CN102844307A - 作为ksp抑制剂的***化合物 - Google Patents
作为ksp抑制剂的***化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102844307A CN102844307A CN2011800184156A CN201180018415A CN102844307A CN 102844307 A CN102844307 A CN 102844307A CN 2011800184156 A CN2011800184156 A CN 2011800184156A CN 201180018415 A CN201180018415 A CN 201180018415A CN 102844307 A CN102844307 A CN 102844307A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- compound
- substituted
- cancer
- expression
- alkyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 0 CCN(*)C(N(C[C@]1[C@](CC=C)CNC1)[C@](C(C)(C)C)c1nc(-c(cc(cc2)F)c2F)n[n]1Cc1cc(F)ccc1)=O Chemical compound CCN(*)C(N(C[C@]1[C@](CC=C)CNC1)[C@](C(C)(C)C)c1nc(-c(cc(cc2)F)c2F)n[n]1Cc1cc(F)ccc1)=O 0.000 description 4
- JHIMTUJVNVSYIJ-AWTYYCOISA-N C[C@H](C1)O[C@@H](C)CN1C(N(C[C@H](CNC1)[C@H]1F)[C@H](C(C)(C)C)c1nc(-c(cc(cc2)F)c2F)n[n]1C)=O Chemical compound C[C@H](C1)O[C@@H](C)CN1C(N(C[C@H](CNC1)[C@H]1F)[C@H](C(C)(C)C)c1nc(-c(cc(cc2)F)c2F)n[n]1C)=O JHIMTUJVNVSYIJ-AWTYYCOISA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
- C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
- A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D207/10—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D249/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D249/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having three nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
- C07D249/08—1,2,4-Triazoles; Hydrogenated 1,2,4-triazoles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
- C07D405/12—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
- C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
- Pyrrole Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供了如文中进一步所述的式(I)的***化合物。本发明还提供了包含治疗有效量的式(I)化合物的药物组合物，和治疗哺乳动物患者的至少部分由KSP介导的病症的方法，该方法包括对需要该治疗的哺乳动物患者施用治疗有效量的式(I)化合物。
Description
相关申请的交叉引用
本申请根据35U.S.C.§119(e)要求2010年4月15日提交的美国临时申请号61/324,651的权益，将其全文引入本文作为参考。
发明领域
本发明总体上涉及***化合物以及其药学可接受的盐、酯或前药。本发明另外涉及此类化合物与药学可接受的载体的组合物、此类化合物的用途、它们的制备和相关的中间体。
发明背景
驱动蛋白是使用三磷酸腺苷结合于微管并生成机械力的动力蛋白(motor protein)。驱动蛋白的特征在于具有约350个氨基酸残基的动力结构域(motor domain)。已经解析出几种驱动蛋白动力结构域的晶体结构。
目前，已经确定了约100种与驱动蛋白相关的蛋白质(KRP)。驱动蛋白与多种细胞生物过程有关，包括细胞器和泡囊的转运，以及内质网的维持。几种KRP与有丝***纺锤体的微管相互作用或直接与染色体相互作用，似乎在细胞周期的有丝***阶段起到关键的作用。这些有丝***的KRP对于开发癌症治疗法具有特别的重要性。
驱动蛋白纺锤体蛋白(KSP)(又名Eg5、HsEg5、KNSL1或KIF11)是集中在有丝***纺锤体且已知是两极有丝***纺锤体形成和/或功能所必需的几种驱动蛋白样动力蛋白中的一种。
在1995年，使用针对KSP羧基末端的抗体耗尽KSP表现出阻抑具有单星形微管排列(monoastral microtubule array)的HeLa细胞的有丝***(Blangy等人，Cell 83：1159-1169，1995)。被认为是KSP同系物的bimC和cut7基因的突变在构巢曲霉(Aspergillus nidulans)(Enos，A.P.，和N.R.Morris，Cell 60：1019-1027，1990)和裂殖酵母菌丝(Schizosaccharomyces pombe)(Hagan，I.，和M.Yanagida，Nature347：563-566，1990)中引起中心体分离失败。用在蛋白水平上减少KSP表达的ATRA(全反式视黄酸)处理细胞，或者使用反义寡核苷酸耗尽KSP，在DAN-G胰腺癌细胞中显示出显著的生长抑制，表明KSP可能与全反式视黄酸的抗增殖作用有关(Kaiser，A.，等人，J.Biol.Chem.274，18925-18931，1999)。有趣的是，光滑爪蟾(Xenopus laevis)Aurora-相关蛋白激酶pEg2表现出结合并磷酸化XlEg5(Giet，R.，等人，J.Biol.Chem.274：15005-15013，1999)。Aurora-相关激酶的可能的底物对于癌症药物开发特别重要。例如，在结肠癌患者中，Aurora 1和2激酶在蛋白质和RNA水平上过度表达且基因被扩增。
第一个可渗透细胞的小分子KSP抑制剂“monastrol”表现出阻抑具有单极纺锤体的细胞而不像常规的化疗药物例如紫杉烷类和长春花生物碱那样影响微管聚合(Mayer，T.U.等人，Science 286：971-974，1999)。Monastrol在基于表型的筛选中被确定为抑制剂，且建议该化合物可以作为开发抗癌药的先导化合物。确定所述抑制相对于三磷酸腺苷不是竞争性的，且是可迅速逆转的(DeBonis，S.等人，Biochemistry，42：338-349，2003；Kapoor，T.M.，等人，J.Cell Biol.，150：975-988，2000)。
考虑到改进的化疗药物的重要性，需要体内有效抑制KSP和KSP相关蛋白的KSP抑制剂。
发明概述
在一个实施方案中，本发明涉及取代的***化合物及其药学可接受的盐、酯或前药，它们的制备、药物组合物和用于治疗由KSP介导的疾病的用途，其中所述化合物由以下通式表示：
其中，
R1可以选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R3表示-(CH2)0-3被取代的或未被取代的吡咯烷基或任选被取代的C3-5烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；并且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
在这些式I化合物的某些实施方案中：
R1选自C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R3表示-(CH2)0-3被取代的或未被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、
-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；并且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
在其它实施方案中，R1是C1-6烷氧基-C1-4烷基，例如甲氧基-取代的C1-4烷基和2-甲氧基-2-丙基。
本发明还提供了制备和使用这些化合物的方法和包含这些化合物的药物组合物，如文中进一步所述。
发明实施方案的详述
本发明的化合物包括式(I)的化合物或其药学可接受的盐、酯或前药：
其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R3表示-(CH2)0-3--被取代的或未被取代的吡咯烷基、例如-CH2-吡咯烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；并且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
在式I化合物中，R1通常是支链烷基或烷氧基烷基，且R2通常是H。
在优选的实施方案中，式I化合物可以是该异构体：
在这些化合物中，R5通常是苄基，其任选被至多3个卤素原子在苄基基团的苯基环上取代。R5可以是未被取代的；当其被取代时，其通常被一个或两个氟原子取代。
R6典型地是任选被取代的苯基环；在一些实施方案中，其是被1-2个卤素基团取代的苯基。在优选的实施方案中，R6是氟苯基或二氟苯基，特别是2，5-二氟苯基。
在这些式I化合物的某些实施方案中，R1选自C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基。
本发明的一个具体实施方案提供了式I化合物，其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4烷基，优选甲氧基-取代的C1-4烷基；
R2表示H；
R3表示-(CH2)1-3-被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5表示苄基或被至多两个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个卤素原子取代的苯基。
本发明更优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R1选自C3-6支链烷基；
R2表示H；
R3表示-(CH2)1-3-被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5表示苄基或被至多两个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个卤素原子取代的苯基。
本发明更优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R1表示叔丁基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
本发明更优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R1表示甲氧基-C1-4烷基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
另一个优选的实施方案提供了式I化合物，其中，
R3表示-(CH2)1-3-氟-吡咯烷基；并且
R4表示-C(O)-2-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基。在特别优选的实施方案中，R4选自：
这些R4基团可以是外消旋的或光学活性的；在优选的实施方案中，R4是具有文中所示的绝对立体化学的光学活性基团。典型地，其是一种对映体，并且基本上没有其相反的对映体，即，R4基团具有至少90％的对映体过量，并且通常是至少95％的对映体过量。
本发明的又一个优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R3表示((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基基团
R4选自-C(O)-CH(CH3)-OH，和
在特别优选的实施方案中，R4选自：
本发明更优选的实施方案提供了式I化合物，其中：
R5表示
R6是
在另一个实施方案中，本发明提供了式II化合物：
其中，
R1可以选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R3表示-(CH2)0-3-被取代的或未被取代的吡咯烷基或被至多三个选自氨基和卤素的基团取代的C3-5烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I(优选F)；并且
R6选自苯基，其被至多三个卤素原子取代，优选被F或Cl或两者取代。
在其中R5或R6是被取代的式II化合物中，优选的取代基是F和Cl。
在式II化合物中，R1通常是被烷氧基基团例如甲氧基取代的支链烷基，且R2通常是H。在优选的实施方案中，式II化合物可以是其具有所示的绝对立体化学的该异构体：
在式II化合物的特别优选的实施方案中，R4选自：
优选地，这些基团是光学活性的并且具有所示的绝对立体化学。
本发明的又一个优选的实施方案提供式II化合物，其中R3表示
这些R3基团可以是外消旋的或光学活性的；在优选的实施方案中，R3是具有此处所示绝对立体化学的光学活性基团。典型地，其为一种对映体并且基本上没有它的相反的对映体，即，R3基团具有至少90％且通常至少95％的对映体过量。
在式II化合物中，R5通常是苄基，其任选被至多3个卤素原子在苄基基团的苯基环上取代。R5可以是未被取代的；当其被取代时，其通常被一个或两个氟原子取代。
在式II化合物中，典型地，R6是任选被取代的苯基环；在一些实施方案中，其是被1-2个卤素基团取代的苯基。在优选的实施方案中，R6是氟苯基或二氟苯基、特别是2，5-二氟苯基。
在这些式II化合物的某些实施方案中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C3-6支链烷基和C3-6环烷基；
R3表示-(CH2)0-3-被取代的吡咯烷基例如((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基基团或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F，其优选是
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；并且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
在式II化合物的某些实施方案中，R1是甲氧基-取代的C1-4烷基。在这些化合物的优选实施方案中，R1是2-甲氧基-2-丙基。
在式II化合物中，R3可以包括被取代的吡咯烷基；例如，它可以表示-(CH2)1-2-被取代的吡咯烷基例如((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基基团。吡咯烷基可以在环的任何位置进行连接，典型地在碳原子上连接，并且优选在3位(以环氮原子作为1位来计数)上连接。吡咯烷基基团可以被例如卤素、低级烷基和低级烷氧基的基团取代。优选地，吡咯烷基环被至少一个卤素通常是F在环碳原子上取代；此外，其任选被低级烷基(典型的是Me或Et)取代，并且任选地，低级烷基是在N上。
在任何上述的式II化合物的优选实施方案中，R3表示-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F例如
或-(CH2)1-2-被取代的吡咯烷基，其中基团-(CH2)1-2-被取代的吡咯烷基可以是，例如：
其中R”是H、Me、Et、异丙基或正丙基。优选地，吡咯烷基基团具有此处所示的绝对立体化学构型，即，其是其中R”是H、Me、Et、异丙基或正丙基的((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基基团。
在式II化合物的优选实施方案中，R4选自-C(O)-CH(CH3)-OH、
在这些化合物的特别优选的实施方案中，R4选自：
在这些化合物中还优选地，R5表示
并且在一些此类实施方案中，R6是
本发明的特别优选的实施方案提供选自以下的式I或式II化合物：
N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺；和
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺。
本发明的另一个特别优选的实施方案提供选自以下的式I或式II化合物：
和这些化合物的药学上可接受的盐。
本发明的另一方面提供了药物组合物，其包含治疗有效量的式I或II化合物，包括上面公开的这些化合物的任何实施方案，和药学上可接受的载体。本发明的这一方面的优选的实施方案提供了组合物，该组合物进一步包含至少一种另外的用于治疗癌症的活性剂。在进一步优选的实施方案中提供组合物，其中所述用于治疗癌症的另外的活性剂选自伊立替康、拓扑替康、吉西他滨、伊马替尼、曲妥珠单抗、5-氟尿嘧啶、亚叶酸(leucovorin)、卡铂、顺铂、多西紫杉醇、紫杉醇、替扎他滨(tezacitabine)、环磷酰胺、长春花生物碱、蒽环类、利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
在本发明的另一方面提供了治疗哺乳动物患者的至少部分由KSP介导的病症的方法，该方法包括对需要该治疗的哺乳动物患者施用治疗有效量的包含式I或II化合物(包括上面公开的这些化合物的任何实施方案)的组合物。优选的实施方案提供了治疗哺乳动物患者的至少部分由KSP介导的病症的方法，其包括对需要该治疗的哺乳动物患者施用治疗有效量的组合物，该组合物包含上述式I或II化合物的任何实施方案的化合物和至少一种另外的用于治疗癌症的活性剂。在本发明的这一方面的优选实施方案提供了治疗哺乳动物患者的至少部分由KSP介导的病症的方法，其中所述病症是细胞增殖性疾病；细胞增殖性疾病优选是癌症。
本发明的这一方面的进一步优选的实施方案提供了如上所述的治疗细胞增殖性疾病的方法，其中细胞增殖性疾病是癌症，所述癌症选自肺和支气管癌、***癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠和直肠癌、甲状腺癌、胃癌、肝脏和肝内胆管癌、肾脏和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、卵巢癌、多发性骨髓瘤、食管癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性白血病、骨髓性白血病、脑癌、口腔和咽癌、喉癌、小肠癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和绒毛状结肠腺瘤。
本发明的这个方面的另一个优选的实施方案提供了一种方法，其中用于治疗癌症的另外的活性剂选自伊立替康、拓扑替康、吉西他滨、伊马替尼、曲妥珠单抗、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、多西紫杉醇、紫杉醇、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱、蒽环类、利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
该方面的特别优选的实施方案提供了用于抑制哺乳动物患者的KSP的方法，其中所述方法包括对患者施用抑制KSP有效量的文中所述的任何实施方案中的式I或II化合物。在一些实施方案中，所述方法应用如上所述式I或II化合物；例如，式I化合物，其中：
R1选自C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R3表示-(CH2)0-3被取代的或未被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；并且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
对于这些方法而言的患者一般是人，且通常在开始这些方法之前其已被诊断为需要该种治疗。
另一个优选的实施方案提供了一种方法，其包括对患者施用抑制KSP有效量的根据上述任何实施方案的式I或II化合物。在一些实施方案中，所述方法应用式I化合物，其中
R1选自C3-6支链烷基；
R2表示H；
R3表示-(CH2)1-3-被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5表示苄基或被至少两个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个卤素原子取代的苯基。
另外特别优选的实施方案提供了一种方法，其包括施用式I化合物，其中：
R1表示叔丁基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
另外特别优选的实施方案提供了一种方法，其包括施用式II化合物，其中：
R1表示2-甲氧基-2-丙基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
另一特别优选的实施方案提供了施用式I或式II化合物来治疗疾患例如癌症的方法。该方法可以使用根据上述任何实施方案的化合物，包括如此的式I或式II化合物，其中：
R3表示
R4选自-C(O)-CH(CH3)-OH、
R5表示
R6是
上述治疗方法的特别优选的实施方案提供了用于抑制哺乳动物患者的KSP的方法，其中所述的方法包括对患者施用抑制KSP有效量的选自以下化合物的式I化合物：
N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺；且
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺。
另一个的特别优选的实施方案提供了用于抑制哺乳动物患者的KSP的方法，其中所述方法包括对患者施用抑制KSP有效量的选自下列的式I或式II化合物：
这些化合物之一的药学上可接受的盐。
在另外一个方面，本发明提供了制备某些式I或式II化合物和合成它们的关键中间体的方法。文中流程2描述了一种制备用于例如上文所述那些化合物的优选的吡咯烷环部分的方法。制备该氟化的吡咯烷的合成方法包括：将式V的反式-3，4-二取代的吡咯烷氟化，得到式VI的顺式-氟化的乙烯基吡咯烷化合物，并氧化式VI化合物的烯烃得到式VII的醛，如下所示：
这些转化可用外消旋化合物或用光学活性化合物来完成；在一些实施方案中，式V或VI或VII化合物是光学活性的并且具有此处所示的绝对立体化学，具有至少90％的对映体过量。在式V-VII化合物中，R是H或任选被取代的C1-C6烷基或芳基，并且PG表示适合用于脂肪族氮原子的保护基团。在一些实施方案中，R是H，并且式V化合物可以例如由保护的3-吡咯啉的环氧化物(参见流程2中的化合物2.3)通过使该环氧化物与Grignard试剂反应来制备。可以使用提供SN2交换完成手性中心的翻转的任何适合的试剂将式V的反式-羟基基团转化为式VI的顺式-氟基团。在一些实施方案中，这采用在惰性溶剂中的氟化物源和活化羟基使其成为适合的离去基团的试剂来完成。可以在对反应条件惰性的适合的溶剂中使用例如氟化物盐如三烷基胺三氢氟酸盐(例如Et3N-三氢氟酸盐)或HF-吡啶与烷基或芳基磺酰氟例如C1-C6全氟烷基磺酰氟一起使羟基立体化学翻转地转化为F。
式VI化合物中的乙烯(vinylogous)基团可以采用各种常规的方法(例如用四氧化锇和高碘酸钠处理，或使用臭氧)氧化为醛，以得到式VII化合物。用于该转化的方法是本领域已知的。
然后可以通过各种方法将式VII化合物引入到式I化合物中，所述方法包括如文中所述的还原胺化反应；或利用所述醛和适于期望目标化合物的亲核碳基团的本领域已知的各种亲核加成反应。在一实施方案中，式VII化合物如流程3所示经还原胺化连接至式Ia化合物上，得到如下所示的式Ib化合物。其中R3是H的式Ia化合物任选被保护，如果其包含例如需要保护的游离的胺或羟基的基团的话。
用于这些反应和中间体的适合的保护基团(PG)包括酰胺类(例如甲酰胺、乙酰胺、三氯乙酰胺)和氨基甲酸酯类(例如甲基、乙基、三氯乙基、叔丁基或苄基氨基甲酸酯)。酰胺类和氨基甲酸酯类具有通式-C(O)-L-A，其中L是键(对于酰胺)或-O-(对于氨基甲酸酯)，并且A是任选被取代的烷基(优选C1-6的)或芳基(优选苯基)；或当L是键时，A可以是H。
在一些实施方案中，该方法进一步包括式VII化合物与式Ia化合物的还原胺化：
其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基；
以提供式Ib化合物：
在一些实施方案中，上述的任何合成方法还包括由式IV的环氧化物合成式V化合物，
其如下进行：用下式的有机金属试剂将所述环氧化物开环，
其中R是H或任选被取代的烷基或芳基基团，且M是选自Li、MgX和ZnX的金属基团，其中X是卤素，得到式V化合物。对于该步骤，优选的金属试剂是：
其中X是Cl、Br或I。
因此本发明提供如上所述的新的式VI和VII的中间体，以及使用这些中间体制备式I或Ib化合物的方法。
这些方法所使用和生产的化合物可以是外消旋的，或具有至少一个手性中心的任一化合物可以分离成单一的对映体或单一的非对映体，如果合适的话。在本发明中，有时候优选分离式V或VI化合物的两种对映体，以使用单一对映体来制备式I或Ib化合物。在一些实施方案中，式V或VI化合物以外消旋的形式制备，然后通过手性色谱法或其它常规方法分离来得到光学活性的化合物，优选基本上没有其对映体。在一优选的实施方案中，式V或VI化合物是光学活性的，并且具有如文中所示的特定绝对立体化学。在一些这样的实施方案中，基本上没有相反的对映体。
代表性的本发明的化合物
本发明范围内的具体化合物在实验部分的表1中举例说明。
B.定义和概述
正如以上所讨论，本发明部分地涉及新的被取代的***化合物。
应该理解的是，本文中使用的术语只是用于描述具体的实施方案而不意在限制本发明的范围。需要指出的是，如本文中和权利要求中所用的单数形式“一个(a)”和“该(the)”包括复数的指示，除非上下文明确指出。在该说明书和所附权利要求中，应该参考许多术语，所述术语具有以下含义：
如本文中使用的“烷基”或“直链烷基”是指具有1到6个碳原子、更优选1到3个碳原子的单价饱和脂肪族烃基。该术语由例如甲基、乙基、正丙基、正戊基等基团举例说明。
如本文中所使用的术语“支链烷基”是指具有从3至6个碳原子的单价的饱和的分支的烷基基团。该术语由例如异丁基、异丙基、叔丁基等基团举例说明。
“环烷基”是指具有3至6个碳原子并且其中三个或者更多碳原子互相连接以至形成环结构的烷基基团。示例性实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基基团。
如本文中所使用的“烷氧基烷基”是指被至少一个烷氧基基团取代的烷基基团。如果没有其它描述，烷氧基烷基基团在烷氧基基团中包含至多10个碳原子并且在烷基基团中包含至多10个碳原子。其通过烷基基团连接到主体(base)分子上。在一些情况中，这些基团根据在烷氧基基团和/或烷基基团中的碳原子数目来描述，例如C1-6烷氧基-C1-4-烷基，其是指具有1-4个碳原子的烷基基团，该烷基基团被C1-C6烷氧基基团取代。适合的烷氧基烷基基团包括甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、甲氧基丙基和甲氧基-异丙基(2-甲氧基-2-丙基)。
“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和/或碘，并且优选是氟或氯。
本文中使用的“生物学活性”是指在实施例12-14中的任一个中描述的试验中的至少一个进行试验时的抑制浓度，且如其至少一个实施例定义的抑制浓度。
如本文中使用的术语“药学可接受的盐”是指式(I)或(II)化合物的无毒性的酸或碱土金属盐。这些盐可以在式(I)和(II)化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者通过使碱或酸官能团分别与适合的有机或无机酸或碱反应来制备。代表性的盐包括但不限于以下的：乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、二葡糖酸盐、环戊烷丙酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙烷磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐(pectinate)、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐和十一酸盐(undecanoate)。另外，碱性含氮基团可以用例如如下物质季铵化：烷基卤化物，例如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸的二甲酯、二乙酯、二丁酯和二戊基酯；长链卤化物，例如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基卤化物，如溴化苄和苯乙基溴化物；等等。从而得到水溶性或油溶性的或水可分散或油可分散的产物。
可以用于形成药学可接受酸加成盐的酸的实例包括无机酸如盐酸、硫酸和磷酸，以及有机酸如草酸、马来酸、甲磺酸、琥珀酸和柠檬酸。碱加成盐可以在式(I)或(II)化合物的最终分离和纯化过程中原位制备，或者单独地通过使羧酸部分与适合的碱例如药学可接受的金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐或与氨或与有机的伯胺、仲胺或叔胺反应来制备。药学可接受的盐包括但不限于基于碱金属和碱土金属的阳离子如钠、锂、钾、钙、镁、铝盐等，以及铵、季铵和胺阳离子，包括但不限于铵、四甲基铵、四乙基铵、甲基胺、二甲基胺、三甲基胺、三乙基胺、乙基胺等。可用于形成碱加成盐的其它代表性的有机胺包括二乙基胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等。
如本文中使用的术语“药学可接受的酯”是指在体内水解的酯，包括在人体内分解而留下母体化合物、其盐或其药学活性代谢物的那些。适合的酯基团包括例如衍生自药学可接受的脂肪族羧酸的那些，所述脂肪族羧酸尤其是链烷酸、链烯酸、环烷酸和烷二酸，其中每个烷基或链烯基部分有利地具有不超过6个碳原子。具体的酯的代表性实例包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。
本文中使用的术语“药学可接受的前药”是指本发明化合物的那些前药，其在合理的医学裁判范围内适合于接触人和低等动物的组织，而没有过度的毒性、刺激性、***反应等，具有合理的利益/风险比，且对于其预定用途是有效的，且在可能的情况下包括本发明化合物的两性离子形式。术语“前药是指在体内迅速地转化以得到母体化合物或上述通式的药学活性代谢物的化合物，例如通过在血液中水解。关于该问题的讨论提供在T.Higuchi和V.Stella，PRO-DRUGS AS NOVEL DELIVERY SYSTEMS，Vol.14，A.C.S.Symposium Series，和Edward B.Roche，ed.，BIOREVERSIBLE CARRIERS IN DRUG DESIGN，AmericanPharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中，二者都被全文并入本文作为参考。
如本文中使用的“抗癌剂”或“用于治疗癌症的活性剂”是指包括只是作为例子的以下那些的活性剂：诱导凋亡的活性剂；多核苷酸(例如核酶)；多肽(例如酶)；药物；生物学模拟物；生物碱；烷化剂；抗肿瘤抗生素；抗代谢物；激素；铂化合物；与抗癌药物、毒素和/或放射性核素缀合的单克隆抗体；生物反应调节物(例如干扰素和白细胞介素等)；过继性免疫疗法活性剂；造血生长因子；诱导肿瘤细胞分化的活性剂(例如全反式视黄酸等)；基因治疗试剂；反义治疗试剂和核苷酸；肿瘤疫苗；血管生成抑制剂等。许多其它的活性剂都是本领域技术人员所熟知的。
应该理解，在上面定义的所有被取代的基团中，通过用另外的取代基对取代基本身进行限定得到的聚合物不意欲包括在本文中。在此情况下，这类取代基的最大数量为三个。例如，取代的芳基基团被两个其它的取代的芳基基团连续取代限于-取代的芳基-(取代的芳基)-取代的芳基。
类似地，应该理解，上述定义意在不包括不允许的取代模式(例如用5个氟取代甲基，或者乙烯或炔不饱和的α位的羟基基团)。这种不允许的取代模式是本领域技术人员公知的。
由于化合物中存在一个或多个不对称中心或手性中心，本发明的化合物可能表现出立体异构现象。本发明考虑了各种立体异构体及其混合物。本发明的某些化合物包含不对称取代的碳原子。此类不对称取代的碳原子可以产生这样的本发明化合物，其包括在特定的不对称取代的碳原子处的立体异构体混合物或单一的立体异构体。结果，本发明化合物的外消旋混合物、非对映体混合物、单一的对映体以及单一的非对映体都包括在本发明中。本文中使用的术语“S”和“R”构型如IUPAC 1974“RECOMMENDATIONS FOR SECTION E，FUNDAMENTALSTEREOCHEMISTRY，”Pure Appl.Chem.45：13-30，1976所定义。可以通过本领域中公知的方法、从市售的手性原料进行手性合成得到期望的对映体，或者可以通过使用已知的技术分离期望的对映体而从对映体混合物得到期望的对映体。
本发明的化合物还可以表现出几何异构现象。几何异构体包括具有烯基或亚烯基(alkenylenyl)部分的本发明化合物的顺式和反式形式。本发明包括单独的几何异构体及立体异构体和其混合物。
C.化合物制备
本发明的化合物可以使用以下一般方法和步骤从容易得到的原料制备。除非另有陈述，原料为市售可得的且是本领域中公知的。应该理解，在给出典型的或优选的方法条件(即反应温度、时间、反应物的摩尔比、溶剂、压力)时，除非另有说明，也可以使用其它方法条件。最佳的反应条件可以随使用的具体反应物或溶剂而变化，但是可以由本领域技术人员通过常规的优化方法来确定该条件。
另外，对于本领域技术人员显而易见的，可能需要使用常规的保护基来防止某些官能团发生不希望的反应。用于各种官能团的适合的保护基以及用于对具体的官能团进行保护和脱保护的适合的条件是本领域中公知的。例如，在T.W.Greene和P.G.M.Wuts，Protecting Groups in OrganicSynthesis，第2版，Wiley，New York，1991以及其中引用的参考文献中描述了大量的保护基。
此外，本发明的化合物可以包含一个或多个手性中心。因此，如果需要的话，这些化合物可以制备或分离为纯的立体异构体，即作为单独的对映体或非对映体，或作为立体异构体富集的混合物。除非另有陈述，所有此类立体异构体(以及富集的混合物)都包括在本发明范围内。可以使用例如本领域中公知的光学活性原料或立体选择性试剂来制备纯的立体异构体(或富集混合物)。作为替代选择，可以使用例如手性柱色谱法、手性拆分剂等来分离此类化合物的外消旋混合物。
本发明的化合物可以通过本领域已知的和文中进一步描述的方法制备。例如制备式(I)化合物的方法描述在公开的申请PCT/US2007/084154(WO 2008/063912)中。文中提供了适用制备式(I)化合物的其它合成方法的示例。
制备某些式I的KSP抑制剂的示例如下面流程1所示。
流程1
将丁基甘氨酸1.1用氯甲酸乙酯处理形成混合酸酐1.2。将苄腈1.3用硫化铵处理形成硫代酰胺1.4，然后将其用肼处理形成式1.5的酰肼。使酰肼1.5与1.2和三乙胺反应得到氨基甲酸酯1.6。然后将-氨基甲酸酯1.6与醋酸铵(NH4OAc)在二甲苯中回流，得到***1.7。使1.7与氟化的苄基溴((2-氟苯基)甲基溴或(3-氟苯基)甲基溴)和Cs2CO3在二甲基甲酰胺反应，得到带有其区域异构体(由柱色谱法分离)的1.8。用三氟乙酸处理1.8得到1.8的TFA盐，然后在用NaOH/甲醇溶液滴定时可以将该盐转化为其游离碱。在使用溴化苄而不是氟化的溴化苄的类似制备中，由1.1和1.3形成1.8以高产率和高纯度(＞97％，由HPLC测定)以及高光学纯度(＞99％e.e.)进行。
流程2
化合物1.9可以与醛2.7在还原胺化条件下反应得到仲胺3.1，然后将其酰化得到式(I)化合物。流程2举例说明可以用于还原胺化步骤来制备式I化合物、特别是式Ia化合物的醛2.7的制备。将环状的胺2.1用Cbz基团保护得到化合物2.2。由MCPBA环氧化化合物2.2获得环氧化物2.3。通过环氧化物与乙烯基溴化镁和溴化铜反应得到醇2.4的外消旋的混合物。通过手性柱色谱法获得为单一对映体的醇2.5。将醇2.5置于在氟化条件下得到乙烯基氟吡咯烷2.6。乙烯基氟吡咯烷2.6随后经历二羟基化/氧化断裂得到醛2.7。
流程3
在连接氟吡咯烷部分后，采用已知的酰化剂和条件来酰化非环状的胺得到式(I)化合物，之后将吡咯烷环的氮上的保护基和/或酰化部分的保护基脱保护。流程3举例说明还原胺化得到仲胺3.1。酰化胺3.1，然后将Cbz基团脱保护并除去游离羟基基团的保护基，得到化合物3.4。用于吡咯烷环氮的适合的保护基例如可以通过氢解作用除去氨基甲酸苄基酯和可以用例如三甲基碘硅烷或酸的试剂选择性除去的氨基甲酸叔丁酯。
流程4
流程4表示对于由仲胺3.1形成脲的一般描述。使仲胺3.1与光气或三光气反应得到氯化合物4.1，使其直接与胺反应得到式(I)的脲化合物，之后将吡咯烷环的氮上的保护基脱保护。流程4图示说明仲胺3.1的氯羰基化得到化合物4.1，使其立即与吗啉反应，然后除去Cbz基团得到化合物4.2。
注意的是，在该分子中的手性中心的绝对立体化学根据已知原料或中间体的手性确定。HPLC和nmr数据支持上述方法提供为单一异构体的化合物的结论。
对于酰化步骤适合的酰化剂和酸包括具有适当结构的酰卤、酸酐和酸(参见式I)。适合的酰胺偶联条件包括使用许多种用来形成酰胺键的酰胺偶联试剂，例如碳二亚胺类N-N’-二环己基碳二亚胺(DCC)、N-N’-二异丙基碳二亚胺(DIPCDI)和1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDCI)。碳二亚胺类可以与添加剂联合使用，所述添加剂例如二甲基氨基吡啶(DMAP)或苯并***类例如7-氮杂-1-羟基苯并***(HOAt)、1-羟基苯并***(HOBt)和6-氯-1-羟基苯并***(Cl-HOBt)；该类酰胺键的形成的条件是本领域众所周知的。
另外的酰胺偶联试剂还包括基于铵和
的试剂。铵盐包括N-[(二甲基氨基)-1H-1，2，3-***并[4，5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物(HATU)、N-[(1H-苯并***-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物(HBTU)、N-[(1H-6-氯苯并***-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物(HCTU)、N-[(1H-苯并***-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵四氟硼酸盐N-氧化物(TBTU)和N-[(1H-6-氯苯并***-1-基)(二甲基氨基)亚甲基]-N-甲基甲铵四氟硼酸盐N-氧化物(TCTU)。
盐包括苯并***-1-基-氧基-三-(二甲基氨基)-
六氟磷酸盐(BOP)、7-氮杂苯并***-1-基-N-氧基-三(吡咯烷子基)
六氟磷酸盐(PyAOP)和苯并***-1-基-N-氧基-三(吡咯烷子基)
六氟磷酸盐(PyBOP)。
酰胺形成步骤可以在极性溶剂例如二甲基甲酰胺(DMF)中进行，并且也可以包含有机碱例如二异丙基乙胺(DIEA)或二甲基氨基吡啶(DMAP)。
下面表1中的化合物通过使用上面所述方法之一来制备。表1还提供了各实施例的IC50值。
D.药物制剂
在用作药物时，本发明的化合物通常以药物组合物的形式施用。这些组合物可以通过多种途径施用，包括口服、胃肠外、透皮、局部、直肠和鼻内施用。这些化合物作为例如可注射的和口服的组合物都是有效的。这些组合物以药学领域公知的方式制备，且包含至少一种活性化合物。
本发明还包括如下的药物组合物，其包含作为活性成分的一种或多种上述的本发明化合物以及药学可接受的载体。在制备本发明的组合物时，通常将活性成分与赋形剂混合，用赋形剂稀释，或包封在可以为胶囊、药囊、纸或其它容器形式的载体中。所用的赋形剂典型地为适合于对人类受试者或其它哺乳动物施用的赋形剂。在将赋形剂用作稀释剂时，所述赋形剂可以是固体、半固体或液体材料，起到活性成分的溶媒、载体或介质的作用。因此，所述组合物可以是片剂、丸剂、粉剂、锭剂、囊剂(sachets)、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶剂、糖浆剂、气雾剂(作为固体或在液体介质中)、包含例如最多10重量％活性化合物的软膏剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、无菌可注射溶液和无菌包装粉剂的形式。
在制备制剂时，可能需要对活性化合物进行碾磨，以便在与其他成分组合之前提供适当的粒径。如果活性化合物基本上是不可溶的，通常将其碾磨到小于200目的粒径。如果活性化合物基本上是水可溶的，通常通过碾磨对粒径进行调整以便提供制剂中基本上均匀的分布，例如约40目。
适合的赋形剂的一些实例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、***树胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、无菌水、糖浆和甲基纤维素。制剂可以另外包含：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；润湿剂；乳化剂和助悬剂；防腐剂，如羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯；甜味剂；和调味剂。可以通过本领域中已知的方法将本发明的组合物配制为用于在对患者施用之后提供活性成分的快速、持续或延迟释放。
在药物组合物和其单位剂型中的活性组分即本发明化合物的量可以宽泛地改变或调整，这取决于具体的应用、具体化合物的效力和期望的浓度。
优选将组合物配制为单位剂型，每一剂量包含约1-约500mg、通常约5-约100mg、有时为约10-约30mg的活性成分。术语“单位剂型”是指适合于作为用于人类受试者和其它哺乳动物的单一剂量的物理上离散的单位，每个单位包含计算的用于产生期望治疗效果的预定量的活性物质以及适合的药物赋形剂。优选地，上述本发明化合物以药物组合物的不超过约20重量％的量使用，更优选为不超过约15重量％，余量为药学惰性的载体。
活性化合物在宽剂量范围内有效，通常以药学有效量或治疗有效量施用。然而，应该理解，实际上施用的化合物的量由医生根据相关情况来决定，所述相关情况包括要治疗的疾患、要治疗疾患的严重程度、选择的施用途径、所施用的实际化合物、个体患者的年龄、体重和反应、患者症状的严重程度等。
在用于治疗或对抗哺乳动物的癌症的治疗用途中，所述化合物或其药物组合物可以通过任何适当的途径例如口服、局部、透皮和/或胃肠外途径以如此剂量施用，所述剂量可以获得和保持治疗有效的浓度(即在接受治疗的哺乳动物中的活性成分的量或血液水平)。一般地，活性组分的剂量的治疗有效量(即有效剂量)为约0.1到约100mg/kg体重/天，更优选为约1.0到约50mg/kg体重/天。
对于制备固体组合物如片剂而言，将主要的活性成分与药物赋形剂混合，以形成包含本发明化合物的均匀混合物的固体预制剂组合物。在描述这些预制剂组合物为均匀的时，意思是活性成分均匀地分散在组合物中，使得组合物可以容易地再分为同等地有效的单位剂型，如片剂、丸剂和胶囊剂。然后将这种固体预制剂再分成上述类型的单位剂型，其包含例如0.1-约500mg的本发明活性成分。
本发明的片剂或丸剂可以包衣或者以其它方式调合，以得到提供延长作用益处的剂型。例如，片剂或丸剂可以包括内部剂量组分和外部剂量组分，后者为内部剂量组分外的外壳形式。两种组分可以通过肠溶层分离，所述肠溶层用以防止在胃中崩解且允许内部组分完整地进入到十二指肠中或者延迟释放。有多种材料可以用于这种肠溶层或包衣，这些材料包括多种聚合酸类和聚合酸类与诸如虫胶、鲸蜡醇和醋酸纤维素的材料的混合物。
其中可以掺合本发明的新组合物的用于口服或通过注射施用的液体形式包括水溶液剂、适当调味的糖浆剂、水或油混悬剂，和包含可食用油如玉米油、棉子油、芝麻油、椰子油或花生油的调味的乳剂，以及酏剂和类似的药物媒介物。
用于吸入或吹入的组合物包括在药学可接受的水性或有机溶剂或其混合物中的溶液剂和混悬剂，以及粉剂。所述液体或固体组合物可以包含前述的适合的药学可接受的赋形剂。优选地，所述组合物通过口或鼻的呼吸途径施用，用于得到局部或全身的作用。在优选的药学可接受溶剂中的组合物可以通过使用惰性气体来雾化。雾化的溶液可以从雾化装置直接吸入，或者可以将雾化装置连接于面具罩，或者连接于间歇性正压呼吸机。溶液、混悬液或粉末组合物可以从以适当的方式递送制剂的装置优选经口或经鼻施用。
以下制剂实施例说明本发明的代表性的药物组合物。
制剂实施例1
制备包含以下成分的硬明胶胶囊：
将上述成分混合，以340mg的量填充到硬明胶胶囊中。
制剂实施例2
使用以下成分制备片剂：
将各组分混合，压片，形成片剂，每片称重为240mg。
制剂实施例3
制备包含以下组分的干燥粉末吸入制剂：
成分 重量％
活性成分 5
乳糖 95
将活性成分与乳糖混合，将混合物加入到干燥粉末吸入装置中。
制剂实施例4
如下制备各自包含30mg活性成分的片剂
使活性成分、淀粉和纤维素通过No.20目U.S.筛且充分混合。将聚乙烯吡咯烷酮的溶液与得到的粉末混合，然后通过16目U.S.筛。将如此制备的颗粒在50℃-60℃干燥，通过16目U.S.筛。然后向颗粒加入预先通过No.30目U.S.筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石，在混合之后，将其在压片机上压制，得到每片称重为120mg的片剂。
制剂实施例5
如下制备每粒包含40mg药物的胶囊：
将活性成分、淀粉和硬脂酸镁混合，通过No.20目U.S.筛，以150mg的量填充到硬明胶胶囊中。
制剂实施例6
如下制备每枚包含25mg活性成分的栓剂：
成分 量
活性成分 25mg
饱和脂肪酸甘油酯，加至2,000mg
使活性成分通过No.60目U.S.筛，悬浮在事先使用最小必须热量熔化的饱和脂肪酸甘油酯中。然后将混合物倾倒在标称容积为2.0g的栓剂模具中，使其冷却。
制剂实施例7
如下制备每5.0mL剂量包含50mg药物的混悬剂：
将活性成分、蔗糖和黄原胶混合，通过No.10目U.S.筛，然后与事先制备的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的水溶液混合。将苯甲酸钠、调味剂和着色剂用一定量的水稀释，在搅拌下加入。然后添加充足的水，得到所需体积。
制剂实施例8
将活性成分、淀粉和硬脂酸镁混合，通过No.20目U.S.筛，并以425.0mg的量填充到硬明胶胶囊中。
制剂实施例9
可如下制备皮下制剂：
成分 量
活性成分 5.0mg
玉米油 1.0mL
制剂实施例10
可如下制备局部制剂：
将白软石蜡加热，直到熔化。掺入液体石蜡和乳化蜡且搅拌，直到溶解。加入活性成分，继续搅拌，直到活性成分分散。然后将混合物冷却，直到得到固体。
制剂实施例11
可如下制备静脉内制剂的示例性实例：
成分 量
活性成分 250mg
等渗盐水 1000mL
用于本发明方法中的另一种优选的制剂采用透皮递送装置(“贴剂”)。这类透皮贴剂可用于以可控量进行本发明化合物的连续或间断输注。用于递送药物的透皮贴剂的结构和用途是本领域中公知的。参见例如1991年6月11日授权的美国专利5,023,252，其被并入本文作为参考。这类贴剂可以构造为用于药物的连续、脉冲或按需递送。
经常地，期望或者需要将药物组合物直接或间接地引入到脑。直接的技术通常包括将递送药物的导管放置在宿主的脑室***中，以便绕过血脑屏障。用于转运生物因子到身体的特定解剖学区域中的这种可植入递送***之一描述在美国专利5,011,472中，其被并入本文作为参考。
间接技术一般是优选的，通常包括通过将亲水性药物转化为脂溶性药物而将组合物配制为提供药物潜效化。潜效化一般通过封闭药物上存在的羟基、羰基、硫酸根和伯胺基团来实现，使得药物更具脂溶性且可以转运通过血脑屏障。或者，亲水性药物的递送可以通过可以短暂地打开血脑屏障的高渗溶液的动脉内输注而得以加强。
用于本发明的其它适合的制剂可以在Remington’s PharmaceuticalSciences，Mack Publishing Company，Philadelphia，PA，17th ed.(1985)中找到。
E.剂量和施用
如上所述，本文中描述的化合物适用于上述多种药物递送***。另外，为了增加所施用化合物的体内血清半衰期，可以将化合物装入胶囊、引入到脂质体的腔中、制备为胶体，或者可以采用提供延长化合物血清半衰期的其它常规技术。有多种方法可用于制备脂质体，如例如Szoka，等人，美国专利4,235,871、4,501,728和4,837,028中所述，所述专利的每一个都被并入本文作为参考。
本发明化合物可用于抑制或治疗至少部分由KSP活性介导的病症。在一个方面中，所述至少部分由KSP介导的病症是细胞增殖性病症。术语“细胞增殖性病症”或“细胞增殖病症”是指这些疾病，包括例如癌症、肿瘤、增生、再狭窄、心脏肥大、免疫病症和炎症。本发明提供治疗需要该治疗的人或哺乳动物受试者的方法，包括对所述受试者施用治疗有效量的单独或与其它抗癌剂组合的式I或II的化合物。
本发明的化合物可以在体外或体内用于抑制癌细胞生长。术语“癌症”是指癌症疾病，包括例如：肺和支气管癌、***癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠和直肠癌、甲状腺癌、胃癌、肝脏和肝内胆管癌、肾脏和肾盂癌、膀胱癌、子宫体(uterine corpus)癌、子***、卵巢癌、多发性骨髓瘤、食管癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性白血病、骨髓性白血病、脑癌、口腔和咽癌、喉癌、小肠癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和绒毛状结肠腺瘤(villous colon adenoma)。
癌症还包括选自以下的肿瘤或赘生物(neoplasm)：癌、腺癌、肉瘤和血液学恶性肿瘤。
另外，癌症的类型可以选自以下：实体瘤/恶性肿瘤的生长、粘液样(myxoid)细胞和圆细胞癌、局部的晚期肿瘤(locally advanced tumors)、人软组织癌、癌症转移、鳞状细胞癌、食道鳞状细胞癌、口腔癌、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、肾上腺皮质的癌症、产生ACTH的肿瘤、非小细胞癌、乳腺癌、胃肠癌、泌尿科癌症、女性生殖道的恶性肿瘤、男性生殖道的恶性肿瘤、肾癌、脑癌、骨癌、皮肤癌、甲状腺癌、视网膜母细胞瘤、神经母细胞瘤、腹膜渗出液、恶性胸腔积液、间皮瘤(mesothelioma)、Wilm’s肿瘤、胆囊癌、滋养层肿瘤(trophoblasticneoplasms)、血管外皮细胞瘤(hemangiopericytoma)和卡波济氏肉瘤。
本发明的化合物或组合物可以通过适合的途径对哺乳动物施用，例如通过口服、静脉内、胃肠外、透皮、局部、直肠或鼻内途径施用。
哺乳动物包括例如人和其它灵长类动物、宠物或陪伴动物如狗和猫、实验动物如大鼠、小鼠和兔和农场动物如马、猪、羊和牛。
肿瘤或赘生物包括其中细胞的增殖是不受控制且是进行性的组织细胞生长。这类生长中的一些是良性的，但是其它的被称为“恶性的”且可能导致生物体死亡。恶性的赘生物或“癌症”与良性的生长之间的不同之处在于，除了表现出攻击性的细胞增殖之外，恶性的赘生物或“癌症”可以侵入周围的组织以及转移。此外，恶性的赘生物的特征在于它们表现出相对于彼此和相对于周围组织的更大的分化丧失(更大的“去分化(dedifferentiation)”)和更大的结构损失。这种性质被称为“退行发育”。
具有期望生物活性的化合物可以根据需要进行修饰来提供所需的性质，如改善的药理学性质(例如体内稳定性、生物利用度)或者在诊断应用中被检测到的能力。稳定性可以通过多种方式试验，如通过在与肽酶或人血浆或血清进行培养过程中测量化合物的半衰期。
对于诊断目的，可以为化合物连接可以直接或间接地提供可检测信号的各种标记物。因此，本发明的化合物和/或组合物可以通过多种方式进行修饰来用于多种目的，而仍保持生物活性。另外，可以引入各种活性部位用于连接于粒子、固体基质、大分子等。
可将标记的化合物用于多种体内或体外应用中。可以采用多种标记物，例如放射性核素(例如发射γ射线同位素，如锝-99或铟-111)、荧光剂(例如荧光素)、酶、酶底物、酶辅助因子、酶抑制剂、化学发光化合物、生物发光化合物等。本领域技术人员应知道用于结合于复合物的其它适合的标记物，或者能够使用常规实验来确定。这些标记物的结合使用本领域技术人员公知的标准技术来实现。
本发明的药物组合物适合用于多种药物递送***。用于本发明的适合的制剂可以在Remington′s Pharmaceutical Sciences，Mace PublishingCompany，Philadelphia，Pa.，第17版.(1985)中找到。
对患者施用的量随所施用的药物、施用的目的如预防或治疗、患者的状态、施用方式等而不同。在治疗应用中，将组合物以足以治愈所述疾病及其并发症或至少部分抑制所述疾病及其并发症的进展或症状的量对已经患病的患者施用。足以实现该目的的量被定义为“治疗有效剂量”。对于这种用途有效的量取决于所治疗的疾病状况以及主治临床医师根据各种因素得出的判断，所述因素例如疾病、病症或疾患的严重程度；患者的年龄、体重和一般状况等。
对患者施用的化合物典型地为上述的药物组合物的形式。这些组合物可以通过常规的灭菌技术灭菌，或者可以是无菌过滤的。所得到的水溶液可以经过包装就此使用，或者可以冻干，冻干的制备物在施用前与无菌含水载体合并。化合物制备物的pH典型地为约3-11，更优选为约5-9，且最优选为约7-8。应该理解，使用某些前述的赋形剂、载体或稳定剂会导致形成药用盐。
本发明的化合物和/或组合物的治疗剂量会随以下因素改变，例如进行治疗的具体用途、化合物的施用方式、患者的健康和状况、处方医生的判断。例如，对于口服施用，剂量典型地为每天每千克体重约5μg-约50mg，优选为每天每千克体重约1mg-约10mg。或者，对于静脉内施用而言，剂量典型地为每千克体重约5μg-约50mg，优选为每千克体重约500μg-约5000μg。所考虑的可供选择的施用途径包括但不限于鼻内、透皮、吸入、皮下和肌肉内的途径。有效剂量可以从体外或动物模型试验***得到的剂量反应曲线外推得到。
通常，本发明的化合物和/或组合物通过对于用于类似用途的药物的任何可接受的施用方式以治疗有效量施用。这些化合物的毒性和治疗效能可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学方法来测定，例如测定LD50(使群体的50％致死的剂量)和ED50(在群体的50％中治疗有效的剂量)。毒性和治疗效果间的剂量比为治疗指数，其可以表示为比率LD50/ED50。优选表现出大的治疗指数的化合物。
得自细胞培养试验和动物研究的数据可用于制定在人类中使用的剂量范围。优选这些化合物的剂量处于包括ED50在内的有很小毒性或没有毒性的循环浓度范围内。取决于所用的剂型和所用的施用途径，剂量可以在该范围内变化。对于用于本发明方法的任何化合物和/或组合物而言，治疗有效剂量可以最初从细胞培养试验来估算。可以在动物模型中制定实现包括在细胞培养中测定的IC50(实现活性的半数最大抑制的试验化合物浓度)在内的循环血浆浓度范围的剂量。这种信息可用于更准确地确定在人类中有用的剂量。可以通过例如高效液相色谱法测量血浆中的水平。
提供以下合成实施例和生物学实施例来阐明本发明，不应以任何方式将其解释为限制本发明的范围。
实施例
参考以下的实施例，使用本文中所述的方法或本领域中公知的其它方法合成本发明的化合物。应该理解，未加以制备或分析的化合物可以通过本文中所述的方法或本领域中公知的其它方法来制备或分析。
化合物和/或中间体通过高效液相色谱法(HPLC)进行表征，所述HPLC使用具有2690分离模块的Waters Millenium色谱***(Milford，MA)。分析柱是Alltima C-18反相柱，4.6x250mm，得自Alltech(Deerfield，IL)。使用梯度洗脱，典型地从5％乙腈/95％水开始，且在40分钟内递进到100％乙腈。所有的溶剂都包含0.1％的三氟乙酸(TFA)。化合物在220nm或254nm通过紫外线(UV)吸收检测。HPLC溶剂得自Burdick andJackson(Muskegan，MI)或Fisher Scientific(Pittsburgh，PA)。在有些情况下，通过使用玻璃或塑料背层硅胶板如例如Baker-Flex Silica Gel 1B2-F柔性薄板的薄层色谱法(TLC)评价纯度。TLC结果容易地在紫外光下通过视觉检测，或者通过采用公知的碘蒸气以及其它各种染色技术检测。
质谱分析在两个LC/MS仪器之一上进行：一个是WatersSystem(Alliance HT HPLC和Micromass ZQ质谱仪；柱：Eclipse XDB-C18，2.1x50mm；溶剂***：含5-95％(或35-95％或65-95％或95-95％)乙腈的水，包含0.05％TFA；流速：0.8mL/min；分子量范围：500-1500；锥孔电压：20V；柱温40℃)；或另一个是Hewlett Packard System(Series 1100HPLC；柱：Eclipse XDB-C18，2.1x50mm；溶剂***：含1-95％乙腈的水，包含0.05％TFA；流速：0.4mL/min；分子量范围：150-850；锥孔电压：50V；柱温：30℃)。所有的质量均作为质子化母体离子的质量来报告。
GC/MS分析在Hewlett Packard仪器(HP6890 Series气相色谱仪，具有Mass Selective Detector 5973；注射器体积：1mL；初始柱温：50℃；最终柱温：250℃；升温时间：20分钟；气体流速：1mL/min；柱：5％苯基甲基硅氧烷，Model No.HP 190915-443，直径：30.0mx25mx0.25m)上进行。
使用Varian 300MHz NMR(Palo Alto，CA)对一些化合物进行核磁共振(NMR)分析。光谱的参比是TMS或已知的溶剂的化学位移。一些化合物样品的测试在升高的温度(例如75℃)进行，以便增加样品溶解性。
通过元素分析(Desert Analytics，Tucson，AZ)来评价本发明的一些化合物的纯度。
在Laboratory Devices Mel-Temp装置(Holliston，MA)上测定熔点。
制备性分离使用Flash 40色谱***和KP-Sil，60A(Biotage，Charlottesville，VA)进行，或者通过使用硅胶(230-400目)填充材料的快速柱色谱法进行，或者通过使用C-18反相柱的HPLC进行。对于Flash 40Biotage***和快速柱色谱法所用的典型的溶剂是二氯甲烷、甲醇、EtOAc、己烷、丙酮、含水羟胺和三乙胺。对于反相HPLC所用的典型的溶剂是含0.1％三氟乙酸的不同浓度的乙腈和水。
除非另有说明，所有的温度都是摄氏温度。另外，在这些实施例中和在别处，缩写具有以下含义：
AcOH ＝ 乙酸
aq. ＝ 含水的
ATP ＝ 三磷酸腺苷
Boc ＝ 叔丁基氧基羰基
BSA ＝ 牛血清白蛋白
CAM ＝ 钼酸铈铵
DCM ＝ 二氯甲烷
DIAD ＝ 偶氮二甲酸二异丙基酯
DIBAL ＝ 二异丁基氢化铝
DIEA ＝ 二异丙基乙基胺
DIPEA ＝ 二异丙基乙基胺
DMAP ＝ 二甲基氨基吡啶
DMF ＝ 二甲基甲酰胺
DMSO ＝ 二甲基亚砜
DTT ＝ 二硫苏糖醇
eq. ＝ 当量
Et2O ＝ ***
Et3N ＝ 三乙胺
EtOAc ＝ 乙酸乙酯
EtOH ＝ 乙醇
g ＝ 克
h ＝ 小时
HPLC ＝ 高效液相色谱法
L ＝ 升
LC/MS ＝ 液相色谱/质谱
M ＝ 摩尔的(摩尔浓度)
m ＝ 米
m/z ＝ 质量/电荷比
MeNH2 ＝ 甲基胺
mg ＝ 毫克
min ＝ 分钟
mL ＝ 毫升
mm ＝ 毫米
mM ＝ 毫摩尔的(毫摩尔浓度)
mmol ＝ 毫摩尔
mol ＝ 摩尔
N ＝ 正常
nm ＝ 纳米
nM ＝ 纳摩尔(纳摩尔浓度)
NMR ＝ 核磁共振
PPh3 ＝ 三苯膦
PhCF3 ＝ 三氟甲基苯
psi ＝ 磅/平方英寸
RT ＝ 室温
sat. ＝ 饱和的
TEA ＝ 三乙胺
THF ＝ 四氢呋喃
TFA ＝ 三氟乙酸
TLC ＝ 薄层色谱法
TMS ＝ 三甲基甲硅烷基
TMSCl ＝ 三甲基甲硅烷基氯
μg ＝ 微克
μL ＝ 微升
μM ＝ 微摩尔的(微摩尔浓度)
Uplc ＝ 超高效液相色谱法
实施例1
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺
步骤
2，5-二氢-1H-吡咯的Cbz保护
向2，5-二氢-1H-吡咯(30g，434mmol，96％来自Alfa Aesar)的二氧六环的溶液(1000mL，0.43M溶液)中加入CbzOSu(130g，521mmol)。在室温下搅拌18h后，将反应混合物浓缩至约300mL，用1000mL的EtOAc稀释。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法以91％的产率(80.0g)得到预期的2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯，为无色油状物。Rf＝0.6(30％EtOAc的己烷溶液)。1HNMR(CDCl3，400MHz)：
(5H，m)，5.80(2H，m)，5.77(2H，s)，4.22(4H，m).LC/MS(uplc)：MH+204.2，160.1(-44)，0.86min.
2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯的环氧化
向2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苄酯(33g，163mmol；90％来自Aldrich)的二氯甲烷溶液(540mL，0.3M溶液)中加入MCPBA(44g，340mmol，77％来自Aldrich)。将反应混合物在室温下搅拌18h后，加入500mL的饱和的Na2CO3水溶液并将得到的混合物在室温下搅拌1h。将有机层分离，用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤，并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法以83％产率(29.5g)得到预期的产物，为黄色油状物。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ3.38(2H，m)，3.68(2H，m)，3.87(2H，m)，5.11(2H，s)，7.33(5H，m).LC/MS(uplc)：MH+220.0，0.69min.
6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯的开环
在-40℃下，向6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苄酯(28.5g，130mmol)和CuBr·SMe2(26.7g，130mmol)的无水THF溶液(260mL，0.5M溶液)中缓慢地加入乙烯基溴化镁(520mL，1.0M的THF溶液)。然后将反应混合物加热至-20℃反应2h。用饱和的NH4Cl水溶液(200mL)淬灭后，将反应混合物用EtOAc(500mL)萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩。通过快速柱色谱法以48％产率(15.5g)得到期望的反式-(±)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的外消旋的混合物，为黄色油状物。Rf＝0.2(30％EtOAc的己烷溶液)。1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ2.71(1H，m)，3.28(2H，m)，3.72(2H，m)，4.11(1H，m)，5.14(2H，s)，5.16-5.23(2H，m)，5.69(1H，m)，7.33(5H，m).LC/MS(uplc)：MH+248.0，0.78min.
反式-(±)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的拆分
通过使用手性HPLC(Chiralpak AD-H庚烷∶EtOH∶MeOH，8∶1∶1)将反式-(±)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的外消旋的混合物(14g)拆分。以92％回收率得到期望的对映体富集的(3S，4R)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(6.7min；6.3g，＞99.5％ee)和不期望的(3R，4S)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(9.3min；6.7g，99.5％ee)。
(3S，4R)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯的氟化
向(3S，4R)-3-羟基-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(5.0g，20.2mmol)的PhCF3溶液(81mL，0.25M溶液)中加入N，N-二异丙基乙胺(53mL，303mmol)、三乙胺三氢氟酸盐(19.8mL，121mmol)和全氟-1-丁烷磺酰氟(PBSF，3.6mL，20.2mmol)。将得到的混合物在室温下搅拌。60和120分钟后，再加入全氟-1-丁烷磺酰氟(3.6mL，20.2mmol)。18小时后，将反应混合物转移至分液漏斗并用50mL的1.0N HCl洗涤两次(注意！产生大量热量)，用饱和的NaHCO3水溶液洗涤两次，并且用H2O和盐水洗涤一次。将有机相用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩得到粗的棕色油状物。通过快速柱色谱法(SiO2，10％-30％ EtOAc的己烷溶液)以81％产率(4.1g)得到纯的(3R，4R)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯，为黄色油状物。Rf＝0.55(30％EtOAc的己烷溶液).1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ7.37-7.25(5H，m)，5.9(1H，m)，5.24(2H，m)，5.14(2H，m)，5.03(1H，dt，J＝52.8，3.2Hz)，3.9-3.5(3H，m)，3.53(1H，m)，2.83(1H，m).13C NMR(CDCl3，100MHz)：δ154.7，154.6，136.6，131.89，131.83，128.48，128.02，127.94，119.00，118.94，95.23，94.47，93.42，92.67，66.99，66.94，53.16，52.94，52.83，52.60，48.17，48.02，47.91，47.83，47.2，47.1.LC/MS(uplc)：MH+250.0，0.93min.
乙烯基氟吡咯烷的氧化裂解
向(3R，4R)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.78g，7.15mmol)的CH3OH和H2O溶液(2∶1，30mL，0.2M溶液)中加入OsO4的H2O溶液(3mL 4％ w/v溶液，0.5mmol)。然后一次性地加入NaIO4(4.6g，21.5mmol)并将得到的混合物在室温下搅拌。2小时后，将混合物过滤除去沉淀的白色固体并将滤饼用EtOAc洗涤。将滤液在真空下浓缩除去大多数的有机溶剂。将残留物用三份EtOAc萃取并将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗的(3R，4S)-3-氟-4-甲酰基吡咯烷-1-甲酸苄酯不需要进一步纯化即用于下一步骤。LC/MS(uplc)：MH+208.2(-44)，252.0，0.69min.
2，5-二氟硫代苯甲酰胺的合成
将搅拌的2，5-二氟苄腈(25g，180mmol)的吡啶(90mL)溶液用20wt％硫化铵的水溶液(67.4mL，198mmol)和三乙胺(27.4mL，198mmol)处理。将反应混合物在50℃下搅拌5h直至反应完全。在室温下冷却后，将混合物用冷水稀释并用EtOAc萃取。将有机层分离，然后用H20(x3)、盐水(x3)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发得到粗产物。通过硅胶柱纯化(20％ EtOAc的己烷溶液)，得到2，5-二氟硫代苯甲酰胺，为黄色固体(31.0g，99％)。1H NMR(CDCl3，300MHz)：δ7.12(m，2H)，7.90(br，2H)，8.08(m，lH).LC/MS(uplc)：MH+174.0，0.64min.
2，5-二氟苯亚氨酰肼的合成
向搅拌的2，5-二氟硫代苯甲酰胺(22.5g，129.7mmol)的EtOH(150mL)溶液中加入肼(6.1mL，194.5mmol)。在室温下搅拌30min后，通过LC/MS显示反应完全，并且白色固体沉淀。将沉淀物过滤并用己烷洗涤得到2，5-二氟苯亚氨酰肼(5.52g，94％)。
2，5-二氟苯亚氨酰肼的酰化
在-5℃至0℃下，将N-Boc-D-叔丁基甘氨酸(7.5g，32.4mmol)通过加入氯甲酸乙酯(3.41mL，35.6mmol)、Et3N(6.8mL，48.6mmol)的无水THF溶液(65mL，0.5M)转化为混合酸酐。将混合物在-5℃下搅拌30min。将得到的固体过滤，并再加入无水THF来洗涤沉淀物。然后在-5℃下将得到的反应溶液加入到2，5-二氟苯亚氨酰肼(5.53g，32.4mmol)的THF溶液中。然后将反应逐渐地升至室温并搅拌过夜。一旦反应完全，将混合物在EtOAc和H2O之间分配。将有机层分离并用H2O、盐水洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤，并且在减压下蒸发，得到粗产物，将粗产物通过硅胶柱纯化(50％EtOAc的己烷溶液)，得到(R)-1-(2-((2，5-二氟苯基)(亚氨基)甲基)肼基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(67％).Rf＝0.4(50％EtOAc的己烷溶液).LC/MS(uplc)：MH+385.3，0.65min.
(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸
叔丁酯的合成
将(R)-1-(2-((2，5-二氟苯基)(亚氨基)甲基)肼基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(8.35g，21.7mmol)溶解在二甲苯(200mL)中。装配Dean-Stark汽水分离器并将反应混合物加热至150℃。一旦反应完全，将混合物冷却至室温，然后在EtOAc和饱和的NaHCO3水溶液之间分配。将有机层分离，然后用饱和的NaHCO3水溶液、H2O和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发，得到(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(7.81g，98％)，其没有进一步纯化用于下一步骤。LC/MS(uplc)：MH+ 367.2，0.98min.
用苄基溴烷基化(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-
二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯
向搅拌的(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(5.89g，16.1mmol)和Cs2CO3(10.5g，32.2mmol)的DMF混悬液(46mL，0.35M)中加入苄基溴(2.11mL，17.7mmol)。一旦分离有机层，并用H2O、盐水洗涤后，用Na2SO4干燥，过滤，并在真空中蒸发，得到(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基-氨基甲酸叔丁酯。通过硅胶柱得到期望的区域异构体(0％至100％EtOAc的己烷溶液，3.25g，44.3％)。通过1H NMR nOe实验证实结构。
对于期望的异构体，((R)-(1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯)：晶体，LC/MS(uplc)：MH+ 457.2，1.36min.1H NMR(CDCl3，300MHz)：(m，1H)，7.29-7.39(m，5H)，7.00-7.18(m，2H)，5.53(s，2H)，5.20(d，2H)，4.83(m，2H)，1.41(s，9H)，0.91(s，9H)。对于不期望的异构体，((R)-(1-(1-苄基-5-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-3-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯)：无色油状物，LC/MS(uplc)：MH+ 457.2，1.25min.1H NMR(CDCl3，300MHz)：
(m，5H)，7.15(m，2H)，7.05(m，1H)，5.45(d，2H)，5.28(s，2H)，4.85(d，2H)，1.43(s，9H)，0.97(s，9H).
(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基
氨基甲酸叔丁酯的脱保护
将(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(3.25g，7.13mmol)用TFA(10mL)的CH2C12(30ml)溶液处理。一旦反应完全，将反应在真空下浓缩，然后在EtOAc和饱和的NaHCO3水溶液之间分配。将有机物分离，然后用H2O、盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发，得到(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙-1-胺，其没有进一步纯化直接用于下一步骤(2.32g，91％)。LC/MS(uplc)：MH+ 357.1，0.82min.
还原烷基化
向(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙-1-胺(2.55g，7.15mmol)的CH2Cl2(59mL)溶液中加入粗的(3R，4S)-3-氟-4-甲酰基吡咯烷-1-甲酸苄酯(由1.4当量的(3R，4R)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯得到)的CH2Cl2(10mL)溶液和NaBH(OAc)3(2.3g，10.7mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。用饱和的NaHCO3水溶液淬灭后，将反应混合物用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗的还原胺化产物被HF消除的烯烃产物污染，其通过硅胶柱色谱法或制备反相HPLC都不能分离。因此，将粗混合物(3.0g)溶解在丙酮和水(5∶1，120mL)中。将4-甲基吗啉N-氧化物(715mg，6.1mmol)和OsO4(2.15mL的4％w/v溶液)加入到该反应混合物中，然后将其在室温下搅拌过周末。在真空下除去丙酮，将剩余的水层用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法得到期望的(3R，4R)-3-(((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(35％至80％EtOAc的己烷溶液，1.5g，35％)。LC/MS(uplc)MH+592.3，0.97min.
还原烷基化
向(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙-1-胺(2.55g，7.15mmol)的CH2Cl2(59mL)溶液中加入粗的(3R，4S)-3-氟-4-甲酰基吡咯烷-1-甲酸苄酯(来自1.4当量的(3R，4R)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯)的CH2Cl2(10mL)溶液和NaBH(OAc)3(2.3g，10.7mmol)。然后在室温下搅拌16h。用饱和的NaHCO3水溶液淬灭后，将反应混合物用EtOAc淬灭。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗的还原胺化产物被HF消除的烯烃产物污染，其通过硅胶柱色谱法或制备反相HPLC都不能分离。因此，将粗混合物(3.0g)溶解在丙酮和水(5∶1，120mL)中。将4-甲基吗啉N-氧化物(715mg，6.1mmol)和OsO4(2.15mL的4％w/v溶液)加入到该反应混合物中，然后将其在室温下搅拌过周末。在真空下除去丙酮，将剩余的水层用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法得到期望的(3R，4R)-3-(((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(35％至80％EtOAc的己烷溶液，1.5g，35％)。LC/MS(uplc)MH+592.3，0.97min.
酰氯的制备
将(S)-四氢呋喃-2-甲酸(5.1g，44mmol)用SOCl2(15mL)溶解。将反应混合物回流30min。真空下除去挥发性物质，粗的(S)-四氢呋喃-2-羰基氯(6.0g，＞99％)用于下一步骤。
酰胺键形成
在室温下，向(3R，4R)-3-(((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(500mg，0.845mmol)的二氯甲烷溶液(8.5mL，0.1M溶液)中加入三乙胺(236μL，1.69mmol)。然后历经2min滴加粗的(S)-四氢呋喃-2-羰基氯(227mg，1.69mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。真空下除去挥发性有机物质，通过快速柱色谱法纯化期望的(3R，4R)-3-(((S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)四氢呋喃-2-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(产率：N/A)0％-100％，EtOAc的己烷溶液).LC/MS(uplc)：MH+690.5，1.35min.
脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)四氢呋喃-2-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(583mg，0.845mmol)的脱气的EtOAc溶液(8mL，0.1M溶液)中加入Pd/C(899mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。在真空下除去挥发性有机滤液得到粗产物，其通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。然后将干燥的产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以27.9％产率(131mg)得到白色粉末状的(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺，其为游离的胺。1H NMR(CD3Cl，400MHz)：δ7.82(1H，m)，7.53(2H，m)，7.35-7.27(3H，m)，7.14(1H，m)，7.06(1H，m)，6.14(1H，s)，5.45(2H，m)，4.85(2H，m)，4.72(1H，m)，4.21(1H，m)，3.97(1H，m)，3.83(1H，m)，3.02(1H，m)，2.80(1H，m)，2.33-1.80(6H，m)，1.25(1H，s)，1.01(1H，m)，0.99(9H，s).LC/MS(uplc)：MH+556.4，0.99min.
实施例2
N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺
步骤
脲形成
向(3R，4R)-3-(((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(110mg，0.186mmol)的二氯甲烷溶液(1.9mL，0.1M溶液)中加入三乙胺(78μL，0.558mmol)，然后在室温下加入20％光气的甲苯溶液(66mg，0.223mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌15min(LC/MS(uplc)：MH+ 654.3，1.37min，(3S，4R)-3-((((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)(氯羰基)氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯)，加入2，6-二甲基吗啉(64mg，0.558mmol)并在40℃下加热过夜(在密闭管中)。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。真空下除去挥发性有机物质，通过制备反相HPLC纯化粗产物。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩，得到期望的(3R，4R)-3-(((2S，6R)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(91mg，66.7％，经2步骤).LC/MS(uplc)：MH+733.5，1.41min.
脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((2S，6R)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(91mg，0.124mmol)的脱气的乙醇溶液(12mL，0.1M溶液)中加入Pd/C(2.64mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌45min。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。在真空下除去挥发性有机滤液得到粗产物，其通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将干燥产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以94％产率(70mg)得到白色粉末状的(2S，6R)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺，其为游离胺。1H NMR(CD3Cl，300MHz)：δ7.83(1H，m)，7.52(2H，m)，7.34-7.27(3H，m)，7.08(1H，m)，7.04(1H，m)，5.94(2H，m)，5.41(1H，s)，3.92-3.62(3H，m)，3.60-3.45(3H，m)，3.17-2.58(3H，m)，2.57-2.37(1H，m)，2.35-2.04(2H，m)，1.85(2H，m)，1.20(6H，s)，0.9(1H，m)，0.8(9H，s).LC/MS(uplc)：MH+ 599.5，1.06min.
实施例3
N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙
基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺
步骤
用3-氟苄基溴烷基化(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-
2.2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(对于CHIR782903)
向搅拌的(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(5.89g，16.1mmol)和Cs2CO3(10.5g，32.2mmol)的DMF(46mL，0.35M)混悬液中加入3-氟苄基溴(2.17mL，17.7mmol)。一旦反应完全，将混合物在EtOAc和H2O之间分配。将有机层分离并用H2O、盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并在真空下蒸发得到(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。通过硅胶柱得到期望的较小极性的区域异构体(0％至100％EtOAc的己烷溶液，5.05g，66.2％)。
对于期望的异构体，(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯：LC/MS(uplc)475.2，1.35min。对于不期望的异构体(R)-1-(5-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-3-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯：LC/MS(uplc)MH+475.2，1.24min.
(R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基
氨基甲酸叔丁酯的脱保护(对于CHIR782903)
将(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(5.05g，10.7mmol)用TFA(10mL)的CH2Cl2(30ml)溶液处理。一旦反应完全，将反应物在真空下浓缩，然后在EtOAc和饱和的NaHCO3水溶液之间分配。将有机物分离，然后用H2O、盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发得到(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙-1-胺，其不需要进一步纯化直接用于下一步骤(2.55g，64％)。LC/MS(uplc)MH+375.1，0.83min.
还原烷基化
向(R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙-1-胺(2.55g，6.8mmol)的CH2Cl2(58mL)溶液中加入粗的(3R，4S)-3-氟-4-甲酰基吡咯烷-1-甲酸苄酯(来自1.4当量的(3R，4R)-3-氟-4-乙烯基吡咯烷-1-甲酸苄酯)的CH2Cl2(10mL)溶液和NaBH(OAc)3(2.2g，10.2mmol)。然后将反应混合物在室温下搅拌16h。用饱和的NaHCO3水溶液淬灭后，将反应混合物用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。粗的还原胺化产物被HF消除的烯烃产物污染，其通过硅胶柱色谱法或制备反相HPLC都不能分离。因此，将粗混合物(2.89g)溶解在丙酮和水(5∶1，120mL)中。将4-甲基吗啉N-氧化物(667mg，5.7mmol)和OsO4(1.51mL的4％w/v溶液)加入到该反应混合物中，然后将其在室温下搅拌过周末。在真空下除去丙酮，将剩余的水层用EtOAc萃取。将有机层用水和盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱法得到期望的(3R，4R)-3-(((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(40％至90％EtOAc的己烷溶液，2.16g，52％)。LC/MS(uplc)：MH+610.2，0.99min.
脲形成
在室温下，向(3R，4R)-3-(((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(30mg，0.049mmol)的二氯甲烷溶液(450μL，0.1M溶液)中加入三乙胺(20.6μL，0.148mmol)，然后加入20％光气的甲苯溶液(6.2μL，0.059mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌15min后(LC/MS(uplc)：MH+ 654.3，1.37min，(3S，4R)-3-((((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)(氯羰基)氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯)，加入2，6-二甲基吗啉(64mg，0.558mmol)并在室温下搅拌15min。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用NaHCO3溶液和盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。真空下除去挥发性有机物质，粗产物通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩得到期望的(3R，4R)-3-(((2S，6R)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(30mg，81％，经2步骤)。LC/MS(uplc)：MH+751.5，1.39min.
脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((2S，6R)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(35mg，0.047mmol)的脱气的乙醇溶液(10mL，4.7mM溶液)中加入Pd/C(0.99mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。在真空下除去挥发性有机滤液得到粗产物，其通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。然后将干燥产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以63％产率(18mg)得到白色粉末状的(2S，6R)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺，其为游离胺。1H NMR(CD3Cl，300MHz)：δ7.84(1H，m)，7.32-6.95(6H，m)，5.79(2H，m)，5.36(1H，s)，4.58(1H，m)，3.91-3.72(3H，m)，3.65-3.50(3H，m)，3.04(1H，m)，2.97-2.65(2H，m)，2.53(1H，m)，2.36(1H，m)，2.18(1H，m)，1.20(6H，s)，0.9(1H，m)，0.84(9H，s).LC/MS(uplc)：MH+617.5，1.06min.
实施例4
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺
步骤
酰胺键形成
在室温下，向(3R，4R)-3-(((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.5g，2.53mmol)的二氯甲烷溶液(25mL，0.1M溶液)中加入三乙胺(458μL，3.29mmol)。然后历经2min滴加乙酸(S)-1-氯-1-氧代丙-2-基酯(416μL，3.29mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。真空下除去挥发性有机物质后，将期望的(3R，4R)-3-(((S)-2-乙酰氧基-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-丙酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯通过快速柱色谱法(0％-100％，EtOAc的己烷溶液)纯化。LC/MS(uplc)：MH+ 706.5，1.34min.
整体脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((S)-2-乙酰氧基-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)丙酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.78g，2.53mmol)的脱气的EtOAc溶液(25mL，0.1M溶液)中加入Pd/C(178mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。将挥发性的有机滤液在真空下除去，得到粗的胺(LC/MS(uplc)：MH+572.4，1.11min)。然后，将粗产物溶解在MeOH中(168mL，0.015M溶液)，然后加入无水碳酸钾(3.5g，25mmol)。然后将反应物在室温下搅拌15min。通过过滤除去白色沉淀后，将有机的滤液在真空下浓缩。将粗产物通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc(200mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。然后将干燥产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以65.5％产率(876mg，经3步骤)得到白色粉末状的(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺，其为游离胺。1H NMR(CD3Cl，400MHz)：δ7.82(1H，m)，7.52(2H，m)，7.34-7.25(3H，m)，7.16(1H，m)，7.07(1H，m)，6.09(1H，s)，5.44(2H，s)，4.61(2H，m)，4.39(1H，m)，3.78(1H，m)，3.60(1H，m)，2.92(1H，m)，2.56(1H，m)，2.16(2H，m)，1.44(3H，m)，1.22(1H，m)，0.99(9H，s)，0.42(1H，m).LC/MS(uplc)：MH+530.3，1.05min.
实施例5
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺
步骤
酰胺键形成
在室温下，向(3R，4R)-3-(((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(500mg，0.82mmol)的二氯甲烷溶液(4mL，0.2M溶液)中加入三乙胺(229μL，1.64mmol)。然后历经2min滴加粗的(S)-四氢呋喃-2-羰基氯(221mg，1.64mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取、将有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。真空下除去挥发性有机物质后，将期望的(3R，4R)-3-(((S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)四氢呋喃-2-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯通过快速柱色谱法纯化(产率N/A；0％-100％，EtOAc的己烷溶液)。LC/MS(uplc)：MH+708.4，1.35min.
脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)四氢呋喃-2-甲酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(580mg，0.82mmol)的脱气的EtOAc溶液(80mL，0.1M溶液)中加入Pd/C(873mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。在真空下除去挥发性有机滤液得到粗产物，其通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将干燥产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以10.4％产率(48.9mg)得到白色粉末状的(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺，其为游离胺。1H NMR(CD3Cl，400MHz)：δ7.82(1H，m)，7.34-7.25(3H，m)，7.22(1H，m)，7.15(1H，m)，7.07(1H，m)，6.98(1H，m)，6.10(1H，s)，5.44(2H，m)，4.86(2H，m)，4.19(1H，m)，3.96(1H，m)，3.86(2H，m)，3.05(1H，m)，3.05(1H，m)，2.37-1.70(2H，m)，1.35-1.02(5H，m)，0.99(9H，s).LC/MS(uplc)：MH+574.4，0.98min.
实施例6
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺
酰胺键形成
在室温下，向(3R，4R)-3-(((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(1.48g，2.43mmol)的二氯甲烷溶液(25mL，0.1M溶液)中加入三乙胺(440μL，3.16mmol)。然后历经2min滴加乙酸(S)-1-氯-1-氧代丙-2-基酯(400μL，3.16mmol)。将得到的溶液在室温下搅拌过夜。将反应混合物用H2O淬灭并用EtOAc萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并过滤。真空下除去挥发性有机物质后，将期望的(3R，4R)-3-(((S)-2-乙酰氧基-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)丙酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯通过快速柱色谱法(0％-100％，EtOAc的己烷溶液)纯化。LC/MS(uplc)MH+724.4，1.34min.
整体脱保护
在无水N2气氛下，向(3R，4R)-3-(((S)-2-乙酰氧基-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)丙酰氨基)甲基)-4-氟吡咯烷-1-甲酸苄酯(2.24g，3.09mmol)的脱气的EtOAc溶液(25mL，0.1M溶液)中加入Pd/C(224mg，10wt％)。用氢气冲洗后，将装备有氢气球的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物通过用EtOAc洗涤的
垫过滤。将挥发性的有机滤液在真空下除去，得到粗的胺。然后，将粗产物溶解在MeOH中(200mL，0.015M溶液)，然后加入无水碳酸钾(4.2g，30.9mmol)。然后在室温下将反应搅拌15min。通过过滤除去白色沉淀后，将有机的滤液在真空下浓缩。粗产物通过制备反相HPLC纯化。将合并的产物流分用饱和的NaHCO3溶液中和，然后将其用EtOAc(200mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并在真空下浓缩。将干燥产物溶解在乙腈和水(1∶1比例)中并冻干48h。以57％产率(962mg，经3步骤)得到白色粉末状的(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3S，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺，其为游离胺。1H NMR(CD3OD，400MHz)：
7.81(1H，m)，7.40-7.16(5H，m)，7.06(1H，m)，6.12(1H，s)，5.44(2H，m)，4.77(2H，m)，3.87(1H，m)，2.82(2H，m)，2.28(1H，m)，2.17(1H，m)，1.95(1H，m)，1.43(3H，m)，1.22(1H，m)，0.91(9H，s).LC/MS(uplc)：MH+548.3，0.94min.
实施例7
用于测定KSP活性的试验
该实施例提供用于体外测定KSP活性的代表性体外试验。从Cytoskeleton Inc.(Denver，Colorado，USA)购买得自牛脑的纯化微管。将人KSP(Eg 5，KNSL1)的动力结构域克隆、表达并纯化到大于95％的均质性。Biomol Green购自BIOMOL International L.P.(Plymouth Meeting，Pennsylvania，USA)。在稀释前，将微管在37℃下快速解冻10分钟。将微管和KSP动力蛋白质(即KSP动力结构域)在试验缓冲液(20mMTris-HCl(pH 7.5)，1mM MgCl2，10mM DTT和0.125mg/mL BSA)中稀释到50μg/mL微管和3nM KSP的最终浓度。
向包含1.25μL含抑制剂或试验化合物的DMSO(或者在对照的情况中只有DMSO)的试验板(96孔半面积板)的每个孔加入25μL ATP溶液(ATP在试验缓冲液中稀释到250μM浓度)和25μL上述的微管/KSP溶液。将板在RT孵育2小时。在孵育之后，向每孔中加入65μL含有0.015％ Tween20的Biomol Green(一种基于孔雀绿的染料，其可以检测无机磷酸盐的释放)。将板孵育另外15-20分钟，然后使用Molecular Devices分光光度计在650nm测定吸收。在650nm的吸收量对应于样品中KSP活性的量。然后基于每个浓度下650nm处吸收的减少，通过非线性回归，使用用于Excel的XLFit或使用GraphPad Software Inc的Prism数据分析软件，确定每种抑制剂或试验化合物的IC50。
本发明优选的化合物在实施例7所述的试验方案中具有以IC50测定的小于约1mM的生物活性，优选实施方案具有小于约25μM的生物活性，特别优选的实施方案具有小于约1000nM的生物活性，最优选的实施方案具有小于约100nM的生物活性。
表1列出了代表本发明的示例性实施例的结构、IC50值、质谱数据和保留时间。
表1
本发明的其它化合物在下述表2中。这些化合物类似上述那些化合物那样制备，并且在R1中引入烷氧基基团。这些含有烷氧基部分的化合物可以如下面的实施例中所说明的那样制备。
实施例9
(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-羟基-3-甲基丁酸的甲基化
在0℃下，向氢化钠在矿物油中的混悬物(60％wt)(3.86g，96mmol)的干燥THF(60mL)溶液中缓慢地加入(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-羟基-3-甲基丁酸(7.5g，32.2mmol)的THF(50mL)溶液。在室温下搅拌1h后，加入碘甲烷(4.31ml，38.6mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。用水淬灭后，将反应混合物用***萃取。将水层通过加入6N HCl酸化至pH＝3，然后用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，通过布氏漏斗过滤，并浓缩得到粗的(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-甲基丁酸(7g，28.3mmol，88％)，其没有纯化即用于下一步反应。LC/MS(uplc)：MH+160.1，0.68min.
2，5-二氟苯亚氨酰肼的酰化
在-5℃至0℃下，通过加入Et3N(3.38ml，24.26mmol)、氯甲酸乙酯(1.931g，17.79mmol)的无水THF溶液(32.4ml，0.5M)，将粗的(R)-2-((叔丁氧羰基)氨基)-3-甲氧基-3-甲基丁酸(4g，16.2mmol)转化为混合酸酐。将混合物在-5℃下搅拌30min。将得到的固体过滤并另外加入无水THF洗涤沉淀物。然后在-5℃下，将得到的反应溶液加入到2，5-二氟苯亚氨酰肼(2.77g，16.18mmol)的THF溶液中。然后使反应逐渐升至室温并搅拌过夜。一旦反应完全，将混合物在EtOAc和H2O之间分配。将有机层分离并用H2O、盐水洗涤，然后用无水Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发得到粗产物，将其通过硅胶柱纯化(50％EtOAc的己烷溶液)，得到(R)-(1-(2-((2，5-二氟苯基)(亚氨基)甲基)肼基)-3-甲氧基-3-甲基-1-氧代丁-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1g，15％).LC/MS(uplc)：MH+401.2，0.61min.
(S)-(1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2-甲氧基-2-甲基丙基)氨
基甲酸叔丁酯的合成
将(R)-1-(2-((2，5-二氟苯基)(亚氨基)甲基)肼基)-3，3-二甲基-1-氧代丁-2-基氨基甲酸叔丁酯(1.0g，2.497mmol)溶解在二甲苯(8mL)中。装配Dean-Stark汽水分离器，并将反应混合物加热至160℃。一旦反应完全，将混合物冷却至室温，然后在EtOAc和饱和的NaHCO3水溶液之间分配。将有机层分离，然后用饱和的NaHCO3水溶液、H2O和盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥，过滤，并在减压下蒸发，得到(S)-(1-(3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2-甲氧基-2-甲基丙基)氨基甲酸叔丁酯(0.97g，98％)，其没有进一步纯化用于下一步骤。LC/MS(uplc)：MH+383.2，0.9min.
表2
这类代表性化合物的NMR数据提供在下面：
实施例8
用KSP抑制剂处理的肿瘤细胞系中细胞增殖的抑制
将细胞以96孔板的每孔约500个细胞的密度铺板在96孔板中，并使其生长24小时。然后将细胞用不同浓度的化合物处理72小时。然后，加入100μl
溶液。
试验(assay)测量细胞裂解后在孔中存在的ATP的量；释放的ATP用于酶反应，其包括酶Luciferease和其底物荧光素。发射的光的量与ATP的量成比列，ATP的量与孔中活细胞的的数量成比例。(参见Promega产品目录#G7573，
Luminescent Cell Viability Assay)。然后将细胞在黑暗中孵育30分钟。使用Wallac Trilux读板器测定每孔的发光量，其与每孔中细胞数目相关。将只接收DMSO(0.5％)的孔中的活细胞数作为0％抑制的指示，而将没有细胞的孔作为细胞生长的100％抑制。在连续暴露于化合物72小时时，从转化为对数的剂量值对细胞计数(对照的百分比)的S形剂量反应曲线、通过绘图法确定产生50％生长抑制的化合物浓度(GI50)。
所用细胞系列在下面。
如上所述进行细胞增殖试验。
癌细胞系
Colo 205-结肠癌
RPMI 1640 +10％FBS +1％L-谷氨酰胺+1％P/S
+1％NaPyr.+Hepes
+4.5g/L葡萄糖+1％NaBicarb.
MDA 435-乳腺癌-高met
EMEM+10％FBS+1％P/S+1％L-谷氨酰胺
+1％NEAA+1％NaPyr+1％维生素
HCT-15和HCT116-结肠癌
RPMI 1640+10％FBS+1％L-谷氨酰胺+1％P/S
耐药细胞系
KB3.1-结肠表皮癌；母细胞系
Iscove’s+10％FBS+1％L-谷氨酰胺+1％P/S
KBV1-p-糖蛋白相关的多药耐药细胞系
RPMI 1640+10％FBS+1％L-谷氨酰胺+1％P/S
+0.2ug/mL长春碱
KB8.5-p-糖蛋白相关的多药耐药细胞系
DMEM+10％FBS+1％L-谷氨酰胺+1％P/S+
10ng/mL秋水仙碱
本发明优选的化合物在所述试验方案中具有以GI50测定的小于约1mM的生物活性，一些实施方案具有小于约25μM的生物活性，其它实施方案具有小于约1000nM的生物活性，再其它实施方案具有小于约100nM的GI50。
实施例9
产克隆软琼脂试验方案
将人癌细胞以3x105细胞/孔的密度铺板在6孔板中。第二天，向每孔中加入某一浓度的所关注化合物。在孵育24和48小时之后，收获细胞，洗涤，并计数。使用Multimek 96自动机械进行以下步骤。然后，将每孔的500个活细胞铺板在包被有防止细胞粘附于孔底壁的PolyHema的96孔板中。将琼脂糖(3％储备液)熔化，在温热的培养基中稀释，以0.5％最终浓度加到细胞中。在软琼脂固化之后，将板在37℃孵育6天。添加Alamar蓝染料，将板再孵育6小时。在读板器上测量，并认为其与软琼脂中形成的集落数相关。癌细胞能够在琼脂上生长，由此表现出光密度增加。光密度读数减小意味着癌细胞受到抑制。预期本发明化合物将显示光密度降低。
Claims (37)
1.式I化合物
其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R3表示-(CH2)0-3被取代的或未被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
2.权利要求1的化合物，其中R1选自C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基。
3.权利要求1的化合物，其中R1是C1-6烷氧基-C1-4-烷基。
4.权利要求1的化合物，其中：
R1选自C3-6支链烷基；
R2表示H；
R3表示-(CH2)1-3-被取代的吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5表示苄基或被至多两个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个卤素原子取代的苯基。
5.权利要求2的化合物，其中：
R1表示叔丁基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
6.权利要求4或权利要求5的化合物，其中：
R3表示-CH2-3-氟-吡咯烷基；并且
R4表示-C(O)-2-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-2，6-二甲基吗啉基。
7.权利要求6的化合物，其中：
R3表示
R4选自-C(O)-CH(CH3)-OH和
8.权利要求7的化合物，其中：
R5表示
R6是
9.上述权利要求中任一项的化合物，其中R4选自：
10.权利要求1的化合物，其选自：
N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2，6-二甲基吗啉-4-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)四氢呋喃-2-甲酰胺；
(S)-N-((R)-1-(3-(2，5-二氟苯基)-1-(3-氟苄基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺；和
(S)-N-((R)-1-(1-苄基-3-(2，5-二氟苯基)-1H-1，2，4-***-5-基)-2，2-二甲基丙基)-N-(((3R，4R)-4-氟吡咯烷-3-基)甲基)-2-羟基丙酰胺；
以及这些化合物中任一个的药学上可接受的盐。
11.式I化合物，其选自
和这些化合物的药学上可接受的盐。
12.式(II)化合物：
其中，
R1选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R3表示-(CH2)0-3-被取代的或未被取代的吡咯烷基或被至多三个选自氨基和卤素的基团取代的C3-5烷基；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
13.权利要求12的化合物，其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C3-6支链烷基和C3-6环烷基；
R3表示-(CH2)0-3-被取代的吡咯烷基或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F；
R4选自-C(O)-CH2OH、-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH、-C(O)-未被取代的吗啉基和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基。
14.权利要求12或13的化合物，其中R1是甲氧基-取代的C1-4烷基。
15.权利要求14的化合物，其中R1是2-甲氧基-2-丙基。
16.权利要求12-15中任一项的化合物，其中：
R2表示H；
R3表示-(CH2)1-3-被取代的吡咯烷基或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH和-C(O)-被至多三个烷基基团取代的吗啉基；
R5表示苄基或被至多两个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个卤素原子取代的苯基。
17.权利要求16的化合物，其中：
R1表示2-甲氧基-2-丙基；
R3表示-(CH2)-氟-吡咯烷基或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F；
R4选自-C(O)-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH和-C(O)-2，6-二甲基吗啉基；
R5表示苄基或被一个氟原子取代的苄基；并且
R6选自被至多两个氟原子取代的苯基。
18.权利要求17的化合物，其中：
R3表示-(CH2)1-3-氟-吡咯烷基或-CH2-CH2-CH(NH2)-CH2F；且
R4表示-C(O)-2-四氢呋喃基、-C(O)-CH(CH3)-OH和-C(O)-2，6-二甲基吗啉基。
19.权利要求18的化合物，其中：
R3表示
R4选自-C(O)-CH(CH3)-OH、
R5是
R6是
20.权利要求12-19中任一项的化合物，其中R4选自：
21.权利要求12的化合物，其中所述化合物选自：
以及其药学上可接受的盐。
22.药物组合物，其包含治疗有效量的上述权利要求中任一项的化合物和药学可接受的载体。
23.权利要求22的组合物，其还包含至少一种用于治疗癌症的另外的活性剂。
24.权利要求23的组合物，其中所述用于治疗癌症的另外的活性剂选自伊立替康、拓扑替康、吉西他滨、伊马替尼、曲妥珠单抗、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、多西紫杉醇、紫杉醇、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱、蒽环类、利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
25.治疗哺乳动物患者的至少部分由KSP介导的病症的方法，其包括对需要该治疗的哺乳动物患者施用治疗有效量的上述权利要求中任一项的化合物或药物组合物。
26.权利要求25的方法，其中所述病症为细胞增殖性疾病。
27.权利要求26的方法，其中细胞增殖性疾病为癌症。
28.权利要求27的方法，其中所述癌症选自肺和支气管癌、***癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠和直肠癌、甲状腺癌、胃癌、肝脏和肝内胆管癌、肾脏和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、卵巢癌、多发性骨髓瘤、食管癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性白血病、骨髓性白血病、脑癌、口腔和咽癌、喉癌、小肠癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和绒毛状结肠腺瘤。
29.权利要求28的方法，其中用于治疗癌症的另外的活性剂选自伊立替康、拓扑替康、吉西他滨、伊马替尼、曲妥珠单抗、5-氟尿嘧啶、亚叶酸、卡铂、顺铂、多西紫杉醇、紫杉醇、替扎他滨、环磷酰胺、长春花生物碱、蒽环类、利妥昔单抗和曲妥珠单抗。
30.用于抑制哺乳动物患者的KSP的方法，其中所述方法包括对所述患者施用抑制KSP有效量的权利要求1-21中任一项的化合物。
31.权利要求1-21中任一项的化合物，其用于治疗。
32.权利要求31的化合物，其中所述化合物用于治疗细胞增殖性病症。
33.权利要求32的化合物，其中细胞增殖性病症为选自以下的癌症：肺和支气管癌、***癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠和直肠癌、甲状腺癌、胃癌、肝脏和肝内胆管癌、肾脏和肾盂癌、膀胱癌、子宫体癌、子***、卵巢癌、多发性骨髓瘤、食管癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、淋巴细胞性白血病、骨髓性白血病、脑癌、口腔和咽癌、喉癌、小肠癌、非霍奇金淋巴瘤、黑素瘤和绒毛状结肠腺瘤。
34.制备氟化的吡咯烷的方法，该方法包括使式V的反式-3，4-二取代的保护的吡咯烷
与氟化试剂反应，得到式VI化合物：
并且氧化式VI化合物，得到式VII的醛：
其中PG表示保护基团，并且R选自H和任选被取代的烷基或芳基基团。
35.权利要求34的方法，其进一步包括式VII化合物与式Ia化合物的还原胺化：
其中：
R1选自C1-6烷氧基-C1-4-烷基、C1-6直链烷基、C3-6支链烷基和-C3-6环烷基；
R2选自H和C1-6直链烷基；
R5选自被取代的或未被取代的苄基，其中取代基选自Cl、F、Br和I；且
R6选自被至多三个卤素原子取代的苯基；
得到式Ib化合物：
36.权利要求34的方法，其进一步包括从式(IV)的环氧化物合成式(V)化合物，
其如下进行：用下式的有机金属试剂使所述环氧化物开环，
其中R是H或任选被取代的烷基或芳基基团，并且M是选自Li、MgX和ZnX的金属基团，其中X是卤素。
37.权利要求36的方法，其中有机金属试剂是
其中X是Cl、Br或I。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US32465110P | 2010-04-15 | 2010-04-15 | |
| US61/324,651 | 2010-04-15 | ||
| PCT/EP2011/055840 WO2011128381A1 (en) | 2010-04-15 | 2011-04-13 | Triazole compounds as ksp inhibitors |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102844307A true CN102844307A (zh) | 2012-12-26 |
Family
ID=44009916
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2011800184156A Pending CN102844307A (zh) | 2010-04-15 | 2011-04-13 | 作为ksp抑制剂的***化合物 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US8546434B2 (zh) |
| EP (1) | EP2558450A1 (zh) |
| JP (1) | JP2013523867A (zh) |
| KR (1) | KR20130100056A (zh) |
| CN (1) | CN102844307A (zh) |
| AR (1) | AR080893A1 (zh) |
| AU (1) | AU2011239977B2 (zh) |
| BR (1) | BR112012025879A2 (zh) |
| CA (1) | CA2794406A1 (zh) |
| EA (1) | EA201201404A1 (zh) |
| MX (1) | MX2012011910A (zh) |
| TW (1) | TW201136925A (zh) |
| UY (1) | UY33332A (zh) |
| WO (1) | WO2011128381A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105451773A (zh) * | 2013-03-15 | 2016-03-30 | 诺华股份有限公司 | 细胞增殖抑制剂及其缀合物 |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103153970A (zh) * | 2010-04-15 | 2013-06-12 | 诺瓦提斯公司 | 作为ksp抑制剂的*唑和噻唑化合物 |
| US9498540B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-11-22 | Novartis Ag | Cell proliferation inhibitors and conjugates thereof |
| WO2016020791A1 (en) | 2014-08-05 | 2016-02-11 | Novartis Ag | Ckit antibody drug conjugates |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1993331A (zh) * | 2004-06-18 | 2007-07-04 | 希龙公司 | N－(1－(1－苄基－4－苯基－1h－咪唑－2－基 )－2 , 2－二甲基丙基)苯甲酰胺衍生物和相关化合物作为用于治疗癌症的驱动蛋白纺锤蛋白(ksp)抑制剂 |
| CN101558049A (zh) * | 2006-11-13 | 2009-10-14 | 诺瓦提斯公司 | 作为ksp抑制剂的被取代的吡唑和***化合物 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235871A (en) | 1978-02-24 | 1980-11-25 | Papahadjopoulos Demetrios P | Method of encapsulating biologically active materials in lipid vesicles |
| US4501728A (en) | 1983-01-06 | 1985-02-26 | Technology Unlimited, Inc. | Masking of liposomes from RES recognition |
| US5023252A (en) | 1985-12-04 | 1991-06-11 | Conrex Pharmaceutical Corporation | Transdermal and trans-membrane delivery of drugs |
| US4837028A (en) | 1986-12-24 | 1989-06-06 | Liposome Technology, Inc. | Liposomes with enhanced circulation time |
| US5011472A (en) | 1988-09-06 | 1991-04-30 | Brown University Research Foundation | Implantable delivery system for biological factors |
| JP2006502219A (ja) | 2002-10-11 | 2006-01-19 | サイトキネティクス・インコーポレーテッド | 化合物、組成物および方法 |
| JP2008502721A (ja) * | 2004-05-21 | 2008-01-31 | ノバルティス ヴァクシンズ アンド ダイアグノスティクス， インコーポレイテッド | ***キネシンインヒビターとしての置換キノリン誘導体 |
| RU2007118523A (ru) * | 2004-10-19 | 2008-11-27 | Новартис Вэксинс Энд Диагностикс Инк. (Us) | Производные индола и бензимидазола |
| US20080102068A1 (en) * | 2005-01-19 | 2008-05-01 | Coleman Paul J | Mitotic Kinesin Inhibitors |
| AU2006235022B2 (en) * | 2005-04-07 | 2011-07-21 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Mitotic kinesin inhibitors |
| TW200800951A (en) | 2005-08-09 | 2008-01-01 | Novartis Ag | Substituted imidazole compounds as KSP inhibitors |
| US7325386B2 (en) | 2005-10-17 | 2008-02-05 | Etienne Kissling | Double action vertical form-fill-seal apparatus |
| MX2009007260A (es) | 2007-01-05 | 2009-07-10 | Novartis Ag | Derivados de imidazol como inhibidores de proteina de huso de cinesina (eg-5). |
| CN103153970A (zh) * | 2010-04-15 | 2013-06-12 | 诺瓦提斯公司 | 作为ksp抑制剂的*唑和噻唑化合物 |
-
2011
- 2011-04-13 CA CA2794406A patent/CA2794406A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-13 KR KR1020127029781A patent/KR20130100056A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-04-13 US US13/085,746 patent/US8546434B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-13 JP JP2013504265A patent/JP2013523867A/ja active Pending
- 2011-04-13 CN CN2011800184156A patent/CN102844307A/zh active Pending
- 2011-04-13 AR ARP110101254A patent/AR080893A1/es unknown
- 2011-04-13 AU AU2011239977A patent/AU2011239977B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2011-04-13 EP EP11715682A patent/EP2558450A1/en active Pending
- 2011-04-13 WO PCT/EP2011/055840 patent/WO2011128381A1/en active Application Filing
- 2011-04-13 EA EA201201404A patent/EA201201404A1/ru unknown
- 2011-04-13 MX MX2012011910A patent/MX2012011910A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-04-13 BR BR112012025879A patent/BR112012025879A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-04-14 UY UY0001033332A patent/UY33332A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-04-14 TW TW100113030A patent/TW201136925A/zh unknown
-
2013
- 2013-08-28 US US14/012,167 patent/US20140056880A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1993331A (zh) * | 2004-06-18 | 2007-07-04 | 希龙公司 | N－(1－(1－苄基－4－苯基－1h－咪唑－2－基 )－2 , 2－二甲基丙基)苯甲酰胺衍生物和相关化合物作为用于治疗癌症的驱动蛋白纺锤蛋白(ksp)抑制剂 |
| CN101558049A (zh) * | 2006-11-13 | 2009-10-14 | 诺瓦提斯公司 | 作为ksp抑制剂的被取代的吡唑和***化合物 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105451773A (zh) * | 2013-03-15 | 2016-03-30 | 诺华股份有限公司 | 细胞增殖抑制剂及其缀合物 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AR080893A1 (es) | 2012-05-16 |
| TW201136925A (en) | 2011-11-01 |
| CA2794406A1 (en) | 2011-10-20 |
| EA201201404A1 (ru) | 2013-04-30 |
| MX2012011910A (es) | 2012-11-29 |
| KR20130100056A (ko) | 2013-09-09 |
| US20110256128A1 (en) | 2011-10-20 |
| JP2013523867A (ja) | 2013-06-17 |
| US8546434B2 (en) | 2013-10-01 |
| BR112012025879A2 (pt) | 2017-11-21 |
| EP2558450A1 (en) | 2013-02-20 |
| AU2011239977A1 (en) | 2012-11-01 |
| UY33332A (es) | 2011-12-01 |
| US20140056880A1 (en) | 2014-02-27 |
| AU2011239977B2 (en) | 2014-11-27 |
| WO2011128381A1 (en) | 2011-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US8304408B2 (en) | Wnt signaling inhibitors, and methods for making and using them | |
| KR102366670B1 (ko) | O-아미노헤테로아릴알키닐기를 함유한 화합물 및 이의 제조 방법과 용도 | |
| CN101558049B (zh) | 作为ksp抑制剂的被取代的吡唑和***化合物 | |
| RU2573633C2 (ru) | Хинолил-содержащее соединение гидроксамовой кислоты, способ его получения, а также применение при лечении заболеваний, вызванных аномальной активностью протеинкиназы и/или гистондеацетилазы | |
| RU2385867C2 (ru) | Замещенные производные хинолина как ингибиторы митотического кинезина | |
| CN109153669B (zh) | 苯甲酰胺类化合物的新晶型 | |
| KR20190086442A (ko) | 피리딘 화합물 | |
| CN101253167A (zh) | 作为ksp抑制剂的取代的咪唑化合物 | |
| JP2018513215A (ja) | 抗菌化合物 | |
| CN101233115A (zh) | 吲哚和苯并咪唑衍生物 | |
| US20120189623A1 (en) | Cyclized derivatives as eg-5 inhibitors | |
| CN109071561A (zh) | 用作泛素特异性蛋白酶抑制剂的噻吩并吡嗪甲酰胺 | |
| CN105246896A (zh) | 吡唑并吡咯烷-4-酮衍生物及其在治疗疾病中的用途 | |
| JP2024521966A (ja) | イソインドリノン化合物およびその用途 | |
| CN102844307A (zh) | 作为ksp抑制剂的***化合物 | |
| JP6913955B2 (ja) | ＰＩ３Ｋ／ｍＴＯＲ阻害剤としての溶融キノリン化合物 | |
| KR20090082486A (ko) | 항암성 약물로서 ｃ12-ｃ13 위치에서 개질된 에포틸론 유사체 | |
| US8748626B2 (en) | Oxazole and thiazole compounds as KSP inhibitors | |
| WO2017181974A1 (zh) | 五元杂环类化合物及其制备方法、药物组合物和用途 | |
| US9499552B2 (en) | Pyrazolo[1,5-A]pyrimidine derivative and use of anti-tumor thereof | |
| WO2022272313A1 (en) | Modulators of histone acetyltransferase 1 and methods of treatment thereof | |
| US8680155B2 (en) | Synthesis and antitumor activity of novel bis(benzylidene-benzenamine)disulfides | |
| WO2017181973A1 (zh) | 五元杂环类化合物及其制备方法、药物组合物和用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent of invention or patent application | ||
| CB02 | Change of applicant information |
Address after: Basel Applicant after: Novartis Ag Address before: Basel Applicant before: Novartis AG |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: APPLICANT; FROM: NOVARTIS AG TO: NOVARTIS CO., LTD. |
|
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20121226 |