CN102719410B - 一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法，属于生物技术领域。其特征在于含有重量比的以下物质：红薯汁8～16份，酒石酸1～5份，甘露糖8～14份，酵母膏6～15份，氯化钠5～10份，牛肉膏4～13份，蛋白胨7～12份，硫酸铵6～12份，磷酸二氢钾5～11份，硫酸镁7～12份，干酪素3～7份，麦芽糖5～10份，蒸馏水15-25份。上述一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法，该配方安全温和、富含漆酶生长所需的各种营养物质，培养出的漆酶活性高，大大超过漆酶基础培养基，提高了产酶量，同时降低了产酶成本，在实验室和工业上使用对漆酶的培养具有很好的效果，该培养基营养丰富、培养效果好，是理想的漆酶培养基。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体为一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法。
背景技术
漆酶（Laccase）是一种多酚氧化酶，也是一种典型的含Cu2+的糖蛋白。它具有特征性吸收光谱，具有单体、双体和四聚体形式，但一般以单体形式存在。漆酶蛋白分子含有4个铜离子，这4个铜离子处于漆酶的活性部位，在催化氧化反应中起着决定性作用。漆酶是单电子氧化酶，以O2为电子受体。在菌体外，当存在O2时漆酶发生聚合反应，还原态漆酶被氧化，而O2被还原成水。这个过程的实现是四个铜离子通过协同传递电子和价态变化完成的。在这个反应过程中，漆酶从底物分子中获得一个电子形成一个不稳定的自由基，该自由基可以进一步发生聚合反应和解聚反应。漆酶具有非常宽泛的专一性，主要是氧化酚类生成苯氧自由基。它能催化的氧化底物种类繁多，有酚及其衍生物、羧酸及其衍生物、芳胺及其衍生物、甾体激素和生物色素以及其它酚类底物。因此，漆酶不仅在生物制浆、生物漂白以及有毒化合物的降解等方面有重要的应用前景，而且在生物检测、合成工业、染料降解等方面也具有潜在的应用前景。漆酶最早从漆树的分泌物中发现，广泛存在于植物、真菌和细菌和昆虫中。分泌漆酶的真菌主要集中于担子菌亚门（除了属名和种名之外，其他学名都是正体）、子囊菌亚门及半知菌亚门等高等真菌中，其中最主要的是担子菌亚门的白腐真菌。本发明通过对产漆酶培养基配方进行优化，筛选出一种专用于漆酶的培养基，以提高产酶量，降低工业上产酶成本，为工业化奠定基础。
发明内容
鉴于现有技术中存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法的技术方案，其生产成本低、效果好且对环境无影响。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方，其特征在于含有重量比的以下物质：红薯汁8～16份，酒石酸1～5份，甘露糖8～14份，酵母膏6～15份，氯化钠5～10份，牛肉膏4～13份，蛋白胨7～12份，硫酸铵6～12份，磷酸二氢钾5～11份，硫酸镁7～12份，干酪素3～7份，麦芽糖5～10份，蒸馏水15-25份。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方，其特征在于：红薯汁10～15份，酒石酸2～4份，甘露糖9～12份，酵母膏7～13份，氯化钠6～9份，牛肉膏6～11份，蛋白胨8～10份，硫酸铵7～11份，磷酸二氢钾7～10份，硫酸镁8～11份，干酪素4～6份，麦芽糖6～8份，蒸馏水17-23份。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）按权利要求1所述比例称取红薯，将红薯去皮蒸煮10-21min，后捣烂用四层纱布取汁，再加入权利要求1中所述比例的蒸馏水搅拌均匀，110-135℃灭菌15-30min，备用；
2）按权利要求1所述比例称取酒石酸、甘露糖、酵母膏、氯化钠、牛肉膏、蛋白胨、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、干酪素、麦芽糖，然后与步骤1）中红薯汁、蒸馏水搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方的制备方法，其特征在于步骤1）中：红薯蒸煮时间为12-20min，优选13-18min。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌温度为120-130℃，优选125-128℃。
所述的一种专用于漆酶的培养基配方的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌时间为16-28min，优选20-25min。
上述一种专用于漆酶的培养基配方及其制备方法，通过多种营养成分按一定比例配制而成，解决了实验室和工业上高效培养漆酶的问题。该配方安全温和、富含漆酶生长所需的各种营养物质，培养出的漆酶活性高，大大超过漆酶基础培养基，提高了产酶量，同时降低了产酶成本，在实验室和工业上使用对漆酶的培养具有很好的效果，该培养基营养丰富、培养效果好，是理想的漆酶培养基。
本申请文件中涉及的百分含量除另有说明外，其它的均为纯物质的重量百分含量。
具体实施方式
现结合本发明的实施例和药效试验，进一步说明本发明的有益效果。
实施例1
将红薯去皮蒸煮13min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入14g红薯汁，加入23g蒸馏水搅拌均匀，121℃灭菌25min，再加入4g酒石酸、11g甘露糖、7g酵母膏、6g氯化钠、11g牛肉膏、8g蛋白胨、11g硫酸铵、7g磷酸二氢钾、8.5g硫酸镁、4.5g干酪素和6.5g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
实施例2
将红薯去皮蒸煮18min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入10g红薯汁，加入17g蒸馏水搅拌均匀，125℃灭菌20min，再加入2g酒石酸、9g甘露糖、8g酵母膏、7g氯化钠、10g牛肉膏、9g蛋白胨、10g硫酸铵、8g磷酸二氢钾、9.5g硫酸镁、4g干酪素和6g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
实施例3
将红薯去皮蒸煮14min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入15g红薯汁，加入18g蒸馏水搅拌均匀，123℃灭菌21min，再加入3g酒石酸、12g甘露糖、9g酵母膏、8g氯化钠、9g牛肉膏、10g蛋白胨、9g硫酸铵、9g磷酸二氢钾、10.5g硫酸镁、5.5g干酪素和7g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
实施例4
将红薯去皮蒸煮15min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入13g红薯汁，加入19g蒸馏水搅拌均匀，124℃灭菌22min，再加入2.5g酒石酸、10g甘露糖、10g酵母膏、9g氯化钠、8g牛肉膏、8.5g蛋白胨、8g硫酸铵、10g磷酸二氢钾、8g硫酸镁、5g干酪素和8g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
实施例5
将红薯去皮蒸煮17min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入12g红薯汁，加入20g蒸馏水搅拌均匀，123.5℃灭菌24min，再加入3.5g酒石酸、10.5g甘露糖、11g酵母膏、8.5g氯化钠、7g牛肉膏、9.5g蛋白胨、7g硫酸铵、8.5g磷酸二氢钾、9g硫酸镁、6g干酪素和7.5g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
实施例6
将红薯去皮蒸煮16min，后捣烂用四层纱布取汁，向2L搅拌釜内投入11g红薯汁，加入22g蒸馏水搅拌均匀，124.5℃灭菌23min，再加入3.7g酒石酸、11.5g甘露糖、13g酵母膏、7.5g氯化钠、6g牛肉膏、9.2g蛋白胨、7.5g硫酸铵、9.5g磷酸二氢钾、11g硫酸镁、5.8g干酪素和7.8g麦芽糖，搅拌溶解混合均匀即成漆酶培养基。
以下通过试验进一步说明本发明的有益效果
表1实施例1-6对漆酶活性（U/L）的影响
| 培养天数 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 |
| 0 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 |
| 2 | 27.12 | 26.87 | 27.05 | 26.89 | 27.14 | 27.21 |
| 4 | 49.31 | 48.97 | 49.24 | 49.15 | 49.46 | 48.79 |
| 6 | 61.57 | 61.36 | 62.05 | 61.68 | 62.64 | 62.55 |
| 8 | 96.33 | 95.42 | 95.19 | 96.07 | 97.84 | 96.10 |
| 10 | 172.18 | 171.53 | 172.09 | 171.67 | 173.11 | 172.07 |
| 12 | 223.67 | 225.31 | 223.54 | 224.38 | 225.69 | 224.16 |
| 14 | 341.09 | 342.37 | 341.25 | 342.33 | 343.54 | 342.67 |
从上表1可见，实施例1-6对漆酶活性（U/L）均具有明显的促进作用，其中实施例5效果最佳。
Claims (9)
1.一种专用于产漆酶的培养基，其特征在于含有重量比的以下物质：红薯汁8～16份，酒石酸1～5份，甘露糖8～14份，酵母膏6～15份，氯化钠5～10份，牛肉膏4～13份，蛋白胨7～12份，硫酸铵6～12份，磷酸二氢钾5～11份，硫酸镁7～12份，干酪素3～7份，麦芽糖5～10份，蒸馏水15-25份。
2.如权利要求1所述的一种专用于产漆酶的培养基，其特征在于：红薯汁10～15份，酒石酸2～4份，甘露糖9～12份，酵母膏7～13份，氯化钠6～9份，牛肉膏6～11份，蛋白胨8～10份，硫酸铵7～11份，磷酸二氢钾7～10份，硫酸镁8～11份，干酪素4～6份，麦芽糖6～8份，蒸馏水17-23份。
3.如权利要求1所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）按权利要求1中所述比例称取红薯，将红薯去皮蒸煮10-21min，后捣烂用四层纱布取汁，再加入权利要求1中所述比例的蒸馏水搅拌均匀，110-135℃灭菌15-30min，备用；
2）按权利要求1中所述比例称取酒石酸、甘露糖、酵母膏、氯化钠、牛肉膏、蛋白胨、硫酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、干酪素、麦芽糖，然后与步骤1）中红薯汁、蒸馏水搅拌溶解混合均匀即成产漆酶培养基。
4.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：红薯蒸煮时间为12-20min。
5.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：红薯蒸煮时间为13-18min。
6.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌温度为120-130℃。
7.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌温度为125-128℃。
8.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌时间为16-28min。
9.如权利要求3所述的一种专用于产漆酶的培养基的制备方法，其特征在于步骤1）中：灭菌时间为20-25min。
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