CN102919133A - 一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的方法。该方法为在无菌超净工作台上，将生长健壮的无菌丛生芽用剪刀剪下，接种到如下生根培养基中：1/2WPM基本培养基，添加NAA10mg/L，蔗糖10g/L，活性炭0.3g/L，琼脂粉6g/L。先进行3天的暗培养，然后光培养7天结束后，在无菌超净工作台上，将芽苗取出，转接到不含激素的1/2WPM基本培养基中，继续进行30-40天的光培养。使用本方法组培苗生根率能提高30％以上，大大提高了紫水晶组培苗的生根率，且此方法处理得到的组培苗根系较粗壮、根系二级分支较多，更易于移栽成活。
Description
一、技术领域
本发明属于植物栽培技术领域，尤其是木本观赏植物组培快繁方法领域，具体涉及一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法。
二、背景技术
高山杜鹃是杜鹃花科杜鹃花属中常绿阔叶种类及其杂交后代的总称，常生长于海拔1000m以上的高山上。紫水晶(Rhododendron hybrids‘Roseum Elegans’)是目前市场上比较受欢迎的高山杜鹃之一，常绿灌木或小乔木，高可达3米，花期4-5月份，花为略显玫红色的丁香紫色，漏斗状，单朵花直径达6cm，花瓣带有棕色花纹图案，总状伞型花序直径可达15-30cm，叶大色深，特耐寒且耐热，-26℃下不落叶，抗病力强。紫水晶因其花序硕大、花色鲜艳、叶片四季常青而备受人们的喜爱，不仅是国内高档的年宵花卉，也是国际上高档的园林绿化美化材料，必将成为我国高档园林绿化树种应用的新秀，具有广阔的市场开发前景。
目前，国内市场上销售的高山杜鹃基本全是从国外进口，每盆售价高达数百至上千元，价格一直居高不下，种苗市场紧俏。且在栽培过程中发现高山杜鹃扦插成活率低、种子繁殖性状分离等问题，因此国内已经有科研工作者从事高山杜鹃组织培养技术的研究，已成功建立组织培养快繁体系的种类有马缨杜鹃、云锦杜鹃以及一些国外品种(Lee’s Dark Purple、Rocket、Jean de Marle Montage、Nova Zembla、Cosmopolitan等)，但在紫水晶组织培养特别是生根技术方面的研究仍未见报道。
三、发明内容
本发明的目的在于提供一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法。
为实现本发明的目的，本发明提供了如下技术方案：
1、一种促进高山杜鹃组培苗生根的方法，其内容包括：在无菌超净工作台上，将生长健壮的无菌丛生芽用剪刀剪下，接种到如下生根培养基中：1/2WPM基本培养基，添加NAA10mg/L，蔗糖10g/L，活性炭0.3g/L，琼脂粉6g/L。先进行3天的暗培养，然后光培养7天结束后，在无菌超净工作台上，将芽苗取出，转接到不含激素的1/2WPM基本培养基中，继续进行30-40天的光培养。
2、在本发明中：WPM培养基是参考Lloyd G and McCown B(1980)的文献，1/2WPM即大量元素和微量元素用量为原文献里元素用量的一半，而其他元素(包括有机元素和铁盐)均不变。参考文献：LloydG and McCown B.Commercially-feasible micropropagation of mountain laurel，Kalmia latifolia，by use of shoottip culture[J].Combined Proceedings-International Plant Propagators’Society，1980，30：421-427
3、在本发明中：NAA即为萘乙酸(1-naphthylacetic acid)。
4、在本发明中：采用的是100ml的锥形玻璃瓶作为培养器皿，每瓶中分装的培养基为40-50ml，培养基添加激素并调至pH值53-5.8后，分装，在121℃下高压灭菌20min。
5、在本发明中：光培养条件为白天温度为25±1℃，夜间温度为20±1℃，光照强度为50μmol·m-2·s-1，每天光照12h。暗培养条件为白天温度为25±1℃，夜间温度为20±1℃，无光照。
本发明经过以下试验，优选总结出上述最佳的技术参数：
(1)、应用正交设计，从不同激素种类、激素浓度、转空白培养前天数、糖用量4个方面探讨紫水晶组培苗生根的情况，应用L9(3)4正交表，共设9个处理，以不添加激素和30g/L糖为对照，实验设计及结果如下表1：
表1高山杜鹃紫水晶组培生根正交试验结果分析表
根据正交分析，当激素种类选择NAA、浓度为10mg/L、转空白培养前天数为10d以及糖用量为10g/L时，生根效果将会最佳。
(2)、在试验(1)的基础上，将最优试验处理组合(培养基中NAA 10mg/L，转空白培养前天数为10d以及糖用量为10g/L)与正交试验4进行比较试验。结果表明最优试验处理组合和正交试验4的生根率分别为56.8％、42.1％，二者存在着显著差异，且最优试验处理组合的组培苗根系较粗壮、根系二级分支较多。
具体实施方式
为进一步了解本发明的发明内容及功效，兹例举以下实施例，实施例中所使用的实验方法若无特殊说明均为常规方法：
1、无菌丛生芽的准备：生根试验开始前60天，选取健壮无病虫害的紫水晶植株带芽茎段为外植体，进行外植体的清洗、消毒、芽萌发及丛生芽诱导，具体步骤参考文献：刘晓青，苏家乐，项立平，等.高山杜鹃茎段组培培养和优化体系的建立[J].扬州大学学报(农业与生命科学版)，2007，28(3)：91-94.
2、培养基的准备：参考1980年Lloyd G and McCown B的文献里元素用量，分别将大量元素和微量元素用量减半，有机元素和铁盐用量不变，即为1/2WPM基本培养基。生根培养基是在基本培养基的基础上添加了10mg/L的NAA。基本培养基和生根培养基均是添加10g/L蔗糖、03g/L活性炭、6g/L琼脂粉，调pH值为53-5.8后，分装，在121℃下高压灭菌20min。
3、生根诱导：选取健壮的无菌丛生芽，在无菌超净工作台上，将丛生芽用剪刀剪下，接种到生根培养基中，先进行3天的暗培养，然后进行光培养7天，光培养结束后，在无菌超净工作台上，将芽苗取出，直接转接到不含激素的1/2WPM基本培养基中，继续进行30-40天的光培养。
4、驯化及移栽：将已生根的组培瓶苗，转移到阳面室内进行自然光温驯化5-7天，然后再将组培瓶的封口膜去掉，并在每瓶中添加10ml的蒸馏水，进行有菌条件驯化2-3天。然后，用镊子将组培苗轻轻的从瓶中取出，在清水中小心地将根部黏附的培养基清洗掉，并用0.1％多菌灵或0.3％-0.5％的高锰酸钾浸泡根系5分钟以消毒杀菌，然后移栽到已提前2天用5％的高锰酸钾进行消毒的栽培基质(泥炭∶珍珠岩＝4∶1)中，放置无加温加光的温室中，进行遮荫驯化3周，期间不定期的喷施1/2WPM营养液以保证足够的营养和湿度。3周后可进行常规田间养护管理。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，不是对本发明的具体限制，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法，其特征在于：在无菌超净工作台上，将生长健壮的无菌丛生芽用剪刀剪下，接种到如下生根培养基中：1/2WPM基本培养基，添加NAA10mg/L，蔗糖10g/L，活性炭0.3g/L，琼脂粉6g/L。先进行3天的暗培养，然后光培养7天结束后，在无菌超净工作台上，将芽苗取出，转接到不含激素的1/2WPM基本培养基中，继续进行30-40天的光培养。
2.根据权利要求1所述的促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法，其特征在于：WPM培养基是参考Lloyd G and McCown B(1980)的文献，1/2WPM即大量元素和微量元素用量在原文献里元素用量的一半，而其他元素(包括有机元素和铁盐)均不变。
3.根据权利要求1所述的促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法，其特征在于：NAA即为萘乙酸(l-naphthylacetic acid)。
4.根据权利要求1所述的促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法，其特征在于：采用的是100ml的锥形玻璃瓶作为培养器皿，每瓶中分装的培养基为40-50ml，培养基添加激素并调至pH值5.3-5.8后，分装，在121℃下高压灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的促进高山杜鹃紫水晶组培生根的技术方法，其特征在于：光培养条件为白天温度为25±1℃，夜间温度为20+1℃，光照强度为50μmol·m-2·s-1，每天光照12h。暗培养条件为白天温度为25±1℃，夜间温度为20±1℃，无光照。
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