CN102698096A - 一种中药提取物的组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物、其制备方法以及该玉米须多糖和粗黄芩苷在制备用于治疗降血糖的药物中的用途。本发明所述的玉米须多糖和黄芩苷可以利用简单有效的提取工艺和方法，分别从玉米须和黄芩中分离提取、纯化而得到。药理实验表明该中药提取物的组合物具有显著的体内降血糖活性。

Description

一种中药提取物的组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种植物提取物的组合物，更具体地说，涉及一种从玉米须(Zeamays L.)中提取得到的玉米须多糖和一种从黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)中提取得到的粗黄芩苷及其制备方法以及玉米须多糖与粗黄芩苷组合物在制备用于治疗降血糖的药物中的用途。

背景技术

糖尿病是一种病因十分复杂的内分泌代谢性疾病，其基本病理生理是绝对性或相对性的胰岛素分泌不足；以及β细胞对胰岛素的敏感性降低，从而导致糖、蛋白质、脂肪和继发的水、电解质代谢紊乱。严重时可引起酸碱平衡失调。其典型特性为：高血糖、尿糖、葡萄糖耐量降低及胰岛素释放试验异常。临床表现为多饮、多食、多尿、烦渴、易饥、消瘦、疲乏无力等症状，糖尿病患者由于遗传因素、环境因素、生活因素、精神因素、引起人体免疫功能障碍，导致白细胞介素反应性增加，促进胰岛细胞内淋巴细胞浸润，浸润的细胞产生一种对抗胰岛素功能损害因子淋巴活素，淋巴活素阻碍胰岛β细胞血液循环，杀伤胰岛β细胞及糖载体基因，破坏胰岛素分泌、***和转运的各个环节，引起胰岛功能的损害，造成糖尿病及糖尿病并发症。2型糖尿病，多称为非胰岛素依赖型糖尿病，发病率占糖尿病病人总数的90％；发病年龄多数在35岁以上。

玉米须、黄芩分别有较好的治疗糖尿病和并发症的疗效。

玉米须为禾本科植物玉蜀黍Zea mays L.的花柱和柱头。最早药用记载见于1476年的《滇南木草》，是我国传统的中药材，《中国药典》1977年收载。为《中华人民共和国***药材标准》1985版(一部)收录的常用药材品种。玉米须对人或家兔均有利尿作用，可增加氯化物排出量，其水浸膏甲醇不溶部分经过透析者利尿作用最强，无论口服、皮下或静脉注射均有显著效果。玉米须制剂能促进胆汁***，降低其粘度，减少其胆色素含量，因而可作为利胆药用于无并发症的慢性胆囊炎、胆汁排出障碍的胆管炎患者。它还能加速血液凝固过程，增加血中凝血酶元含量，故可作为止血药兼利尿药应用于膀胱及***。曾有研究报道关于玉米须多糖对腹腔注射四氧嘧啶造模小鼠的降血糖作用。

黄芩苷(Baicailin，Bai)是从中药材黄芩(Scutellariabaicalensis georgi)根中提取的一种黄酮类化合物，具有广泛的药理作用。研究发现黄芩苷具有较好的抗脂质过氧化、抑制醛糖还原酶(AR)、防治糖尿病周围神经病变和糖尿病肾病等慢性并发症的作用。

发明内容

本发明利用简单有效的提取工艺和方法，以玉米须为原料获得了一种玉米须多糖复合物I；以黄芩为原料获得了一种黄芩苷复合物II；将两种成分I、II按重量比1∶1混合均匀，即可得到本发明治疗糖尿病的复方制剂。药理实验表明该复方制剂的降血糖活性。因此该复方制剂有望开发成为一种作为降血糖保健产品或药物或者辅佐药物而服务于患者。

因此，本发明的一个目的在于提供一种分子量范围、糖组成明确、化学成分及处方重量比清楚的复方制剂。

本发明的另一个目的是提供一种中药提取物的组合物的制备方法。

本发明的再一个目的是提供一种用于治疗降血糖的中药提取物的组合物，其包含40-4,000mg/kg/d有效剂量范围内的中药提取物的组合物作为有效成分，并且优选地，其可进一步含有药学上可接受的载体及辅料。

本发明的又一个目的是提供中药提取物的组合物在制备用于治疗降血糖的药物中的用途。

本发明中，所述玉米须多糖的糖组成为鼠李糖，***糖，木糖，甘露糖，半乳糖和葡萄糖。其摩尔比为：Rha∶Ara∶Xyl∶Man∶Gal∶Glc＝0.25∶0.86∶0.81∶0.47∶0.84∶1.22；平均分子量为42,095Da，分子量范围为1,500-100,000Da。

本发明中，所述粗黄芩苷为淡黄色粉末，可溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠等碱液。

根据本发明的另一个目的，本发明提供了制备这两种中药提取物的方法。

(一)从禾本科植物玉蜀黍Zea mays L.的花柱和柱头中进行分离提取以及纯化，包括如下步骤：

(1)取干燥的玉米须药材，用95％的乙醇浸泡脱脂(冷浸乙醇没过药材即可)，更换三次，浸泡完毕，将所得固体物置于室温通风处晾干，然后进行提取。1kg原材料每次加10L自来水加热煮沸，提取时间为2～3小时，并用苯酚-硫酸法检测提取液中糖含量，至糖反应不明显，共计提取6次；浓缩提取液，冷却。加入等体积30％(W/V)三氯乙酸溶液，使其终浓度为15％(W/V)；

(2)4℃脱蛋白之后用10％NaOH中和至pH为7.0至8.0，离心。上清液对流动水透析二天，透析液浓缩至2-3L，加入3倍量95％乙醇沉淀，静置，沉淀离心，用无水乙醇洗涤数次后烘干，得到玉米须粗多糖；

其中，步骤(1)中所述的醇溶液为95％乙醇，所用醇溶液浸泡为用95％乙醇浸泡脱脂三次。

步骤(1)中所述的沸水提取的条件为：每次加约10L蒸馏水，提取时间为2～3小时，并用苯酚-硫酸法检测提取液中糖含量，提取3～5次，优选提取6次。步骤(1)中所述的透析条件为：采用对流动水透析2天。

(二)从唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)根中进行分离提取以及纯化，包括如下步骤：

将黄芩药材打成粗粉，用8倍量的醇浸泡5小时后，于90℃回流提取4次，每次2小时(料、液体积比：1∶2)，过滤之后得滤液，回收乙醇至无醇味，得水溶液，水溶液加热至80℃，盐酸调至pH 2，保温0.5h后，继续静置20h，离心，得沉淀，用丙酮洗至无色，在60℃干燥，得粗黄芩苷(得率：7.9％)；其中，所述的醇溶液为60％乙醇。

在本发明的一个优选实施方案中，制备玉米须多糖包括如下步骤：

(1)取干燥的玉米须药材，用95％的乙醇浸泡脱脂(冷浸乙醇没过药材即可)，更换三次，浸泡完毕，将所得固体物置于室温通风处晾干；然后进行提取，1kg原材料每次加10L自来水加热煮沸，提取时间为2～3小时，并用苯酚-硫酸法检测提取液中糖含量，至糖反应不明显，共计提取6次；浓缩提取液，冷却。加入等体积30％(W/V)三氯乙酸溶液，使其终浓度为15％(W/V)，4℃脱蛋白，之后用10％NaOH中和至pH为7.0至8.0，离心。上清液对流动水透析二天，透析液浓缩至2-3L，加入3倍量95％乙醇沉淀，静置，沉淀离心。用无水乙醇洗涤数次后烘干，得到玉米须粗多糖(得率：4.2％)。

根据本发明的再一个目的，本发明提供了一种用于治疗降血糖的药物组合物，其包含40-4,000mg/kg/d有效剂量范围的组合物作为有效成分，并且优选地，其可进一步含有药学上可接受的载体及辅料。

本发明的组合物可经口服给药。经口服给药时，可直接或首先使该类化合物与常规的药用辅剂(如赋形剂、崩解剂、黏合剂、润滑剂、抗氧化剂、包衣剂、着色剂、芳香剂、表面活性剂等)混合，将其制成颗粒剂、胶囊、片剂等形式。制备上述制剂时，可使用常规的制剂技术。

根据本发明的又一个目的，本发明提供了该组合物在制备用于治疗降血糖的药物中的用途。本发明利用简单有效的提取工艺和方法，以玉米须和黄芩为原料获得了玉米须粗多糖和粗黄芩苷，并采用重量比1∶1的配方组成。药理实验表明该组合物具有血糖调节功能及相应的降血糖活性。因此该组合物有望开发成为一种作为降血糖保健产品或药物或者辅佐药物用于临床。

附图说明

图1是根据本发明的一个实施方式的玉米须粗多糖的提取分离纯化流程图。

图2是根据本发明的一个实施方式的粗黄芩苷的提取分离纯化流程图

图3是根据本发明的一个实施方式的玉米须粗多糖的红外光谱(IR)图。

图4是根据本发明的一个实施方式的粗黄芩苷的红外光谱(IR)图。

图5是根据本发明的一个实施方式的玉米须粗多糖的糖组成分析图(GC)图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，以下实施方式只以举例的方式描述本发明。很明显，本领域普通技术人员可在本发明的范围和实质内，对本发明进行各种变通和修改。需要了解的是，本发明意欲涵盖在所附权利要求书中包括的变通和修改。

仪器：

岛津SIL-20A自动进样器，LC-20AD高压泵，CTO-20A柱温箱，SPD-20A紫外可见光检测器，CBM-20A***控制器及GPC数据处理软件。两根多糖专用凝胶色谱柱Ultrahydrogel 500和Ultrahydrogel 2000(7.8mm×300mm，羟基化的聚甲基丙烯酸甲酯，排阻极限分别为4×10⁵和7×10⁶Da)以及一根预柱Ultrahydrogel Guard Column(6μm，6x40mm)串联；色谱条件：以Buffer(7.32g磷酸氢二钾以及0.4g磷酸二氢钾混和定容至1L)为流动相，柱温为35℃，流速为每分钟0.5ml，进样量为20μl。

BSZ-100自动部分收集器和HL-2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂)，Labconco 6型冷冻干燥器(英国Labconco公司)，日立CR-22G型高速离心机(日本Hitachi公司)，电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司)，EYELA-N1100型旋转蒸发仪，UV1000紫外可见分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)。

药品和试剂：

玉米须实体购自于上海胡庆余堂药店。

黄芩实体购自于上海胡庆余堂药店。

透析袋(分子截留为3,500Da)，其他试剂来源于上海国药集团。

实施例1玉米须多糖的制备：

取玉米须(购自上海胡庆余堂药店)1公斤，用95％的乙醇浸泡3次，结束后晾干。脱脂后的干品用沸水提取，每次加水10升左右，提取时间为2-3小时，以苯酚硫酸法检测提取液的糖含量，直至糖反应不明显，共计提取7次。将每次的提取液合并，最终浓缩至2L左右，加入等体积30％(W/V)三氯乙酸溶液，使其终浓度为15％(W/V)，于4℃脱蛋白3h，之后用10％NaOH调pH至中性，12000rpm离心，取上清液，上清液对流动水透析二天，透析液浓缩至2L左右，加入3倍量95％乙醇沉淀，静置过夜，12,000rpm离心，取沉淀。经无水乙醇和丙酮依次洗涤后，于50℃加热干燥，得玉米须多糖，棕褐色固体。

实施例2粗黄芩苷的制备：

将黄芩药材50℃干燥打成粗粉，过60目药筛，用8倍量的60％乙醇浸泡5小时，于90℃回流提取4次。每次2小时，料、液体积比为1∶2，过滤之后得滤液，滤液回收乙醇至无醇味，得水溶液。水溶液加热至80℃，用37.5％的盐酸调至水溶液pH 2，80℃保温0.5h后，继续静置20h，离心，得沉淀。沉淀用丙酮洗至无色，在60℃干燥。得粗黄芩苷(得率：7.9％)。

实验实施例

实验例1药理实验：

1、该中药提取物的组合物，(玉米须多糖与粗黄芩苷，药理实验中命名为S1)对2型糖尿病小鼠降糖作用。2型糖尿病的主要特征为胰岛素抵抗和胰岛素分泌绝对或相对不足，以及由此导致糖蛋白质和脂肪代谢紊乱，从天然植物中寻找有效的降血糖成分可能为治疗糖尿病提供新的方法。

1.1实验材料

(a)原料：S1，褐色干粉，由赛珂睿德生物医药科技(上海)有限公司提供，-20度保存。

(b)实验小鼠：KK-A^y小鼠是一种毛色基因(ay)突变型糖尿病小鼠，ay基因不仅影响小鼠的毛色而且可引起代谢紊乱，出现肥胖、高血糖、脂质代谢紊乱和高胰岛素血症等代谢异常综合征，其发病是在遗传易感的基础上加环境因素而诱发，与人类2型糖尿病表现极为相似，是一种理想的人类型糖尿病动物模型，为胰岛素抵抗的典型模型。

KK-A^y糖尿病小鼠32只，雄性，体重26±1g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，均饲以高脂饲料(由北京华阜康生物科技股份有限公司提供)，用灭菌塑料鼠笼喂养，自由饮水，动物房温度控制在20-25度，湿度55-65％，光照10-12h/d，鼠笼一周更换2-3次。

(c)实验仪器：血糖仪，罗氏卓越型血糖仪(

Performa)，罗氏血糖试纸

1.2实验方法

(a)随机分为高、中、低3个剂量组和对照组，分别以等体积的100、300、600mg/kg/d的S1连续灌胃8周。

(b)每两周测定小鼠空腹血糖1次，测定前禁食3hr，剪尾取血。

表1.试验剂量分组表

Group

Compound

Animals

Route

Dose(mg/kg)

Schedule

Model

1

Control 1

8

po

0.1ml/10g，BW

Qd＊56

KK-Ay

2

S1

8

po

100mg/kg

Qd＊56

KK-Ay

3

S1

8

po

300mg/kg

Qd＊56

KK-Ay

4

S1

8

po

600mg/kg

Qd＊56

KK-Ay

表2试验各组空腹血糖值

表2显示，在实验开始时，各组动物空腹血糖无显著差异；灌胃2周后，S1 100mg/kg和600mg/kg给药组的空腹血糖较开始时和同期对照组显著降低(均p＜0.05)；之后几周给药后血糖值跟对照比又无明显差别。

实验例2药理实验：

1.S1对糖尿病小鼠OGTT及体重的影响实验

1.1实验材料

(a)原料：S1，褐色干粉，由赛珂睿德生物医药科技(上海)有限公司提供，-20度保存。

(b)实验小鼠：KK-A^y糖尿病小鼠32只，雄性，体重26±1g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，均饲以高脂饲料(由北京华阜康生物科技股份有限公司提供)，用灭菌塑料鼠笼喂养，自由饮水，动物房温度控制在20-25度，湿度55-65％，光照10-12h/d，鼠笼一周更换2-3次。

(c)实验仪器：血糖仪，罗氏卓越型血糖仪(

Performa)，罗氏血糖试纸

1.2实验方法

(a)第4周时各组小鼠做糖耐量实验(oral glucose tolerance test，OGTT)。OGTT前小鼠空腹3h，可自由饮水。OGTT当天，将葡萄糖按2g/kg体重分别溶于灭菌蒸馏水内，各组分别给予药物后10min给葡萄糖液，灌胃液体容积量0.1ml/10g小鼠体重，观察灌胃时及灌胃后30min、1h、2h的血糖变化。

(b)实验各组在给药四周时，空腹给予2g/kg葡萄糖，检测给糖后30min、60min和120min时的血糖变化。测定前禁食3hr，剪尾取血。

表3试验各组OGTT值

表3显示，灌胃4周后的OGTT结果未见各组血糖值与对照组有显著差异。

(c)实验各组连续给药八周，每两周测量体重一次，观察药物对各实验组体重的影响。

表4各实验组体重变化表

表4显示，2周时，S1 100mg/kg给药组体重较对照组有减轻的趋势(p＜0.05)。但之后给药几周后体重又开始恢复，未见其他相关毒性。

KK-A^y糖尿病小鼠在饲喂S1的过程中，每次灌胃液体容积量(ml)均为0.01倍小鼠体重(g)，6周后小鼠未出现消化功能降低现象，体重与对照组无显著差异。

实验例3药理实验：

1.S1对餐后血糖的影响实验

1.1实验材料

(a)原料：S1，褐色干粉，由赛珂睿德生物医药科技(上海)有限公司提供，-20度保存。

(b)实验小鼠：KK-A^y糖尿病小鼠32只，雄性，体重26±1g，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，均饲以高脂饲料(由北京华阜康生物科技股份有限公司提供)，用灭菌塑料鼠笼喂养，自由饮水，动物房温度控制在20-25度，湿度55-65％，光照10-12h/d，鼠笼一周更换2-3次。

(c)实验仪器：血糖仪，罗氏卓越型血糖仪(

Performa)，罗氏血糖试纸

(d)按实验1方法，在给药8周后，实验各组在非禁食状态下，给予药物处理，分别测量给药后0min、30min、60min、120min后的血糖变化。

表5各实验组给药8周后餐后血糖值

表6.各实验组给药9周后餐后血糖值

表7.各实验组给药10周后餐后血糖值

表5显示，在给药8周后，实验各组在非禁食状态下，给予药物处理，分别测量给药后0min、30min、60min和120min后的血糖变化。S1 600mg/kg组在120min时的血糖值与对照组有显著差异(p＜0.05)。

Claims (10)

1.玉米须多糖与粗黄芩苷一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物，其特征在于它是由下列原料或者是下列原料的醇和/或水提取物作活性成分组成：

玉米须600-900重量份    黄芩450-750重量份

2.一种治疗糖尿病的中药提取物的组合物的制备方法，其特征在于工艺流程包括：

(1)称取下列中药为原料：玉米须740重量份  黄芩600重量份

(2)将上述玉米须粗粉用醇浸渍，除脂，得到的提取物作为活性成分I；

(3)将上述黄芩粗粉用醇浸渍，得到的提取物作为活性成分II；

(4)将上述活性成分I、II按重量比1∶1混合均匀，即可得到本发明治疗糖尿病的复方制剂。

3.从玉米须中提取的玉米须多糖的复合物，其特征在于该多糖复合物的糖组成为：鼠李糖，***糖，木糖，甘露糖，半乳糖和葡萄糖。其摩尔比为：Rha∶Ara∶Xyl∶Man∶Gal∶Glc＝0.25∶0.86∶0.81∶0.47∶0.84∶1.22；平均分子量为42,095Da，分子量范围为1,500-100,000Da。

4.一种制备如权利要求2所述的玉米须多糖的方法，包括如下步骤：

取干燥的玉米须药材，用95％的乙醇浸泡脱脂(冷浸乙醇没过药材即可)，更换三次，浸泡完毕，将所得固体物置于室温通风处晾干，然后进行提取，1kg原材料每次加10L自来水加热煮沸，提取时间为2～3小时，并用苯酚-硫酸法检测提取液中糖含量，至糖反应不明显，共计提取6次，浓缩提取液，冷却，加入等体积30％(W/V)三氯乙酸溶液，使其终浓度为15％(W/V)，4℃下脱蛋白3小时之后用10％NaOH中和至pH为7.0至8.0，离心，上清液对流动水透析二天，透析液浓缩至2-3L，加入3倍量95％乙醇沉淀，静置，沉淀离心，用无水乙醇洗涤数次后50℃烘干，得到玉米须粗多糖，提取率为4.2％。

5.一种制备如权利要求2所述的粗黄芩苷的方法，包括如下步骤：

将黄芩药材打成粗粉，用8倍量的60％乙醇浸泡5小时后，于90℃回流提取4次，每次2小时(料、液体积比：1∶2)，过滤之后得滤液，回收乙醇至无醇味，得水溶液，水溶液加热至80℃，盐酸调至pH 2，保温0.5h后，继续静置20h，离心，得沉淀，用丙酮洗至无色，在60℃干燥，得粗黄芩苷。

6.从黄芩中分离得到的粗黄芩苷，淡黄色粉末，可溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠等碱液，但在碱液中不稳定，粗黄芩苷中黄芩苷的提取率为7.9％。

7.根据权利要求1和2中任一项所述的治疗糖尿病中药提取物的组合物，其特征在于所述的药剂是任何一种药剂学上所说的剂型。

8.根据权利要求2所述的治疗糖尿病中药提取物的组合物，其特征在于所述的药剂剂型是胶囊剂。

9.一种中药提取物的组合物，其包含40-4000mg/kg/d有效剂量范围内的、权利要求1所述的中药提取物的组合物作为有效成分，并且优选地进一步含有药学上可接受的载体及辅料。

10.权利要求1所述的中药提取物的组合物在制备用于治疗降血糖的药物中的用途。

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