CN102716272A - 一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物、其软胶囊及制备方法 - Google Patents
一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物、其软胶囊及制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物、其软胶囊及制备方法,属于中医药技术领域。中药组合物由下列重量份的原料药组成:人参2份、葡萄籽10份、蒺藜1份和淫羊藿1份。其中药软胶囊包括药学上可接受的载体和由人参、葡萄籽、蒺藜和淫羊藿制备所得的活性成分。本发明的中药组合物及其软胶囊具有延缓衰老和抗疲劳作用的优点。
Description
技术领域
本发明属于中医药技术领域,具体涉及一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物、其软胶囊及制备方法。
背景技术
衰老,也称老化(Aging),是指人类在发育成熟以后,随着年龄的增加或时间的增长机体出现组织结构变化、功能减退、适应能力减弱、器官应激能力下降、生活能力逐渐丧失,更易于死亡的过程。自《内经》以来,实践经验早已揭示,从幼年至青年中年,随着五脏的逐渐充盛而机体亦渐强盛。机体衰老是五脏虚衰的结果,五脏所主的每一组织和功能,均无不衰减。现代医学研究也表明影响衰老的因素极为复杂。当前医学衰老机理及其中医药延缓衰老研究认为,人是一个有机的整体,五脏则是这一有机整体的主持中心。衰老作为复杂生命现象的一种变化,是多因素综合作用的结果,是个体的衰老是各脏器衰老的总和。从器官的整体水平和分子细胞的研究发现,衰老与遗传基因、自由基、内分泌功能失调,免疫功能紊乱等因素有关。研究发现,人体内代谢产生的大量氧化物自由基,破坏细胞功能,导致人体的心脏器官老化。内分泌功能失调,首当其冲受影响的也是肌体内脏器官的功能衰退,随着身体的损耗积累,导致老化。
疲劳,是21世纪人类健康的大敌。疲劳不但是医学问题也是社会问题,不但使人们的生活质量降低,也制约了经济的发展,进而影响社会发展的进程,防治疲劳已经成为当务之急。慢性疲劳综合征(Chronic Fatigue Syndrome,CFS)是一种以原因不明的、持续或反复发作至少6个月而且休息不能明显缓解疲劳为主要特征的疾病,其常伴有短期记忆力减退,集中注意力困难、不解乏的睡眠等认知功能障碍,咽痛、淋巴肿大的流感样症状,或头痛、肌肉关节痛等躯体不适症状。在现代社会,随着竞争激烈,压力的加大,节奏的加快,脑力、体力长期处于紧张、疲劳状态的人正与日增加,而且常常由于疲劳无因可查而束手无措。疲劳的治疗基本原则应是疏补结合,补虚损以疏调气机。理脏腑,补虚损,平阴损,恢复身体健康之目的。
发明内容
本发明为了解决当前社会由于工作压力和社会压力等问题导致的疲劳、衰老等亚健康状况,提供了一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物。
本发明的第二个目的在于公开了一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊。
本发明的第二个目的在于公开了一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊的制备方法。
为了实现上述发明的目的,本发明采取如下的技术方案:
一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物,所述中药组合物由下列重量份的原料药组成:人参2份、葡萄籽10份g、蒺藜1份g和淫羊藿1份。
一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊,所述中药软胶囊包括活性成分和药学上可接受的载体,其中,所述活性成分由人参、葡萄籽、蒺藜和淫羊藿通过下述方法制备得到:
(1)、将人参饮片置入提取罐中,用75%乙醇提取两次,每次加乙醇6倍量,提取2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,减压回收乙醇至60度时相对密度1.15的浓缩液备用;残渣留做水提取用;
(2)、取葡萄籽、蒺藜粗粒、淫羊藿粗丝以及步骤(1)中人参残渣混合后,加水提取3次,每次加水6倍量,提2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,静置4小时,吸取上清液,蒸发浓缩至60度时相对密度1.15的提取浓缩液;将该提取浓缩液加入95%的乙醇,使含醇量为60%,静置24小时,吸取上清液后沉淀过滤,滤液与上清液合并,减压回收乙醇,至60度时相对密度1.15的浓缩液;
(3)、将步骤(2)得到的浓缩液与步骤(1)得到的浓缩液混匀后,经喷雾干燥得到活性成分的干浸膏粉。
上述技术方案所述的中药软胶囊,其中,每100g活性成分中含有总皂甙Rb1430mg,原花青素253mg。
上述技术方案所述的中药软胶囊,其中,所述药学上可接受的载体由大豆油、明胶、甘油和蒸馏水组成。
一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊的制备方法,包括由活性成分和药学上可接受的载体制得中药软胶囊剂的步骤,其中,所述制备方法还包括活性成分的制备步骤,其中活性成分的制备步骤包括:
(1)、将人参饮片置入提取罐中,用75%乙醇提取两次,每次加乙醇6倍量,提取2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,减压回收乙醇至60度时相对密度1.15的浓缩液备用;残渣留做水提取用;
(2)、取葡萄籽、蒺藜粗粒、淫羊藿粗丝以及步骤(1)中人参残渣混合后,加水提取3次,每次加水6倍量,提2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,静置4小时,吸取上清液,蒸发浓缩至60度时相对密度1.15的提取浓缩液;将该提取浓缩液加入95%的乙醇,使含醇量为60%,静置24小时,吸取上清液后沉淀过滤,滤液与上清液合并,减压回收乙醇,至60度时相对密度1.15的浓缩液;
(3)、将步骤(2)得到的浓缩液与步骤(1)得到的浓缩液混匀后,经喷雾干燥得到活性成分的干浸膏粉。
上述技术方案所述的制备方法,其中,由活性成分和药学上可接受的载体制得中药软胶囊的步骤包括:
(a)、取制备所得的活性成分干浸膏粉与药学上可接受量的大豆油混合,经过胶体磨,研磨均匀,得到干浸膏粉油的混悬剂;
(b)、按照明胶∶甘油∶蒸馏水=1∶0.6∶1的重量比,称取各原料,先将明胶用水浸泡12小时,使其充分膨胀后,加入比例量的甘油,补加蒸馏水,加热至70-80度,搅拌、熔融、混匀,保温1-2小时,静置,除去上浮泡沫,滤过,得到胶壳料液保温待用;
(c)、将步骤(a)得到的干浸膏粉油的混悬剂与步骤(b)得到的胶壳料液分别置于自动旋转式压囊机片,在室温23度,相对湿度40%的条件下,压制成胶丸,得到中药软胶囊。
本发明的中药组合物、软胶囊具有延缓衰老和抗疲劳保健作用的原理在于原料中各原料药具有如下的药性:
1、人参是五加科人参属植物人参的干燥跟,是传统名贵中药,其味甘、微苦,性温,具有大补元气、固脱生津等功效,本品主要含多种皂甙类,此外,尚含人参炔醇(Panaxynol)、β-榄香烯(Elem-ene)等挥发性成分,以及单糖、双糖、三聚糖、低分子肽、多种氨基酸;还有软脂酸、硬脂酸、葡萄糖甙等成分,其有效成分是人参皂甙。人参皂甙为人参的主要有效成分之一,它具有人参根的主要生理活性,现代药理研究证明;人参皂甙能延长生命寿限,明显抑制肝、脑微粒体脂质过氧化,并能提高体内SOD的含量。人参始载于我国的第一本本草专著《神农本草经》,是我国古代著名的延年益寿药物,随着现代科学技术的发展,特别是分子生物学技术的应用,使人参研究深入到细胞、分子、基因水平,七十年代以来报道揭示,人参皂甙加入培养基中可使二倍体细胞寿命延长,在适当浓度的人参提取物的培养介质中,二倍体细胞有丝***活性和生长速度增强,人胚肺成纤维细胞密度显著高于对照组,结果表明适量的人参皂甙可延长细胞寿命,人参二醇组皂甙的重要组成部分Rb1,不仅具有抑制细胞脂质过氧化反应,清除自由基的能力,还可以使过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性增加。人参水提液可通过强化内分泌***,如下丘脑-垂体-性腺轴、甲状腺***和肾上腺皮质的功能来调节机体的多种代谢活动,从而达到抗衰延寿之目的,人参水提液还能促进机体免疫功能,增强抗病能力,它对体液免疫和细胞免疫均有刺激作用,能扶正祛邪、延缓细胞退化,防止细胞衰死。人参含有的大量微量元素也是抗衰老的重要原因之一,通过补充微量元素,可进一步调节与之有关的代谢活动,从而达到抗衰延寿的目的。
人参补气生血、助精养神,能增强人体功能及“适应原”样作用,所谓“适应原”样作用,就是能增强机体对各种有害因素的防御能力,提高机体适应性,促进正常功能的恢复,并能调整功能紊乱的大脑皮层,提高大脑的机能,对老年人智力及记忆力减退和反应迟钝有一定的改善作用,经口给小鼠人参提取液(含人参皂甙0.3-1.5mg/kg.bw.d)连续灌胃30d,能延续小鼠游动时间,减少游动时血乳酸的产生,表明人参皂甙具有明显抗疲劳作用。
2、葡萄籽提取物(原花青素OPC,proanthocyanidin)是一种新型高效抗氧化剂,具有极强的体内活性和自由基清除作用。研究证实,OPCkeyi降低心脏病、癌症、关节炎和退行性疾病的危险性。OPC还具有增强血管壁抵抗力、降低毛细血管脆性、保持毛细血管适当通透性和增强皮肤弹性和柔滑性以及机体免疫力的作用;葡萄籽提取物原花青素的应用非常广泛,它的防病保健功效基础就是清楚自由基的能力,其延缓衰老的功效就是通过清除体内自由基而实现的,具有较好的延缓衰老作用;此外,它还具有较好的生物利用度,易与胶原蛋白结合,稳定细胞膜及抗酶活性。此外OPC由于具有较强的抗氧化作用,有利于活性氧的清除,使机体抗脂质过氧化作用增强,减少运动时自由基的生成机器对组织的损伤作用,有效地延缓疲劳的发生,实验表明原花青素能显著延长小鼠负重游泳时间,降低疲劳鼠血乳酸含量和增加肝细胞糖元含量,从而证明原花青素具有抗疲劳作用,其作用机制可能主要是通过清除自由基和对自由基引起的组织过氧化损伤的保护作用来实现的。
3、蒺藜(Tribulusterrestrisl)又称白蒺藜、刺蒺藜,系蒺藜科(zygophyllaceae)蒺藜属植物,具平肝解郁、活血祛风、祛痰止咳、明目、利尿、止痒之功效,祛肾寒,镇赫依,强壮,利尿逐水,用于浮肿、水尿、尿闭,肾寒引起的腰痛、遗精、阳痿。蒺藜的有效化学成分主要有生物碱、黄酮类、皂苷类等,再防治心脑血管疾病、抗衰老和治疗性功能减退等方面均显示出良好疗效,蒺藜及其有效成分的研究多以甾体皂苷为主。
4、淫羊藿为中国传统的补益中药,历代本草均有记载,始载于《神农本草经》,别名仙灵脾,为饿哦小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium L.)植物。《本草纲目》记载:茎、叶入药,辛温无毒,有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等作用,丈夫久服令人无子,丈夫绝阳无子,老年昏耄,中年健忘,四肢不仁,偏风不遂,真阳不足者宜之。现代药理研究表明:生品,无促进且抑制性机能,即性寒;炮制品,经温德羊脂油炮制后,促进性机能,即性温。国内外研究表明,淫羊藿主要化学成分为黄酮类化合物、木质素及生物碱;近年来关于淫羊藿的药理研究表明,淫羊藿具有多种药效功能,主要集中在免疫、生殖***、核酸代谢、心脑血管***及抗衰老等方面。淫羊藿黄酮能够显著恢复D-半乳糖衰老模型小鼠T和B淋巴细胞增殖反应的功能,同时提高肝脏总SOD的活性,减少心、肝等组织的脂褐素形成,淫羊藿多糖脂质体(EPSS)明显提高老龄动物红细胞及肝组织中SOD活性,提高老龄小鼠GSH-Px的活性,能明显降低老龄动物血清及肝组织中过氧化脂质(LPO)的含量,降低老龄小鼠心肌脂褐质(LF)的含量,有抗氧化、延缓衰老、抗疲劳的作用。
综上所述,本发明中含有人参皂甙、原花青素等功效成分,经现代医学研究具有延缓衰老,抗疲劳、促进机体功能恢复的作用。
本发明的中药软胶囊规格为0.7g/粒;具有延缓衰老、抗疲劳的功效,适宜人群为中老年人、易疲劳者;不适宜人群为少年儿童、孕妇;每日2次,每次1粒,空腹服用更佳。
本发明具有以下有益效果:
1、本发明的中药组合物及其提取物的软胶囊具有能够延缓衰老和抗疲劳,具有促进人体功能恢复的作用。
附图说明:
1、图1为本发明软胶囊的生产工艺流程图;
2、图2为本发明软胶囊内容物中人参皂甙Rb1(总皂甙Rb1)含量测定中的HPLC色谱图。
具体实施方式:
为使本发明的技术方案便于理解,以下结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1:延缓衰老和抗疲劳的中药组合物的制备:
称取原料药人参2份、葡萄籽10份、蒺藜1份和淫羊藿1份。
实施例2:延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊的制备:
一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊的制备方法,包括下述步骤
(1)、将人参饮片置入提取罐中,用75%乙醇提取两次,每次加乙醇6倍量,提取2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,减压回收乙醇至60度时相对密度1.15的浓缩液备用;残渣留做水提取用;
(2)、取葡萄籽、蒺藜粗粒、淫羊藿粗丝以及步骤(1)中人参残渣混合后,加水提取3次,每次加水6倍量,提2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,静置4小时,吸取上清液,蒸发浓缩至60度时相对密度1.15;将该提取浓缩液加入95%的乙醇,使含醇量为60%,静置24小时,吸取上清液后沉淀过滤,滤液与上清液合并,减压回收乙醇,至60度时相对密度1.15的浓缩液;
(3)、将步骤(2)得到的浓缩液与步骤(1)得到的浓缩液混匀后,浓缩液经喷雾干燥得到活性成分的干浸膏粉;
(4)、取制备所得的活性成分干浸膏粉与药学上可接受量的大豆油混合,经过胶体磨,研磨均匀,得到干浸膏粉油的混悬剂;
(5)、按照明胶∶甘油∶蒸馏水=1∶0.6∶1的重量比,称取各原料,先将明胶用水浸泡12小时,使其充分膨胀后,加入比例量的甘油,补加蒸馏水,加热至70-80度,搅拌、熔融、混匀,保温1-2小时,静置,除去上浮泡沫,滤过,得到胶壳料液保温待用;
(6)、将步骤(4)得到的干浸膏粉油的混悬剂与步骤(5)得到的胶壳料液分别置于自动旋转式压囊机片,在室温23度,相对湿度40%的条件下,压制成胶丸,得到中药软胶囊。
本发明中药软胶囊中每100g活性成分含有总皂甙430mg,原花青素253mg的含量是通过以下方法进行测定所得:
一、人参皂甙的测定:
1、适用范围:
本方法规定了人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法适用于人参含片、人参冲剂、人参茶、人参胶囊等以人参为主要原料的保健食品中人参皂甙的含量的HPLC的测定方法。
本方法的六种皂甙的最低检出量为:10mg/kg。
本方法的六种皂甙的最佳线性范围:0.1mg/mL~1mg/mL。
2、原理:
将试样中的人参皂甙溶解、提取、经净化处理后,使用梯度洗脱反相高效液相色谱进行分离,紫外检测器(UV)检测,根据色谱峰的保留时间定性,外标定量,适用于保健食品中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的同时定量分析。
3、试剂:
试验用水为去离子水。
3.1、乙腈:色谱纯,200nm吸光度值为0.021。
3.2、甲醇:分析纯。
3.3、101大孔吸附树脂。
3.4、高效液相色谱流动相:梯度淋洗A液为乙腈,B液为水。
3.5、人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准品:含量大于98%(HPLC)。
3.6、人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准溶液的配制:
配制人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd标准储备液,浓度分别为10mg/mL;再以此储备液配制成混合标准系列溶液,浓度范围为0.1mg/mL~1mg/mL;所有标准溶液均用甲醇配制。
4、仪器设备
4.1、高效液相色谱仪:双高压输液泵,附紫外检测器。
4.2、超声波清洗器。
4.3、离心机。
4.4、水浴锅。
5、分析步骤
5.1固体试样处理取片剂或胶囊内容物研成粉末,并过20目筛;精确称取该粉末样适量于50mL具塞试管中,加水50mL于超声波清洗器中超声提取30分钟,取出,待溶液恢复常温后,准确取出10mL,通过D-101大孔吸附树脂净化柱(大孔吸附树脂使用前先经甲醇浸泡,水洗,装成10cm长小柱),小柱先用10mL水冲洗,弃去水液之后,用70%甲醇25mL洗脱皂甙,收集甲醇溶液,水浴上蒸干,残留以甲醇溶解并定容至5mL,该样液离心后过0.5μm膜,滤液进行色谱分析。
5.2、液体试样处理取一定量的试样于水浴上蒸干,残留以50mL水超声提取30min,余下步骤与5.1相同。
5.3、测定
5.3.1、液相色谱参考条件
5.3.1.1、色谱柱:反相C18柱,4.6×250mm,5μm
5.3.1.2、紫外检测器:检测波长203nm
5.3.1.3梯度淋洗条件:
5.3.1.4、柱温:35℃
5.3.2、色谱分析
5.3.2.1、标准曲线的制备:
将混合标准系列溶液均取5μL进行HPLC分析,用峰面积对浓度作各皂甙的标准回归曲线。
5.3.2.2、试样测定:
取5μL试样净化液进行高效液相色谱分析,以绝对保留时间定性,用峰面积通过各皂甙的标准曲线定量计算试样中人参皂甙Re、Rg1、Rb1、Rc、Rb2、Rd的含量。
6、分析结果表述:
6.1、计算
式中:C-试样溶液中各人参皂甙的含量,mg/mL;
m-试样质量,g;
试样中总人参皂甙的含量(g/100g)=CRe+CRg1+CRb1+CRc+CRb2+CRd
式中:CRe(g/100g):试样中Re的含量;
CRg1(g/100g):试样中Rg1的含量;
CRb1(g/100g):试样中Rb1的含量;
CRc(g/100g):试样中Rc的含量;
CRb2(g/100g):试样中Rb2的含量;
CRd(g/100g):试样中Rd的含量。
6.2、结果表示:计算结果保留三位有效数字。
7、色谱图:见图2所示。
经对三个批量的样品(0.7g/粒×60粒×12瓶×3批)进行检测,产品中人参皂甙Rb1(即总皂甙Rb1)的含量如下表:
人参皂甙Rb1(mg/kg)
二、原花青素含量的测定方法:
1、范围:
本方法规定了保健食品中原花青素的测定方法
本方法适用于保健食品中原花青素的含量测定
本方法最低检出量为3μg,最低检出浓度为3μg/mL
本方法最佳线性范围:3-150μg/Ml
2、原理:
原花青素是含有儿茶素和表儿茶素单元的聚合物。原花青素本身无色,但经过用热酸处理后,可以生成深红色的花青素离子。本方法用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子。计算试样中原花青素含量。
3、试剂:
3.1、甲醇分析纯。
3.2、正丁醇分析纯。
3.3、盐酸分析纯。
3.4、硫酸铁铵NH4Fe(SO4)2·12H2O溶液:用浓度为2mol/L盐酸配成2%(w/v)的溶液。
3.5、原花青素标准品葡萄籽提取物,纯度95%/
4、仪器:
4.1、分光光度计。
4.2、回流装置。
5、分析步骤:
5.1、试样的制备:
5.1.1、片剂取20片试样,研磨成粉状
5.1.2、胶囊挤出20粒胶囊内容物,研磨或搅拌均匀,如内容物含油,应将内容物尽可能挤出
5.1.3、口服液摇匀后取样
5.2、提取:
5.2.1、粉状试样称取50-100mg试样置于50mL容量瓶中,加入30mL甲醇,超声处理20min,放冷至室温后,加甲醇至刻度,摇匀,离心或放置至澄清后取上清液备用。
5.2.2、含油试样称取50mg试样置于小烧杯中,用20mL甲醇分数次搅拌,将原花青素洗入50mL容量瓶中,直至甲醇提取液无色,加甲醇至刻度,摇匀。
5.2.3、口服液吸取适量样液(取样量不超过1mL)置于50mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀。
5.3、测定:
5.3.1、标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10mL甲醇中,吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5mL置于10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,各取1mL测定,与试样测定方法相同。
5.3.2、试样测定将正丁醇与盐酸按照95∶5的体积比混合后,取出6mL置于具塞锥瓶中,再加入0.2mL硫酸铁铵溶液和1mL试样溶液,混匀,置沸水浴回流,精确加热40min后,立即置冰水中冷却,在加热完毕15min后,于546nm波长处测吸光度,由标准曲线计算试样中原花青素的含量,显色在1小时内稳定。
6、分析结果表述:
试样中原花青素测定结果按(1)式计算:
式中:X-试样中原花青素的百分含量,g/100g;
m1-反应混合物中原花青素的量,μg;
v-待测样液的总体积,mL;
m-试样的质量,mg;
6.2、结果表示:
计算结果保留三位有效数字。
7、技术参数
相对标准偏差:<10%。
回收率:84.6-94.4%。
经对三个批量的样品(0.7g/粒×60粒×12瓶×3批)进行检测,产品中原花青素的含量如下表:
原花青素(mg/kg)
为了更好的说明本发明中药软胶囊具有的有益效果,以下通过具体试验例来说明本发明所具有的延缓衰老和抗疲劳效果:
以下试验例均以《保健食品功能学评价程序和检验方法》为检验依据,检验机构均为天津市疾病预防控制中心(原天津市卫生防病中心)。
试验例一、本发明中药软胶囊的延缓衰老的作用:
本试验的检验项目为本发明中药软胶囊延缓衰老作用的动物实验。
1、材料
1.1、样品:本发明制备的中药软胶囊,内容物为油状粘稠液体。
1.2、试验动物:二级昆明种雄性小鼠75只,体重18-22g,约3月龄,由军事医学科学院试验动物中心提供,合格证号:SCSK(军)2002-001。Oregon野生型黑腹果蝇(Drosophila melanogaster),由上海铁道大学医学院提供。
1.3、实验动物室:SPF级实验动物室,合格证号:医动字第015号,温度20.8-22.5℃,湿度52-58%。实验动物饲料由天津市华荣实验动物科技有限公司提供。
1.4、剂量选择:
1.4.1、果蝇生存实验:本发明中药软胶囊人体推荐摄入量为1.4g/d,设四个浓度组,分别为0.016%、0.047%、0.140%和0.420%,另设空白对照组。
1.4.2、过氧化脂粉(MDA)含量及抗氧化酶(SOD)活力测定:本发明中药软胶囊人体推荐摄入量为1.4g/60kg.BW.d,设三个剂量组,分别为:0.117、0.233、0.70g/kg.BW,即分别相当于人体摄入量的5、10、30倍。受试物用花生油配成混悬液,均经口灌胃,灌胃量0.1ml/10g.BW。
1.5、主要仪器试剂:
1.5.1、果蝇生存实验:生化培养箱(25±1℃、温度45-75%)、培养指管(平底)2.5×10cm、电子天平、***、丙酸。
1.5.2、抗氧化实验:丙二醛(MDA)试剂盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒,均由天津TBD生物技术有限公司提供;UV-1201紫外可见分光光度计。
1.6、试验方法:
1.6.1、果蝇生存实验:收集8小时内新羽化的果蝇成虫,***麻醉下区分雌雄随机分组,每个浓度组袭胸果蝇各200只,分装在10个培养指管内,每管20只。成虫从分窝2周后开始称重并给予受试物,果蝇放入受试物培养及后实验即正式开始,对照组给予普通玉米粉培养基,试验组分别给予含0.016%、0.047%、0.140%和0.420%受试物的培养基。实验条件:温度25±1℃,相对湿度54-66%。每天定时观察记录果蝇的死亡数,每4天更换一次培养基,一直观察到果蝇全部死亡。实验结束,计算半数死亡天数、平均寿命和平均最高寿命(每组最后死亡的20只果蝇的平均存活天数为该组的最高寿命)。
1.6.2、D-半乳糖造模实验:取二级昆明种雌性小鼠75只,随机分成5组:正常对照组、D-半乳糖模型对照组、三个受试物组,每组15只。模型对照组及三个受试物组均经腹腔注射D-半乳糖(500mg/kg·bw),注射量0.1ml/10g·bw,同时受试物组经口给予不同剂量的本发明中药软胶丸内容物,对照组给予等量花生油。D-半乳糖与受试物均连续给药60天,于实验末期取肝,制成10%匀浆后测定MDA和SOD。
1.6.3、MDA含量测定:按试剂盒的要求测定10%肝匀浆中MDA含量。
1.6.4、SOD活力测定:按试剂盒的要求测定10%肝匀浆中SOD活力。
1.7、实验数据用SPSS10.1 for Windows中的方差分析进行统计检验。
2、结果:
2.1、本发明中药软胶囊对果蝇寿命的影响:
表1本发明中药软胶囊果蝇生存试验统计表
其中a(平均最高寿命)由寿命最长的20只果蝇计算得出。
由表1可见,果蝇生存试验中,各组果蝇生长活动良好。雄性果蝇0.140%浓度组半数死亡天数比对照组延长6天,平均寿命及平均最高寿命均比对照组延长,且差异有显著性(P<0.05);雌性果蝇0.140%浓度组平均最高寿命比对照组延长,且差异有显著性(P<0.05)。
2.2、本发明中药软胶囊对小鼠体重的影响:
表2对D-半乳糖造模实验小鼠体重的影响
由表2可见,经口给予不同剂量的本发明中药软胶囊内容物后,各组动物生长、活动正常,各组动物体重增重与模型对照组相比,差异无显著性(P>0.05)。
2.3、本发明中药软胶囊对小鼠MDA、SOD的影响:
表3对小鼠MDA、SOD的影响
由表3可见,经口给予不同剂量的本发明中药软胶囊内容物后,各剂量组肝匀浆中MDA含量均低于模型对照组,且差异均具有显著性(P<0.05);SOD均高于模型对照组,其中高剂量组与模型对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。
3、小结:
果蝇生存试验中,各组果蝇生长活动良好。雄性果蝇0.140%浓度组半数死亡天数比对照组延长6天,平均寿命及平均最高寿命均比对照组延长,且差异有显著性(P<0.05);雌性果蝇0.140%浓度组平均最高寿命比对照组延长,且差异有显著性(P<0.05);在D-半乳糖造模动物实验中,经口给予不同剂量的本发明中药软胶囊内容物后,各组动物生长、活动正常,各组动物体重增重与模型对照组相比,差异无显著性(P>0.05);在对小鼠MDA、SOD的影响试验中,经口给予不同剂量的本发明中药软胶囊内容物后,各剂量组肝匀浆中MDA含量均低于模型对照组,且差异均具有显著性(P<0.05);SOD均高于模型对照组,其中高剂量组与模型对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。根据《保健食品功能学评价程序和检验方法》,本发明中药软胶囊具有延缓衰老的作用。
试验例二、本发明中药软胶囊抗疲劳作用:
本试验的检验项目为本发明中药软胶囊抗疲劳作用的动物实验。
1、材料和方法:
1.1、样品:本发明中药软胶囊,内容物为油状粘稠液体,摄入量为1.40/60kg·bw·日。
1.2、实验动物:18-22g,雄性二级昆明种小鼠160只,由军科院实验动物中心提供,批准号位SCXK-(军)2002-001 043820。
1.3、实验动物室:SPF级实验动物室,合格证号:医动字第015号。温度:20-23℃,湿度:50-60%。实验动物饲料由天津市华荣实验动物科技有限公司提供。
1.4、剂量选择:本发明中药软胶囊,按人体日摄入量1.40/60kg·bw,本试验设计了对照组及低、中、高三个剂量组(每组10只),剂量分别为0.117g/kg、0.233g/kg、0.467g/kg。即相当于人体推荐量的5倍、10倍、20倍。样品用花生油配制,按0.1ml/10g·bw灌胃,对照组给予等量花生油,各组经口灌胃,每日一次,连续给予30天后测定各项指标。
1.5、主要仪器与试剂:
游泳箱(具备温度调控***);紫外可见光光度计(UV1221);全自动生化分析仪(Vitalab Seletra2);尿素氮试剂盒(北京中生生物试剂公司生产);血乳酸葡萄糖测定仪(YSI2300)。
1.6、实验方法:
1.6.1、将本发明中药软胶囊内容物用花生油配制成混悬液,经口灌胃给予受试物30天,灌胃容积为0.1ml/10g·bw.
1.6.2、负重游泳试验:小鼠连续经口灌胃受试物30天,按程序规定负重2%进行游泳试验,记录小鼠入水至力竭身亡时的游泳时间。
1.6.3、血清尿素氮测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天后,按程序规定游泳90分钟后采血,分离血清并进行尿素氮含量测定。
1.6.4、肝糖原测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天,按程序规定直接测定。
1.6.5、血乳酸测定:小鼠连续经口灌胃受试物30天后取尾血约40ul,滴入已放入8ulEDTA的试管中,充分混匀,然后再30℃的水中不负重游泳10分钟后立即采血,休息20分钟后再采血,采血量及处理方法三次相同。然后用乳酸仪测定。根据以下公式计算血乳酸曲线下面积:
血乳酸曲线下面积=1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)×10+1/2×(游泳后0min的血乳酸值+游泳后休息20min的血乳酸值)×20=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值)。
1.6.6、实验数据统计:用SPSS10.0及微软Excel软件进行方差分析和t检验。
2、结果:
2.1、本发明中药软胶囊对小鼠体重的影响:
表4抗疲劳一组小鼠体重
表5抗疲劳二组小鼠体重
表6抗疲劳三组小鼠体重
表7抗疲劳四组小鼠体重
由表4-7可见各剂量组小鼠体重与对照组比较在试验中期、末期及增重差异均无显著性。
2.2、本发明中药软胶囊对小鼠负重游泳时间的影响:
表8对小鼠负重游泳时间的影响
由表8可见,负重游泳试验中,各剂量组动物游泳时间均长于对照组,其中低、高剂量组与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。
2.3、本发明中药软胶囊对小鼠运动90分钟后血清尿素氮的影响:
表9对小鼠运动90分钟后血清尿素氮的影响
由表9可见,血清尿素氮试验中,各剂量组血清尿素氮均低于对照组,且差异均有显著性(P<0.05)。
2.4、本发明中药软胶囊对小鼠肝糖原含量的影响:
表10对小鼠肝糖原含量的影响
由表10可见,肝糖原试验中,各剂量组小鼠肝糖原含量与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05)。
2.5、本发明中药软胶囊对小鼠血乳酸水平的影响:
表11对小鼠血乳酸水平的影响
由表11可见,各剂量组小鼠血乳酸曲线下面积均低于对照组,其中高剂量组与对照组相比,差异有显著性(P<0.05)。
3、小结:
经口给予不同剂量的本发明中药软胶囊内容物30天后,负重游泳试验中各剂量组动物游泳时间均长于对照组,其中低、高剂量组与对照组相比,差异有显著性(P<0.05);血清尿素氮试验中,各剂量组血清尿素氮均低于对照组,且差异均具有显著性(P<0.05);肝糖原试验中,各剂量组小鼠肝糖原含量与对照组相比,差异均无显著性(P>0.05);血乳酸测定中各剂量组小鼠血乳酸曲线下面积均低于对照组,其中高剂量组与对照组相比,差异有显著性(P<0.05),按《保健食品功能学评价程序和检验方法》之判断标准本发明中药软胶囊有抗疲劳的作用。
以上所述,仅为本发明的较佳实施例,并非对本发明作任何形式上和实质上的限制,凡熟悉本专业的技术人员,在不脱离本发明技术方案范围内,当可利用以上所揭示的技术内容,而作出的些许更动、修饰与演变的等同变化,均为本发明的等效实施例;同时,凡依据本发明的实质技术对以上实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变,均仍属于本发明的技术方案的范围内。
Claims (6)
1.一种延缓衰老和抗疲劳的中药组合物,所述中药组合物由下列重量份的原料药组成:人参2份、葡萄籽10份g、蒺藜1份g和淫羊藿1份。
2.一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊,所述中药软胶囊包括活性成分和药学上可接受的载体,其特征在于,所述活性成分由人参、葡萄籽、蒺藜和淫羊藿通过下述方法制备得到:
(1)、将人参饮片置入提取罐中,用75%乙醇提取两次,每次加乙醇6倍量,提取2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,减压回收乙醇至60度时相对密度1.15的浓缩液备用;残渣留做水提取用;
(2)、取葡萄籽、蒺藜粗粒、淫羊藿粗丝以及步骤(1)中人参残渣混合后,加水提取3次,每次加水6倍量,提2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,静置4小时,吸取上清液,蒸发浓缩至60度时相对密度1.15的提取浓缩液;将该提取浓缩液加入95%的乙醇,使含醇量为60%,静置24小时,吸取上清液后沉淀过滤,滤液与上清液合并,减压回收乙醇,至60度时相对密度1.15的浓缩液;
(3)、将步骤(2)得到的浓缩液与步骤(1)得到的浓缩液混匀后,经喷雾干燥得到活性成分的干浸膏粉。
3.根据权利要求2所述的中药软胶囊,其特征在于:每100g活性成分中含有总皂甙Rb1430mg,原花青素253mg。
4.根据权利要求2或3所述的中药软胶囊,其特征在于:所述药学上可接受的载体由大豆油、明胶、甘油和蒸馏水组成。
5.一种延缓衰老和抗疲劳的中药软胶囊的制备方法,包括由活性成分和药学上可接受的载体制得中药软胶囊的步骤,其特征在于:所述制备方法还包括活性成分的制备步骤,其中活性成分的制备步骤包括:
(1)、将人参饮片置入提取罐中,用75%乙醇提取两次,每次加乙醇6倍量,提取2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,减压回收乙醇至60度时相对密度1.15的浓缩液备用;残渣留做水提取用;
(2)、取葡萄籽、蒺藜粗粒、淫羊藿粗丝以及步骤(1)中人参残渣混合后,加水提取3次,每次加水6倍量,提2小时,100目不锈钢筛过滤,滤液合并,静置4小时,吸取上清液,蒸发浓缩至60度时相对密度1.15的提取浓缩液;将该提取浓缩液加入95%的乙醇,使含醇量为60%,静置24小时,吸取上清液后沉淀过滤,滤液与上清液合并,减压回收乙醇,至60度时相对密度1.15的浓缩液;
(3)、将步骤(2)得到的浓缩液与步骤(1)得到的浓缩液混匀后,经喷雾干燥得到活性成分的干浸膏粉。
6.根据权利要求5所述的制备方法,其特征在于:由活性成分和药学上可接受的载体制得中药软胶囊的步骤包括:
(a)、取制备所得的活性成分的干浸膏粉与药学上可接受量的大豆油混合,经过胶体磨,研磨均匀,得到干浸膏粉油的混悬剂;
(b)、按照明胶∶甘油∶蒸馏水=1∶0.6∶1的重量比,称取各原料,先将明胶用水浸泡12小时,使其充分膨胀后,加入比例量的甘油,补加蒸馏水,加热至70-80度,搅拌、熔融、混匀,保温1-2小时,静置,除去上浮泡沫,滤过,得到胶壳料液保温待用;
(c)、将步骤(a)得到的干浸膏粉油的混悬剂与步骤(b)得到的胶壳料液分别置于自动旋转式压囊机片,在室温23度,相对湿度40%的条件下,压制成胶丸,得到中药软胶囊。
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