万-900万道尔顿。 

亨氏马尾藻粗多糖F₃中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为28%，蛋白质的质量百分含量为1.42%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-200万道尔顿。 

（3）径向流色谱纯化 

分离介质预处理：取适量A103S弱碱性阴离子交换剂（大孔弱碱苯乙烯系树脂）填料→质量百分浓度为2%的NaOH水溶液浸泡3h→纯水洗涤至中性→质量百分浓度为3%HCl水溶液浸泡3h→纯水洗涤至中性→质量百分浓度为2%的NaOH水溶液浸泡3h→纯水洗涤至中性。 

装柱：将经过预处理的离子交换剂脱气后，手动装填于径向流色谱柱中；装柱后，用5倍体积纯水先反向冲洗柱子，再用5倍体积纯水正向冲洗柱子，以使柱子平衡； 

上样、洗脱：取1.000g冻干后的亨氏马尾藻粗多糖F₁，溶于50mL蒸馏水中，配成浓度为20mg/mL溶液，1000rpm，4℃离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜，用恒流泵于5mL/min的流速下上样，然后用蒸馏水以40mL/min进行洗脱，至苯酚-硫酸法无多糖检出，自动部分收集器收集洗脱液，同时间隔测定多糖含量，整个洗脱过程耗时40min。 

收集洗脱液：将所有洗脱液收集，合并混匀，分别用苯酚-硫酸法及Folin-酚法测定其中的多糖和蛋白质含量，计算多糖回收率和蛋白质脱除率； 

填料再生：所用离子交换剂经再生后可重复使用，即利用2mol/L NaCl水溶液洗脱，至洗脱液无色透明，且用Folin-酚法基本无蛋白检出，再用 蒸馏水洗脱至无NaCl； 

浓缩：洗脱液采用真空浓缩，减少浓缩过程中的损失，其条件为转速20rpm、温度（45±5）℃、真空度为0.1MPa。 

干燥：洗脱液浓缩后在-40℃、0.10mbar下真空冷冻干燥48h，得到纯化后的产物：亨氏马尾藻多糖提取物F₁。 

亨氏马尾藻多糖提取物F₁中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为19.47%，蛋白质的质量百分含量为0.53%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-700万道尔顿。由图1可以看出径向流色谱前后亨氏马尾藻多糖提取物F₁的多糖含量变化不大，多糖的损失很少，多糖回收率高达92.06%，如图2所示蛋白质在径向流色谱前后的变化较小，由于F₁中的糖主要由糖蛋白组成，所以蛋白脱除率不高，达到55.08%。由于径向流色谱纯化所需时间较短，整个洗脱过程只需要40min，多糖天然抗氧化活性未受到破坏。 

实施例2： 

其他操作如实施例1，不同之处在于： 

上样、洗脱：取800mg冻干后的亨氏马尾藻粗多糖F₂，溶于40mL蒸馏水中，配成浓度为20mg/mL溶液，1000rpm，4℃离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜，用恒流泵于5mL/min的流速下上样，然后用蒸馏水以40mL/min进行洗脱，至苯酚-硫酸法无多糖检出，自动部分收集器收集洗脱液，同时间隔测定多糖含量，整个洗脱过程耗时42min。 

由图1可以看出径向流色谱前后亨氏马尾藻多糖提取物F2的多糖回收率高达97.79%，如图2蛋白脱除率高达92.86%。整个洗脱过程只需要42min。 

亨氏马尾藻多糖提取物F₂中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为26%，蛋白质的质量百分含量为0.1%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在160万-900万道尔顿。 

实施例3： 

其他操作如实施例1，不同之处在于： 

上样、洗脱：取500mg冻干后的亨氏马尾藻粗多糖F₃，溶于50mL蒸馏水中，配成浓度为10mg/mL溶液，1000rpm，4℃离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜，用恒流泵于5mL/min的流速下上样，然后用蒸馏水以40mL/min进行洗脱，至苯酚-硫酸法无多糖检出，自动部分收集器收集洗脱液，同时间隔测定多糖含量，整个洗脱过程耗时40min。 

由图1可以看出径向流色谱前后亨氏马尾藻多糖提取物F₃的多糖回收率高达96.39%，如图2蛋白脱除率高达92.96%。整个洗脱过程只需要40min。 

亨氏马尾藻多糖提取物F₃中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为27.52%，蛋白质的质量百分含量为0.1%，亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-200万道尔顿。 

下面结合具体实验数据对本发明的亨氏马尾藻多糖的抗氧化活性做进一步说明： 

（1）亨氏马尾藻多糖对羟基自由基的清除作用 

利用Fenton反应制备羟自由基（·OH）的体系是在国内外有广泛应用的一种经典自由基生成体系，它的基本原理是过氧化氢跟二价铁离子反应，生成水和氧气，同时在反应过程中产生羟基自由基（·OH），而与此同时，水杨酸对羟基自由基（·OH）又具备特异识别能力。在体系中加入水杨酸能够敏锐的捕捉到羟基自由基（·OH），生成紫色产物，该产物在510nm处具备强吸收峰。但若加入具有清除作用的物质，便会与水杨酸竞争，从而使有色产物生成量减少，吸光度降低。如图3所示，结果表明，实施例1、2、3中得到的纯化后的三种不同分子量范围的亨氏马尾藻多糖提取物F₁、亨氏马尾藻多糖提取物F₂、亨氏马尾藻多糖提取物F₃都具有很强的清除羟基自由基的效果，低浓度（此浓度已经换算成亨氏马尾藻多糖浓度）时就可达到很高的清除率，且清除率与多糖浓度呈一定的量效关系，在体系中多糖浓度为0.07mg/mL时，三种多糖的清除率均可达到65%以上，其中亨氏马尾藻多糖提取物F₂对羟基自由基的清除能力最强，在0.07mg/mL时达到71.84%，三种多糖的IC₅₀值分别为0.0084mg/mL、0.0075mg/mL、0.0180mg/mL，清除能力为F₂>F₁>F₃,以上数据表明亨氏 马尾藻多糖对羟基自由基有显著的清除活性，其中分子量分布在160万-900万道尔顿的亨氏马尾藻多糖的清除活性最好。 

（2）亨氏马尾藻多糖对超氧阴离子自由基的清除作用 

邻苯三酚在碱性条件下迅速自氧化，自氧化过程中产生超氧阴离子（O2·），超氧阴离子（O2·）加速邻苯三酚自氧化速率，同时生成有色中间产物，有色产物在325nm有强烈的光吸收。该体系常用于测定超氧化物歧化酶(SOD)或类SOD活性物质对O2·的抑制作用。从反应动力学角度考虑，如果活性物质对O2·具有清除作用，则会减缓该反应的进行。由于自氧化速率依赖于超氧阴离子（O2·）的浓度，清除超氧阴离子（O2·），则抑制自氧化反应，阻止中间产物的积累，从而评价提取液清除超氧阴离子（O2·）的能力。如图4所示，结果表明，实施例1、2、3中得到的纯化后的三种不同分子量范围的亨氏马尾藻多糖提取物F₁、亨氏马尾藻多糖提取物F₂、亨氏马尾藻多糖提取物F₃都具有很强的清除超氧阴离子自由基的效果，低浓度（此浓度已经换算成亨氏马尾藻多糖浓度）时就可达到很高的清除率，且清除率与多糖浓度呈一定的量效关系，亨氏马尾藻多糖提取物F₂对超氧阴离子自由基的清除能力最强，在0.07mg/mL时达到74.34%，三种多糖的IC₅₀值分别为0.0886mg/mL、0.0424mg/mL、0.0605mg/mL，清除能力为F₂>F₃>F₁,以上数据表明亨氏马尾藻多糖对超氧阴离子自由基有显著的清除活性，其中分子量分布在160万-900万道尔顿的亨氏马尾藻多糖的清除能力最好。 

上述实验结果表明，本发明亨氏马尾藻多糖或含亨氏马尾藻多糖的提取物具有抗氧化性能，能够作为或制备抗氧化剂。 

本发明中，由于起抗氧化性能的活性物质为亨氏马尾藻多糖，因此亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物均具有抗氧化性能，其抗氧化性能的强弱与体系中亨氏马尾藻多糖的浓度呈一定的量效关系，一般体系中亨氏马尾藻多糖的浓度越高，抗氧化性能越强，浓度过高时抗氧化性能趋于平稳。 

本发明制备方法中参数的适度变化并不影响亨氏马尾藻多糖的制备，因此本发明制备方法中任意参数的组合均可实现亨氏马尾藻多糖的制备。 在此不再赘述。 

Claims (5)

1.一种亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，其特征在于，所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物在制备抗氧化剂中的应用，所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-900万道尔顿。

2.根据权利要求1所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，其特征在于，所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-700万道尔顿。

3.根据权利要求1所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，其特征在于，所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在160万-900万道尔顿。

4.根据权利要求1所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，其特征在于，所述的亨氏马尾藻多糖的分子量分布在150万-200万道尔顿。

5.根据权利要求1-4任一项所述的亨氏马尾藻多糖或含有亨氏马尾藻多糖的提取物的应用，其特征在于，所述的含有亨氏马尾藻多糖的提取物中亨氏马尾藻多糖的质量百分含量为19%-28%。