CN102596980A - 源自脂磷壁酸的糖脂及含有该糖脂的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种源自脂磷壁酸的糖脂，及包含所述源自脂磷壁酸的糖脂的药品、食品、化妆品组合物及疫苗佐剂。根据本发明的源自脂磷壁酸的糖脂，通过抑制炎性细胞因子的生成具有抗炎效果。因此包含所述源自脂磷壁酸的糖脂的药品、食品和化妆品组合物可以用于预防和治疗炎症性疾病，并且所述源自脂磷壁酸的糖脂也可以用作疫苗佐剂。

Description

源自脂磷壁酸的糖脂及含有该糖脂的组合物
技术领域
本发明涉及一种源自脂磷壁酸的糖脂及含有该糖脂的药物组合物、食品组合物、化妆品组合物及疫苗佐剂。
背景技术
脂磷壁酸(LTA)为革兰氏阳性菌的细胞壁的成分之一。脂磷壁酸通常分为两种结构：包含葡萄糖或D-丙氨酸取代基的聚甘油磷酸酯、及包含糖单元和脂肪酸链的糖脂。众所周知，根据聚甘油磷酸酯中的D-丙氨酸的含量可以调控诸如TNF-α的炎性细胞因子的表达。(Morath，S.，A.Geyer，等2001，Structure-function relationship of cytokine induction by LTA from Staphylococcusaureus.J.Exp.Med.193：393-397)。
尤其是人们已经知道分离自金黄色葡萄球菌的LTA(aLTA)可诱发革兰氏阳性菌败血症，aLTA可被Toll样受体(TLR2，例如巨噬细胞的免疫细胞)和细胞膜相关的CD14识别，从而诱导增强炎性细胞因子表达。炎性细胞因子表达受NF-κB和MAP激酶活性的影响。
但是，分离自乳酸菌(乳杆菌)的LTA具有与aLTA不同的免疫活性(de Vos，W.J.2005.Lipoteichoic acid in lactobacilli：D-alanine makes the differences.Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(31)：10763-4)。即，aLTA诱导免疫细胞引起的过度炎症反应，而分离自乳杆菌的LTA抑制免疫细胞的炎症反应。LTA免疫活性的这种差异被认为是两种LTA的结构的差异所引起的。因此，从阐明LTA的功能以调控免疫活性的方面分析LTA的结构是非常重要的。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗炎效果的糖脂、及包含所述糖脂的药物组合物、食品组合物或化妆品组合物及疫苗佐剂。
为了解决上述问题，本发明提供一种源自脂磷壁酸的糖脂，及包含该糖脂的药物组合物、食品组合物、化妆品组合物及疫苗佐剂。
本发明的源自脂磷壁酸的糖脂通过抑制炎性细胞因子的生成，从而具有抗炎效果。因此包含源自脂磷壁酸的糖脂的药物组合物、食品组合物和化妆品组合物可以用于预防和治疗炎症性疾病，并且源自脂磷壁酸的糖脂也可以用作疫苗佐剂。
附图说明
图1为源自植物乳杆菌的LTA的1H、13C及2D-NMR波谱示意图；
图2为源自植物乳杆菌的LTA的COSY波谱示意图；
图3为源自植物乳杆菌的LTA的HMQC波谱示意图(A：与烯烃中的碳原子相连的α-亚甲基和亚甲基，B：α-D-半乳糖和α-D-葡萄糖的异头质子)；
图4为LTA水解物的GC/MS分析结果示意图；
图5为LTA糖脂的MALDI-TOF MS波谱示意图(A：金黄色葡萄球菌，B：植物乳杆菌)；
图6为(A)aLTA和(B)pLTA的全糖脂及O-乙酰化糖脂的MALDI-TOF MS波谱示意图；
图7为pLTA糖脂的结构示意图；
图8示出pLTA糖脂的质量分析表格；
图9为(A)aLTA糖脂和(B)pLTA糖脂的LTQ-Orbitrap FTMS波谱示意图；
图10示出LTA糖脂的阴离子CID波谱示意图(A：二己糖基二酰甘油B：三己糖基二酰甘油)；
图11示出aLTA糖脂的质量分析表格；
图12示出aLTA的脱酰化糖脂的MALDI-TOF MS波谱示意图(a：完整的糖脂b：氢氧化钠处理后的糖脂c：氢氧化钙处理后的糖脂)；
图13示出对pLTA、dLTA、rLTA及sLTA的糖脂部分进行的MALDI-TOF分析结果示意图；
图14示出了完整的aLTA和pLTA、及源自其的糖脂及聚甘油磷酸酯诱导TNF-α表达能力的实验结果；
图15示出了完整的aLTA、去丙氨酸aLTA及去酰基aLTA的抑制TNF-α表达能力的实验结果；
图16示出了完整pLTA、去丙氨酸pLTA及去酰基pLTA的抑制TNF-α表达能力的实验结果；
图17示出了利用源自pLTA的糖脂进行预处理的细胞中减小TNF-α表达的示意图；
图18为从不同的LTA分离出的糖脂的抑制TNF-α表达的效果示意图；
图19示出根据pLTA处理的福氏志贺菌肽聚糖诱导抑制TNF-α及IL-1β表达的效果示意图(A：TNF-α的表达测量，B：IL-1β的表达测量，C：多粘菌素B处理后的TNF-α的表达测量)；
图20示出福氏志贺菌肽聚糖诱导的炎症反应中根据p-LTA处理的(A)NOD2mRNA表达量的变化，(B)NOD2蛋白质的表达量的变化，及(C)NF-κB的活性变化的示意图；
图21示出福氏志贺菌肽聚糖诱导的炎症反应中根据p-LTA处理的TNF-α的表达变化的测量结果示意图(A：利用控制siRNA转化的THP-1细胞，B：利用TLR2siRNA转化的THP-1细胞C：从正常小鼠分离的BMM及D：从TLR2基因剔除小鼠分离的BMM)；
图22示出根据pLTA处理的MAP激酶和NF-κB的活性变化示意图(A：磷-ERK及磷-SAPK/JNK活性B：IκB-α降解活性C：依据免疫荧光染色法测量的NF-κB活性)；
图23为腹腔注射PBS或pLTA后诱发败血症的小鼠(A)生存率及(B)血液内TNF-α的含量的示意图；
图24为根据pLTA处理的(A)DNCB诱导特应性老鼠的皮肤损伤及(B)皮肤组织内IL-4的分布示意图；
图25为经rLTA预处理的细胞中TNF-α表达量减少的示意图；
图26示出各种LTA的抑制TNF-α表达的效果的示意图；
图27为根据特定信号抑制剂处理的各种LTA的抑制TNF-α表达的效果的示意图。
具体实施方式
源自乳酸菌的脂磷壁酸诱导抗炎活性来抑制炎性细胞因子的表达。本发明人通过本发明发现源自作为乳酸菌的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)的脂磷壁酸(pLTA)与诱导炎症反应的aLTA具有不同的糖脂结构。尤其发现不仅pLTA本身，去除聚甘油磷酸酯部分的pLTA的糖脂部分也具有抑制炎性细胞因子表达的抗炎效果。即，基于pLTA的糖脂结构，制造与其类似的各种糖脂变体，从而使具有抗炎效果的各种糖脂变体可以有效地灵活应用。
本发明提供一种糖脂，在该糖脂的α键连接的二己糖或三己糖的C1、C3、C4及C6位置中的至少一个位置上结合2至6个饱和或不饱和的C10至C30酰基链。
此时，上述己糖可以为葡萄糖、半乳糖、甘露糖或果糖，优选为葡萄糖或半乳糖。
而且所述糖脂优选包含至少一种不饱和的酰基链。
根据本发明的一具体实施例，所述糖脂可以是具有下列化学式I结构的糖脂。
【化学式I】
Figure BPA00001546409600041
在上述化学式I中，R1至R4可以分别独立地为羟基、
Figure BPA00001546409600051
Figure BPA00001546409600052
其中，R’可以分别独立地为饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。n可以为0或1，Cm可以为C4至C30的烷基，具体可为C6至C26的烷基或C10至C24的烷基，所述糖脂内酰基链的总数为2至6个，具体可为2至4个或2至3个。
更具体地，所述化学式I中R1可以为
Figure BPA00001546409600053
其中，R’可以分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。R2至R4可以为羟基，n可以为1，并且所述糖脂可以包含至少一个具有1至14个双键的酰基链，上述1至14个双键具体可为：1至10个双键、1至8个双键、1至6个双键、1至4个双键、1至3个双键或1至2个双键。
具体地，所述化学式I中R1可以为
Figure BPA00001546409600054
此时R2、R3和R4中的其中一个可以为
Figure BPA00001546409600055
其它的可以为羟基。其中，R’可以分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。n可以为1，并且所述糖脂可以包含至少一个具有1至14个双键的酰基链，上述1至14个双键具体可为：1至10个双键、1至8个双键、1至6个双键、1至4个双键、1至3个双键或1至2个双键。
例如，化学式I的所述糖脂可以为具有下列化学式I-1或化学式I-2结构的糖脂。
【化学式I-1】
Figure BPA00001546409600061
【化学式I-2】
Figure BPA00001546409600062
此时，在化学式I-1或化学式I-2中所标示出的双键的位置可以不同。
根据本发明的另一具体实施例，所述糖脂可以为源自乳酸菌的糖脂。所述乳酸菌可以为乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、链球菌(Streptococcus)或乳球菌(Lactococcus)，但并不仅限于此。乳酸杆菌可以为诸如植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、约氏乳杆菌(Lactobacillusjohnsonn)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)或干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)，双歧杆菌可以为诸如两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifido)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium infantis)或动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)。链球菌例如可以为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)。乳球菌例如可以为乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)。
脂磷壁酸(LTA)中，已知结构最为明确的是源自金黄色葡萄球菌(S.aureus)的LTA(aLTA)。源自病原微生物金黄色葡萄球菌的aLTA通过诱导免疫刺激活性，提高炎性细胞因子的表达。如下列化学式III所示，已知aLTA的骨架为β键[β1→6连接]连接两个葡萄糖的龙胆二糖，并在葡萄糖C6位置上通过1，3磷酸二酯键连接有聚甘油磷酸酯链。而且，平均具有15个碳原子的两个饱和脂肪酸链(C15:0)由酯键连接到葡萄糖的C1上。
【化学式III】
Figure BPA00001546409600071
而源自乳酸菌的pLTA诱导抑制炎性细胞因子表达的抗炎活性，在本发明中揭示的pLTA糖脂的结构的特征在于：由α键连接三个己糖作为骨架，由1，3磷酸二酯键连接的聚甘油磷酸酯链被连接至末端己糖的C6位置，该末端己糖在与脂肪酸酰基链连接的己糖的相反侧。pLTA的糖脂的特征还在于，在第一己糖的C1或C6位置上由酯键连接2个或3个脂肪酸酰基链。具体地，源自pLTA的糖脂可以具有化学式I-1或化学式I-2的结构，但是，在上述化学式中双键的位置可以不同。化学式I-1表示第I组pLTA的糖脂，其中，具有18个碳原子的饱和脂肪酸酰基链(C18:0)和具有18个碳原子的不饱和脂肪酸酰基链(C18:2)连接到己糖的C1位置。化学式I-2表示第II组pLTA的糖脂，所述第II组pLTA的糖脂，在化学式I-1的糖脂的己糖C6位置还包含具有16个碳原子的饱和脂肪酸链(C16:0)。结合的己糖、脂肪酸链的数量及其结合位置、碳原子、及是否具有不饱和脂肪酸在TLR2识别脂磷壁酸方面起着重要的作用。因此，LTA的这种结构特性为诱导抗炎活性的重要因素。
已知现有技术中，根据脂磷壁酸的聚甘油磷酸酯中的D-丙氨酸含量，调控例如TNF-α炎性细胞因子的表达。而本发明与此不同，根据下述实施例，可以看出，在pLTA中，相比聚甘油磷酸酯的D-丙氨酸，包含脂肪酸酰基链的糖脂结构在调控炎性细胞因子的表达方面起着更重要的作用。本发明人发现：源自pLTA的糖脂自身即可通过抑制炎性细胞因子TNF-α表达，从而显示抗炎效果。除了源自pLTA的糖脂之外，还证实了，具有与pLTA相似的结构的源自鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)的rLTA及源自德氏乳杆菌(L.delbrueckii)的dLTA中也同样，仅通过糖脂部分就可抑制炎性细胞因子TNF-α表达，从而显示抗炎效果。
此外，本发明还提供一种糖脂，在该糖脂中，在与酰基链连接的己糖的相反侧的末端己糖的C6位置上还连接有聚甘油磷酸酯。
根据本发明的一具体实施例，所述糖脂可以为具有下列化学式II的结构的糖脂。
【化学式II】
Figure BPA00001546409600081
在所述化学式II中，R1至R4可以分别独立地表示羟基、
Figure BPA00001546409600082
Figure BPA00001546409600083
在这种情况下，R’可以分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为：饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。R”可以分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基。N可以为0或1，Cm可以表示C4至C30的烷基，具体可为C6至C26的烷基或C10至C24的烷基，并且l可以在0至80具体为0至60、0至40或0至20的范围内。所述糖脂的酰基链的总数可以为2至6个，具体可为2至4个或2至3个的范围内。
具体地，在所述化学式II中，R1可以为在这种情况下，R’可以分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。R”可以分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基。R2至R4可以为羟基。n为1。l可以在0至80范围内，具体为0至60、0至40或0至20的范围内。并且所述糖脂可以包含至少一个具有1至14个双键的酰基链，具体为1至10个双键、1至8个双键、1至6个双键、1至4个双键、1至3个双键或1至2个双键。
更具体地，在所述化学式II中，R1可以为
Figure BPA00001546409600092
R2、R3和R4中的其中一个为
Figure BPA00001546409600093
其它的可以为羟基。在这种情况下，R’可以分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链，具体可为饱和或不饱和的C14至C26酰基链、饱和或不饱和的C14至C24酰基链、饱和或不饱和的C14至C22酰基链、饱和或不饱和的C14至C20酰基链、饱和或不饱和的C14至C18酰基链、饱和或不饱和的C16至C20酰基链、或饱和或不饱和的C16至C18酰基链。R”可以分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基。n为1。l可以在0至80范围内，具体可为0至60、0至40或0至20的范围内。并且所述糖脂可以包括具有1至14个双键，具体可为1至10个双键、1至8个双键、1至6个双键、1至4个双键、1至3个双键或1至2个双键的至少一个酰基链。
例如，所述化学式II可以为下列化学式II-1或化学式II-2。
【化学式II-1】
Figure BPA00001546409600101
【化学式II-2】
在所述化学式中，R”可以分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基。并且1可以在0至80范围内，具体可为0至60、0至40或0至20的范围内。
而且，化学式II-1或化学式II-2中的双键的位置可以不同。
根据本发明的一具体实施例，还连接有聚甘油磷酸酯的糖脂可以为源自乳酸菌的脂磷壁酸，所述乳酸菌可以为乳酸杆菌(Lactobacillus)、双歧杆菌(Bifidobacterium)、链球菌(Streptococcus)或乳球菌(Lactococcus)，但并不局限于此。乳酸杆菌例如可以为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)、约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonn)、瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)或干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)，双歧杆菌例如可以为两岐双岐杆菌(Bifidobacterium bifido)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双歧杆菌(bifidobacterium infantis)或动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)，链球菌例如可以为嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)，乳球菌例如可以为乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)。
本发明还提供一种包含所述糖脂的药物组合物。
如下列实施例可知，根据本发明的糖脂，通过抑制由内毒素LPS刺激引起的NF-kB的活性及IkB-α的降解，并且抑制TLR2的表达，从而具有抑制炎性细胞因子TNF-α及IL-8的表达的抗炎效果。
含有本发明糖脂的药物组合物，根据常规方法，可以以粉剂、粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液，糖浆或气溶胶的形式制成口服制剂、外用制剂、栓剂或无菌注射溶液。上述药物组合物还可以包含至少一种合适的添加剂，上述添加剂选自广泛用于制备药物组合物的抗生素、载体、赋形剂和稀释剂。
具体地，所述载体、赋形剂及稀释剂可以使用乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇、淀粉、***橡胶、藻酸盐、明胶、磷酸钙、硅酸钙、纤维素、甲基纤维素、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、水、甲基羟苯酸酯、丙基羟苯酸酯、滑石、硬脂酸镁和矿物油。当对药物组合物进行制剂时，可以使用背景技术中广泛使用的稀释剂或赋形剂进行配置，例如，填充剂、增量剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂或表面活性剂。用于口服的固形制剂包括片剂、丸剂、粉剂、粒剂、胶囊等。这种固形制剂可以通过将至少一种赋形剂(例如，淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖、明胶等)与所述提取物混合形成。除了简单地添加的赋形剂以外，还可以使用润滑剂，例如，硬脂酸镁和滑石粉。配置用于口服的液体制剂是可使用悬浮液、内用液体、乳剂、糖浆等，并且除了常用的简单稀释剂(例如，水、液体石蜡)之外，可以包含各种赋形剂，例如，润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等。制备用于非口服外投药的制剂时可使用无菌水溶液、非水溶剂、悬浮液、乳状液、冻干制剂或栓剂。非水溶剂或悬浮液可以使用植物油(例如，丙二醇、聚乙二醇或橄榄油)或注射酯(油酸乙酯)。栓剂基质可以使用半合成脂肪酸酯、聚乙二醇、吐温61、可可油脂、劳林黄油、甘油明胶等。
根据本发明的药物组合物中，相对于100重量份的药物组合物，可以包含0.01至99.9重量份、0.1至90重量份、1至80重量份、或10至80重量份的糖脂，但本发明并不受限于此。糖脂的含量可以根据患者的状态、疾病的种类及进展程度进行改变。
本发明的糖脂具有抗炎活性，因此可以用于预防及治疗炎症性疾病或免疫相关疾病。因此，本发明提供一种药物组合物，该药物组合物包含所述糖脂，用于预防及治疗炎症性疾病或免疫相关疾病；本发明提供一种糖脂的用途，该糖脂用于制造预防及治疗炎症性疾病或免疫相关疾病的药物；及本发明提供一种预防及治疗炎症性疾病的方法，该方法包括将治疗有效量的糖脂给药受治疗者。
具体地，所述炎症性疾病或免疫相关疾病可以包括败血病、动脉硬化、菌血症、全身炎症反应综合症、多器官功能障碍综合症、癌症、骨质疏松、牙周炎、***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、强直性脊柱炎、***性硬结、肌肉特发性炎症性疾病、干燥综合症
Figure BPA00001546409600121
syndrome)、***性血管炎、结节病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血小板减少症、甲状腺炎、糖尿病、免疫介导性肾脏疾病、中枢神经***或周围神经***的脱髓鞘疾病、特发性脱髓鞘性多发性神经病、格林-巴利综合症(Guillain-Barre syndrome)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、肝胆疾病、传染性或自身免疫性慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、肉芽肿性肝炎、硬化性胆管炎、发炎性肠病(infiammatory bowel disease，IBD)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、克罗恩病(Crohn’s disease)、肠易激综合症(irritable bowelsyndrome)、麸胶肠易激综合症(gluten)、惠普尔病(Whipple’s disease)、自身免疫或免疫介导的皮肤疾病，大疱性皮肤疾病、多形性红斑、接触性皮炎、牛皮癣、过敏性疾病、哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、食物过敏、荨麻疹、肺部免疫疾病、嗜酸细胞性肺炎、特发性肺纤维化、过敏性肺炎、移植相关疾病、移植排斥或移植物抗宿主病。
本发明的一具体实施例，糖脂可以通过口服给药、直肠给药或静脉内注射给药、肌内注射给药、皮下注射给药、子宫内膜注射给药或侧脑室注射给药的方式对患者给药。
本发明的糖脂的适宜剂量可以根据患者的状态及体重、疾病的种类及程度、药物的类型、服用的路径及周期进行改变，本领域的技术人员可进行适当选择。但是，每天的给药量为0.01至10,000mg/kg，具体为0.1至10,000mg/kg，更具体地，优选0.1至1,000mg/kg的剂量。可以一天给药一次，或分成数次给药，本发明的范围并不受限于此。
本发明中，术语“患者”包括人类、猩猩、黑猩猩、小鼠、大鼠、狗、牛、鸡、猪、山羊、羊等，但并不受限于此。
本发明还提供一种包含所述糖脂的食品组合物。所述食品组合物可用于制备功能性食品和常规食品，所述功能性食品具有预防和治疗炎症性疾病和免疫相关疾病，所述炎症性疾病和免疫相关疾病选自败血病、动脉硬化、菌血症、全身炎症反应综合症、多器官功能障碍综合症、癌症、骨质疏松、牙周炎、***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、强直性脊柱炎、***性硬结、肌肉特发性炎症性疾病、干燥综合症
Figure BPA00001546409600131
syndrome)、***性血管炎、结节病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血小板减少症、甲状腺炎、糖尿病、免疫介导性肾脏疾病、中枢神经***或周围神经***的脱髓鞘疾病、特发性脱髓鞘性多发性神经病、格林-巴利综合症(Guillain-Barresyndrome)、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、肝胆疾病、传染性或自身免疫性慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、肉芽肿性肝炎、硬化性胆管炎、发炎性肠病(inflammatory bowel disease，IBD)、溃疡性结肠炎(ulcerative colitis)、克罗恩病(Crohn’s disease)、肠易激综合症(irritable bowel syndrome)、麸胶肠易激综合症、惠普尔病(Whipple’s disease)、自身免疫或免疫介导的皮肤疾病，大疱性皮肤疾病、多形性红斑、接触性皮炎、牛皮癣、过敏性疾病、哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、食物过敏、荨麻疹、肺部免疫疾病、嗜酸细胞性肺炎、特发性肺纤维化、过敏性肺炎、移植相关疾病、移植排斥或移植物抗宿主病。
在本发明的一具体实施例中，所述食品组合物可以进一步包含选自有机酸、磷酸盐、抗氧化剂、乳糖、酪蛋白、糊精、葡萄糖、糖和山梨醇中的至少一种添加剂，但并不受限于此。所述有机酸可以为柠檬酸、富马酸、己二酸、乳酸或苹果酸，但并不仅限于此。所述磷酸盐可以为磷酸钠、磷酸钾、焦磷酸或聚磷酸盐，但并不收受限于此。抗氧化剂可以为天然抗氧化剂，例如，茶多酚、儿茶素、α-生育酚、迷迭香提取物、甘草提取物、壳聚糖、鞣酸或植酸，但并不受限于此。
在本发明中，相对于100重量份的食品组合物，可以包含0.01至99.9重量份，具体为1至90重量份、或30至80重量份的糖脂。
此外，在本发明的一具体实施例中，食品组合物的制剂也可以为固体、粉剂、粒剂、片剂、胶囊或液体形式，但并不受限于此。
包含本发明的糖脂的食品组合物可以用于制备食品，例如，点心、糖类、冰淇淋产品、乳制品、肉制品、鱼制品、豆腐或果冻、食用油和油脂、面类食品、茶、饮料、特殊营养食品、保健品食品、调味品、冰、人参制品、泡菜腌制食品、干贝类、水果、蔬菜、水果或蔬菜干制品、切碎的产品、果汁、蔬菜汁、混合果汁、薯片、薄片食物、加工的禽畜食品、加工的海产食品、加工乳制品、发酵乳食品、豆类食品、谷类食品、微生物发酵食品、烤甜点、佐料、加工肉制品、酸性饮料、甘草或草药，但并不受限于此。食品的类型包括固体、粉剂、粒剂、片剂、胶囊剂、液体或饮料形式，但并不受限于此。
在本发明的另一具体实施例中，当包含所述糖脂的组合物用于制备保健食品时，所述组合物可为整个食品重量的0.01至15％，当用于制备饮料时，可以为整个饮料重量的0.02至10％或0.3至1％。
除了所述糖脂之外，本发明的食品组合物可以包含各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、合成调味剂或天然调味剂等调味剂、着色剂、增味剂(奶酪、巧克力等)、果胶酸及其盐、褐藻酸及其盐、有机酸、保护胶体增稠剂、pH值调节剂、稳定剂、防腐剂、甘油、酒精，用于碳酸饮料的碳化剂，但并不受限于此。而且，根据本发明的食品组合物可以包含果肉，该果肉用于制造天然果汁、果汁饮料、蔬菜饮料。这种添加剂的含量相对于100重量份本发明的组合物，在0至约20重量份的范围内选择，但并不受限于此。
本发明还提供一种包含所述糖脂的化妆品组合物。
在本发明中，相对于100重量份的化妆品组合物，可以包含0.01至99.9重量份、具体为1至90重量份、或30至80重量份的所述糖脂。
使用本发明的化妆品组合物的化妆品制剂例如可以包括，柔肤乳液、营养皮肤乳液、按摩霜、营养霜、面膜、胶体、精华素、唇膏、底妆、粉底、乳液、软膏、凝胶、霜、清洁霜、洁面剂、肥皂、洗发水、护发素、焗油膏、美容液，但并不受限于此。这种化妆品可以包含常规成分，例如，水性维生素、油性维生素、高分子肽、高分子多糖、鞘脂，并且本领域的技术人员可以利用广泛共知的技术容易地制造。
与所述成分一起，所述化妆品可以进一步包含选自添加剂，例如，维生素、氨基酸、蛋白质、表面活性剂、乳化剂、香料、色素、稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、紫外线阻断剂、pH值调节剂和螯合剂中的至少一种添加剂。
本发明还提供一种由所述糖脂组成或包含所述糖脂的疫苗佐剂。
本发明的糖脂可用于各种目的。一种较佳的用途为作为包含免疫原性多核苷酸、多肽、抗体、T-细胞或抗原呈递细胞(APC)的药用组合物的免疫***或佐剂使用所述糖脂。
所述佐剂指的是底物，所述底物通过诱导更快地形成疫苗抗体，增强对抗原的免疫反应。本发明的糖脂不仅影响炎性细胞因子的表达，而且影响例如粘附分子的表达等免疫作用，从而可以增强对抗原的免疫反应。而且，因为其自身没有免疫原性(immunogenicity)，可以用作疫苗佐剂。
本发明的糖脂可以刺激的一种免疫反应为Th1或Th2类型，因此，本发明的佐剂可以设计成主要诱导Th1或Th2类免疫反应。高浓度的Th1类细胞因子(例如，TNF-α，IFN-γ，IL-2及IL-12)有助于诱导对服用抗原的细胞介导的免疫反应。另一方面，高浓度的Th2类细胞因子(例如，IL-4，IL-5，IL-6，IL-10及TNE-B)有助于诱导体液免疫反应。在适应包含本发明的糖脂的疫苗后，患者体内可以保持包括Th1或Th2类反应的免疫反应。当反应主要为Th1类反应时，Th1类型细胞因子的浓度增加到大于Th2类型细胞因子的浓度。可以采用标准检测法容易地测量这种细胞因子的浓度被。为了调查细胞因子家族，可以参照文献【Mosmann and Coffman，Ann.Rev.Immunol.7：145-173，1989】。含有CpG的寡核苷酸(CpG二核苷酸未被甲基化)通常用于诱导Th1免疫反应，对这种寡核苷酸人们是耳熟能详，例如WO96/02555中就有记载。
用于主要诱导Th1或Th2型反应的佐剂优选可以包含与铝盐相结合的糖脂。
为了帮助理解本发明，以下参考实施例对本发明进行详细地描述。下述实施例仅用于示例性目的，并不意图限制本发明的范围。具有通常知识的本发明所属领域的普通技术人员应该明白，本发明的实施例是为了更完整地描述本发明。
<实验例>
下列实验例在本发明的各个实施例中均可适用。
LTA及源自LTA的糖脂和聚甘油磷酸酯的分离和提纯
参考已有的报告(Morath，S.，A.Geyer，et al.2001.Structure-functionrelationship of cytokine induction by lipoteichoic acid from Staphylococcus aureus.J.Exp.Med.193(3)：393-7.)方法进行LTA的分离。将100g的细胞(湿重)悬浮于400ml的0.1M的柠檬酸钠缓冲液(pH 4.7)后，通过进行超声波处理，裂解细胞。添加等量正丁醇，混合30分钟后，通过离心分离从而分离出含LTA的水层。添加15％的正丙醇和0.1M柠檬酸钠缓冲液(pH4.7)，分离LTA切片后，用半透膜透析。此后，采用辛基琼脂糖凝胶交换柱CL-4B(2.5cmx10cm)进行疏水作用色谱分析。用含15％的正丙醇和0.1M柠檬酸钠缓冲液(pH4.7)的200ml缓冲液清洗所述色谱柱后，用300ml的洗脱缓冲液(35％的正丙醇，0.1M柠檬酸钠，pH4.7)收集LTA。在添加平衡缓冲液(30％的正丙醇，0.1M醋酸盐缓冲液，pH4.7)后，将含LTA的切片充填到所述交换柱中，从而再次进行DEAE-琼脂糖凝胶离子交换色谱(1.5cmx10cm)分析。用300ml的含系列NaCl(0至1M)的平衡缓冲液收集LTA。
将30mg的完整LTA溶解在500ml、98％(v/v)的醋酸水溶液中，进行30分钟超声波处理，在100℃下加热3小时，从而从LTA分离糖脂。在真空条件下去除溶剂后，用氯仿/甲醇/水(1∶1∶0.9，v/v/v)分离糖脂。在有机层中提取糖脂，在溶剂层中提取聚甘油磷酸酯被萃取到。
核磁共振(NMR)光谱
使用装备有X、Y、Z-屏蔽梯度三重共振探针或Z-屏蔽梯度三重共振冷冻探针的Avance-600MHz和Avance-800MHz高分辨率核磁共振分光镜进行NMR实验。将10mg的LTA溶解于0.5ml的2H2O溶液中。2H2O用作参考信号(4.75ppm，1H)。从相关谱(COSY)、双量子滤波相关谱(DQF-COSY)、总相关谱(TOCSY)、旋转框奥佛豪塞增强光谱(rotating frame Overhauser enhancementspectroscopyROSEY)的波谱中获得同核分配。13C分配是基于异核多量子相关(HMQC)和异核多键相关(HMBC)实验。在300K中记录所有的波谱，并且使用程序nmrPipe28处理NMR数据及使用Sparky可视化NMR数据。
糖脂的弱碱性水解(Mild alkaline hydrolysis)
为了确定糖脂中的弱碱性不稳定的成分，在56℃下将50μg的试样溶解于200μl、0.5M的氢氧化钠中，放置60分钟。然后，用3N盐酸酸化后与正己烷(hexane)混合。去除含脂肪酸的上清液，并且干燥下层溶液从而去除盐份。用氯仿/甲醇/水(8∶4∶3，v/v)溶液层析残留物，通过离心分离使溶液分层并去除上清液。再干燥下层溶液从而去除盐。然后，将残留物溶解在氯仿/甲醇(1∶1，v/v)溶液后，用于MALDI-TOF MS分析。
外切糖苷酶(Exoglycosidase)处理
将糖脂悬浮在含0.1％牛黄脱氧胆酸钠的50μl的50mM碳酸氢铵缓冲液后，添加α-葡萄糖苷酶(酿酒酵母)、β-葡萄糖苷酶(杏仁)、α-半乳糖苷酶(绿色咖啡豆)或β-半乳糖苷酶(大肠杆菌)，在37℃时处理48小时。此后，添加1.35ml氯仿∶甲醇(1∶1，v/v)和100ul的蒸馏水，进行层分离，并且干燥下层溶液进行连锁分析(linkage analysis)。
MALDI-TOF MS
将0.5μl的糖脂溶液添加到基质溶液(2，5-二羟基苯甲酸溶液、30mg/ml 70％的乙腈/30％的水[v/v]，0.5μl)后，进行MALDI探针分析。提纯后的糖脂可直接通过MALDI-TOF MS分析或经O-乙酰化后再进行分析。在80℃时利用200μl的吡啶∶乙酸酐(1∶1，v/v)O-乙酰化净化后的糖脂2小时。此后，去除溶剂，并且通过MALDI-TOF MS分析糖脂。
利用氢氟酸部分水解LTA
为了实现部分或完全水解聚(甘油磷酸盐)主链，将1mg LTA添加到100μl48％的氢氟酸(HF)后，在4℃时处理5至48小时。此后，利用饱和氢氧化锂(LiOH)中和产生的混合物后，通过离心分离(12,000x g，10分钟)去除沉淀物。收集上清液用于TLC和ESI-LIT MS分析。
气相色谱/质谱(GC/MS)
为了从LTA水解产物中分析单糖组分，进行GC/MS分析。将标准参考化合物(Authentic reference compound)(半乳糖、葡萄糖、甘露糖或N-乙酰氨基葡萄糖)或LTA水解产物试样溶解于吡啶后，常温放置48小时。添加50μl的三甲基硅烷咪唑后，在67℃时加热30分钟。将试样溶解于200μl的氯仿后，在Finnigan MAT***(气相色谱模型GCQ，HP19091J-433)中使用。将所述试样上样到非极性毛细管柱(5％苯基甲基硅氧烷毛细管30mx250μm i.d.，0.25μm的薄膜厚度，HP-5)。在100℃时将所述毛细管柱柱放置2分钟后，以4℃/秒的速度加热至220℃，并且保持5分钟。此后，以15℃/秒的速度将所述柱加热至300℃并且保持5分钟。在具有85℃的离子试样温度、65eV的电子能量和300mA的发射电流的正离子化学电离模式中使用质谱仪。甲烷作为分析气体(analyte gas)，其压力维持在0.5托。
通过将0.1μg的十三酸添加到200μg的LTA试样中，并且利用4N KOH(100℃、4hours)水解LTA试样来确定糖脂的脂肪酸成分。调整水解产物的pH值，使其接近1.0后，从氯仿中提取游离脂肪酸(3次，1ml)，用氮气干燥。将干燥的脂肪酸溶解于乙腈(30μl)中后，利用10μl 35％的溴化无氟苄基(在乙腈中)和10μl的二异丙基乙胺处理。在40℃时将溶液加热20分钟后，利用氮气干燥。利用N，O-双(三甲基硅基)-三氟乙酰胺将生成物无氟苄基酯处理一整夜。将保持在85℃的毛细管柱柱以7℃/秒的速度加热至265℃后，保持10分钟。利用检测基峰离子的选择性的离子检测方法，确定羟基脂肪酸的量，并且通过十三酸的内标法避免了提取物损失。
薄层色谱法(TLC)
在预涂层硅胶HPTLC板上，利用氯仿-甲醇-醋酸-水(100∶20∶12∶5，v/v/v/v)进行糖脂分析。用5％的硫酸处理糖脂并且在120℃下加热，从而检测TLC方法中的糖脂。
为了分析磷酸甘油，使用n-丁醇-吡啶-水(15∶30∶20，v/v/v)进行TLC分析。为了用TLC方法检测丙氨酸和糖取代基，分别使用0.5％的茚三酮(在正丁醇中)和5％的硫酸(在甲醇中)。此后，在120℃下加热磷酸甘油，以使其可视化。从TLC板收集可见斑点后，使用甲醇从硅胶粉提取试样，用于MS分析。
ESL-LIT MS
利用连接到LTQ-Orbitrap混合线性离子阱的质谱仪Ultimate 3000nano LC，进行液相色谱-串联质谱法。注入5μl试样后，利用Ultimate 3000nano LC上样到Zorbax300扩展的-C18柱(3.5μm，0.3mm i.dx150长度)中。流动相A为含0.1％甲酸的100％的水，流动相B为含0.1％甲酸的100％的乙腈。使用C18柱进行相分离。使用电喷雾离子化(ESI)技术分析从LC***分离的试样。在高压(5kV磷酸甘油及4.5kV糖脂)下，通过金属毛细管，以3μl/秒的速度将试样溶液注入离子源。毛细管被保持在180℃，并且氮气被用作鞘气(以8个任意单位的流速)。分析仪在负离子模式下运行。离子入口毛细管电压和管镜头偏移电压分别为-45V和-206V。35～37％的归一化碰撞能量和2.5至3Da的隔离宽度用于MSn碎片。最大的离子收集时间设置成50毫秒，并且使用3个微型扫描计算平均值。
实施例1：LTA及LTA糖脂的结构分析
使用1H、13C及2D-NMR波谱探明pLTA的整个结构
根据报告，在aLTA的1H-NMR波谱中，α-D-N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)的乙酰基共振信号的化学位移(δH)为2.1。但是，在pLTA的1H-NMR波谱中，化学位移(δH)为2.1处的峰形与aLTA不同。相比aLTA，pLTA的共振形状分布的范围更广泛，并且没有观测到自由乙酰基(δH1.9)发出的信号(图1)。使用COSY波谱分析的结果，证实δH2.01与(γ-ω)-亚甲基(-CH2-；δH1.28)和烯烃质子(-CH＝CH-；δH5.38)相关联(图2)。从HMQC波谱的分析结果，也证实δH2.01中的质子是从亚甲基(CH2；δc27)分配的(图3A)。基于COSY和HMQC波谱的分析，可以看出，化学位移(δH)2.01是来自附着到脂肪酸中的烯碳(-CH2-CH2-CH＝CH-CH2-CH2-)的亚甲基的信号。因此，还可以看出，在pLTA的磷酸甘油骨架上，没有GlcNAc取代基。
δH2.01(CH2-CH＝CH)和δH5.38(CH＝CH)的信号的相互关系还说明存在不饱和脂肪酸(图2)。而且，通过1H及13C NMR波谱中的两个异头质子信号[δH5.08(d，J＝Hz)和5.17(d，J＝3Hz)]及两个异头碳信号(δc96.5和97.7ppm)，确定糖脂中存在两个糖单位。通过LTA水解产物的GC/MS分析进行糖的测量(图4)，并且证实源自p-LTA的糖脂是例如葡萄糖和半乳糖等糖取代形成的。最后，确定具有两个糖单位的异头物的J值指示D-吡喃糖的异头中心位于α方向，δH5.08和5.17的信号分别产生于与在δc96.5和97.7中共振的异头碳相应的α-D-葡萄糖和α-D-半乳糖的异头质子(图3B)。综上所述，源自p-LTA糖脂的己糖以α-键连接。
pLTA糖脂的结构分析
采用MALDI-TOF MS方法分析LTA的糖脂试样。
pLTA的糖脂的质谱分为两组(图5B)。第I组的离子信号在1,103m/z至1,227m/z的范围内，并且第II组的离子信号在1,368m/z至1,464m/z的范围内。已确定属于第I组的糖脂为三己糖基-二酰基-甘油(Hex3-DAG)，并且在C16位置具有C22酰基链。已确定属于第II组的糖脂为还具有己糖残基或酰基链。采用对糖脂进行O-乙酰化的方式确定还有己糖残基(图6A)。
对羟基残基的乙酰化使质量单位增加42。第I组pLTA的糖脂显示增加420质量单位(10个羟基残基)，并可确认为三己糖基(图6B)。而且，第II组中的大部分糖脂增加378质量单位(9个羟基残留物)。根据O-乙酰化分析，可以看出第II组中的糖脂在己糖残基中还含酰基链(图7)。
此外，波谱显示了12质量单位的差异，这表明发生了烯碳的增减，从而可以判断糖脂具有不饱和的脂肪酸链。上述内容的可能性可通过COSYNMR确定(图2)。图8示出预测的pLTA糖脂分子结构。接着，为了进行串联MS分析，利用ESI-FT MS(负离子模式)分析糖脂(图9)，从ESI-FT MS结果中选择代表性的峰值并进行分析，从而确定了酰基链分布(图10A和B)。
从分析结果可知：如图9所示，pLTA糖脂的结构具有三个己糖骨架，为含不饱和脂肪酸的三己糖基-二酰基甘油(第I组)和三己糖基-三酰基甘油(第II组)，并且酰基链平均含18个碳原子。
aLTA糖脂的结构分析
通过糖脂中质量与电荷(m/z)比率可确定：aLTA为含C15至C21的链(图5A和图11)的脂肪酸。在aLTA的糖脂中，几乎所有的m/z信号都增加了294质量单位。这表明7个羟基发生了乙酰化，这相当于两个己糖。因此，可判断aLTA的糖脂具有二己糖基。而且，通过弱碱性水解，可以确认糖脂中存在脂肪酸酰基链(图12)。
dLTA、rLTA及sLTA的糖脂的结构分析
为了分析dLTA、rLTA及sLTA的糖脂部分的结构，进行MALDI-TOF分析。dLTA、rLTA及sLTA分别表示源自德氏乳杆菌(L.delbreukii)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)及清酒乳杆菌(L.sakei)的LTA。
如图13所示，MALDI-TOF分析结果显示，与pLTA一样，源自dLTA的糖脂被分成分别含三己糖基-二酰基甘油和三己糖基-三酰基甘油的两组。此外，还观察到在源自dLTA的糖脂中存在具有四个酰基链的第三组，并且各酰基链平均具有18个碳原子。通过观察可知，源自rLTA衍生糖脂具有比pLTA更低分子量的两组。因为一个糖的分子量为160Da，观察到源自dLTA的糖脂含二己糖基-二酰基甘油和二己糖基-三酰基甘油，它们均含两个己糖骨架，而不是三个己糖骨架，并且各酰基链平均含15个碳原子。观察到源自sLTA的糖脂也具有二己糖基-二酰基甘油和二己糖基-三酰基甘油，各酰基链平均具有18个碳原子，酰基链长度比rLTA更长。
实施例2：源自LTA的糖脂的抗炎效果
源自LTA的糖脂的TNF-α表达抑制效果
用完整LTA、和分离自完整LTA的源自LTA的糖脂和源自LTA的聚甘油磷酸酯分别对THP-1细胞处理4小时。然后通过ELISA方法，从培养液测量TNF-α的表达量。
如图14所示，完整的aLTA诱导TNF-α的高表达，但是，完整的pLTA不能诱导TNF-α的表达。而且，源自aLTA的糖脂和聚甘油磷酸酯，虽然比完整的aLTA的表达量少，但可以相当程度地诱导TNF-α表达，相反，源自pLTA的糖脂及聚甘油磷酸酯几乎不能诱导TNF-α表达。由此可知，与aLTA不同，不仅完整的pLTA，源自pLTA的糖脂也不能诱导TNF-α表达。
根据LTA改性的抗炎效果实验
为了使aLTA及pLTA发生改性(modification)并测量其活性，人们进行了实验。首先，在Tris-HCl(pH 8.5)中对LTA进行隔夜培养，以去除聚甘油磷酸酯的D-丙氨酸。而且，用0.1N氢氧化钠处理LTA，以去除糖脂的脂肪酸酰基链。此后，中和产生的培养液，并且利用辛基色谱提纯改性后的LTA，将其冻干后定量放置，用于实验。用100μg/ml的去除D-丙氨酸的LTA(de-acyl)和去除脂肪酸酰基链的LTA(de-alanine)预处理THP-1细胞18小时后，利用0.5μg/ml的LPS再处理4小时。然后，通过ELISA方法，从培养液测量TNF-α的表达量。
图15示出使用aLTA的实验结果。在aLTA的情况下，在利用完整的aLTA预处理的THP-1细胞中，虽然多少能看出LPS的TNF-α表达抑制效果，但是，去除了D-丙氨酸和脂肪酸酰基链的aLTAs(去除丙氨酸、去除酰基)却几乎没有表现出这种抑制效果。
图16示出利用pLTA进行的采用相同方法进行的实验结果。与aLTA不同，完整的pLTA几乎彻底抑制了由LPS诱导的TNF-α表达，并且去除聚甘油磷酸酯中的丙氨酸的pLTA(de-alanine)也表现相同效果。不过，去除了糖脂中的酰基链的pLTA(de-acyl)没有显示抑制TNF-α表达的效果。
这种结果显示aLTA和pLTA具有不同的生物学特性。尤其是，在pLTA的TNF-α表达抑制效果方面，比起聚甘油磷酸酯内的D-丙氨酸，糖脂的酰基链起着更重要的作用。
源自pLTA的糖脂的抗炎效果
为了了解从pLTA分离出的糖脂的抗炎效果，利用各种浓度的糖脂预处理THP-1细胞20分钟后，利用浓度为10μg/ml的flexPGN再处理4小时。此后，通过ELISA方法，从培养液中测量TNF-α表达量。
如图17所示，当仅用10μg/ml的flexPGN处理THP-1细胞时，高度诱导TNF-α的表达。然而，当利用糖脂预处理THP-1细胞时，可以观察出根据预处理的浓度TNF-α表达减小。相比相同浓度的完整的pLTA，这种表达抑制效果多少会差一些，但是，仅pLTA的糖脂部分也充分显示具有抑制TNF-α表达的效果。
其它源自LTA的糖脂的抗炎效果
通过实施例中记载的方法，利用LPS(来自E.coli 111：B4的LPS)和从各LTA(aLTA、rLTA、pLTA、dLTA或sLTA)分离的浓度为0.1μg/ml的糖脂，处理THP-1细胞(5×105细胞/ml)6小时。此后，通过ELSIA方法，从培养液中测量TNF-α的表达量。
图18示出从不同的LTA分离的糖脂的TNF-α表达抑制效果。可以看出，源自aLTA及sLTA衍生的糖脂几乎没有抑制TNF-α表达的效果，但是，源自rLTA、pLTA及dLTA的糖脂则非常有效地抑制TNF-α表达。
实施例3：针对pLTA抗炎效果的体外实验
依据pLTA的弗氏志贺菌肽聚糖(PGN)诱导的TNF-α和IL-1β表达抑制效果实验
使用含经过热处理的10％无活性FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素的RPMI 1640培养基，在37℃和5％CO2的条件下，培养人体单核细胞THP-1细胞。为了进行THP-1细胞的细胞因子诱导实验，将密度为4×105细胞/孔的THP-1细胞转移到96孔板后，在37℃和5％CO2的条件下，培养24小时以稳定细胞。用各种浓度(0至100μg/ml)的pLTA预处理THP-1细胞24小时后，利用浓度为10μg/ml的肽聚糖再处理4小时。
通过离心分离从细胞培养液收集细胞上清液后，使用通常的三明治ELISA方法，进行TNF-α及IL-1B的表达量测量。分别使用从R&D***(R&D system)买入的抗TNF-α单克隆鼠lgG1(克隆#28410)/生物素化的抗人TNF-α特定山羊lgG和抗人IL-1β单克隆鼠IgG1(克隆2805)/生物素化的抗人IL-1β特定山羊IgG，进行ELISA实验。使用链霉亲和素HRP处理后，邻苯二胺被用作底物以发射光。使用酶标仪从OD 450nm的测量值减去OD 550nm的测量值得到的值作为有效值。
如图19所示，当利用LTA预处理THP-1细胞时，依据肽聚糖表达增加的TNF-α(图19A)和IL-1β(图19B)的表达随着LTA浓度的增加而减小。为了确定抗炎细胞因子的表达是否由内毒素诱导，进行多粘菌素B的实验。多粘菌素B用于与LPS的脂质A结合并且抑制LPS的活性。因此，如果实验结果是由内毒素引起的，当利用多粘菌素B处理THP-1细胞时，不能抑制抗炎细胞因子的表达。然而，pLTA在含多粘菌素(polymyxin)B的培养基中，也诱导TNF-α表达的抑制，这表明内毒素(LPS)不诱导LTA的耐性(图19C)。
来自革兰氏阴性菌的肽聚糖通过刺激免疫细胞的NOD2，增强来自所述免疫细胞的大量的促炎性细胞因子的表达。然而，通过利用pLTA预处理免疫细胞，可以抑制由革兰氏阴性菌的肽聚糖引起的促炎性细胞因子的特异性表达。
pLTA对肽聚糖诱导NOD2的表达抑制的效果实验
pLTA对败血症关联受体NOD2表达变化的测量按如下方式x实施。将浓度为8x105细胞孔的THP-1细胞转移到24孔板后，在37℃和5％CO2的条件下培养24小时以稳定细胞。用浓度为100μg/ml的pLTA预处理THP-1细胞24小时后，利用浓度为10μg/ml的福氏志贺菌肽聚糖再处理，然后，培养2小时。离心分离培养液收集各细胞后，从总RNA合成cDNA后，使用实时PCR，测量NOD2的表达的变化。使用蛋白质印迹法测量NOD2的蛋白质的变化。在上述条件下，利用肽聚糖处理由pLTA预处理的THP-1细胞2小时。将细胞裂解后，添加SDS-PAGE加载型染料。此后，将THP-1细胞煮沸5分钟，通过12％SDS-PAGE分离蛋白质。将分离的蛋白质转移到尼龙膜后，利用抗-TLR2、抗-TLR4和抗-NOD2抗体进行蛋白质印迹实验。
在由福氏志贺菌肽聚糖诱导的过度的炎症反应中，为了探明NOD2的作用，进行如下实验。分别利用NOD2表达载体和pNF-κB-Luc/pRL-SV40载体对U937细胞进行形质转化。24小时后，利用浓度为100μg/ml的pLTA预处理各形质转化后的细胞24小时后，利用浓度为10μg/ml的肽聚糖再处理12小时。通过由酶标仪测量的NF-κB的活性值除以海肾属的活性值，测量根据NOD2表达量的NF-κB的活性变化。
如图20所示，福氏志贺菌肽聚糖显著增加了THP-1细胞中的NOD2的表达。另一方面，利用pLTA预处理的THP-1细胞中的NOD2mRNA的表达倾向于随着预处理的pLTA的浓度的增加而减小(图20A)，比起未使用pLTA预处理的细胞，利用pLTA预处理的细胞中的NOD2蛋白质的表达量也显著地减小(图20B)。这种结果表明pLTA可以通过抑制败血症相关受体NOD2的表达，抑制NOD2和肽聚糖之间的相互作用引起的信号传输。
此外，可以确定，比起未利用pLTA预处理的细胞，利用pLTA预处理的细胞中的肽聚糖-诱导NF-κB的活性显著地减小(图20C)。然而，NOD2表达载体的性质转换，使这种NF-κB的活性抑制消失。这种结果表明NOD2作为肽聚糖的主要受体而发挥作用，并且通过利用pLTA预处理THP-1细胞，抑制作为NOD2的主要转录因子的NF-κB的活性，因此，可以降低NOD2的mRNA表达。
pLTA和TLR2的相关性实验
在pLTA对细胞因子的表达抑制作用中，为了检验与TLR2的相关性，进行TLR2 siRNA实验。以TLR2为靶点的siRNA双链是从Santacruz Biotechnology(Santa Cruz，USA)购买的。利用TransIT-TKO感染试剂(Mirus，WI)以TLR2siRNA和对照siRNA形质转化THP-1细胞后，培养72小时。利用浓度为100μg/ml的pLTA预处理由TLR2siRNA和对照siRNA形质转化后的细胞24小时后，利用浓度为10μg/ml的肽聚糖再处理4小时。此后，使用ELISA方法测量培养液中的TNF-α表达量。
作为另一个实验，从剔除TLR2的小鼠(C57BL/6)中分离来自骨髓的巨噬细胞(BMM)后，接种于96孔板，在37℃和5％CO2的条件下培养24小时。利用浓度为100μg/ml的pLTA预处理BMM 24小时后，利用浓度为10μg/ml的肽聚糖再处理4小时。此后，使用ELISA方法测量来自培养液的TNF-α的表达量。
如图21所示，在利用对照siRNA进行形质转化的THP-1细胞中，由于发生由pLTA预处理诱导的耐受性，肽聚糖诱导TNF-α表达减少(图21A)。另一方面，在由TLR2siRNA进行形质转化的THP-1细胞中未出现这种表达减少(图21B)。这种结果在剔除TLR2的BMM中也出现。在从正常的小鼠分离出的BMM中，TNF-α表达本来随肽聚糖的浓度而增加，但这种表达增加由于pLTA预处理而减少(图21C)。而在TLR2-/-BMM中，可以看出，与pLTA的预处理无关，TNF-α表达随肽聚糖的浓度而增加(图21D)。因此可知，针对肽聚糖诱导TNF-α超表达的pLTA诱导耐受表明，TLR2是必须受体。
pLTA对NF-κB活性及TNF-α表达的抑制
依据内毒素LPS处理的TNF-α的超表达是由MAP激酶的磷酸化和NF-κB活性增加引起的。为了确定pLTA如何影响MAP激酶的磷酸化和NF-κB活性，进行下列蛋白质印迹和免疫荧光染色实验。
蛋白质印迹：将浓度为8x105细胞/孔的THP-1细胞转移至24孔板后，在37℃和5％CO2的条件下培养24小时，以稳定细胞。利用浓度为100μg/ml的pLTA预处理THP-1细胞24小时后，添加浓度为0.1μg/ml的LPS，再培养1小时。通过离心分离培养液收集细胞后，在Laemmli缓冲液中裂解细胞。添加SDS-PAGE加载染料，煮沸5分钟后，用12％的SDS-PAGE分离蛋白质。将分离的蛋白质转移到尼龙膜后，利用抗磷酸化MAP激酶抗体(抗磷酸化ERK和抗磷酸化JNK)、抗NF-κB抗体和抗β-肌动蛋白抗体进行蛋白质印迹测试。
免疫荧光染色(immunofluorescence staining)：将浓度为8×105细胞/孔的THP-1转移至24孔板后，在37℃和5％CO2的条件下培养24小时，以稳定细胞。利用浓度为100μg/ml的pLTA预处理THP-1细胞24小时后，利用浓度为0.5μg/ml的LPS再处理，然后，培养2小时。培养后的细胞被以3500rpm的速度离心分离15分钟，使其附着在载物玻璃上，然后，利用4％的甲醛固定细胞。此后，利用0.5％氚核X-100(氚核X-100)，提高细胞膜的透过性，利用抗NF-κBp50和抗NF-κB p65抗体处理固定的细胞2小时。再利用驴抗鼠IgG-FITC抗体处理90分钟后，使用共聚焦显微镜，测量细胞内的NF-κB p50和NF-κB p65的磷酸化程度。
如图22所示，可以看出，经pLTA处理后MAP激酶的活性减小(图22A)。即，从图中可观察到：未给予pLTA耐受性的细胞中，用LPS处理60分钟时，ERK及JNK的活性(磷酸化)急剧增加。另一方面，可以看出，相比未受pLTA耐受性影响的细胞，受pLTA耐受性影响的的细胞中，ERK及JNK的活性减小。
LPS诱导NF-κB的活性需要IKK激酶的磷酸化。活性IKK激酶诱导I-κB蛋白质群的磷酸化，从NF-κB分离出I-κB。将NF-κB移动至细胞核中，促进细胞附着及基因(细胞因子和细胞因子受体等)转录。从本实验的结果可以看出，未给予pLTA耐受性的细胞中，在LPS处理后，I-κBα的降解加速。然而，给予pLTA耐受性的细胞的情况，这种I-κBα的降解很少发生(图22B)。这种结果表明相比给予pLTA耐受性的细胞，给予pLTA耐受性的细胞中NF-κB的活性被抑制。
为了确认这些结果，进行使用抗NF-κB抗体的免疫荧光染色方法，以确认NF-κB的活性被pLTA耐受性所抑制(图22C)。这种一系列的信号传输关联要素的活性抑制表明pLTA在抑制LPS诱导的TNF-α超表达方面起着重要的作用。
实施例4：对pLTA抗炎效果的活体内实验
pLTA的败血症抑制效果
将浓度为300mg/kg的pLTA或PBS腹腔注射至15只4周龄雄性小鼠(BALB/c)。24小时后，腹腔注射200μl败血症诱发水溶液(250mg/kg aLTA+25mg/kg MDP)，以诱发内毒素性休克，观察小鼠的存活率直到诱发败血症后的第4天为止。
作为另一个实验，对腹腔注射pLTA的小鼠和腹腔注射PBS的小鼠(各5只)注射败血症诱发物质。12小时后，从小鼠的心脏采血，分离血清，然后，采用ELISA方法测量血中TNF-α的含量。
如图23所示，经PBS预处理的小鼠，腹腔注射败血症诱发物质后，在48小时内全部死亡。而经pLTA预处理的小鼠，截止第4天为止仍有大约90％的存活率(图23A)。此外还确定，相比利用PBS预处理的小鼠，经pLTA预处理的小鼠，其血液内的TNF-α的量显著降低(图23B)。
这种结果表明pLTA在抑制由aLTA+MDP诱导的活体内的过度的炎症反应及抑制革兰氏阳性菌衍生败血症方面是有效的。
pLTA处理对过敏性皮肤疾病的缓和效果
特异性皮肤疾病由各种原因引起，如细菌感染、接触化学药品等。购买4周龄的SPF(无特异性病原)雄性ICR小鼠(Central Lab.Animal Inc.)和4周龄的SPF雄性NC/Nga小鼠(Central Lab.Animal Inc.)，在实验动物饲养室中适应7天后，用于实验。所述小鼠被分成两个实验组，每组各有20只ICR小鼠和5只NC/Nga小鼠。对于所有的实验组，在涂布实验材料的前一天，对小鼠的背部区域进行脱毛，参照以往的研究，以4天间隔，在小鼠的背部区域涂布1％DNCB两次，然后在4周内每隔3天在小鼠的背部区域涂布0.2％DNCB，诱发特异性皮炎。特异反应后，对小鼠腹腔注射浓度为350μg/kg的pLTA，然后，观察皮肤病变。利用免疫组织化学(IHC)方法，测量与血液中的Th2偏向性有关的，在皮炎瘙痒症周围的皮肤组织中与皮炎和过敏性疾病关联的细胞因子(IL-4)的分布和水平。
如图24所示，DNCB涂布的结果显示：ICR小鼠模型和NC/Nga小鼠模型用肉眼不仅可观测整个背部区域的红斑和水肿，还可以观测到外壳脱皮和脓肿丘疹，而且因个体而异，严重的甚至能看到出血部位。这种皮肤病变与人类特应性皮炎的症状大体类似。而且相比其它的小鼠模型严重诱导了皮炎。但是可观察到这些症状可通过注射pLTA得以缓和(图24A)。为了观察可认为是特异性皮炎病因的Th2偏向性，测量IHC，以测量发病的皮肤组织内相关的细胞因子的水平。在ICR和NC/Nga小鼠模型中，可以看出皮肤组织内的IL-4成显著上升的分布趋势，而IFN-r分布则基本没有差别。另一方面，经pLTA处理的小鼠，可以看出皮肤组织内IL-4的分布减小(图24B)，这表明pLTA通过抑制诱导Th2反应的IL-4的表达，从而缓和特异性皮炎的症状。
实施例5：其它LTA的抗炎效果实验
rLTA的抗炎效果
为了调查从其它种类的乳酸菌鼠李糖乳杆菌(rLTA)分离的LTA的抗炎效果，利用浓度为100μg/ml的rLTA处理THP-1细胞，并且刺激4小时。此后，通过ELISA方法，测量培养液中的TNF-α的表达量。
如图25所示，随着预处理的rLTA的浓度的增加，TNF-α的表达量减少。
aLTA、rLTA、pLTA、dLTA和sLTA的抗炎效果比较
利用LPS和各LTA处理THP-1细胞，以确定TNF-α的表达量。
如图26所示，当利用LPS和浓度为10μg/ml的各LTA处理THP-1细胞时，可以看出，aLTA和sLTA不抑制TNF-α的表达，而其它的LTA有效地抑制TNF-α的表达。
而且，假设根据LTA的种类具有不同的TNF-α表达模式是基于如下事实：由于各LTA的结构差异，各LTA对细胞信号通路(cell signal pathway)活性具有不同影响。为了确认这种假设，利用与细胞信号通路关联的信号抑制剂处理THP-1信号后，确认根据不同的LTA形成的TNF-α。
因此，如图27和列出定量各LTA的TNF-α表达抑制率的下列表1所示，可以看出，利用特定的信号抑制剂处理各LTA时，TNF-α表达减小或增加。从这些结果可以确认LTA的结构差异对特定的细胞信号通路具有不同的影响。
表1
  TNF-α   DMSO   ERK   NF-κB   JNK   p38   Akt   IKK   P13K   AFI
  aLTA   4.8   -46.7   -31.8   -9.1   -13.6   -40.0   -7.3   -10.3   8.3   -18.8
  pLTA   64.3   66.7   54.5   9.1   54.5   28.6   63.4   51.7   50.0   56.3
  dLTA   42.9   -16.7   -9.1   0.0   27.3   -28.6   -17.1   0.0   25.0   -9.4
  rLTA   57.1   36.7   31.8   0.0   45.5   -14.3   22.0   27.6   37.5   18.8
  sLTA   23.8   -46.7   -36.4   -9.1   0.0   -28.6   -26.8   -3.4   -4.2   -9.4
实施例6：利用源自pLTA的糖脂诱发抗体反应
利用2.5μg B型肝炎病毒表面抗原(“HBsAg”)在第0天对小鼠进行第1次免疫。在第21天，使小鼠接受第2次免疫(200μl/注射)。在上述第1次免疫后第20天和第2次免疫后第27天对小鼠采血。收集血清，并利用标准ELISA对抗HBsAg抗体进行检查。下列表2示出，当本发明的糖脂与HBsAg一起对动物给药时，诱导生成抗HBsAg抗体。
表2
Figure BPA00001546409600301
制备例1：含pLTA的医药
粉剂的制备
10mg pLTA或pLTA类似物
100mg乳糖
10mg滑石
混合所述成分后，填充到气密封装中以制备粉剂
片剂的制备
5mg pLTA或pLTA衍生物
100mg玉米淀粉
100mg乳糖
2mg硬脂酸镁
按照通常的制备片剂的方法，混合所述成分后，打锭以制备片剂
胶囊的制备
10mg pLTA或pLTA衍生物
3mg纤维素晶体
14.8mg乳糖
0.2mg硬脂酸镁
根据通常的制备胶囊的方法，混合所述成分后，填充到明胶胶囊中以制备胶囊。
注射剂的制备
50mg pLTA或pLTA衍生物
180mg甘露醇
2,974mg注射用的无菌蒸馏水
26mg12水磷酸氢二钠
根据通常的注射剂制备方法，以每安瓿(2ml)含所述含量的成分。
液剂的制备
10mg pLTA或pLTA衍生物
10g异构化糖
5g甘露醇
适量的蒸馏水
根据通常的制备液剂的方法，在蒸馏水中添加上述成分并使其溶解，并且添加适量的柠檬香精。此后，混合所述成分，添加蒸馏水定容至100ml。然后注入到褐色瓶中并灭菌，以制备溶液。
制备例2：含pLTA的健康食品
100mg pLTA或pLTA衍生物
适量的维生素混合物
70μg维生素A醋酸盐
1.0mg维生素E
0.13mg维生素B1
0.15mg维生素B2
0.5mg维生素B6
0.2μg维生素B12
10mg维生素C
10μg生物素
1.7mg烟酰胺
50μg叶酸
0.5mg泛酸钙
适量的无机物混合物
1.75mg硫酸亚铁
0.82mg氧化锌
25.3mg碳酸镁
15mg磷酸一钾
55mg磷酸氢二钾
90mg柠檬酸钾
100mg碳酸钾
24.8mg氯化镁
混合比较适合健康食品的上述成分，以调节较佳实施例中的维生素和矿物混合物的组成比例，但是，混合比例可以选择性地任意改变。根据通常的健康食品制造方法，混合所述成分后，制备粒剂，所述粒剂用于根据通常的方法制备健康食品组合物。
制备例3：含pLTA的饮料
100mg pLTA或pLTA衍生物
15g维生素C
100g维生素E(粉末)
19.75g乳酸亚铁
3.5g氧化锌
3.5g烟酰胺
0.2g维生素A
0.25g维生素B1
0.3g维生素B2
定量的水
根据通常的健康饮料的制备方法，制备饮料。即，混合上述成分后，在85℃时搅拌加热大约1小时后，过滤生成的溶液并放置在2L无菌容器中，将其密封、消毒后，冷藏保管，然后用于制备根据本发明的健康饮料成分。
根据喜爱确定适合的饮料成分上述混合比，以调节较佳实施例中的成分的组成比例，但是根据需求阶层、需求国家、使用用途等地域或民族性偏好，可以任意更改混合比例。
制备例4：含pLTA的化妆品
柔肤乳液的制备
0.1重量份％的pLTA或pLTA衍生物
3.0重量份％的甘油
2.0重量份％的丁二醇
2.0重量份％丙二醇
1.00重量份％的聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油
10.0重量份％的乙醇
0.1重量份％的三乙醇胺
微量防腐剂
微量色素
微量香料
剩余重量份％的蒸馏水
营养皮肤乳液的制备
0.1重量份％的pLTA或pLTA衍生物
1.70重量份％的谷甾醇
1.50重量份％的聚甘油2-油酸酯
1.2重量份％的乳化剂及润肤成分-4
1.5重量份％的胆固醇
0.4重量份％的磷酸二鲸蜡脂
5.0重量份％的浓缩甘油
10.0重量份％的向日葵油
0.2重量份％的聚羧乙烯
0.3重量份％的黄原胶
微量的防腐剂
微量的香料
剩余重量份％的蒸馏水
制备例5：含pLTA的佐剂
包括pLTA的佐剂的制备
25μg pLTA或pLTA衍生物
500μg二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)
125μg胆固醇
剩余重量份％的磷酸盐氯化钠缓冲溶液和水
总计：0.5ml
如专利号为WO96/33739的专利中所述，制备包括上述成分的佐剂。
表3
制备含pLTA佐剂的流感疫苗成分
Figure BPA00001546409600351
所述流感疫苗的单剂量相当于1ml。

Claims (31)

1.一种糖脂，含2至6个饱和或不饱和的C10至C30酰基链，所述酰基链结合在以α键连接的二己糖或三己糖的C1、C3、C4及C6位置中的至少一个位置。
2.如权利要求1所述的糖脂，其中，所述糖脂为具有下列化学式I的结构的糖脂；
【化学式I】
Figure FPA00001546409500011
在所述化学式中，
R1至R4分别独立地表示羟基、
Figure FPA00001546409500012
Figure FPA00001546409500013
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
n为0或1；
Cm表示C4至C30的烷基；及
所述糖脂中的酰基链的总数为2至6个。
3.如权利要求2所述的糖脂，R1为
Figure FPA00001546409500014
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
R2至R4表示羟基；
n为1；及
所述糖脂包含至少一个具有1至14个双键的酰基链。
4.如权利要求2所述的糖脂，R1为
Figure FPA00001546409500021
R2、R3和R4中的一个为
Figure FPA00001546409500022
其它的为羟基；
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
n为1；及
所述糖脂包含至少一个具有1至14个双键的酰基链
5.如权利要求2所述的糖脂，其特征在于，所述化学式I为下列化学式I-1或化学式I-2。
【化学式I-1】
【化学式I-2】
Figure FPA00001546409500024
6.如权利要求1所述的糖脂，所述糖脂为源自乳酸菌的糖脂。
7.如权利要求6所述的糖脂，所述乳酸菌为乳酸杆菌、双歧杆菌、链球菌或乳球菌属。
8.如权利要求7所述的糖脂，其中，所述乳酸菌为植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌、两岐双岐杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、或乳酸乳球菌。
9.如权利要求1所述的糖脂，聚甘油磷酸酯还连接到未结合有酰基链的己糖的C6位置。
10.如权利要求9所述的糖脂，所述糖脂为具有下列化学式II的结构的糖脂；
【化学式II】
Figure FPA00001546409500031
R1至R4分别独立地表示羟基、
Figure FPA00001546409500033
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
R”分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基；
n为0或1；
Cm表示C4至C30的烷基；
1在0至80的范围内；及
所述糖脂中的酰基链的总数为2至6个。
11.如权利要求10所述的糖脂，R1为
Figure FPA00001546409500041
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
R”分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基；
R2至R4为羟基；
n为1；
1在0至80的范围内；及
所述糖脂包含至少一个具有1至14个双键的酰基链。
12.如权利要求10所述的糖脂，R1为
Figure FPA00001546409500042
R2、R3和R4中的一个为
Figure FPA00001546409500043
其它的为羟基；
其中，R’分别独立地表示饱和或不饱和的C10至C30酰基链；
R”分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基；
n为1；
1在0至80的范围内；及
所述糖脂包含至少一个具有1至14个双键的酰基链。
13.如权利要求10所述的糖脂，其中，所述化学式II为下列化学式II-1或化学式II-2；
【化学式II-1】
Figure FPA00001546409500044
【化学式II-2】
Figure FPA00001546409500051
在所述化学式中，R”分别独立地表示N-乙酰氨基葡萄糖、D-丙氨酸或羟基；及
1在0至80的范围内。
14.如权利要求9所述的糖脂，所述糖脂为源自乳酸菌的脂磷壁酸。
15.如权利要求10所述的糖脂，所述乳酸菌为乳酸杆菌、双歧杆菌、链球菌或乳球菌属。
16.如权利要求10所述的糖脂，所述乳酸菌为植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、德氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、格氏乳杆菌、约氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳杆菌、两岐双岐杆菌、长双歧杆菌、婴儿双歧杆菌、动物双歧杆菌、嗜热链球菌、或乳酸乳球菌。
17.一种药物组合物，所述药物组合物包含如权利要求1至16中任一项所述的糖脂。
18.如权利要求17所述的药物组合物，还包含选自抗生素、载体、赋形剂和稀释剂中的至少一种添加剂。
19.如权利要求17所述的药物组合物，所述药物组合物以粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、悬浮液、乳液，糖浆或气溶胶的形式制成口服制剂、外用制剂、栓剂或无菌注射溶液。
20.如权利要求17所述的药物组合物，其中，基于所述药物组合物的重量为100重量份计，所述药物组合物包含0.01至99.9重量份的糖脂。
21.一种用于预防和治疗炎症性疾病或免疫相关疾病的药物组合物，所述药物组合物包括如权利要求1至16中任一项所述的糖脂。
22.如权利要求21所述的药物组合物，所述炎症性疾病或免疫相关疾病选自败血病、动脉硬化、菌血症、全身炎症反应综合症、多器官功能障碍综合症、癌症、骨质疏松、牙周炎、***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、骨关节炎、幼年型慢性关节炎、强直性脊柱炎、***性硬结、肌肉特发性炎症性疾病、干燥综合症、***性血管炎、结节病、自身免疫性溶血性贫血、自身免疫性血小板减少症、甲状腺炎、糖尿病、免疫介导性肾脏疾病、中枢神经***或周围神经***的脱髓鞘疾病、特发性脱髓鞘性多发性神经病、格林-巴利综合症、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病、肝胆疾病、传染性或自身免疫性慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、肉芽肿性肝炎、硬化性胆管炎、发炎性肠病、溃疡性结肠炎、克罗恩病、肠易激综合症、麸胶肠易激综合症、惠普尔病、自身免疫或免疫介导的皮肤疾病，大疱性皮肤疾病、多形性红斑、接触性皮炎、牛皮癣、过敏性疾病、哮喘、过敏性鼻炎、过敏性皮炎、食物过敏、荨麻疹、肺部免疫疾病、嗜酸细胞性肺炎、特发性肺纤维化、过敏性肺炎、移植相关疾病、移植排斥和移植物抗宿主病中的至少一种。
23.如权利要求21所述的药物组合物，所述药物组合物通过口服给药、直肠给药、静脉内注射给药、肌内注射给药、皮下注射给药、子宫内膜注射给药或侧脑室注射给药。
24.如权利要求21所述的药物组合物，所述糖脂1天的给药量为0.01至10000mg/kg。
25.一种食品组合物，所述食品组合物包含如权利要求1至16中任一项所述的糖脂。
26.如权利要求25所述的食品组合物，还包含选自有机酸、磷酸盐、抗氧化剂、乳糖、酪蛋白、糊精、葡萄糖、糖和山梨醇中的至少一种添加剂。
27.如权利要求25所述的食品组合物，其中，基于所述食品组合物的重量为100重量份计，所述食品组合物包含0.01至99.9重量份的所述糖脂。
28.如权利要求25所述的食品组合物，食品组合物的剂型为固体、粉剂、粒剂、片剂、胶囊或液体形式。
29.一种化妆品组合物，所述化妆品组合物包含如权利要求1至16中任一项所述的糖脂。
30.如权利要求29所述的化妆品组合物，还包含选自维生素、氨基酸、蛋白质、表面活性剂、乳化剂、香料、色素、稳定剂、防腐剂、抗氧化剂、紫外线阻断剂、pH值调节剂和螯合剂中的至少一种添加剂。
31.一种佐剂，所述佐剂由如权利要求1至16中任一项所述的糖脂组成或包含如权利要求1至16中任一项所述的糖脂。
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