CN102670574A - 姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了属于药物制备技术领域的姜黄素在制备肠缺血再灌注损伤药物中的应用。本发明制备肠缺血再灌注损伤模型，将姜黄素-PVP固体分散体用注射用生理盐水溶解后用于治疗该疾病模型。通过组织大体观察、疾病模型死亡率、组织病理学变化、血清肝肾功能变化、组织中凋亡、炎症相关调控因子的变化来检测姜黄素的治疗效果。结果发现姜黄素能有效的治疗肠缺血再灌注损伤，为姜黄素在急危重病象的应用提供依据。

Description

姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用

技术领域

本发明属于药物制备技术领域，具体涉及姜黄素在制备肠缺血再灌注损伤药物中的应用。

背景技术

姜黄素类是从姜科、天南星科中的一些植物根茎中提取的一种化学成分，是植物界很稀少的具有二酮的色素。具有破血行气、通经止痛的功能。姜黄素类的主要成分有姜黄素、脱甲氧基姜黄素及双脱甲氧基姜黄素。目前国内外研究证明，姜黄素不仅是一种天然的营养素，具有姜黄的传统作用，而且还具有抗炎、抗氧化、清除氧自由基、抗人类免疫缺陷病毒、防癌、抗癌、保护肝脏和肾脏及抗纤维化等新的药理作用。

无论是在战时或平时，缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury)均是临床常见急危重症病象。肠系膜血管急性病变引起血管狭窄和/或急性循环衰竭导致肠管供血不足或中断是造成肠缺血的重要原因，临床上可分为肠系膜血管阻塞及肠系膜血管供血不足。腹股沟嵌顿性斜疝、肠套叠、肠梗阻、失血性休克、大器官移植术后、严重感染性休克等都是临床常见的疾病，而这些缺血性疾病的病理生理基础就与肠缺血再灌注损伤有关。肠黏膜对缺血缺氧尤为敏感，持续的缺血缺氧必将导致肠组织发生严重坏死，进而表现为肠黏膜广泛的功能障碍、黏膜屏障的通透性增高、肠道细菌移位、毒素的吸收及远处肝、肺、肾等重要器官的损伤，出现严重的临床症状和并发症，导致全身炎症反应综合征(SIRS)，进一步发展为多器官功能障碍综合征(MODS)甚至死亡，给临床诊治带来很大的困难。随着现代医疗科学技术的发展，人们对肠缺血再灌注损伤的认识及诊疗提高到了一个新的水平，为临床防治提供了新的线索。但是通过近10年来的临床实践及调查统计，发现病死率与20多年前比较，有增无减。究其原因，主要是缺乏早期诊断及有效防治措施。因此，寻找有效地预防和早期治疗的药物，从而应用于临床是十分必要的。

肠缺血再灌注损伤的病理生理机制目前尚不清楚，人们先后提出过能量衰竭、氧自由基损伤、白细胞粘附与内皮细胞损伤、介质病等一系列学说，并针对肠缺血再灌注损伤的可能机制，进行了相应的防治实验研究。尽管研究和临床人员尝试了很多的方法用于预防和治疗诸如肠缺血再灌注导致的急危重病象，例如，临床上结合补液并应用扩血管药物治疗、肝素及抗纤溶***药物治疗、抗细胞因子治疗等，但是近十多年来的实践证明，均未能取得预期的效果。这是由于此类急危重病象的发生机制复杂，受到多种因素的调控；发展速度快，必须在早期予以干涉和治疗，所以临床上预防和治疗的效果仍然不是很明显。因此，寻找一些药物新的作用，从而能早期应用于肠缺血再灌注导致的急危重病象如失血性休克、大器管移植术后、严重感染性休克等是十分必要的。

发明内容

本发明的目的在于发现一种传统药物的新作用，即姜黄素能够在早期预防和治疗肠缺血再灌注导致的急危重病象。

姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用。

所述肠缺血再灌注损伤为肠道黏膜坏死、出血或炎症反应。

治疗肠缺血再灌注损伤的药物为姜黄素注射剂；所述姜黄素注射剂的制备方法如下：取姜黄素3g，3ml无水乙醇溶解，滴加入聚维酮溶液中，用10ml无水乙醇洗瓶，手动搅拌，倒入250ml烧杯中搅拌充分，搅拌后冻干3-5h，得到姜黄素固体分散体，取900mg姜黄素固体分散体，加注射用生理盐水5ml，得到20mg/ml的姜黄素注射剂，置于于棕色瓶中保存。

所述姜黄素能显著抑制肠缺血再灌注损伤导致的谷丙转氨酶水平异常增高，改善肝功能损伤。

所述姜黄素能显著抑制肠缺血再灌注损伤导致的尿酸水平异常增高，改善肾功能损伤。

所述姜黄素能显著抑制促凋亡因子及促炎因子的表达水平。

本发明的有益效果：姜黄素能在早期显著改善肠组织病理损伤，并能作用于远端器官，显著改善肠缺血再灌注导致的肝、肾功能的损伤，并且能够调控肠组织中凋亡、炎症相关的调控因子的水平，控制了损伤后机体往更坏的方面发展，有利于临床应用。由于姜黄素比较易得，并且在大剂量使用时无急性毒性及长期毒性，同时姜黄素类药物的剂型较多，使用非常方便，大大避免了临床上在治疗此类疾病时面临的药物毒副作用大、仅能针对单一脏器进行支持治疗、药物费用昂贵、药物使用复杂等缺陷。同时由于姜黄素能在损伤早期就具有很好的疗效，所以为进一步治疗此类疾病争取了机会和时间，极大地稳定了病情的进一步恶化，降低了死亡率。

附图说明

图1肠组织肉眼观察图；

图中，A-假手术组，B-对照组，C-姜黄素治疗组。

图2各组处理小鼠的死亡率。

图3各组处理小鼠的肠组织病理损伤图。

图4各组处理小鼠的谷丙转氨酶活力。

图5各组处理小鼠的尿酸水平。

图6各组处理小鼠的相关因子表达水平；

图中，A-Caspase-3的表达量，B-磷酸化P38的表达量，C-磷酸化cPLA2的表达量，D-COX-2的表达量。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

实施例1姜黄素治疗小鼠肠缺血再灌注损伤

(1)姜黄素制剂的制备

聚维酮(PVP)姜黄素固体分散体：

质量比(姜黄素∶PVP＝1∶8)

PVP 24g，40ml无水乙醇溶解，磁力搅拌；

姜黄素3g，3ml无水乙醇溶解，滴加入PVP溶液中，用10ml无水乙醇洗瓶，手动搅拌，倒入250ml烧杯中大转子搅拌充分，搅拌后冻干4h，得到姜黄素固体分散体。

姜黄素固体分散体溶液：

称取900mg姜黄素固体分散体，加注射用生理盐水5ml，即为姜黄素20mg/ml，于棕色瓶中，呈透明橘红色，粘稠，取20mg/ml 1ml+生理盐水7ml即为2.5mg/ml的应用液。

(2)小鼠肠缺血再灌注损伤模型的制备及姜黄素对损伤模型的治疗

制作小鼠肠缺血再灌注损伤模型：雄性昆明小鼠60只，称重约25g，其中分为假手术组A 20只，对照组B 20只，姜黄素治疗组C 20只，术前12h禁食自由饮水，麻醉后腹部消毒，正中开口，小心分离出肠系膜上动脉，微型动脉夹夹闭形成缺血，45min后松夹进行再灌注，姜黄素治疗组与再灌注同时及以后每6h分别腹腔注射300ul姜黄素工作溶液，对照组注射相同体积的PVP-K30溶液，24h后采集小鼠标本，保存待检测。假手术组仅分离肠系膜上动脉，不夹闭，1h后处死取标本。

图1显示各组肠组织的损伤情况，从图中可以看出，假手术组A和姜黄素治疗组C的肠组织损伤明显小于对照组B；图2显示各组小鼠的死亡率，对照组B死亡率明显高于姜黄素治疗组C。

实施例2姜黄素对肠缺血再灌注损伤小鼠肠组织病理损伤，肝、肾功能，凋亡、炎症相关调控因子表达的影响

(1)姜黄素对小鼠肠组织病理损伤的影响

取实施例1处理后的各组小鼠肠回盲部10cm以上肠管，经10％的中性甲醛固定，石蜡包埋、切片，苏木素-伊红(HE)染色后行组织学检查，并对小肠组织损伤程度进行评分。

结果如图3所示，假手术组A几乎观察不到损伤，对照组B肠组织损伤严重，肠绒毛几乎全部脱落，黏膜坏死严重；姜黄素治疗组C肠组织虽仍有坏死，但是程度明显比对照组轻，提示姜黄素虽然不能避免但是能显著减轻肠组织损伤坏死。

(2)姜黄素对损伤后肝功能的影响

取采集的小鼠血清标本，试剂盒检测血清中谷丙转氨酶活力。谷丙转氨酶(ALT)在37℃及PH7.4条件下，作用于丙氨酸及α-酮戊二酸组成的底物，生成丙酮酸及谷氨酸。反应30min后加入2、4-二硝基苯肼(DNPH)盐酸溶液，既终止反应，同时(DNPH)与酮酸中羰基加成，生成丙酮酸苯腙。苯腙在碱性条件下呈红棕色，于505nm比读吸光度并计算酶活力。

结果如图4所示，损伤后(对照组)小鼠血清中谷丙转氨酶活力显著升高，姜黄素治疗组比对照组显著降低，与假手术组水平基本一致。

(3)姜黄素对损伤后肾功能的影响

取采集的小鼠血清标本，试剂盒检测血清中尿酸(UA)水平。无蛋白滤液中的尿酸在碱性状态下还原磷钨酸生成钨蓝、尿囊素和二氧化碳，于690nm处测定吸光度，蓝色深浅与尿酸浓度成正比例。结果如图5，损伤后(对照组)小鼠血清中尿酸水平显著升高，姜黄素治疗组水平虽然也有所升高，但是差异无显著性，其水平与假手术组比较接近。

(4)姜黄素对凋亡、炎症相关因子表达水平的影响

采集各组小鼠肠组织，采用免疫印迹法检测肠组织中一些与凋亡、炎症相关的因子表达水平。用细胞裂解液提取肠组织细胞全蛋白，定量后按照每孔50ug蛋白上样电泳，后将电泳后的蛋白转印至硝酸纤维素薄膜上，用特异性抗体及化学发光方法检测相关因子的表达水平。结果如图6，损伤后(对照组)肠组织中Caspase-3、磷酸化P38、磷酸化胞浆型磷脂酶A2(cPLA2)、环氧合酶-2(COX-2)这些与细胞凋亡和提示组织细胞损伤的指标均显著增高，而姜黄素治疗组的以上指标表达水平均得到显著的抑制，他们的表达水平都和假手术组比较接近。以上提示，姜黄素可以调控抑制这些与损伤相关的因子表达，避免机体向更坏的方向发展。

姜黄素对肠缺血再灌注损伤的治疗效果明显，姜黄素比较易得，使用方便。在早期使用可以明显避免肠道损伤及显著改善损伤导致的远端肝、肾等重要脏器的损伤，及抑制促凋亡、促炎因子的表达水平，从而控制损伤后机体的进一步恶化。这就为临床上治疗失血性休克、大器管移植术后、严重感染性休克等，与肠缺血再灌注损伤有关的急危重病象，争取了机会和时间，提高了患者的生存率和生活质量。

Claims (6)

1.姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用。

2.根据权利要求1所述姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述肠缺血再灌注损伤为肠道黏膜坏死、出血或炎症反应。

3.根据权利要求1所述姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，治疗肠缺血再灌注损伤的药物为姜黄素注射剂；所述姜黄素注射剂的制备方法如下：取姜黄素3g，3ml无水乙醇溶解，滴加入聚维酮溶液中，用10ml无水乙醇洗瓶，手动搅拌，倒入250ml烧杯中搅拌充分，搅拌后冻干3-5h，得到姜黄素固体分散体，取900mg姜黄素固体分散体，加注射用生理盐水5ml，得到20mg/ml的姜黄素注射剂，置于于棕色瓶中保存。

4.根据权利要求1所述姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述姜黄素能显著抑制肠缺血再灌注损伤导致的谷丙转氨酶水平异常增高，改善肝功能损伤。

5.根据权利要求1所述姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述姜黄素能显著抑制肠缺血再灌注损伤导致的尿酸水平异常增高，改善肾功能损伤。

6.根据权利要求1所述姜黄素在制备治疗肠缺血再灌注损伤药物中的应用，其特征在于，所述姜黄素能显著抑制促凋亡因子及促炎因子的表达水平。

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