CN102940145A - 一种发酵型水产保健饲料的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种发酵型水产保健饲料的制备方法，旨在提供一种安全可靠，绿色环保水产动物用发酵饲料；其制备方法，包括下述步骤：1）一级菌种制备；（2）二级菌种制备，将步骤1）中制得的酵母菌菌液和乳酸菌菌液按0.5～5%体积比的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养；3）三级菌种制备，按2～10%体积的接种量将步骤2）中制得比酵母菌菌液和乳酸菌菌液的酵母菌菌液分别接入盛有酵母菌基本培养基和乳酸菌基本培养基的发酵罐中培养；4）接种将步骤3）所得的乳酸菌三级菌种和酵母菌三级菌种分别以0.25~2%的质量分数接种至基础饲料，并混合均匀，调节水分至终浓度为34~38%；属于饲料技术领域。
Description
技术领域
本发明涉及生物保健饲料的制备，具体地说，是一种发酵型水产保健饲料的制备方法，属于饲料技术领域。
背景技术
随着畜牧业的快速发展，抗生素等药品的大量使用，饲料安全(食品安全)问题已成为养殖业和消费者共同关注的焦点。世界发达国家政府相继下达了对抗生素使用的限令和禁令。欧洲国家近十年来全面禁止在饲料中添加抗生素，我国在饲料中批准使用的抗生素种类也在逐渐减少。面对如此形势，我们必须从源头做起，而发酵饲料是一条很好的途径。
发酵饲料是指在人工控制条件下，有益微生物通过自身的代谢活动，将植物性、动物性和矿物性原料分解或转化为微生物菌体蛋白、生物活性肽、氨基酸、免疫增强剂、益生菌、有机酸、维生素、复合酶制剂和未知生长因子（GDF）为一体的生物安全饲料。这是一个体外生物作用的过程，相当于消化器官的体外延长和消化时间的增加。经体外预消化后的饲料气味酸香，易于消化、吸收，从而提高了饲料的适口性和消化吸收利用率，加速了动物的健康生长，降低饲料成本。除此之外，通过发酵过程，还可消除原料中的抗营养因子、有毒、有害物质，还能大大减少抗生素等药物类添加剂的使用，从而达到安全饲喂的目的。
诚然，并非所有发酵饲料都是“安全的发酵饲料”。目前，我国发酵饲料生产面临如下问题：发酵设备落后、专业人员缺乏；管理、卫生条件差；危险的生料发酵。所谓“生料”是指没有进行消毒的原料，这将导致原料中的毒素不能被彻底脱除。在发酵饲料中，添加免疫星（主要成分为：甘露寡糖≥20%，β-葡聚糖≥20%）等霉菌毒素吸附剂，提高发酵饲料安全性的报道，至今未见有相关报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种发酵型水产保健饲料的制备方法，对水产全价饲料进行发酵，安全可靠，绿色环保水产动物用发酵饲料。
本发明是通过以下技术方案实现的，本发明包括以下步骤：
（1）一级菌种制备
从产朊假丝酵母菌试管固体斜面培养基上挑取一环酵母菌，接种到固体酵母菌种子培养基中，28~35℃培养箱下，培养24～48小时后，制得酵母菌一级菌种；从乳酸菌试管固体斜面培养基上挑取一环乳酸菌，接种到盛有乳酸菌液体种子培养基三角瓶中，35~40℃下，静置培养24～48小时，制得乳酸菌一级菌种；
（2）二级菌种制备
将步骤（1）中制得的酵母菌菌液按0.5～5%体积比的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，通气搅拌发酵24～72小时，温度为28～37℃，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌菌液按0.5～5%体积比的接种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养24～48小时，温度为35～40℃，制得乳酸菌二级菌种；
（3）三级菌种制备
按2～10%体积比的接种量将步骤（2）中制得的酵母菌菌液接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为6.5～7.5，通气搅拌发酵24～72小时，制得酵母菌三级菌种；按2～10%体积比的接种量将步骤（2）中制得的乳酸菌菌液接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为5.5～6，搅拌发酵24～72小时，制得乳酸菌三级菌种；
（4）接种
将豆粕60~75%，玉米粉10~20%，麸皮5~10%，脱核酵母3~10%，免疫星1~8%，植物油1~3%，食盐0.1~0.5%，磷酸二氢钙0.5~1%，水产多矿0.05~0.2%，50%氯化胆碱0.1~0.3%混合制备基础饲料，将步骤（3）所得的乳酸菌三级菌种和酵母菌三级菌种分别以0.25~2%的质量分数接种至基础饲料，并混合均匀，调节水分至终浓度为34~38%；
（5）包装
将（4）中的饲料装入已安置单向阀的塑料袋后，密闭封装，室温下，自然发酵10~25天，即得成品。
上述的发酵型水产保健饲料的制备方法，步骤（1）中所述产朊假丝酵母菌斜面培养基包括以下组分：葡萄糖5g/L，蛋白胨2g/L，酵母膏1g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂15g/L，酵母菌斜面培养基的pH为6.5～7.5，灭菌条件：115℃下灭菌20min；所述乳酸菌斜面培养基包括以下组分：脱脂奶粉100.0g/L，酵母粉1g/L，K2HPO4 5g/L，琼脂15g/L，灭菌条件：115℃下灭菌20min。
上述的发酵型水产保健饲料的制备方法，步骤（2）中所述酵母菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/L，尿素1g/L，K2HPO4 0.1g/L，MgSO4·7H2O 0.1g/L，玉米浆0.6g，酵母菌种子培养基的pH为6.5～7.5；所述乳酸菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，K2HPO4 2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO4·H2O 0.33g/L，乳酸菌种子培养基的pH为6.0～6.5。
上述的发酵型水产保健饲料的制备方法，步骤（3）中所述酵母菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖10g/L，尿素1g/L，K2HPO4 0.1g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，玉米浆0.1g/L，CaCO3 3g/L， pH为6.5～7.5；所述乳酸菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO4·H2O 0.33g/L，pH为6.0～6.5。
上述的发酵型水产保健饲料的制备方法，步骤（3）中的PH值用质量浓度20～30%的NaOH溶液调整罐中pH为5.5～6。
与现有技术相比，本发明具有下述有益效果：
1、本发明摒弃了传统发酵对原料的低要求，特别提出对有害微生物以及霉菌毒素等的检测，从源头提高饲料的安全性；
2、结合了微生物发酵和免疫星的使用，使原料中可能残留的少量有毒有害物质，能够被彻底脱除，进一步巩固了饲料安全性；
3、脱核酵母的使用，提高了水产动物的免疫力和成活率，增加了产量和养殖收益。
4、成品中，有益微生物的大量繁殖，增加了菌体蛋白；乳酸菌产生的乳酸对水产动物的肠道起到一定的调节作用；经长时间、充分的发酵，微生物产生了大量的酶类、多糖、酚类物质，既消除了的饲料抗营养因子，又将饲料中的大分子被转化为小分子，这样，饲料中的营养可被水产动物充分吸收、利用，且其***物及***物中的养分减少，有利于降低水体环境的压力和病原微生物的滋生；
5、所得的成品用途广，主要用于部分替代中高档水产动物饲料。
6、饲料安全可靠，绿色环保。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，对本发明做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
（1）一级菌种制备
从酵母菌试管固体斜面培养基上挑取一环酵母菌，接种到固体酵母菌种子培养基中，30℃培养箱下，搅拌转速150rpm，培养24小时后，制得酵母菌一级菌种，活化并观察其纯度未发现杂菌；同理，从乳酸菌试管固体斜面培养基上挑取一环乳酸菌，接种到盛有乳酸菌液体种子培养基三角瓶中，35℃下，静置培养24小时，制得乳酸菌一级菌种，活化并镜检菌种纯度未发现杂菌；
（2）二级菌种制备
将步骤（1）中制得的酵母菌菌液按1%（v/v）的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，通气搅拌发酵24小时，温度28℃，搅拌转速280rpm，通气量2L/（L·min），检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.65，无杂菌生成，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌菌液按1%（v/v）的接种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养24小时，检测菌液浓度和纯度，制得乳酸菌二级菌种，OD600数值为0.65，无杂菌生成；
（3）三级菌种制备
按2%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的酵母菌菌液接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为6.5，通气搅拌发酵24小时，温度为28℃，搅拌转速500rpm，通气量2L/（L·min），检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.65，无杂菌生成，制得酵母菌三级菌种；按2%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的乳酸菌菌液接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，用质量浓度25%的NaOH溶液调整pH值为5.5，搅拌发酵24小时，温度37℃，搅拌转速70rpm检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.65，无杂菌生成，制得乳酸菌三级菌种；
（4）接种
将豆粕（蛋白含量43%）65%，玉米粉15%，麸皮5%，脱核酵母7%，免疫星3%，植物油2%，食盐0.2%，磷酸二氢钙0.6%，水产多矿0.1%，50%氯化胆碱0.1%混合制备基础饲料。其中，基础饲料中的各个组分按饲料卫生标准的要求，分别检测霉菌、细菌、沙门氏菌、黄曲霉毒素等指标。检测合格后，粉碎机粉碎混合制备基础饲料。将步骤（3）所得的乳酸菌三级菌种和酵母菌三级菌种分别以1%的质量分数，接种至基础饲料中，并混合均匀，调节水分至终浓度为35%。
（5）包装
将（4）中的饲料装入已安置单向阀（袋内气体能排出，袋外气体不能进入，可防止空气中有害菌的进入）的塑料袋后，密闭封装， 30℃下，发酵15天以上，即得成品。
用此饲料替代南美白对虾饲料，5cm前，替代10%的传统虾料，5cm后替代5%传统虾料，结果显示，与对照组相比，料比降低0.15，发病率降低8.6%，减少用药和换水费用146元/亩，提高产量7.8%。
实施例2
（1）一级菌种制备
从酵母菌试管固体斜面培养基上挑取一环酵母菌，接种到固体酵母菌种子培养基中，30℃培养箱下，搅拌转速260rpm，培养24小时后，制得酵母菌一级菌种，活化并观察其纯度，OD600数值为0.60，无杂菌生成；同理，从乳酸菌试管固体斜面培养基上挑取一环乳酸菌，接种到盛有乳酸菌液体种子培养基三角瓶中，37℃下，静置培养24小时，活化并镜检菌种纯度，OD600数值为0.65，制得乳酸菌一级菌种，无杂菌生成；
（2）二级菌种制备
将步骤（1）中制得的酵母菌一级菌种按2%（v/v）的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，通气搅拌发酵48小时，温度37℃，搅拌转速500rpm，通气量3L/（L·min），检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.75，无杂菌生成，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌一级菌种按2%（v/v）的接种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养48小时，制得乳酸菌二级菌种，检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.71，无杂菌生成；
（3）三级菌种制备
按2%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的酵母菌二级菌种接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为7.0，通气搅拌发酵48小时，温度为37℃，搅拌转速500rpm，通气量4L/（L·min）检测菌液浓度和纯度，制得酵母菌三级菌种；按3%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的乳酸菌二级菌种接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，用质量浓度20%的NaOH溶液调整pH值为5.8，搅拌发酵48小时，温度38℃，搅拌转速100rpm；检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.65，无杂菌生成，制得乳酸菌三级菌种；
（4）接种
将豆粕（蛋白含量43%）70%，玉米粉8%，麸皮5%，脱核酵母10%，免疫星3%，植物油1%，食盐0.3，磷酸二氢钙0.5%，水产多矿0.1%，50%氯化胆碱0.1%混合制备基础饲料，其中，基础饲料中的各个组分按饲料卫生标准的要求，分别检测霉菌、细菌、沙门氏菌、黄曲霉毒素等指标。检测合格后，粉碎机粉碎混合制备基础饲料。将步骤（3）所得的乳酸菌三级菌种以0.25%的质量分数接种至基础饲料，酵母菌三级菌种以2.5%的质量分数接种至基础饲料，并混合均匀，调节水分至终浓度为36%。
（5）包装
将（4）中的饲料装入已安置单向阀（袋内气体能排出，袋外气体不能进入，可防止空气中有害菌的进入）的塑料袋后，密闭封装，37℃下，发酵12天以上，即可使用。
用此饲料5%取代传统鳗鱼料饲喂日本鳗鱼，与对照组相比，实验组中，鳗鱼生长速度较快，提前5天上市；发病率和死亡率分别6.3%和4.1%，其中，肠炎发病率降低15.6%。
实施例3
（1）一级菌种制备
从酵母菌试管固体斜面培养基上挑取一环酵母菌，接种到固体酵母菌种子培养基中， 35℃培养箱下，搅拌转速200rpm，培养24小时后，制得酵母菌一级菌种，活化并观察其纯度，OD600数值为0.75，无杂菌生成；同理，从乳酸菌试管固体斜面培养基上挑取一环乳酸菌，接种到盛有乳酸菌液体种子培养基三角瓶中，35℃下，静置培养24小时，制得乳酸菌一级菌种，活化并镜检菌种纯度，OD600数值为0.80，无杂菌生成；
（2）二级菌种制备
将步骤（1）中制得的酵母菌一级菌种按3%（v/v）的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，通气搅拌发酵43小时，温度30℃，搅拌转速350rpm，通气量2.5L/（L·min），检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.75，无杂菌生成，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌一级菌种按3%（v/v）的接种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养43小时，制得乳酸菌二级菌种，检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.70，无杂菌生成；
（3）三级菌种制备
按5%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的酵母菌二级菌种接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为6.5，通气搅拌发酵24小时，温度为30℃，搅拌转速400rpm，通气量4L/（L·min）检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.80，无杂菌生成，制得酵母菌三级菌种；按4%（v/v）的接种量将步骤（2）中制得的乳酸菌二级菌种接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，用质量浓度30%的NaOH溶液调整pH值为5.5，搅拌发酵24小时，温度40℃，搅拌转速50rpm，检测菌液浓度和纯度，OD600数值为0.65，无杂菌生成，制得乳酸菌三级菌种；
（4）接种
将豆粕（蛋白含量43%）65%，玉米粉10%，麸皮7%，脱核酵母8%，免疫星3%，植物油3%，食盐0.5，磷酸二氢钙0.8%，水产多矿0.2%，50%氯化胆碱0.3%混合制备基础饲料，其中，基础饲料中的各个组分按饲料卫生标准的要求，分别检测霉菌、细菌、沙门氏菌、黄曲霉毒素等指标。检测合格后，粉碎机粉碎混合制备基础饲料。将步骤（3）所得的乳酸菌三级菌种和酵母菌三级菌种分别以1.1%的质量分数接种至基础饲料中，并混合均匀，调节水分至终浓度为38%。
（5）包装
将（4）中的饲料装入已安置单向阀（袋内气体能排出，袋外气体不能进入，可防止空气中有害菌的进入）的塑料袋后，密闭封装，28℃下，发酵16天以上，即可使用。
用此饲料5%替代传统草虾饲料投喂草虾，成活率提高7.3%，亩产增加9.5%，草虾肠炎疾病减少18.2%，每周减少换水一次，虾体匀称，活力强，卖相好。
Claims (8)
1.一种发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
（1）一级菌种制备
从产朊假丝酵母菌试管固体斜面培养基上挑取一环酵母菌，接种到固体酵母菌种子培养基中，28~35℃培养箱下，培养24～48小时后，制得酵母菌一级菌种；从乳酸菌试管固体斜面培养基上挑取一环乳酸菌，接种到盛有乳酸菌液体种子培养基三角瓶中，35~40℃下，静置培养24～48小时，制得乳酸菌一级菌种；
（2）二级菌种制备
将步骤（1）中制得的酵母菌菌液按0.5～5%体积比的接种量接入盛有液体酵母菌种子培养基的种子发酵罐中，通气搅拌发酵24～72小时，温度为28～37℃，制得酵母菌二级菌种；将步骤（1）制得的乳酸菌菌液按0.5～5%体积比的接种量接入盛有液体乳酸菌种子培养基的种子发酵罐中，静置培养24～48小时，温度为35～40℃，制得乳酸菌二级菌种；
（3）三级菌种制备
按2～10%体积比的接种量将步骤（2）中制得的酵母菌菌液接入盛有酵母菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为6.5～7.5，通气搅拌发酵24～72小时，制得酵母菌三级菌种；按2～10%体积比的接种量将步骤（2）中制得的乳酸菌菌液接入盛有乳酸菌基本培养基的发酵罐中，调整pH值为5.5～6，搅拌发酵24～72小时，制得乳酸菌三级菌种；
（4）接种
将豆粕60~75%，玉米粉10~20%，麸皮5~10%，脱核酵母3~10%，免疫星1~8%，植物油1~3%，食盐0.1~0.5%，磷酸二氢钙0.5~1%，水产多矿0.05~0.2%，50%氯化胆碱0.1~0.3%混合制备基础饲料，将步骤（3）所得的乳酸菌三级菌种和酵母菌三级菌种分别以0.25~2%的质量分数接种至基础饲料，并混合均匀，调节水分至终浓度为34~38%；
（5）包装
将（4）中的饲料装入已安置单向阀的塑料袋后，密闭封装，室温下，自然发酵10~25天，即得成品。
2.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述产朊假丝酵母菌斜面培养基包括以下组分：葡萄糖5g/L，蛋白胨2g/L，酵母膏1g/L，氯化钠0.5g/L，琼脂15g/L，酵母菌斜面培养基的pH为6.5～7.5。
3.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（1）中所述乳酸菌斜面培养基包括以下组分：脱脂奶粉100.0g/L，酵母粉1g/L，K2HPO4 5g/L，琼脂15g/L。
4.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述酵母菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖10 g/L，尿素1g/L，K2HPO4 0.1g/L，MgSO4·7H2O 0.1g/L，玉米浆0.6g，酵母菌种子培养基的pH为6.5～7.5。
5.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（2）中所述乳酸菌种子培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，K2HPO4 2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO4·H2O 0.33g/L，乳酸菌种子培养基的pH为6.0～6.5。
6.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述酵母菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖10g/L，尿素1g/L，K2HPO4 0.1g/L，MgSO4·7H2O 0.2g/L，玉米浆0.1g/L，CaCO3 3g/L， pH为6.5～7.5。
7.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（3）中所述乳酸菌基本培养基包括以下组分：葡萄糖20.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，牛肉膏10.0g/L，酵母浸膏5.0g/L，无水乙酸钠5.0g/L，磷酸氢二钾2.0g/L，柠檬酸氢二铵2.0g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO4·H2O 0.33g/L，pH为6.0～6.5。
8.根据权利要求1所述的发酵型水产保健饲料的制备方法，其特征在于，步骤（3）中的调节PH值采用质量浓度20～30%的NaOH溶液调节。
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