CN102836367B - 一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法和应用。本发明的目的提供一种中药复方组合物，避免对人体产生毒副作用，具有抗菌、消炎、止痒、调整***菌群紊乱增加***乳杆菌数量、提高机体免疫功能的作用。本发明的技术方案为提供一种抗菌消炎止痒的中药组合物，包括以下重量份的中药原料制成：蛇床子20-30、虎杖20-30、苦参20-30、蒲公英10-20、白藓皮10-15、百部10-20、黄柏5-10、白芷5-10、明矾5-10、公丁香3-6、土荆皮30-50。本中药复方具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，可以使用在卫生巾等保健用品上，辅助妇科疾病治疗。

Description

一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物，具体涉及一种抗菌消炎止痒的中药组合物及其制备方法和应用。

背景技术

随着以青霉素为代表的各类抗生素不断出现，细菌性感染疾病得到有效控制，从而使抗生素成为人类抵抗病原菌感染的有力武器。但近年来，人们长期广泛地使用抗生素导致细菌的耐药性不断增强，耐药频率逐渐增高，以至常规的抗生素无法满足临床需要。随着全球疾病谱和医疗模式的重要变化，我国与世界经济、文化和用药水平的逐步接轨，国人对抗生素的认识有了较大的提高，意识到抗生素带来的诸多不良反应及其相应的耐药性的影响，人们对中药维护健康和防治疾病充满了期待。医学界亦期望通过合理用药和开发中药新药来对付不断产生的耐药菌。

目前随着人们生活水平的提高，卫生保健用品也越来越多，尤其是对妇科有保健作用的，保健卫生巾是妇女保健用品，对致病微生物具有广谱杀灭作用。对常见的革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、链球菌，常见的革兰氏阴性菌如大肠杆菌、绿脓杆菌，常见的真菌如白色念珠菌、絮状表皮癣菌等均有良好的抗菌活性。但其在各种卫生巾中加入洗必泰、度米芬、灭滴灵等灭菌药物的方法，由于对使用者有不良刺激和毒副作用，已经逐渐为中草药药物型卫生巾所替代。

发明内容

本发明的目的提供一种中药复方组合物，由多种天然植物经提炼，纯中药精华制成，避免对人体产生毒副作用，具有抗菌、消炎、止痒、调整***菌群紊乱并增加***乳杆菌数量、提高机体免疫功能的作用。

本发明的技术方案为提供一种抗菌消炎止痒的中药组合物，包括以下重量份的中药原料制成：蛇床子20-30、虎杖20-30、苦参20-30、蒲公英10-20、白藓皮10-15、百部10-20、黄柏5-10、白芷5-10、明矾5-10、公丁香3-6、土荆皮30-50。

优选的，上述抗菌消炎止痒的中药组合物包括以下重量份的中药原料制成：蛇床子30、虎杖30、苦参30、蒲公英20、白藓皮15、百部20、黄柏10、白芷10、明矾10、公丁香6、土荆皮50。

优选的，上述抗菌消炎止痒的中药组合物为各中药原料的水提物或醇提物作为有效成分。

优选的，上述抗菌消炎止痒的中药组合物为溶液剂，所的溶液剂的体积与中药原料质量的比为1ml:0.5g至1ml：1g。

本发明的提供一种抗菌消炎止痒的中药组合物的制备方法，将以下重量份的中药原料：蛇床子20-30、虎杖20-30、苦参20-30、蒲公英10-20、白藓皮10-15、百部10-20、黄柏5-10、白芷5-10、公丁香3-6，回流提取，过滤，得滤液，再将重量分数为明矾5-10份、土荆皮30-50份的中药原料加入质量百分数为70％的醇，醇提两次后，所得醇提取液加入到所得滤液，边搅拌边缓慢加入乙醇使滤液的含醇量为70%-80％，密闭冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇，加水溶解过滤得精制液，所的精制液的体积与中药原料质量比为1ml:0.5g至1ml：1g。

优选的上述抗菌消炎止痒的中药组合物的制备方法中，所述中药原料的各重量份比具体为：蛇床子30、虎杖30、苦参30、蒲公英20、白藓皮15、百部20、黄柏10、白芷10、明矾10、公丁香6、土荆皮50。

本发明的又一技术方案为提供一种上述的抗菌消炎止痒的中药组合物在卫生巾的药物添加剂方面的应用。

本发明的有益效果为：本发明的中药复方由蛇床子、虎杖、等中药组成，是由多种天然植物经提炼后的纯中药精华制成，对妇科病、皮肤病等具有显著疗效。可以使用在卫生巾等保健用品上，辅助妇科疾病治疗。避免对人体产生毒副作用，具有抗菌、消炎、止痒、调整***菌群紊乱并增加***乳杆菌数量、提高机体免疫功能的作用。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、构造特征、所实现目的及效果，以下结合实施方式详予说明。

本发明的中药组合物可以采用中药的常规制备方法来制备。

实施例1

处方1：准备中药原料蛇床子20g、虎杖20g、苦参20g、蒲公英10g、白藓皮10g、百部10g、黄柏5g、白芷5g、明矾5g、公丁香3g、土荆皮30g。按处方（除明矾、土荆皮外）配比回流提取，过滤，滤液加入处方量明矾及土荆皮提取液（70％醇提两次）后，浓缩至1ml:0.5g至1ml：1g，药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达规定含醇量（70～80％），密闭冷藏48h，滤过，滤液回收乙醇，加水溶解过滤得精制液。最后是以液体形式发生作用的。1ml:1g即每1ml药液相当于1g处方生药。

处方2：上述抗菌消炎止痒的中药组合物的中药原料的组成还可为：蛇床子30g、虎杖30g、苦参30g、蒲公英20g、白藓皮15、百部20、黄柏10、白芷10、明矾10、公丁香6、土荆皮50。

处方3：上述抗菌消炎止痒的中药组合物的中药原料的组成还可为：蛇床子25g、虎杖25g、苦参25g、蒲公英15g、白藓皮12g、百部15g、黄柏7g、白芷7g、明矾7g、公丁香4g、土荆皮40g。

从临床角度，处方中各药量都可以有一定的浮动，该中药处方（外用）安全无毒，具有清热解毒、祛风除湿、杀虫止痒的功效，对常见的革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌等、常见的革兰氏阴性菌如大肠杆菌、绿脓杆菌等，常见的真菌如白色念珠菌等均有良好的抗菌活性；同时有良好的消炎止痒、调节***菌群紊乱、提高机体免疫力等作用。

实施例2、本发明中药复方的提取精制方法

本发明的中药组合物可以采用中药的常规制备方法来制备。最优使用水提醇沉法。

1、水提醇沉

水提醇沉法系指在中药水提浓缩液中，加入乙醇使达到不同含醇量，某些药物成分在醇溶液中溶解度降低析出沉淀，固液分离后使水提液得以精制的方法。具体操作过程是：将本发明中药复方水提液浓缩至1∶1（g∶ml），药液放冷后，边搅拌边缓慢加入乙醇使达到70％含醇量，密闭冷藏24～48h，滤过，滤液回收乙醇，得到精制液。

操作时应注意以下问题：（1）药液应适当浓缩，以减少乙醇用量。但应控制浓缩程度（1∶1-1∶0.5），若过浓，有效成分易包裹于沉淀中而造成损失。（2）浓缩的药液冷却后方可加入乙醇，以免乙醇受热挥发损失。（3）慢加快搅。应快速搅动药液，缓缓加入乙醇，以避免局部醇浓度过高造成有效成分被包裹损失。(4)密闭冷藏。可防止乙醇挥发，促进析出沉淀的沉降，便于滤过操作。

2、本发明的中药组合物的提取物还可进行活性炭脱色

取50ml三角烧瓶，分别加入20.0ml水提醇沉后复方提取液，按设计要求，加入适量的活性炭（0.5％、1％、1.5％、2.0％），震荡脱色相应的时间（2小时），加入1.5％的活性炭具有较好的脱色效果。

实施例3

一、对本发明的中药复方进行抗菌作用验证：

1、准备工作

1.1培养基配制：根据菌种的不同，配制各种相应的培养基

1.2其他物品

牛津杯、镊子、涂抹棒、生理盐水、干净试管、接种环、移液枪头、废液缸、阳性药物、试验药物、酒精灯、移液枪、不同菌种（金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌、白色念珠菌、标准乳杆菌）。

1.3菌种活化

取干净试管，加入适量MH肉汤培养基（按2.7g干粉配制100ml液体培养基比例配制）经高压灭菌，在洁净工作台放冷后用接种环取适量菌放入试管中，混匀，培养18～24h后观察结果。（金黄色葡萄球菌（JP）、白色葡萄球菌(BP)、绿脓杆菌(LN)、大肠杆菌(BD)、白色念珠菌(BN)、标准乳杆菌放入37°C培养箱中培养；白色念珠菌放入26.5°C培养箱中培养)。

2、实验方法

牛津杯法进行抗菌作用初筛

实验操作步骤

（1）牛津杯、镊子、涂抹棒、生理盐水、干净试管、接种环、废液缸、阳性药物、试验药物高压灭菌。

（2）制备菌悬液：取干净试管，加入适量生理盐水，再用移液枪取适量已经活化的菌液，放入试管中，混匀。

（3）用移液枪吸取500ul菌悬液至固体培养基中，再用涂抹棒将菌液均匀涂抹至培养基中各部分。

（4）用镊子夹取牛津杯放至涂抹均匀菌液的培养基上，使牛津杯与培养基充分接触，不得留有缝隙。牛津杯放置位置要适中。

（5）向每个牛津杯中加入150μl药液后，小心将培养皿放置培养箱培养。

3、实验结果

3.1为实施例1的处方提取液和阳性对照药为的抑菌圈直径（cm）如表1所示。

表1

阳性对照药为市售的洁尔阴2合1洗液做阳性对照药。实验结果表明本发明中药复方的水提取液对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等细菌都有较好的抑菌作用。

二、本发明中药复方提取液的体内药效学研究

（一）本发明中药复方的急性毒性试验

实验动物：清洁级健康KM小鼠，由湖南省长沙市实验动物中心购买。证书许可证：SCK(湘)2009-0012

实验方法：

急性毒性实验：预试验取小鼠30只，雌雄各半，随机分为5组，每组6只。受试物以浓缩液为最高浓度（3g/ml生药），按1倍法依次稀释，小鼠采用口服灌胃给药，给药体积为0.4ml/10g。5个剂量组所给予的药物剂量依次为120g/kg、60g/kg、30g/kg、15g/kg、7.5g/kg体重（给药浓度均为生药量）。给药后连续观察7天，未见明显的毒性反应，且无1例死亡。因受药物浓度和给药体积的限制，找不出引起小鼠死亡的剂量，故无法测出中药复方小鼠灌胃给药的LD50。

最大耐受量测定：取小鼠20只，雌雄各半，以药物所能配制的最高浓度（120g/kg）及允许使用的最大体积（0.4ml/10g体重）一次给予全部小鼠灌胃给药，给药后连续观察14日。小鼠除给药后第一天出现安静、聚集不动的现象外，无明显的中毒反应，且第3天活动恢复正常，14日内无1例死亡。由此测得组方灌胃给药的最大耐受量为生药120g/kg体重。

（二）本发明中药复方的皮肤毒性试验

1、皮肤致敏试验

（1）实验方法

1.1分组：取健康豚鼠（由湖南省长沙市实验动物中心购买）50只，背部左侧剪去长毛，脱毛，脱毛范围约9cm2，次日按体质量、性别随机分为5组：70%乙醇正常对照组、药物治疗高浓度组、药物治疗低浓度组，2，4-二硝基氯代苯阳性对照组，洁尔阴组，每组10只。药物治疗高、低溶度组（生药量1g/mL，0.25g/mL）。

1.2致敏接触：分别取70%乙醇0.5mL、药物治疗高浓度组及低浓度组0.5mL、0.1%2，4-二硝基氯代苯0.2mL，50%洁尔阴组0.5ml，涂于各组动物左侧脱毛区，持续6小时，第7天和第14天以同样方法重试1次。激发接触：于末次给受试物致敏后14天，分别取70%乙醇0.5mL、药物治疗高浓度及低浓度组0.5mL、O.1%2，4-二硝基氯代苯0.2mL，50%洁尔阴组0.5ml，涂于各组动物右侧脱毛区，6小时后去掉受试物，即刻观察，然后于24小时、48小时、72小时再次观察皮肤过敏反应情况，结果按文献，皮肤过敏反应评分标准如表2。

表2

反应级数	过敏反应
			0	红斑	无红斑
1		轻度红斑
			2		中度红斑
3		重度红斑
			4		水肿并红斑
0	水肿	无水肿
			1		轻度水肿
2		中度水肿
			3		重度水肿

结果评分：按上表反应级数计算各组的反应平均值及致敏率。

（2）实验结果

实验结果见表3为本发明中药复方对豚鼠皮肤的过敏反应结果(致敏接触)，表4为本发明复方中药对豚鼠皮肤的过敏反应结果(激发接触)。

表3

表4

上述结果表明，本发明中药复方不会对豚鼠皮肤造成过敏反应。

（三）本发明中药复方的抗炎作用

实验方法：将60只小鼠（由湖南省长沙市实验动物中心购买。证书许可证：SCK(湘)2009-0012）随机分为6组。各组分别为：对照组（蒸馏水）；洁尔阴组；***组；组方高、中、低剂量组（生药量1g/mL，0.5g/mL，0.25g/mL）。实验各组小鼠右耳前后两面涂药1次（0.1mL），对照组涂以等量蒸馏水，给药7天。第7天给药后1小时各给药组以蒸馏水洗去药液，用干棉球檫净。末次给药后1小时，用移液枪在小鼠左耳涂抹二甲苯正反两面各10μL。30min后，将小鼠颈椎脱臼致死，沿耳廓基线剪下两耳。用直径6mm打孔器分别在两耳同一部位打下圆耳片，电子天秤称重。计算肿胀抑制率。

肿胀抑制率（%）=（A﹣B）／A×100%

式中，A代表空白组肿胀度，B代表受试药物组或阳性对照药物组肿胀度。

肿胀度=左耳重量－右耳重量

实验结果：

表5

组别	耳肿胀度（g）	抑制率（%）
			蒸馏水组	0.00551±0.00129##
***组	0.00113±0.00037**	79.49
			洁尔阴组	0.00505±0.00152##	8.35
高剂量组	0.00305±0.00140**##	44.65

中剂量组	0.00355±0.00174**##	35.57
			低剂量组	0.00327±0.00099**##	40.65

注：与蒸馏水组比较**p＜0.01；与***组比较##p＜0.01

从表5可见给药组均能抑制二甲苯致小鼠耳肿胀度。与空白组比较，用药组对小鼠的肿胀情况都有抑制作用，其中以***的抑制效果最好，抑制率达79.49%，洁尔阴组抑制率最低，而药方各剂量组皆有较好的抑制作用。

（四）本发明中药复方对磷酸组胺致豚鼠皮肤瘙痒的影响（止痒作用）

实验方法

取豚鼠（湖南省长沙市实验动物中心购买）50只，雌雄各半，随机分为5组，即生理盐水对照组，***阳性对照组，组方高剂量组（生药含量1g/ml）、组方低剂量组（生药0.5g/ml）。实验前24小时右后足脱毛，脱毛处给药100μL，致痒时将脱毛处用细砂纸擦伤，以轻度渗血为度（面积1cm×1cm），再给药1次。每只动物于末次涂药后0.5h开始在创面处滴0.01%磷酸组胺50μL/只，每隔3min依次滴质量浓度0.01%、0.02%、0.03%、0.04%、0.05%……递增浓度，每次50μL/只，直至豚鼠出现回头舔右后足，以最后出现豚鼠回头舔右后足时给予的磷酸组胺总量为致痒阈。

实验结果

实验结果见表6。表6为本发明中药复方提取物对磷酸组胺所致豚鼠瘙痒的影响。

表6

组别	致痒阈（μg）
		生理盐水	9±5.16#
洁尔阴	62.5±39.24*
		***	293.00±134.45**##
高剂量组	42.00±37.94*
		低剂量组	25.63±15.91#

注：与生理盐水比较*p＜0.01,**p＜0.05；与洁尔阴组比较#p＜0.01

实验结果表明本发明中药复方提取液涂药后，高剂量组致痒阈与生理盐水对照组比较差异具有显著性；高剂量组与洁尔阴对照组比较无显著性差异，表明组方能明显提高磷酸组胺所致豚鼠致痒阈，有明显的止痒作用，其作用与洁尔阴相当。

（五）本发明中药复方提取液对免疫功能的影响

1、本发明中药复方提取液对T、B淋巴细胞的影响

（1）实验材料

1.1药材：复方中药，所有药材均购自姚和生中医研究所。

1.2试剂刀豆蛋白A(Con A)、LPS

1.3动物清洁级健康KM小鼠，由湖南省长沙市实验动物中心提供。证书许可证：SCK(湘)2009-0012

1.4仪器C0-150二氧化碳培养箱，RT-2100C酶标仪，苏州净化超净工作台，OLYMPUS IX51倒置显微镜。JA1203N型电子天平。

（2）实验方法

2.1动物造模根据文献报道，将环磷酰胺干粉用生理盐水稀释，配制成4mg/mL浓度，按40mg/kg标准对小鼠予腹腔内注射。连续注射三天，建立小鼠免疫抑制模型。

2.2动物分组

将模型小鼠40只，雌雄各半，随机分为模型对照组、复方中药高浓度组（1g/ml）低浓度组（0.25g/ml），50%洁尔阴组，另取10只正常小鼠为空白对照组。灌胃给药，一天1次，连续7d，对照组给予等容积蒸馏水按0.02ml/kg给药。末次给药后1h，处死动物并在无菌条件下取脾进行实验：①小鼠脾细胞悬液的制得:无菌取脾，制备单个细胞，1000r·min-1离心5min，倒去上清液，轻轻叩松细胞沉淀，加0.4mL双蒸水轻轻振荡30s，低渗溶解红细胞，然后加0.4mL 2倍浓生理盐水(1.7%)使溶液恢复等渗，同样转速离心5min，无血清RPMI1640液再洗2次后，细胞沉淀重悬于含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中，显微镜下计数，将细胞密度调至5×10⁵/mL，此即为备用的脾细胞。②淋巴细胞增殖反应：96孔平底培养板每孔中分别加入制得的脾细胞悬液100μL，ConA 100μL终质量浓度为7.5μg·mL-1，对照组则加用100μLRPMI-1640培养液，每只小鼠3孔。将培养板放入37℃5%CO2孵箱内，培养48h。培养结束后，MTT法测细胞光密度（OD）。

统计方法：所有实验数据均以±s表示。计量数据采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析及组间检验。

实验结果

由表7本发明中药复方对T、B淋巴细胞增殖的影响可知，高剂量组均能极显著促进免疫抑制小鼠T、B淋巴细胞增殖（P<0.01），低剂量组促增殖效果不明显。

表7

组别	T淋巴细胞（OD）	B淋巴细胞（OD）
			正常组	0.0562±0.0024△△	0.0488±0.0065△
模型组	0.0428±0.0008**	0.0390±0.0020*
			洁尔阴组	0.0486±0.0027*	0.0483±0.0086△
高剂量组	0.0547±0.0027△△	0.0537±0.0063△△
			低剂量组	0.0495±0.0032	0.0430±0.0068

与正常组比：*p<0.05,**p<0.01；与模型组比△p<0.05,△△p<0.01

2、本发明中药复方对溶血素抗体生成及脏器指数的影响

（1）实验材料：同上。

（2）实验方法

2.1动物造模根据文献报道，将环磷酰胺干粉用生理盐水稀释，配制成4mg/mL浓度，按40mg/kg标准对小鼠予腹腔内注射。连续注射三天，建立免疫抑制小鼠模型。

2.2分组及给药

随机分成正常对照组及复方中药高、低剂量组和洁尔阴组，每组10只。正常组灌服蒸馏水,本发明中药复方组灌服高、低剂量0.02ml/g,，洁尔阴组灌服50%洁尔阴0.02ml/g，连续给药7d。第7日给每只小鼠腹腔注射5%鸡红细胞混悬液0.2mL进行免疫，连续7d。

2.3血清溶血素实验

末次给药后40min，摘取眼球取血，3000r/min离心5min。

血清用生理盐水稀释100倍,取稀释血清1mL于0.5mL 5%鸡红细胞悬液和0.5mL 10%补体(豚鼠血清)混合,在37℃恒温箱中保温30min后,置0℃冰箱30min中止反应。离心,取上清液,于分光光度计540nm处比色,测光密度值。另设生理盐水做空白对照,取其上清作为比色时调零。计算各组小鼠溶血光密度值。

2.4脏器指数测定

脱颈处死小鼠，立即取脾脏和胸腺称重，按照下列公式计算脏器指数。脏器指数=（脏器重量/小鼠体重量）×10

2.5统计学方法

数据用±s表示,各组间比较用单因素方差分析，用SPSS11.0进行统计分析。

（3）实验结果

3.1血清溶血素抗体生成：与模型组比较，高浓度组小鼠血清溶血素抗体生成均有升高，结果见表8：本发明中药复方对小鼠血清溶血素抗体生成的影响说明本发明中药复方可促进免疫抑制小鼠溶血素抗体的生成。

表8

组别	N（只）	光密度（OD）
			空白对照组	10	0.60390±0.040959
模型组	10	0.52120±0.050352**
			洁尔阴组	10	0.58000±0.021448△△
高浓度组	10	0.53620±0.033895**
			低浓度组	9	0.56622±0.050884

注：与正常对照组比较：**p<0.01，与模型组比较：△△p<0.01

3.2脏器指数：

与对照组比较，如表9：本发明中药复方对小鼠脏器指数的影响（n=10,胸腺指数在高，低剂量组小鼠中均有显著升高（p<0.05），而高浓度组升高更明显（p<0.01），说明本发明中药复方能促进小鼠免疫器官胸腺，脾脏的增重，提示复方可以提高免疫抑制小鼠免疫器官增长。

表9

组别	脾脏指数	胸腺指数
			空白对照组	0.08790120±0.009228541△△	0.04117619±0.007334765△△
模型组	0.06729571±0.005778540*	0.02667668±0.003446494*
			洁尔阴组	0.08065789±0.008821144	0.02747108±0.004779367
高浓度组	07713666±.010022596△△	0.03566412±0.004301745△△
			低浓度组	0.08256155±0.010442171△	0.02999935±0.006153046△

与正常组比：*p<0.05,**p<0.01；与模型组比△p<0.05,△△p<0.01

3、本发明中药复方对小鼠吞噬功能影响

（1）.实验材料：同上。

（2）实验方法

2.1动物造模根据文献报道，将环磷酰胺干粉用生理盐水稀释，配制成4mg/mL浓度，按40mg/kg标准对小鼠予腹腔内注射。连续注射三天，建立免疫抑制小鼠动物模型。

2.2分组及给药

随机分成正常对照组及复方中药制剂大、小剂量组和洁尔阴组，每组10只。正常组灌服蒸馏水,本发明中药复方组灌服高、低剂量0.02ml/g,洁尔阴组灌服50%洁尔阴0.02ml/g，连续给药8d。末次给药40分钟后于小鼠尾部静脉注射印度墨汁稀释液。注入墨汁后2min和5min于小鼠眼眶静脉采血0.02ml，融入2ml0.01%碳酸钠溶液中。处死小鼠取其肝，脾称重。取0.02ml小鼠血溶于2ml0.01%碳酸钠溶液作为空白对照组，于650nm处测定吸光度。按下列公式计算吞噬指数（k）和吞噬系数（a）:k=（logA1-logA2）/(t1-t2),a=体重/(肝重+脾重)×k1/3.其中A1、A2分别代表先后两次采血的吸光度，t1-t2代表两次采血的时间间隔。

3实验结果

由表10：药方对免疫抑制小鼠吞噬功能的影响（n=10,可见，本发明中药复方可提高免疫抑制小鼠吞噬细胞吞噬指数和吞噬系数。

表10

组别	吞噬指数K	吞噬系数a
			模型组	0.0367±0.0979△△	3.669±1.102△△
正常空白组	0.0959±0.0136**	5.217±1.423**
			洁尔阴组	0.0511±0.0110*△△	4.484±0.511
高浓度组	0.0495±0.0110*△△	5.036±1.491**
			低浓度组	0.0646±0.0169**△△	5.079±0.160*

与模型组比：*p<0.05，**p<0.01；与正常组比△p<0.05,△△p<0.01

（六）本发明中药复方对小鼠***菌群紊乱的调节作用

1实验材料：

实验动物：清洁级昆明种雌性小鼠50只,8～10周龄,体重18～22g，由湖南省长沙市实验动物中心提供。证书许可证：SCK(湘)2009-0012

药品与试剂：青霉素钠盐为江中集团江西东风药业股份有限公司出品,规格:80万单位,批号:041045-3。青霉素钠盐溶液制备:每次使用前现配制,用无菌生理盐水调至浓度为12.5mg/mL。

MRS琼脂培养基制备：1L蒸馏水中溶解25g琼脂的培养基,加入下列各组分：蛋白胨、肉膏10g,酵母提取物5g,葡萄糖20g,K2HPO42g,柠檬酸二铵2g,乙酸钠5g,吐温801mL,MgS0₄·7H₂O 0.58g,MnSO₄·4H₂O 0.25g,调pH6.2～6.4,121℃灭菌15min。

2实验方法

动物分组：取昆明种雌性小鼠50只,随机分为正常对照组(C)10只、抗生素造成小鼠***菌群失调模型组(A)40只；造模成功后，模型随机分为高、低剂量组、洁尔阴阳性对照组各10只、。

***菌群失调模型建立：除正常对照组外,其他各组用微量加样器取50μL青霉素钠盐溶液(浓度为12.5mg/mL)进行小鼠***冲洗给药,每天1次,连续5d,对照组每天每次注入相同体积的生理盐水。

给药方法：小鼠***菌群失调模型造模成功后,给模型小鼠***内注入组方高剂量组（生药含量1g/ml）、低剂量组（生药含量0.25g/ml）及洁尔阴组（洁尔阴药液稀释50%）各50μL，连续7d，每天1次。正常对照组及模型组每天每次注入相同体积的生理盐水。

小鼠***乳杆菌的测定与分析：末次给药12h后,用微量加样器取50μL生理盐水,反复冲洗小鼠***8次,取30μL的***冲洗液10倍系列稀释至10-6。用微量加样器滴种于MRS选择性培养基上,经37℃、48h培养后进行活菌计数(CFU/mL)(实验重复3次)。

3实验结果

通过建立抗生素致小鼠***菌群失调模型,用平板菌落计数法对组方使用后小鼠***分泌物中的乳杆菌进行了测定,结果见表11：用药后各组小鼠***乳杆菌检测结果（活菌数CFU/mL）。

表11

组别	动物数	CFU
			生理盐水组	10	395±200.28*
洁尔阴组	10	92.58±23.59
			高剂量组	10	799.99±134.69**#
低剂量组	10	359.26±92.01*
			模型组	10	13.33±5.44#

注：与模型组比较*p＜0.01,**p＜0.05；与正常组比较#p＜0.01

实验结果表明：青霉素钠盐溶液连续***冲洗给药5天后致***菌群紊乱，***乳杆菌数量降低，与正常对照组比较，差异有显著性意义表明***菌群失调模型建立。小鼠***内注入组方提取液50μL，连续7天后,明显提高乳杆菌数量,恢复并超过正常对照组水平,与模型组比较,差异有极显著性意义。说明本组方对于小鼠***菌群紊乱有调节作用并增加***乳杆菌数量。

本发明的中药复方具有以下作用：

1、抗菌作用：采用常规的体外抗菌实验，洁尔阴洗液作阳性对照，明确本发明中药配方的提取物最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。对常见的革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌、链球菌；常见的革兰氏阴性菌如大肠杆菌、绿脓杆菌，常见的真菌如白色念珠菌、烟曲霉菌、絮状表皮癣菌等均有良好的抗菌活性。

2、抗炎作用：用常规的急性炎症模型如二甲苯所致耳廓肿胀、皮下注射巴豆油所致小鼠耳廊肿胀模型来研究其抗炎作用，设立阳性对照（洁尔阴作阳性对照），明确本发明中药配方的提取物具有明显的抗炎作用。

3、止痒作用：用常规的磷酸组织胺致大鼠足背皮肤致痒模型研究其止痒作用，设立阳性对照（也可用洁尔阴洗液作阳性对照），明确本发明中药配方的提取物有明显提高致痒阈的作用。

4、调整***菌群紊乱并增加***乳杆菌数量

5、促进免疫功能：运用常规的免疫学实验，设立阳性对照（也可用洁尔阴洗液作阳性对照），明确本发明中药配方的提取物具有促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，促进脾脏T、B淋巴细胞转化，提高机体免疫功能的作用。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (6)

1.一种抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的中药原料制成：蛇床子20-30、虎杖20-30、苦参20-30、蒲公英10-20、白藓皮10-15、百部10-20、黄柏5-10、白芷5-10、明矾5-10、公丁香3-6、土荆皮30-50。

2.根据权利要求1所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于，由以下重量份的中药原料制成：蛇床子30、虎杖30、苦参30、蒲公英20、白藓皮15、百部20、黄柏10、白芷10、明矾10、公丁香6、土荆皮50。

3.根据权利要求1所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物由各中药原料的水提物或醇提物作为有效成分组成。

4.根据权利要求1所述的抗菌消炎止痒的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为精制液，所述精制液的体积与中药原料质量的比为1ml:0.5g至1ml：1g。

5.一种抗菌消炎止痒的中药组合物的制备方法，其特征在于，将以下重量份的中药原料：蛇床子20-30、虎杖20-30、苦参20-30、蒲公英10-20、白藓皮10-15、百部10-20、黄柏5-10、白芷5-10、公丁香3-6，回流提取，过滤，得滤液，再将重量分数为明矾5-10份、土荆皮30-50份的中药原料加入质量百分数为70％的醇，醇提两次后，所得醇提取液加入到所得滤液，边搅拌边缓慢加入乙醇使滤液的含醇量为70％-80％，密闭冷藏48小时，滤过，滤液回收乙醇，加水溶解过滤得精制液，所述精制液的体积与中药原料质量比为1ml：0.5g至1ml：1g。

6.根据权利要求5所述的抗菌消炎止痒的中药组合物的制备方法，其特征在于，所述中药原料的各重量份比具体为：蛇床子30、虎杖30、苦参30、蒲公英20、白藓皮15、百部20、黄柏10、白芷10、明矾10、公丁香6、土荆皮50。