CN102876646A - 一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法及其所用培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法及其所用培养基，属于生物工程技术领域。本发明采用廉价的麸皮、玉米芯、豆饼粉等农副产品为发酵基料，并添加适量的无机氮源、表面活性剂和无机盐等，利用黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S菌株曲盘发酵生产木聚糖酶。本发明提供了黑曲霉XZ-3S菌株实验室生产木聚糖酶的曲盘发酵培养基配方和培养条件，其成熟发酵曲料的酸性木聚糖酶活性可达23065～26380IU/g干曲，高于目前国内水平。本木聚糖酶生产新工艺具有设备简单、投入少、见效快、生产成本低廉、对环境友好以及木聚糖酶的固态发酵酶活性较高等优势，有利于木聚糖酶的开发和利用，具有较高的经济和实用价值。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，涉及一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法及其所用培养基，具体而言是指利用黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S菌株曲盘发酵生产木聚糖酶的新工艺。
背景技术
木聚糖是一种杂合多聚分子，主链由多个吡喃木糖基通过木糖苷键相连。根据糖苷键的类型，木聚糖可分为两种，β-1，4-木聚糖和β-1，3-木聚糖。前者存在于陆生植物细胞壁中，它的主链是由β-1，4-糖苷键相连的β-D-吡喃木糖残基聚合而成；而后者存在于海洋藻类的细胞壁中，其主链由β-D-吡喃木糖残基通过β-1，3-糖苷键聚合而成。自然界中的木聚糖多为异聚多糖，侧链上连着多种不同大小的短取代基，主要有O-乙酰基、4-O-甲基-D-葡糖醛酸残基、L-***糖残基(可进一步与香豆酸、阿魏酸等酚酸相连)等。这些侧链与植物细胞中其它几种结构性多糖(如木质素、纤维素、果胶、葡聚糖等)以共价或非共价键连接，组成植物细胞重要的结构-细胞壁。
木聚糖酶(Xylanases)是一类在木聚糖降解过程中起协同作用的多组分酶系，属于半纤维素酶类，通常指β-1，4-D-木聚糖内切酶(β-1，4-D-endoxylanase，EC3.2.1.8)，能从木聚糖主链的内部水解木糖苷键，将其降解成寡聚木糖、木二糖和少量木糖。木聚糖酶在食品、动物饲料、造纸等众多行业有着广阔的应用前景，研究木聚糖酶具有很好的商业价值和科学意义。
木聚糖酶在自然界分布很广，在海洋及陆地细菌、海洋藻类、真菌、酵母、瘤胃和反刍动物细菌、蜗牛、甲壳动物、陆地植物组织和各种无脊椎动物中都存在木聚糖酶。研究较多的是微生物产生的木聚糖酶，已报道能合成木聚糖酶的微生物有细菌、放线菌、真菌和酵母菌等。目前研究最为深入、应用最为广泛的是真菌中的曲霉、青霉和木霉，它们所产木聚糖酶多为酸性或中性酶。近年来，人们从一些极端环境中筛选到一些耐热菌或耐碱菌，其所产的耐热性或耐碱性木聚糖酶已引起人们的关注。同时，某些人工构建的木聚糖酶基因工程菌株，由于其产木聚糖酶活性高、酶系纯、酶学性质符合人们设定的应用要求，也已得到了广泛应用。
侯伯男等利用黑曲霉(Aspergillus niger)N86菌株，液态发酵产木聚糖酶，酶活力达139IU/mL；程显好等利用短小芽孢杆菌，固态发酵产木聚糖酶活性为4915IU/g干曲；符丹丹等利用宇佐美曲霉E001菌株，固态发酵产木聚糖酶活性为7442IU/g。邬敏辰等在发明专利《一种利用宇佐美曲霉产业化生产木聚糖酶的方法》，公开号CN101067129中报道了利用宇佐美曲霉产业化生产木聚糖酶的方法，木聚糖酶固态发酵酶活性为7783～9616IU/g干曲。
目前，无论是液体发酵法还是固态发酵法，微生物产木聚糖酶活性均较低，导致了木聚糖酶的生产和应用成本高，从而限制了该酶的广泛应用；且未见利用黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的文献或专利报道。本发明利用黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的酶活性高于目前国内水平。
发明内容
本发明的目的在于公开了一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法。
本发明的第二个目的在于公开了由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶所使用的培养基。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其中，所述方法是以黑曲霉XZ-3S为原料，在曲盘发酵培养基上进行固态发酵，获得发酵曲料后对发酵曲料用缓冲液进行提取，获得木聚糖酶液；所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料，(NH4)2SO40.5～1.5g，蛋白胨0.5～1g，KH2PO40.3～0.4g，CaCl20.2～0.3g，ZnCl20.1～0.2g，MgSO40.1～0.2g，Fe2(SO4)30.02～0.08g，吐温400.4～0.8g，自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g。
上述技术方案所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其中，所述固体发酵的条件为曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×107个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次。
上述技术方案所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其中，所述缓冲液为0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
上述技术方案所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其中，对发酵曲料用缓冲液进行提取的过程为称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。
一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，包括下述步骤：
(1)、斜面种子培养：去皮马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，pH6.0；121℃灭菌20min，放置试管斜面；冷却后接种黑曲霉XZ-3S菌株，30℃培养96h；
(2)、麸曲种子制备：250mL三角瓶装10g基料、(NH4)2SO480mg、自来水10mL、pH6.0，充分混匀，121℃灭菌40min，冷却后接种步骤(1)所得的黑曲霉XZ-3S试管斜面种子，30℃静置培养96h，期间分别于24h和44h各翻曲一次，所述基料为麸皮；
(3)、麸曲孢子悬液制备：100mL三角瓶装20mL去离子水，放入10-15粒玻璃珠，121℃灭菌20min，放置室温后，接入1接种铲麸曲种子，先用玻璃珠振荡分散，然后再用脱脂棉过滤，调整孢子浓度为5×107个/mL；
(4)、曲盘发酵：曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×107个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次；所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料、(NH4)2SO40.5～1.5g、蛋白胨0.5～1g、KH2PO40.3～0.4g、CaCl20.2～0.3g、ZnCl20.1～0.2g、MgSO40.1～0.2g、Fe2(SO4)30.02～0.08g、吐温400.4～0.8g、自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g；
(5)、粗酶液提取：曲盘发酵结束后称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。
上述技术方案所述的一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其中，所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料、(NH4)2SO4lg、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50g，玉米芯40g，豆饼粉10g。
上述任一技术方案所述的一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法所使用的曲盘发酵培养基，其中，所述所述曲盘发酵培养基的组成为曲盘装100g基料、(NH4)2SO40.5～1.5g、蛋白胨0.5～1g、KH2PO40.3～0.4g、CaCl20.2～0.3g、ZnCl20.1～0.2g、MgSO40.1～0.2g、Fe2(SO4)30.02～0.08g、吐温400.4～0.8g、自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g。
上述技术方案所述的曲盘发酵培养基，其中，所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO41g、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50g，玉米芯40g，豆饼粉10g。
上述技术方案所述的曲盘发酵培养基，其中，所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO41g、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1g、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g
上述技术方案所述的曲盘发酵培养基，其中，所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO41g、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1g、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水120mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g。
本发明的目的是提供一种以麸皮、玉米芯、豆饼粉等农副产品为发酵基料，利用黑曲霉XZ-3S曲盘发酵生产木聚糖酶的方法。本发明所述曲盘发酵的技术方案和内容如下：
1、菌株：黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S菌株，由新乡医学院筛选和保藏，该菌株已于2012年在《食品工业科技》杂志的Vol.33No.16Pg.187公开，本发明人和申请人承诺该菌株从申请日起20年内向公众发放，公众可以通过联系新乡医学院生命科学技术学院发酵与酶工程研究室获得冻干保藏的菌种。
黑曲霉XZ-3S菌株的菌学特征如下：黑曲霉XZ-3S菌株属半知菌亚门真菌；菌落初白色，后变黑；分生孢子头褐黑色放射状，分生孢子梗长短不一；顶囊球形，双层小梗；分生孢子褐色球形；生长适温37℃，最低相对湿度为88％；黑曲霉具有在培养过程中孢子聚集或萌发成菌丝，菌丝相互缠绕成球的特征。
2、斜面种子培养：去皮马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，pH6.0；121℃灭菌20min，放置试管斜面；冷却后接种黑曲霉XZ-3S菌株，30℃培养96h。此斜面培养基可用于菌种的活化、保藏和斜面种子等，每3个月转接1次。
3、麸曲种子制备：250mL三角瓶装10g基料(麸皮10g)，(NH4)2SO480mg，自来水10mL，pH6.0，充分混匀，121℃灭菌40min，冷却后接种黑曲霉XZ-3S试管斜面种子，30℃静置培养96h，期间分别于24h和44h各翻曲一次。
4、麸曲孢子悬液制备：100mL三角瓶装20mL去离子水，放入10-15粒玻璃珠，121℃灭菌20min，放置室温后，接入1接种铲麸曲种子，先用玻璃珠振荡分散，然后再用脱脂棉过滤，调整孢子浓度为5×107个/mL。
5、曲盘发酵：曲盘(大小φ20cm×4cm)装100g基料(麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g)，(NH4)2SO40.5～1.5g，蛋白胨0.5～1g，KH2PO40.3～0.4g，CaCl20.2～0.3g，ZnCl20.1～0.2g，MgSO40.1～0.2g，Fe2(SO4)30.02～0.08g，吐温400.4～0.8g，自来水120～140mL，自然pH。121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液(孢子浓度为5×107个/mL)，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h正常补水20mL时各翻曲一次。
6、粗酶(木聚糖酶)液提取：固态发酵结束后称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。
7、分析方法：
(1)、木聚糖酶活性测定：于25mL具塞试管A和B中，分别加入用pH4.0、磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制的质量浓度为0.5％的木聚糖溶液2.4mL，45℃预热5～10min，在A管中加入0.1mL适当稀释的酶液，45℃准确反应15min；立即各加入2.5mL3′，5′-二硝基水杨酸(DNS)试剂，在B管中再补加0.1mL酶液，A和B管均煮沸7min；冷却后各加入去离子水5mL，混匀；540nm处以B管为空白对照测定A管吸光度值，并从木糖标准曲线上查出相应的还原糖(以木糖计)含量并折算成酶活性单位。酶活性单位定义为：在本测定条件下，以每分钟产生1μmol还原糖所需的酶量定义为1个木聚糖酶活性单位(IU)。
(2)、还原糖测定：采用DNS法，以木糖为标准。
(3)、曲料水分测定(湿曲干重测定)：称取一定量的固态发酵培养物(曲料)，105℃烘干至恒重。
本发明的分析方法(1)为酶活测定，测定的吸光度值需从木糖标准曲线上查出相应的还原糖(以木糖计)含量并折算成酶活性单位；(2)还原糖测定即为木糖标准曲线制备的方法。另(1)测定的酶活为粗酶液中的酶活，单位为IU/mL；由于本发明是固态发酵最终酶活为IU/g干曲，从IU/mL换算到IU/g干曲需要测定曲料水分(3)。
本发明具有以下有益效果：
(1)、本发明的利用廉价的麸皮、玉米芯等农副产品作为发酵主原料，且采用的生产菌种黑曲霉(Aspergillus niger)是公认的安全(GRAS)的微生物，其具有安全、可靠和不产生毒素等特点。
(2)、本发明利用黑曲霉XZ-3S菌株曲盘发酵生产木聚糖酶是一种充分利用自然界可再生资源、绿色环保且可持续的生产方式，同时具有设备简单、投资少、见效快、生产成本低廉等优势。
(3)、本发明在实验室小规模上，利用黑曲霉XZ-3S菌株曲盘发酵生产木聚糖酶，其木聚糖酶发酵酶活性可达23065～26380IU/g干曲。
具体实施方式：
为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对本发明作进一步的说明。
实施例1：
1.菌株：黑曲霉(Aspergillus niger)XZ-3S菌株。
2、斜面种子培养：去皮马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，pH6.0；121℃灭菌20min，放置试管斜面；冷却后接种黑曲霉XZ-3S菌株，30℃培养96h；
3、麸曲种子制备：250mL三角瓶装10g基料、(NH4)2SO480mg、自来水10mL、pH6.0，充分混匀，121℃灭菌40min，冷却后接种步骤(1)所得的黑曲霉XZ-3S试管斜面种子，30℃静置培养96h，期间分别于24h和44h各翻曲一次，所述基料为麸皮；
4、麸曲孢子悬液制备：100mL三角瓶装20mL去离子水，放入10-15粒玻璃珠，121℃灭菌20min，放置室温后，接入1接种铲麸曲种子，先用玻璃珠振荡分散，然后再用脱脂棉过滤，调整孢子浓度为5×107个/mL；
5.固态发酵培养基：曲盘(大小φ20cm×4cm)装100g基料(麸皮50g，玉米芯40g，豆饼粉10g)，(NH4)2SO4lg，蛋白胨0.5g，KH2PO40.3g，CaCl20.2g，ZnCl20.1g，MgSO40.1g，Fe2(SO4)30.02g，吐温400.4g，自来水140mL，自然pH。
6.固态发酵条件：121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液(孢子浓度为5×107个/mL)，29℃静置培养65h，期间分别于28h和47h正常补水(20mL)时各翻曲一次。
重复3批次(每批次平行做3个曲盘)的上述曲盘实验结果表明，XZ-3S成熟固态发酵曲料粗酶液平均酶活为12398.6IU/mL，湿曲平均干重为0.47g干曲/g湿曲，计算曲料木聚糖酶平均酶活性达到26380IU/g干曲。
实施例2：
本实施例与实施例基本相同，区别在于固态发酵培养基和固态发酵条件上，具体的：
5、固态发酵培养基：曲盘(大小φ20cm×4cm)装100g基料(麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g)，(NH4)2SO41g，蛋白胨0.5g，KH2PO40.3g，CaCl20.2g，ZnCl20.1g，MgSO40.1g，Fe2(SO4)30.02g，吐温400.4g，自来水140mL，自然pH。
6、固态发酵条件：121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液(孢子浓度为5×107个/mL)，29℃静置培养65h，期间分别于28h和47h正常补水(20mL)时各翻曲一次。
重复3批次(每批次平行做3个曲盘)的上述曲盘实验结果表明，XZ-3S成熟固态发酵曲料粗酶液平均酶活为10829.25IU/mL，湿曲平均干重为0.45g干曲/g湿曲，计算的木聚糖酶平均酶活性达到24065IU/g干曲。
实施例3：
本实施例与实施例基本相同，区别在于固态发酵培养基和固态发酵条件上，具体的：
5、固态发酵培养基：曲盘(大小φ20cm×4cm)装100g基料(麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g)(NH4)2SO41g，蛋白胨0.5g，KH2PO40.3g，CaCl20.2g，ZnCl20.1g，MgSO40.1g，Fe2(SO4)30.02g，吐温400.4g，自来水120mL，自然pH
6、固态发酵条件：121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液(孢子浓度为5×107个/mL)，29℃静置培养65h，期间分别于28h和47h正常补水(20mL)时各翻曲一次。
重复3批次(每批次平行做3个曲盘)的上述曲盘实验结果表明，XZ-3S成熟固态发酵曲料粗酶液平均酶活为8995.35IU/mL，湿曲平均干重为0.39g干曲/g湿曲，计算的木聚糖酶平均酶活性达到23065IU/g干曲。
以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何形式上和实质上的限制，凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用以上所揭示的技术内容，而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (10)
1.一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述方法是以黑曲霉XZ-3S为原料，在曲盘发酵培养基上进行固态发酵，获得发酵曲料后对发酵曲料用缓冲液进行提取，获得木聚糖酶液；所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料，(NH4)2SO40.5～1.5g，蛋白胨0.5～1g，KH2PO40.3～0.4g，CaCl20.2～0.3g，ZnCl20.1～0.2g，MgSO40.1～0.2g，Fe2(SO4)30.02～0.08g，吐温400.4～0.8g，自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g。
2.根据权利要求1所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述固体发酵的条件为曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×107个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次。
3.根据权利要求1所述的由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述缓冲液为0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。
4.根据权利要求1～3中任一权利要求所述的方法，其特征在于：对发酵曲料用缓冲液进行提取的过程为称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。
5.一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，包括下述步骤：
(1)、斜面种子培养：去皮马铃薯200g/L，蔗糖20g/L，琼脂20g/L，pH6.0；121℃灭菌20min，放置试管斜面；冷却后接种黑曲霉XZ-3S菌株，30℃培养96h；
(2)、麸曲种子制备：250mL三角瓶装10g基料、(NH4)2SO480mg、自来水10mL、pH6.0，充分混匀，121℃灭菌40min，冷却后接种步骤(1)所得的黑曲霉XZ-3S试管斜面种子，30℃静置培养96h，期间分别于24h和44h各翻曲一次，所述基料为麸皮；
(3)、麸曲孢子悬液制备：100mL三角瓶装20mL去离子水，放入10-15粒玻璃珠，121℃灭菌20min，放置室温后，接入1接种铲麸曲种子，先用玻璃珠振荡分散，然后再用脱脂棉过滤，调整孢子浓度为5×107个/mL；
(4)、曲盘发酵：曲盘发酵培养基121℃灭菌40min，冷却后接种10mL黑曲霉XZ-3S麸曲孢子悬液，该悬液中孢子浓度为5×107个/mL，29℃静置培养65～72h，期间分别于24～28h和43～47h补水20mL时各翻曲一次；所述曲盘发酵培养基的组成为
cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO40.5～1.5g、蛋白胨0.5～1g、KH2PO40.3～0.4g、CaCl20.2～0.3g、ZnCl20.1～0.2g、MgSO40.1～0.2g、Fe2(SO4)30.02～0.08g、吐温400.4～ 0.8g、自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g；
(5)、粗酶液提取：曲盘发酵结束后称取发酵曲料1g，加入29mL pH4.0、0.05mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液，40℃条件下浸提30min，滤纸过滤，所得滤液即为木聚糖酶液。
6.根据权利要求5所述的一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法，其特征在于：所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料、(NH4)2SO4lg、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50g，玉米芯40g，豆饼粉10g。
7.权利要求1-6中任一权利要求所述的一种由黑曲霉曲盘发酵生产木聚糖酶的方法所使用的曲盘发酵培养基，其特征在于：所述所述曲盘发酵培养基的组成为
曲盘装100g基料、(NH4)2SO40.5～1.5g、蛋白胨0.5～1g、KH2PO40.3～0.4g、CaCl20.2～0.3g、ZnCl20.1～0.2g、MgSO40.1～0.2g、Fe2(SO4)30.02～0.08g、吐温400.4～0.8g、自来水120～140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50～80g，玉米芯10～40g，豆饼粉10～20g。
8.根据权利要求7所述的曲盘发酵培养基，其特征在于：所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO4lg、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮50g，玉米芯40g，豆饼粉10g。
9.根据权利要求7所述的曲盘发酵培养基，其特征在于：所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO41g、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1g、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水140mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g 。
10.根据权利要求7所述的曲盘发酵培养基，其特征在于：所述曲盘发酵培养基的组成为φ20cm×4cm曲盘装100g基料、(NH4)2SO41g、蛋白胨0.5g、KH2PO40.3g、CaCl20.2g、ZnCl20.1g、MgSO40.1g、Fe2(SO4)30.02g、吐温400.4g、自来水120mL，自然pH，其中基料的组成为麸皮80g，玉米芯10g，豆饼粉10g。
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